一种富硒核桃石斛组合物、片剂及其应用
阅读说明：本技术 一种富硒核桃石斛组合物、片剂及其应用 (Selenium-rich walnut and dendrobium composition, tablet and application thereof ) 是由 顿春垚 张邵鹏 李双龙 陈贝贝 李春霖 张瑞 郑涵予 于 2021-08-10 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种富硒核桃石斛组合物、片剂及其应用,属于生物医药技术领域,本发明通过对核桃与石斛的控制有效提高了产品中的有机硒含量,生产过程采用冷榨、低温提取的技术,防止高温加工条件下有机硒的变性,制备得到的富硒核桃石斛片剂提高了单位重量的硒含量,硒多肽活性更强,更有益于人体吸收,具有良好的抗氧化、抗衰老的功效。(The invention relates to a selenium-rich walnut-dendrobium composition, a selenium-rich walnut-dendrobium tablet and application thereof, belongs to the technical field of biological medicines, effectively improves the content of organic selenium in a product by controlling walnuts and dendrobium, adopts the technologies of cold pressing and low-temperature extraction in the production process, prevents the denaturation of the organic selenium under the high-temperature processing condition, improves the selenium content of unit weight of the prepared selenium-rich walnut-dendrobium tablet, has stronger selenium polypeptide activity, is more beneficial to human body absorption, and has good antioxidant and anti-aging effects.)
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种富硒核桃石斛组合物、片剂及其应用。
背景技术
硒元素是人体必需的微量元素之一，有研究表明硒对缺少蛋白质引起的营养不良的儿童有治疗作用，对某些可能的致癌物质具有抵抗作用。富硒产品是补硒的主要来源，硒元素作为谷胱甘肽过氧化物酶必需组成部分而在人体中发挥着保护细胞膜、抗癌、延缓衰老、预防心脑血管疾病等作用，与富硒产品特殊的保健功效紧密相关。随着对全球范围内普遍缺硒问题的认识愈来愈清晰，如何科学合理、健康安全地补硒受到了广泛的关注。近年来国内外对天然或人工富硒资源中硒元素的相关研究逐渐增多，但是富硒产品的抗氧化性等问题尚未得到有效解决。
为提高富硒产品的抗氧化性等问题，现有技术中存在多种富硒产品，比如申请公布号为CN111066892A的发明专利申请中以富硒花生、富硒核桃粉等多种富硒原料制备得到富硒特膳饮品，具有清除体内自由基的作用。又如申请公布号为CN105831536A的发明专利申请中以富硒石斛汁作为原料制备得到复合饮品，具有降血脂、增强免疫力的功能。然而，现有富硒核桃以干果为主，硒富集程度一般，且核桃仁中的硒蛋白活化程度不高，无法令人体快速吸收，富硒石斛则以枫斗为主，吸收有效性差，并未有将富硒核桃与富硒石斛复配的相关记载。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种富硒核桃石斛组合物，将富硒核桃与富硒石斛复配，不仅提高了单位重量的硒含量，硒多肽活性更强，而且显著提高了产品的抗氧化性能，具有良好的抗氧化、抗衰老的功效。
