一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用
阅读说明：本技术 一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用 (Small molecule polydeoxyribonucleotide as well as preparation and application thereof ) 是由 王超云 高原 董书萍 于 2019-11-28 设计创作，主要内容包括：本发明针提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品及其可控精准制备方法,以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。本发明中的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp～1000bp,其分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的的85％以上。本发明中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围,针对性更强,功效更稳定,获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著效果,优于现有PDRN产品。(The invention provides a salmon Small molecular poly deoxyribose nucleotide (SMPDRN) product with molecular weight concentrated in an efficacy interval, a controllable and accurate preparation method thereof, and application thereof in the fields of cosmetics, medicines, nutritional foods and health-care foods. The molecular weight of the small molecular poly-deoxyribonucleotide is 50 bp-1000 bp, and the molecular weight of the small molecular poly-deoxyribonucleotide is more than 85 percent of the total mass of fragments of 50 bp-500 bp. The molecular weight of the SMPDRN is concentrated in a high-effect range, the pertinence is stronger, the effect is more stable, and the obtained product has obvious effects on improving the cell activity, promoting the synthesis of collagen, regenerating damaged skin, promoting wound healing, tightening the skin, increasing the skin elasticity, eliminating wrinkles, delaying skin aging, resisting oxidation, preventing the formation of color spots, resisting inflammation, repairing damaged cells and the like through the verification of cells, animals and human bodies, and is superior to the existing PDRN products.)
技术领域
本发明具体涉及一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用。
背景技术
脱氧核糖核酸(DNA)作为生物体的重要遗传物质，一方面其在调控基因、蛋白表达，改善细胞状态，维持机体的正常生理功能方面发挥着重要的作用；另一方面它作为原料库，为机体生长、发育、修复提供了所需要的脱氧核糖核苷酸。但由于DNA链比较长，分子量大且带有电荷，导致其不宜通过细胞膜被机体吸收。制药、医美、保健品行业的科研工作者长期致力于寻找碱基组成与人体相似性高的DNA生物材料。经过研究者不懈的努力，证实三文鱼DNA的碱基组成与人体DNA的相似性达98％，如图1所示。
最先发现三文鱼DNA有功效的是意大利渔民，他们发现把三文鱼***里的***挤出周期性地涂抹在伤口处可以有效地抑制伤口溃烂，促进伤口愈合。意大利Mastelli公司、韩国BR PHARM公司在此基础上分别从海鳟鱼的生殖细胞、三文鱼***中提取聚脱氧核苷酸(PolyDeoxyRiboNucleotide，PDRN)，该物质在促进人体细胞再生，加快伤口愈合，减少疤痕生成方面具有疗效。
然而，现有PDRN制备技术工艺复杂，步骤繁琐，在纯化过程中使用了大量有机溶剂和蛋白酶，产率偏低。同时其制备的可控性及相关产品的功效显著性、功效针对性、功效稳定性尚需提高。
发明内容
本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品及其可控精准制备方法，以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。
具体技术方案如下：
