阅读说明：本技术 一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂、疫苗半成品、疫苗成品及其制备方法 (Improved freeze-dried live attenuated hepatitis A vaccine stabilizer, vaccine semi-finished product, vaccine finished product and preparation method thereof ) 是由 徐艳玲 刘令九 侯丽娟 王艺博 顾建阳 周延彬 *** 李育红 鞠闯 于 2019-09-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂,包括以下组分和浓度：海藻糖：2％-6％,谷氨酸钠：0.1％-1.0％,精氨酸：0.05％-0.3％,尿素：0.1％-0.8％,维生素C：0％-0.5％,右旋糖酐40：0％-2.0％,山梨醇：0％-0.5％,甘露醇：0.05％-0.5％,余量为注射用水。本发明提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂,通过减少稳定剂中药品,不仅增加了产品的溶解速度,而且减少了机体潜在的过敏反应。本发明还提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品的制备方法,使用改良稳定剂进行半成品制备成品,不仅可以简化操作步骤,降低物料使用成本,而且减少染菌风险,提高产品质量。(The invention discloses an improved freeze-dried hepatitis A attenuated live vaccine stabilizer, which comprises the following components in concentration: trehalose: 2% -6%, sodium glutamate: 0.1% -1.0%, arginine: 0.05% -0.3%, urea: 0.1% -0.8%, vitamin C: 0% -0.5%, dextran 40: 0% -2.0%, sorbitol: 0% -0.5%, mannitol: 0.05 to 0.5 percent of the total weight of the injection and the balance of water for injection. The invention provides an improved freeze-dried hepatitis A attenuated live vaccine stabilizer, which not only increases the dissolution speed of a product, but also reduces the potential anaphylactic reaction of an organism by reducing medicines in the stabilizer. The invention also provides a preparation method of the improved freeze-dried live attenuated hepatitis A vaccine finished product, and the improved stabilizer is used for preparing the semi-finished product, so that the operation steps can be simplified, the material use cost can be reduced, the bacterial contamination risk can be reduced, and the product quality can be improved.)

一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂、疫苗半成品、 疫苗成品及其制备方法

技术领域

本发明涉及冻干甲型肝炎减毒活疫苗，尤其涉及一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂及成品的制备方法。

背景技术

冻干甲型肝炎减毒活疫苗中均含有一定量稳定剂，其作用是为使冻干制品中目的蛋白保持活性，且保证冻干制品均匀一致、表面光滑和稳定，其中维生素C、右旋糖酐40、山梨醇作为稳定剂成分之一在疫苗中添加，起到赋形、支架等作用。

目前，我公司所使用的冻干甲型肝炎减毒活疫苗所使用疫苗稳定剂为：海藻糖终浓度为：2％-6％，谷氨酸钠终浓度为0.1％-1.0％，精氨酸终浓度为 0.05％-0.3％，尿素终浓度为0.1％-0.8％，维生素C终浓度为0.05％-0.5％，右旋糖酐40终浓度为3％-5％，山梨醇终浓度为0.05％-0.5％，甘露醇终浓度为 0.05％-0.5％。

但是，目前的技术还存在以下缺点：

1、维生素C、右旋糖酐40、山梨醇作为稳定剂成分之一在疫苗中添加，目前的稳定剂中使用辅料的种类过多，且当疫苗中这三种辅料浓度过高时，产品溶解速度缓慢，还可能会在机体引起潜在的过敏反应，同时过高的辅料使用也会增加生产成本；

2、半成品配制阶段，原液需要依次与浓配稳定剂①、稳定剂②、稳定剂③及疫苗液混合，操作步骤繁琐，同时增加染菌风险。

3、原疫苗复溶后规格为1.0ml/瓶，其缺点在于：

(1)婴幼儿接种时有较大的疼痛感，不利于计划免疫的推广和应用。

(2)注射剂量为1.0ml，在达到同样免疫效果的前提下，疫苗接种体内的非病毒成分(如：辅料成分)高于复溶后0.5ml规格的疫苗，疫苗引起不良反应发生的几率可能高于0.5ml规格的疫苗。

(3)疫苗注射过程中活病毒可能出现外溢情况。

(4)疫苗注射剂量为1.0ml，相比与0.5ml规格的疫苗，辅料的用量增加，从而增加了生产的成本。

发明内容

本发明为解决目前的技术不足之处，提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂，通过减少稳定剂中药品，不仅增加了产品的溶解速度，而且减少了机体潜在的过敏反应。

本发明还提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗半成品。

本发明还提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品。

本发明还提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗半成品的制备方法，使用改良稳定剂进行半成品制备，不仅可以简化操作步骤，降低物料使用成本，而且减少染菌风险，提高产品质量。

本发明还提供了一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品的制备方法，通过本发明提供的本成品进行改进后的冻干操作，可以简化操作步骤，降低物料使用成本，而且减少染菌风险，提高产品质量。