为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种富硒核桃石斛组合物，包括25-35重量份的核桃硒多肽干粉和15-25重量份的富硒石斛超微粉。
优选的，所述核桃硒多肽干粉的制备包括如下步骤：
1)富硒核桃经榨取制得核桃油和饼粕；
2)将所述饼粕与乙醚混合提取脂类得脱脂核桃饼粕；
3)将所述脱脂核桃饼粕风干后与碱液混合提取蛋白质；
4)将提取得到的蛋白质与丝氨酸蛋白酶混合进行酶解反应，酶解产物经干燥后即得所述核桃硒多肽干粉。
优选的，所述步骤2)中饼粕与乙醚的质量比为2.5：1-1.5：1。
优选的，所述步骤3)中所述脱脂核桃饼粕与碱液的质量体积比为18：1-23：1，所述提取蛋白质的温度为50-60℃，pH为8.0-9.5。
优选的，所述步骤3)提取得到的蛋白质经干燥后与水混匀，所述蛋白质在水中的质量百分数为25-35％。
优选的，所述步骤4)中丝氨酸蛋白酶的酶活力≥4000U/g。
优选的，所述核桃硒多肽干粉的硒含量≥1.5mg/kg，富硒石斛超微粉的硒含量≥2mg/kg。
优选的，所述富硒石斛超微粉的粒径≤38μm。
本发明提供了一种富硒核桃石斛片剂，所述片剂包括如下原料：25-35重量份的核桃硒多肽干粉、15-25重量份的富硒石斛超微粉、2-5重量份的甜菊糖苷、0.2-0.5重量份的硬脂酸镁，20-30重量份麦芽糊精，30-40重量份纯水。
本发明还提供了上述的富硒核桃石斛组合物或上述的核桃石斛片剂在制备抗氧化药物或保健品中的应用。
本发明所述的富硒核桃石斛组合物以核桃硒多肽干粉和富硒石斛超微粉为原料，将核桃硒多肽与富硒石斛粉复配，具有协同作用，显著提高了抗氧化性能。本发明通过对核桃与石斛原料的培育有效提高了产品中的有机硒含量，生产过程采用冷榨、低温提取的技术，防止高温加工条件下有机硒的变性，制备得到的富硒核桃石斛片剂提高了单位重量的硒含量，硒多肽活性更强，更有益于人体吸收，具有良好的抗氧化、抗衰老的功效。
具体实施方式
本发明提供了一种富硒核桃石斛组合物，包括25-35重量份的核桃硒多肽干粉和15-25重量份的富硒石斛超微粉。
本发明的富硒核桃石斛组合物中包括重量份数为25-35份的核桃硒多肽干粉，优选的为28-32份，更优选的为30份。本发明的核桃硒多肽干粉中的硒含量优选为≥1.5mg/kg，更优选为≥2mg/kg。本发明中，所述核桃硒多肽干粉由富硒核桃制备获得。本发明对所述富硒核桃的来源并没有特殊限定，在本发明的具体实施例中，所述富硒核桃优选的以专用硒肥进行培育，所述培育富硒核桃的步骤包括：在核桃生长过程中施用专用硒肥，当年采收成熟核桃果烘干后测定硒含量。
本发明的富硒核桃石斛组合物中包括重量份数为15-25份的富硒石斛超微粉，优选的为18-23份，更优选为20份。本发明的富硒石斛超微粉中硒含量优选为≥2mg/kg，更优选为≥5mg/kg。本发明中，所述富硒石斛超微粉由富硒石斛经超微粉碎、过筛后获得，所述富硒石斛超微粉的粒径优选为≤38μm。本发明对所述富硒石斛的来源并没有特殊限定，在本发明的具体实施例中，所述富硒石斛优选的以专用硒肥进行培育，所述培育富硒石斛的步骤包括：在石斛生长过程中施用专用硒肥，当年采收石斛鲜条烘干后测定硒含量。
本发明中，所述测定硒含量的方法优选的依据GB 5009.93-2010《食品安全国家标准食品中硒的测定》进行测定。本发明中，所述专用硒肥优选为硒酸钠，所述硒酸钠优选为0.1-1mg/kg水溶液，所述硒酸钠的施用方法优选为喷施，所述喷施的次数优选为1-4次/天。
本发明中，所述核桃硒多肽干粉的制备包括如下步骤：
1)富硒核桃经榨取制得核桃油和饼粕；
2)将所述饼粕与乙醚混合提取脂类得脱脂核桃饼粕；
3)将所述脱脂核桃饼粕风干后与碱液混合提取蛋白质；
4)将提取得到的蛋白质与丝氨酸蛋白酶混合进行酶解反应，酶解产物经干燥后即得所述核桃硒多肽干粉。