本发明的目的之一是提供一种一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品。
所述的三文鱼包括大西洋鲑、太平洋鲑和虹鳟。
所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸(即SMPDRN)其分子量区间为10bp～1500bp。
优选的，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp～1000bp，其中分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的85％以上。
再进一步，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其分子量位于100bp～200bp的片段的质量占小分子多聚脱氧核糖核苷酸总质量的90％以上。
本发明的第二个目的是提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法。
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，以三文鱼的内脏、肉、***、***、卵为材料，包括如下步骤：
(1)将三文鱼组织使用碱裂解液进行裂解，所述的碱裂解液含有0.05～1mol/LEDTA，0.5～5mol/L NaOH,0.1wt％～5wt％SDS；
(2)将步骤(1)获得的反应体系中加入Tris-HCl；
(3)向步骤(2)中获得的反应体系中加入HCL；
(4)将步骤(3)获得的反应体系离心，收集上清；
(5)将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪进行分子破碎；
(6)在步骤(5)获得的反应体系中加入NH4AC，再加入无水乙醇，放置30min以上；
(7)将步骤(6)获得的反应体系离心，保留沉淀，得SMPDRN。
优选的，步骤(1)的工作条件为：在三文鱼组织中加入所述的碱裂解液，三文鱼组织与碱裂解液的用量比为1g:(5～15)mL；破碎组织，颠倒混匀，90～100℃恒温水浴15～60min。
优选的，步骤(2)的工作条件为：将步骤(1)获得的反应体系冰浴至40℃以下，按照其总体积的1/3～1的体积比例加入0.5～4mol/L Tris-HCl，，颠倒混匀。
优选的，步骤(3)的工作条件为：按照步骤(2)获得的反应体系的总体积的1/5～1的体积比例加入0.5～5mol/L HCL,颠倒混匀。
优选的，步骤(4)的工作条件为：将步骤(3)获得的反应体系0℃以上5000～12000rpm离心5～20min，收集上清。
优选的，步骤(5)的工作条件为：将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪破碎5s～5min。
优选的，步骤(6)的工作条件为：按照步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10～1/5的体积比例加入10mol/L NH4AC溶液，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置30min以上；。
优选的，步骤(7)的工作条件为：将步骤(6)获得的反应液0℃以上6000～12000rpm离心5～20min，倾去无水乙醇，加入50wt％～80wt％的乙醇，使沉淀泛起，然后6000～12000rpm离心5～20min，保留沉淀。
优选的，所述的制备方法还包括用生理盐水悬浮步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥。
将步骤(7)获得的沉淀用TE液溶解，进行琼脂糖凝胶电泳，可验证本发明的制备方法得到的SMPDRN的分子量位于50bp～500bp的片段的数量在85％以上，高度集中。
在本发明的实施例2中，制备得SMPDRN的分子量位于100bp-200bp的片段的数量在90％以上。
本发明的制备方法产率高，达到9～14％；获得的产品纯度高，使用分光光度法检测其纯度(260nm/280nm)为1.6～1.9。
本发明特有的制备方法使SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，经细胞、动物、人体实验，发明人发现获得的产品在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著优于现有PDRN的效果。实施例中有实验数据证实上述效果。
此外，本发明的制备方法实现了分子量集中于50～500bp甚至100bp～200bp，有效地避免了较大分子量或较小分子量片段的产生，成分的相对统一可提高其靶效性，增加其生物活性。
本发明的第三个目的是提供小分子多聚脱氧核糖核苷酸在化妆品、药品、营养食品、保健食品中的应用，应用形式包括面膜、乳剂、溶液、胶体制剂、粉针剂、注射液、片剂或胶囊。
本发明提供了SMPDRN在提高细胞活性，减少自由基生成，抗氧化中的应用
本发明提供了SMPDRN增加皮肤弹性，消除皱纹延缓皮肤衰老中的应用。
本发明提供了SMPDRN促进伤口愈合中的应用。
本发明提供了SMPDRN防止黑斑、黄褐斑、老年斑的形成中的应用。
本发明提供了SMPDRN抗炎作用，修复受损细胞中的应用.
本发明所述的SMPDRN在用于上述任一用途时，其使用剂量范围为每次0.1mg～1g，优选每次0.5mg～0.1g，更优选为每次1mg～20mg。
本发明的有益效果如下：
本发明中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，功效更稳定，获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著效果，优于现有PDRN产品。