本发明提供的技术方案为：

一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂，所述稳定剂包括以下组分和质量体积浓度：

海藻糖：2％-6％，谷氨酸钠：0.1％-1.0％，精氨酸：0.05％-0.3％，尿素： 0.1％-0.8％，维生素C：0％-0.5％，右旋糖酐40：0％-2.0％，山梨醇：0％-0.5％，甘露醇：0.05％-0.5％，余量为注射用水。

一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗半成品，使用所述的改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂进行制备。

一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗半成品的制备方法，用于所述的改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗半成品，包括如下步骤：

步骤一、将甲型肝炎病毒收获液经过纯化处理得疫苗原液；

步骤二、配制所述改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂；

步骤三、计算并量取稀释液；

步骤四、依次将所述疫苗原液、所述疫苗稳定剂、所述稀释液混合均匀得到半成品。

优选的是，在所述步骤二中，配制所述改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂过程包括如下步骤：

步骤1、配制初始疫苗稳定剂；

步骤2、根据所述疫苗原液的液量和病毒滴度确定半成品液量，按照半成品液量体积的50％计算得到所述改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂的液量并进行量取；

其中，所述改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂包括以下组分和质量体积浓度为：

海藻糖：2％-6％，谷氨酸钠：0.1％-1.0％，精氨酸：0.05％-0.3％，尿素：0.1％-0.8％，维生素C：0％-0.5％，右旋糖酐40：0％-2.0％，山梨醇：0％-0.5％，甘露醇：0.05％-0.5％，余量为注射用水。

优选的是，在所述步骤三中，所述稀释液的液量的计算方法：

V₁＝V₀-V₂-V₃；

其中，V₁为稀释液的液量，V₀为半成品的液量，V₂为疫苗原液的液量，V₃为疫苗稳定剂的液量。

优选的是，在所述步骤四中，依次将所述疫苗原液、所述疫苗稳定剂和所述稀释液进行合并处理，合并的同时振荡得到所述半成品。

一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品，使用所述的改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂进行制备。

一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品的制备方法，用于所述的改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品，包括如下步骤：

步骤一、获取改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗半成品；

步骤二、将所述半成品冻干制成所述的改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品。

优选的是，所述冻干方法为：

在-30℃～-60℃温度下保持2～6h，得预冻半成品；

将所述预冻半成品置于隔板温度为-30℃～-60℃的一次升华冻干箱内，进行一次冻干，得一次冻干半成品；

将所述一次冻干半成品置于隔板温度为10℃～40℃的二次升华冻干箱内，进行二次冻干，得到所述改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品。

优选的是，所述改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品复溶后规格为 0.5mL/瓶。

本发明所述的有益效果：

1)改良稳定剂的使用可以提高疫苗稳定性，保证疫苗安全性和相对效力。减少改良稳定剂中药品使用量不仅增加了产品溶解速度，减少了机体潜在的过敏反应，同时降低了生产成本。

2)使用该改良稳定剂进行半成品配制时，可以简化操作步骤，降低物料使用成本，减少染菌风险，提高产品质量。

3)使用该半成品配制后的成品疫苗复溶后规格为0.5ml/瓶，疫苗的外观及可见异物检查、水分检查、病毒滴度及热稳定性试验检测结果均符合规定，顺应市场发展趋势，减少生产成本，可以带来较高的经济收益。

4)在保证疫苗的免疫效果和安全性均不改变的前提下，复溶后0.5ml/瓶的疫苗不仅可以减轻接种时的疼痛感，增加顺应性，还可防止活病毒外溢，同时扩大计划免疫的推广和应用。

具体实施方式

下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

本发明提供一种改良型的冻干甲型肝炎减毒疫苗稳定剂，其改良型的稳定剂的具体配方为(最终的成分与浓度，最终浓度为质量体积分数，g/mL)：海藻糖：2％-6％，谷氨酸钠：0.1％-1.0％，精氨酸：0.05％-0.3％，尿素：0.1％-0.8％，维生素C：0％-0.5％，右旋糖酐40：0％-2.0％，山梨醇：0％-0.5％，甘露醇： 0.05％-0.5％，余量为注射用水。

本发明还提供一种改良型的冻干甲型肝炎减毒疫苗成品的制备方法，按照以上配方配制改良型的稳定剂，以半成品液量体积的50％计算出稳定剂的液量并与原液稀释液混合即为半成品，半成品配制方法简便，易于操作，同时可降低染菌风险。该半成品经过分装、加塞和冻干后的规格为复溶后0.5ml/ 瓶，在保证免疫效果不变前提下，产品复溶后的规格为0.5ml/瓶与复溶后 1.0ml/瓶相比，减少了接种时的疼痛感，降低不良反应可能发生的几率，阻止了活病毒外溢的可能性，同时可以节约生产成本。