本发明中，所述榨取的温度优选为50-70℃，更优选为55-65℃，榨取所得核桃油的出油率优选的＞50％。本发明中，所述榨取采用冷榨法，避免了富硒核桃中有机硒的结构的破坏，保证了富硒核桃中有机硒的含量，有利于提高所述富硒核桃石斛组合物中的硒含量。
本发明中，所述饼粕与乙醚的质量比优选为2.5：1-1.5：1，更优选为2:1。本发明中，所述提取脂类的方法优选为索氏提取法。本发明中，所述风干的温度优选为20-50℃，更优选为30-45℃。本发明中，所述脱脂核桃饼粕与碱液的质量体积比优选为18：1-23：1，更优选为20:1。本发明中，所述碱液优选为氢氧化钠溶液，所述提取蛋白质的温度优选为50-60℃，更优选为55℃，所述提取蛋白质的pH优选为8.0-9.5，更优选为9.0。
本发明中，所述提取得到的蛋白质优选的进行干燥、溶解。本发明中，所述干燥的温度优选为40-65℃，更优选为50-60℃，本发明对所述干燥的方式并没有特殊限定，本发明的具体实施例中所述干燥的方式优选为喷雾干燥。本发明中，所述溶解时蛋白质在水中的质量百分数优选为25-35％，更优选为30％。
本发明中，所述酶解的温度优选为40-50℃，更优选为45℃；所述酶解的pH优选为9-11，更优选为10。本发明中，所述丝氨酸蛋白酶的酶活力优选为≥4000U/g。
本发明提供了一种富硒核桃石斛片剂，所述片剂包括如下原料：25-35重量份的核桃硒多肽干粉、15-25重量份的富硒石斛超微粉、2-5重量份的甜菊糖苷、0.2-0.5重量份的硬脂酸镁，20-30重量份麦芽糊精，30-40重量份纯水。
本发明的富硒核桃石斛片剂中包括重量份数为2-5份的甜菊糖苷，优选的为3-4份。本发明的富硒核桃石斛片剂中包括重量份数为0.2-0.5份的硬脂酸镁，优选的为0.3-0.4份。本发明的富硒核桃石斛片剂中包括重量份数为20-30份的麦芽糊精，优选的为23-25份。本发明的富硒核桃石斛片剂中包括重量份数为30-40份的纯水，优选的为34-38份。本发明中，以核桃硒多肽干粉、富硒石斛超微粉作为功效成分，甜菊糖苷作为甜味剂，硬脂酸镁作为润滑剂、抗粘剂，麦芽糊精作为增稠剂，制备得到的片剂将核桃硒多肽与富硒石斛粉结合，提高了单位重量的硒含量，硒多肽活性更强，生物利用度好，质量稳定。
本发明还提供了上述的富硒核桃石斛组合物或上述的核桃石斛片剂在制备抗氧化药物或保健品中的应用。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
富硒核桃石斛组合物的制备
1.原材料培育检测
5-8月，在核桃与石斛生长过程中分别喷施硒酸钠0.1-1mg/kg水溶液，每天喷施1-4次。核桃果成熟后，采收核桃果机械脱去外皮，在阳光下摊晒48小时进行烘干。石斛以剪刀剪下新鲜枝条，与叶片共同清洗干净，50℃条件下风干。后依据GB 5009.93-2010《食品安全国家标准食品中硒的测定》中的方法分别测定烘干后的核桃果和风干后的石斛叶片中的硒含量，其中，核桃硒含量为1.5mg/kg，石斛硒含量为2mg/kg。
2.核桃硒多肽和富硒石斛粉制备
A)采用冷榨法在50℃条件下榨取富硒核桃中的核桃油，保证出油率为50％以上。将冷榨后饼粕与乙醚以2:1的质量体积比混合提取脂类得到脱脂核桃饼粕。将脱脂核桃饼粕置于低温30℃通风环境风干，风干后的饼粕按质量体积比20:1与氢氧化钠溶液混合，在pH9.0、55℃条件下提取蛋白质。提取得到的蛋白质40℃下喷雾干燥得到蛋白质干品，将蛋白质干品按30％比例与水混匀，然后加入酶活为4000U/g的丝氨酸蛋白酶，在pH10，45℃条件下进行酶解反应，将酶解产物经喷雾干燥即得本发明所述核桃硒多肽干粉。
B)将富硒石斛叶片进行超微粉碎，过400目筛，即得本发明所述富硒石斛超微粉。
3.将所述核桃硒多肽干粉与所述富硒石斛超微粉混合即得本发明所述富硒核桃石斛组合物。
实施例2
将实施例1所述核桃硒多肽干粉25份，实施例1所述富硒石斛超微粉15份，甜菊糖苷2份，硬脂酸镁0.2份，麦芽糊精20份，纯水30份，充分混匀制粒，50℃条件下干燥至水分含量低于0.5％，过100目筛，压片脱模即得本发明所述富硒核桃石斛片剂。
实施例3