此外，本发明的制备方法实现了分子量集中于50bp～500bp甚至100bp～200bp，有效地避免了较大分子量或较小分子量片段的产生,成分的相对单纯，可显著提高分子的靶效性，增强生物活性。
本发明提供了分子量可控的制备方法，实现了小分子多聚脱氧核糖核苷酸的精准制备。本发明中分子量高度集中的SMPDRN是通过本发明的制备方法获得的，本发明通过特有的裂解工艺与DNA打断仪的配合，获得了分子量高度集中于高功效区域、高纯度的产品。本发明的制备方法工艺简单、产率高、试剂成本低且不使用有机溶剂，有利于工业上规模化生产，无残留与污染排放。
由于本发明的产品功效显著、效果稳定且具有低致敏性，成分相对单纯，为化妆品、医药、营养食品、保健食品领域提供了一种优秀原料，在抗衰老、损伤修复方面具有巨大的潜力。
附图说明
图1为三文鱼DNA与人体DNA的相似性对比图；
图2为实施例1获得的SMPDRN的电泳图；
图3为实施例2、实施例3获得的SMPDRN的电泳图；
图4为实施例2获得的SMPDRN的红外色谱图；
图5为实施例2获得的SMPDRN对细胞活性的影响；
图6为实施例2获得的SMPDRN对细胞凋亡的影响；
图7为实施例2获得的SMPDRN对细胞抗氧化能力的影响；
图8为实施例2获得的SMPDRN对大鼠创口愈合的影响图表；
图9为实施例2获得的SMPDRN对斑马鱼创口愈合的影响图表；
图10为实施例8获得的SMPDRN涂抹式营养液对皮肤弹性的影响；
图11为实施例8获得的SMPDRN涂抹式营养液对皮肤含水量的影响；
图12为以本发明SMPDRN为活性成分的涂抹式营养液、导入式精华液对额头消皱、美白的效果对比照片；
图13为以本发明SMPDRN为活性成分的涂抹式营养液、导入式精华液对颈部消皱、美白的效果对比照片；
图14为以本发明SMPDRN为活性成分的涂抹式营养液、导入式精华液对背部美白的效果对比照片；
图15为以本发明SMPDRN为活性成分的面膜、导入式精华液对脸部祛痘、增白的效果对比照片；
图16为以本发明SMPDRN为活性成分的面膜、导入式精华液对额头祛痘、的效果对比照片；
图2中：A、1号样；B、2号样；C、3号样；D、4号样；
图3中：A、实施例3；B、实施例2；C、实施例2。
具体实施方式
实施例中使用的试剂与物料均为市售普通试剂与物料。实施例中使用的三文鱼为太平洋鲑鱼(大马哈鱼，来自黑龙江抚远县)。
实施例中使用的DNA打断仪型号为Sonicator-4000，生产商为美国Misonix公司。
实施例1
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取四份三文鱼***组织,每份均为100g，标记为1～4号样，分别加入碱裂解液；1号样加入500mL碱裂解液(0.05mol/L EDTA,0.5mol/L NaOH,0.1％SDS)；2号样加入500mL碱裂解液(1mol/L EDTA,5mol/L NaOH,5％SDS)；3号样加入1500mL碱裂解液(0.05mol/L EDTA,0.5mol/L NaOH,0.1％SDS)；4号样加入1500mL裂解液(1mol/L EDTA,5mol/L NaOH,5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，1号样置于90℃恒温水域60min，2号样置于100℃恒温水域15min，3号样置于90℃恒温水域60min，4号样置于100℃恒温水域15min。
(2)冰浴至40℃以下，1号样加入0.5mol/L Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/3；2号样加入4mol/Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量与步骤(1)获得的反应体系体积比为1:1；3号样加入0.5mol/Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积1/3；4号样加入4mol/Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量与步骤(1)获得的反应体系体积比为1:1；将1～4号样均颠倒混匀；
(3)1号样加入5mol/L HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5；2号样加入0.5mol/L HCL，加入体积量与步骤(2)获得的反应体系体积比为1:1；3号样加入5mol/L HCL，加入的体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5；4号样加入0.5mol/LHCL，加入体积量与步骤(2)获得的反应体系体积比为1:1；将1～4号样均颠倒混匀；
(4)0～4℃条件下，1号样5000rpm离心20min；2号样12000rpm离心5min；3号样5000rpm离心20min；4号样12000rpm离心5min；1～4号样均收集上清。
(5)1号样用DNA打断仪6000焦耳/s破碎30s；2号样用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min、3号样用DNA打断仪6000焦耳/秒破碎30s；4号样用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min。
(6)1～4号样加入10mol/L NH4AC溶液，其体积量占步骤(5)获得的反应总体积的1/5，再加入-20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0～-20℃放置30min。