将实施例1所述核桃硒多肽干粉35份，实施例1所述富硒石斛超微粉25份，甜菊糖苷5份，硬脂酸镁0.5份，麦芽糊精30份，纯水40份，充分混匀制粒，50℃条件下干燥至水分含量低于0.5％，过100目筛，压片脱模即得本发明所述富硒核桃石斛片剂。
实施例4
将实施例1所述核桃硒多肽干粉30份，实施例1所述富硒石斛超微粉20份，甜菊糖4份，硬脂酸镁0.4份，麦芽糊精25份，纯水35份，充分混匀制粒，50℃条件下干燥至水分含量低于0.5％，过100目筛，压片脱模即得本发明所述富硒核桃石斛片剂。
实施例5
核桃硒多肽的抗氧化活性测定
1)DPPH·自由基清除：
分别取2mg、4mg、6mg、8mg和10mg实施例1所述的核桃硒多肽干粉溶于10mL的纯净水中制备得到0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL和1mg/mL的样品液。取4mL不同浓度样品液于试管中，加入4mL DPPH溶液(0.1mmolL,以质量分数为95％乙醇作溶剂进行配制)，混匀后在室温下避光反应30min，以蒸馏水调零，制备得到样品组，在波长517nm处测定其吸光值A0。其他条件不变，以95％乙醇溶液代替DPPH溶液，制备得到对照组1，在波长517nm处测定其吸光值A1。其他条件不变，用蒸馏水代替样品液，制备得到对照组2，在波长517nm处测定其吸光值A2。按公式DPPH·清除率(％)＝(1-(A0-A1/A2)×100计算得到DPPH自由基的清除率，结果如下表1所示。
表1不同浓度的富硒核桃多肽对DPPH·自由基的清除率
富硒核桃多肽浓度(mg/mL)
DPPH·清除率％
0.2
35.08
0.4
40.13
0.6
47.25
0.8
58.42
1
70.44
2)·OH自由基清除：
分别取2mg、4mg、6mg、8mg和10mg实施例1所述的核桃硒多肽干粉溶于10mL的纯净水中制备得到0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL和1mg/mL的样品液。依次于试管中加入1mL1,10-菲啰啉(1.865mmol/L)、2mL不同浓度的样品液，混匀后再加入1mLFeSO4·7H2O(1.865mmol/L)，振荡混匀，最后加入1mLH2O2溶液(0.03％，v/v)，置于37℃水浴反应60min，于536nm处测量吸光度A，同时以蒸馏水代替样品液作阴性对照Aj，以蒸馏水代替过氧化氢作空白对照A0。样品液清除羟基自由基的能力按公式·OH自由基清除率(％)＝((A-A0)/(A0-Aj))×100计算。式中：A为样品液吸光度；Aj为阴性对照吸光度；A0为空白对照吸光度。计算结果如下表2所示。
表2不同浓度的富硒核桃多肽对·OH自由基的清除率
富硒核桃多肽浓度浓度(mg/mL)
·OH清除率％
0.2
33.21
0.4
35.65
0.6
44.87
0.8
47.37
1
49.55
可以看出，不同浓度的富硒核桃多肽溶液对DPPH·和·OH均有明显的清除作用，且清除率随着多肽质量浓度增加而增大。相同样品浓度下，DPPH·和·OH清除率随着多肽硒含量的增加而增大。可见，本发明所述核桃硒多肽具有良好的抗氧化活性，富硒能够增加核桃多肽的抗氧化活性。
2.富硒石斛超微粉的抗氧化活性测定
将实施例1所述的富硒石斛超微粉与90℃的热水以1:2的体积比进行混合浸提，浸提3h后将浸提液浓缩至1/10体积，然后用6倍体积的体积分数为95％的乙醇进行3次沉淀，所得沉淀经55℃干燥。将2mg、4mg、6mg、8mg、10mg的所述沉淀分别溶于10mL纯水中得到不同质量浓度的铁皮石斛多糖溶液。
1)对DPPH·自由基的清除：
在样品管中加入0.5mL不同质量浓度的铁皮石斛多糖溶液与2.5mL体积分数0.004％的DPPH·溶液；对照管用体积分数95％乙醇代替DPPH·溶液；空白管用蒸馏水代替铁皮石斛多糖溶液。以上3组试管均置于30℃水浴避光反应30min后，用0.5mL蒸馏水和95％乙醇2.5mL调零，分别测定吸光度A，试验重复三次取其平均值。按照公式清除率＝(A空白-(A样品-A对照))/A空白计算得到铁皮石斛多糖对DPPH·的清除率如下表3所示。
表3不同浓度的富硒石斛多糖溶液对DPPH·自由基的清除率
富硒石斛多糖溶液质量浓度(mg/mL)
DPPH·清除率％
0.2
21.33
0.4
36.29
0.6
38.24
0.8
41.33
1
44.70
2)对·OH自由基的清除：
在样品管中加入1mL 0.15mmol/L FeSO4、0.4mL 2mmol/L水杨酸、0.2mL不同质量浓度的铁皮石斛多糖溶液、1mL 6mmol/L H2O2和0.4mL蒸馏水；空白组用蒸馏水代替铁皮石斛多糖溶液，对照组用蒸馏水代替水杨酸。将3组试管放入37℃水浴锅中，1h后取出冷却，用蒸馏水调零，分别测定吸光度A，实验均设3个重复，取平均值。吸光度越小，对·OH的清除效果越好。按公式清除率＝(A空白-(A样品-A对照))/A空白×100％计算得到铁皮石斛多糖对·OH的清除率如下表4所示。
表4不同浓度的富硒石斛多糖溶液对·OH自由基的清除率
富硒石斛多糖溶液质量浓度(mg/mL)
·OH清除率％
0.2
30.15
0.4
36.52
0.6
47.11
0.8
51.43
1
62.25
3.所述富硒核桃石斛片剂的抗氧化活性测定
1)DPPH·自由基清除：
分别取2mg、4mg、6mg、8mg和10mg实施例3所述的富硒核桃石斛片剂溶于10mL的纯净水中制备得到0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL和1mg/mL的样品液。取4mL不同浓度样品液于试管中，加入4mL DPPH溶液(0.1mmol/L,以质量分数为95％乙醇作溶剂进行配制)，混匀后在室温下避光反应30min，以蒸馏水调零，制备得到样品组，在波长517nm处测定其吸光值A0。其他条件不变，以95％乙醇溶液代替DPPH·溶液，制备得到对照组1，在波长517nm处测定其吸光值A1。其他条件不变，用蒸馏水代替样品液，制备得到对照组2，在波长517nm处测定其吸光值A2。按公式DPPH·清除率(％)＝(1-(A0-A1/A2)×100计算得到DPPH·自由基的清除率如下表5所示。
表5不同浓度的富硒核桃石斛片剂对DPPH自由基的清除率
富硒核桃石斛片剂浓度(mg/mL)
DPPH·清除率％
0.2
38.23
0.4
46.78
0.6
54.32
0.8
62.64
1
73.55
2)·OH自由基清除：
分别取2mg、4mg、6mg、8mg和10mg核桃硒多肽干粉溶于10mL的纯净水中制备得到0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL和1mg/mL的样品液。依次于试管中加入1mL 1,10-菲啰啉(1.865mmol/L)、2mL不同浓度的样品液，混匀后再加入1mLFeSO4·7H2O(1.865mmol/L)，振荡混匀，最后加入1mLH2O2溶液(0.03％，v/v)，置于37℃水浴反应60min，于536nm处测量吸光度A，同时以蒸馏水代替样品液作阴性对照Aj，以蒸馏水代替过氧化氢作空白对照A0。样品液清除羟基自由基的能力按公式·OH自由基清除率(％)＝((A-A0)/(A0-Aj))×100计算得到如下表6所示。式中：A为样品液吸光度；Aj为阴性对照吸光度；A0为空白对照吸光度。
表6不同浓度的富硒核桃石斛片剂对·OH自由基的清除率
富硒核桃石斛片剂浓度(mg/mL)
·OH清除率％
0.2
45.53
0.4
48.28
0.6
52.14
0.8
64.73
1
71.16
由以上实施例可知，本发明以桃硒多肽干粉和富硒石斛超微粉为原料，将核桃硒多肽与富硒石斛粉复配，显著提高了抗氧化性能。本发明通过对核桃与石斛的控制有效提高了产品中的有机硒含量，生产过程采用冷榨、低温提取的技术，防止高温加工条件下有机硒的变性，制备得到的富硒核桃石斛片剂提高了单位重量的硒含量，硒多肽活性更强，更有益于人体吸收，具有良好的抗氧化、抗衰老的功效。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。