(7)0～4℃条件下，1号样6000rpm离心20min；2号样12000rpm离心5min；3号样6000rpm离心20min；4号样12000rpm离心5min；均倾去无水乙醇，加入浓度70wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后12000rpm离心5min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)取步骤(7)获得的少量沉淀，用TE液溶解，测定其浓度，进行琼脂糖凝胶电泳。
(9)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
对1～4号样的纯度进行检测，并计算产率。1号样A260/A280＝1.78，产率9.2％；2号样A260/A280＝1.80，产率9.8％；3号样A260/A280＝1.82，产率10.5％；4号样A260/A280＝1.85，产率9.4％。
如图2所示，图2为四个样品获得的SMPDRN的电泳图，1、2、3、4号样品所得SMPDRN的长短处于50bp～1000bp范围，其中50bp～500bp片段的质量占SMPDRN总质量的85％以上。
实施例2
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼***100g，加入600ml碱裂解液(0.1mol/L EDTA,2mol/LNaOH,0.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5，颠倒混匀。
(4)0～4℃条件下，6000rpm离心15min，收集上清。
(5)用DNA打断仪6000焦耳/s破碎30s。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入-20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，-20℃放置2h。
(7)0～4℃条件下，10000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度70wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后10000rpm离心15min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)取步骤(7)获得的少量沉淀，用TE液溶解，测定其浓度，进行琼脂糖凝胶电泳。
(9)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例2获得的SMPDRN的纯度进行检测，并计算产率。纯度A260/A280＝1.82；产率高，达到14.1％。
如图3所示，图3中的B、C泳道为实施例2获得的SMPDRN的电泳图谱，其分子量长度100bp～200bp片段的质量占SMPDRN总质量90％以上。
实施例2获得的SMPDRN的红外图谱见图4。
实施例3
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼***100g，加入600ml碱裂解液(0.1mol/L EDTA,2mol/LNaOH,0.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/5，颠倒混匀。
(4)0～4℃条件下，6000rpm离心15min，收集上清。
(5)用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入-20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，-20℃放置2h。
(7)0～4℃条件下，10000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度70wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后10000rpm离心15min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)取步骤(7)获得的少量沉淀，用TE液溶解，测定其浓度，进行琼脂糖凝胶电泳。
(9)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
如图3所示，图3中的A泳道为实施例3获得的SMPDRN的电泳图谱，其分子量长度100bp～500bp片段的质量占总质量的90％以上。实施例3与实施例2的区别仅在于其步骤(5)中DNA打断仪的破碎条件。
实施例4
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼卵巢100g，加入800ml碱裂解液(0.4mol/L EDTA,2mol/LNaOH,1.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/4，颠倒混匀。
(4)18～25℃条件下，12000rpm离心10min，收集上清。
(5)用DNA打断仪600焦耳/s破碎5min。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置5h。
(7)18～25℃条件下，12000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度50wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后6000rpm离心20min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例5
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼肉100g，加入1000ml碱裂解液(0.1mol/L EDTA,2mol/L NaOH,0.5wt％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(4)18～25℃条件下，12000rpm离心10min，收集上清。
(5)用DNA打断仪6000焦耳/s破碎30s。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置5h。
(7)18～25℃条件下，12000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度50wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后6000rpm离心20min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例6
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，包括如下步骤：
(1)精确称取三文鱼内脏100g，加入600ml碱裂解液(0.4mol/L EDTA,2mol/LNaOH,1.5％SDS)，迅速破碎组织，颠倒混匀，95℃恒温水域20min.
(2)冰浴至40℃以下，加入2mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加入体积量占步骤(1)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(3)加入1mol/L的HCL，加入体积量占步骤(2)获得的反应体系体积的1/2，颠倒混匀。
(4)18～25℃条件下，12000rpm离心10min，收集上清。
(5)用DNA打断仪6000焦耳/s破碎20s。
(6)加入10mol/L NH4AC溶液,其体积占步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置5h。
(7)18～25℃条件下，12000rpm离心15min，倾去无水乙醇，加入浓度80wt％乙醇，轻轻吹打，使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后6000rpm离心20min，傾去上部液体，残留乙醇用枪头吸除。
(8)用生理盐水悬浮沉淀步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥，获得SMPDRN。
实施例7
一种SMPDRN面膜的制备，以本发明实施例2获得的SMPDRN作为功效成分，具有抗氧化、增白、除皱的作用，其制备方法如下：
(1)用脂质体分别包埋0.01g还原型谷胱甘肽、0.02g透明质酸、0.005g SMPDRN和0.02g维生素E，获得各组分脂质体，然后置于60℃水浴中恒温30min；
(2)制备左旋维生素C、甘草素、六胜肽微胶囊，每个组分0.01g，然后将其置于60℃水浴中恒温30min；
(3)称取一定量尿囊素、甘油、丙二醇、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素，加水搅拌至澄明，将上述脂质体、微胶囊分别缓缓加入上述溶解液中，最后加入香精、防腐剂搅拌均匀，补足水至100.0g，即得全功效面膜精华液，然后进行灌装、包装，即得全功效面膜。
实施例8
一种SMPDRN涂抹式营养液的制备，以本发明实施例2获得的SMPDRN作为功效成分，其制备方法如下：
(1)按重量比称取各原料：25份玻尿酸、10份甘油、5份SMPDRN、2份L-抗坏血酸钠、3份稳定剂、3份角鲨烷、90份水。稳定剂由瓜尔胶、海藻糖、木糖醇搅拌混合均匀得到，其中瓜尔胶、海藻糖、木糖醇的质量比为1：1：1；
(2)将温度为90℃的水真空抽入至乳化锅内，在均质条件下加入稳定剂2000转/分均质处理5min；
(3)当温度降低至35℃时，向乳化锅内加入玻尿酸，2000转/min均质处理5min；加入SMPDRN，2000转/min均质处理5min；加入甘油，2000转/min均质处理5min；最后加入角鲨烷，2000转/min均质处理5min；降至室温，即得实施例3的直达真皮层的涂抹式营养液。
实施例9
一种SMPDRN导入式精华液的制备，以本发明实施例1中的样品1获得的SMPDRN作为功效成分，其制备方法如下：
称取5mg～100mg实施例1中的样品1获得的SMPDRN，谷胱甘肽2mg～100mg，溶于1～2ml生理盐水，制备成导入式精华液。
获得的导入式精华液具有祛痘、消皱，填充凹陷的功能。
实施例10
一种SMPDRN导入式精华液的制备，以本发明实施例2获得的SMPDRN作为功效成分，其制备方法如下：
称取5mg～100mg实施例1中的样品1获得的SMPDRN，谷胱甘肽2mg～100mg，溶于1～2ml生理盐水，制备成导入式精华液。
获得的导入式精华液具有消皱、保湿美白，增加皮肤弹性，延缓皮肤衰老的功能。
实验1
以实施例2获得的SMPDRN为例，测试SMPDRN对细胞活性、抗氧化酶活性、自由基生成的影响。
将HaCaT细胞分别接种于6孔板和96孔板，加入含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的DMEM高糖培养基，置于37℃5％CO2条件下培养。根据实验，将细胞分为正常对照组、H2O2组、SMPDRN(5μg/mL)、SMPDRN(50μg/mL)、SMPDRN(500μg/mL)、SMPDRN(5mg/mL)、SMPDRN(50mg/mL)。各给药组按要求给予SMPDRN使其达到终浓度。除正常组外，其余各组均加入150mMol H2O2。12小时后，分别利用MTT法、试剂盒检测细胞凋亡、抗氧化酶活性和ROS水平。
(1)HaCaT细胞接种于96孔板，除正常对照组外，其余各组均加入150mMolH2O2建立氧化应激模型。利用MTT法检测细胞活性。数值用±SD(n＝8),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，**P<0.01,有极显著性差异；#表示与H2O2组比较，##P<0.01,有极显著性差异。结果如图5所示。
(2)HaCaT细胞接种于6孔板，除正常对照组外，其余各组均加入150mMolH2O2建立氧化应激模型。利用南京建成生物科技有限公司的凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。数值用±SD(n＝8),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，**P<0.01,有极显著性差异；#表示与H2O2组比较，#P<0.05或##P<0.01,有显著性或极显著性差异。结果如图6所示。
(3)HaCaT细胞接种于6孔板，除正常对照组外，其余各组均加入150mMolH2O2建立氧化应激模型。利用南京建成生物科技有限公司的生化试剂盒检测细胞抗氧化能力(SOD、GSH-Px、MDA、ROS)的变化。数值用±SD,组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，**P<0.01,有极显著性差异；#表示与H2O2组比较，#P<0.05或##P<0.01,有显著性或极显著性差异。结果如图7所示。
由图5、图6、图7可见，随着剂量的增加，本发明中的SMPDRN能有效地增加HaCaT细胞抗氧化酶活性，抑制ROS生成，降低MDA的产生。SMPDRN具有缓解氧化应激对皮肤细胞损伤的作用。
实验2
以实施例2获得的SMPDRN为例，测试SMPDRN对伤痕治愈的效果。
(1)取健康清洁级Sprague Dawley大鼠12只，分为对照组、SMPDRN(0.1％)组，每组6只。选取相同部位(背部)，用电推子剃毛。酒精棉球擦拭裸露皮肤后，用手术刀划开皮肤，伤口大小相同。对照组用生理盐水涂抹伤口，SMPDRN组用0.1％SMPDRN涂抹伤口。分别观察0、3、7、11天的伤口愈合情况。结果如图8所示。
数值用±SD(n＝6),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有极显著性差异。
(2)选取10尾斑马鱼，分为对照组、SMPDRN(0.1％)组，每组5只。将鱼麻醉，用牙科钻距鱼鳃5mm处破损鱼表皮，将鱼放入不同的鱼缸中(对照组无任何添加，SMPDRN组加入SMPDRN其终浓度为0.05％)。观察对照组、SMPDRN组中创口在0、2、4、8、12、16天的变化。结果如图9所示。
由图8、9可见，SMPDRN能加快大鼠和斑马鱼体表创口的愈合。
实验3
皮肤弹性、皮肤角质层含水量是判断皮肤衰老的重要标志，我们通过检测上述指标来衡量含实施例8获得的SMPDRN涂抹式营养液的抗衰老作用。
选择健康、皮肤正常、无化妆品过敏史受试人群，年龄20-45岁，其中男性15位，女性15位，共分正常对照组(仅不含SMPDRN，其他成分均相同)、SMPDRN(0.001％)组、SMPDRN(0.01％)组、SMPDRN(0.1％)组、SMPDRN(1％)组5组,每组6人(3男3女)室温25℃±1℃；湿度50％±5％。一周为一个疗程，共四个疗程，每次使用前将面部清洁，且每次洁面时间相同，待皮肤晾干后使用相应产品，各组每天使用相应产品1次，取10g均匀涂抹于脸上。
(1)选择面颊部作为测试区域，分别于0周、1周、2周、3周、4周末次使用产品10min后进行测试。使用皮肤弹性测试仪测定皮肤弹性曲线，根据皮肤的拉伸量和回弹性数据，可对化妆品的保湿和抗衰老功能进行评估。
数值用±SD(n＝6),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有极显著性差异。
(2)以面颊部4cm×4cm皮肤作为测试区域，分别于产品使用1h、2h、4h、6h后，用数字皮肤水分检测仪测面颊部皮肤含水量，用经皮水分散失测量仪测面颊部皮肤水分散失量，测定三次取平均值。
数值用±SD(n＝6),组间数据用SPSS 10.0单因素方差分析进行统计分析.*表示与正常对照组比较，*P<0.05有显著性差异，**P<0.01有极显著性差异。
不同浓度的SMPDRN涂抹式营养液，使用不同时期对皮肤弹性、含水量的影响见图10、图11。如图10所示，随着SMPDRN浓度的增加，SMPDRN涂抹式营养液能够明显增强皮肤弹性，说明SMPDRN具有良好的抗衰老和紧致肌肤等功效，增强肌肤弹性，深层修复肌肤，让肌肤充满活力。如图11所示，涂抹式营养液补水效果好、保湿时间长，说明含SMPDRN的涂抹式营养液可直达真皮层，能够有效抑制多余油脂，平衡肌肤油水，控油的同时还具有补水效果，持久保湿滋润，软化皮肤。
实验4
验证本发明的SMPDRN的消皱、美白效果。
以健康、皮肤正常、无化妆品过敏史受试人群，我们对长期(4个疗程以上，一周为一个疗程)使用以本发明的SMPDRN为主要成分的涂抹式营养液、导入式精华液的女性顾客进行跟踪观察，通过使用前与使用后的比较，如图12～14可见SMPDRN具有除皱、美白的效果。
涂抹式营养液、导入式精华液的额头除皱、美白效果见图12；
涂抹式营养液、导入式精华液的颈部消皱、美白效果见图13；
涂抹式营养液、导入式精华液的背部美白效果见图14。
需要注意的是图12、图13、图14的原图均为彩色照片，如果审查中认为显示的效果不清楚，申请人可提供原图作为证据。
实验5
以健康、无化妆品过敏史受试人群，我们对长期(5个疗程以上，一周为一个疗程)使用以本发明中SMPDRN为主要成分的增白面膜、导入式精华液的顾客进行跟踪观察，通过使用前与使用后的比较，如图可见SMPDRN具有祛斑祛痘、改善皮肤状态的效果。
脸部祛斑、增白效果见图15，额头皮肤祛痘改善效果见图16。
需要注意的是图15、图16的原图均为彩色照片，如果审查中认为显示的效果不清楚，申请人可提供原图作为证据。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。