本发明提供的改良型的冻干甲型肝炎减毒疫苗成品的制备方法主要包括以下步骤：

步骤1、通过保藏编号为CCTCC No.V92004的甲型肝炎病毒毒种L-A-1 减毒株制备得到甲型肝炎病毒收获液后，将病毒收获物进行细胞破碎、抽提后的纯化处理得到疫苗原液。

步骤2、配制疫苗稳定剂，配方和浓度(最终浓度为质量体积分数，g/mL) 如下(其成分的浓度均为对应的改良型的稳定剂成分浓度的2倍)：海藻糖： 4％-12％，谷氨酸钠：0.2％-2.0％，精氨酸：0.1％-0.6％，尿素：0.2％-1.6％，维生素C：0％-1.0％，右旋糖酐40：0％-4.0％，山梨醇：0％-1.0％，甘露醇： 0.1％-1.0％；按上述配方称量好药品后溶于注射用水中，进行除菌过滤后得到疫苗稳定剂。

步骤3、根据疫苗原液液量和疫苗原液的病毒滴度确定半成品的液量；

步骤4、稳定剂计算及量取：按半成品液量体积的50％计算出改良型的稳定剂的液量并进行量取；

其中，改良型的稳定剂的具体配方为(最终的成分与浓度，最终浓度为质量体积分数，g/mL)：海藻糖：2％-6％，谷氨酸钠：0.1％-1.0％，精氨酸： 0.05％-0.3％，尿素：0.1％-0.8％，维生素C：0％-0.5％，右旋糖酐40：0％-2.0％，山梨醇：0％-0.5％，甘露醇：0.05％-0.5％，余量为注射用水

步骤5、稀释液计算及量取：

稀释液液量V₁(单位mL)的计算方法：

V₁＝V₀-V₂-V₃

其中，V₀为半成品液量，单位mL；V₂为疫苗原液液量，单位mL；V₃为疫苗稳定剂液量，单位mL。

步骤6、合并半成品：依次将疫苗原液、稳定剂及稀释液导入稀释合并专用桶，边合并边振荡得半成品。

步骤7、将半成品灌装后进行冻干。

具体的冻干方法和条件为：

1)预冻阶段：-30℃～-60℃，保持2-6小时；

2)一次冻干：一次升华冻干箱隔板温度为-30～-60℃；

3)二次冻干：二次升华冻干箱隔板温度为10-40℃，即制成改良型冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品。

对制成改良型冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品进行相关检测，包括：外观及可见异物、水分、病毒滴度、热稳定性试验。结果表明以上各项检测结果均达到合格标准。

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的解释说明。

实施例1～12

根据现有技术制备3批次条件相同的疫苗原液作为平行实验的实验组，分别为：第1批次、第2批次、第3批次；由长春生物制品研究所有限责任公司疫苗二室制备后保存。

制备4批次稳定剂作为平行实验的实验组，第1批次疫苗稳定剂：右旋糖酐40浓度7.0％，维生素C浓度1.0％，山梨醇浓度1.0％；第2批次疫苗稳定剂：右旋糖酐40浓度4.0％，维生素C浓度0.5％，山梨醇浓度0.5％；第2 批次疫苗稳定剂：右旋糖酐40浓度2.0％，维生素C浓度0.1％，山梨醇浓度 0.1％)；第4批次疫苗稳定剂：右旋糖酐40浓度0.0％，维生素C浓度0.0％，山梨醇浓度0.0％)；由长春生物制品研究所有限责任公司疫苗二室制备。

试验疫苗半成品的制备：根据原液病毒滴度检测结果将原液用稀释液进行稀释，确保成品病毒滴度不低于6.50lgCCID50/剂；将疫苗原液与稳定剂混合得到12组疫苗半成品；其中，稳定剂的体积为半成品体积的一半，稳定剂成分中右旋糖酐40的终浓度相应分别变为：3.5％、2.0％、1.0％、0.0％；维生素C和山梨醇的终浓度相应分别变为：0.5％、0.25％、0.05％、0.0％。

试验疫苗成品实施例1～12的制备：对半成品进行灌装，灌装后进行冻干，冻干条件：预冻阶段：-30℃～-60℃，保持2～6小时；一次升华冻干箱隔板温度为-30～-60℃，二次升华冻干箱隔板温度为10～40℃，得到冻干甲型肝炎减毒活疫苗成品实施例1～12。

试验疫苗成品的检定：包括：外观、可见异物、水分、病毒滴度及热稳定性试验检测，分析检测数据，确定疫苗成品中稳定剂成分中右旋糖酐40、维生素C和山梨醇的终浓度。

实验结果

试验疫苗成品检定结果如表1所示；

表1、不同终浓度右旋糖酐40试验疫苗检测结果比较

外观及可见异物检查结果：试验疫苗右旋糖酐40终浓度为3.5％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.5％；右旋糖酐40终浓度为2.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.25％；右旋糖酐40终浓度为1.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.05％和不含右旋糖酐40、不含维生素C和山梨醇的外观均为白色疏松体，复溶后无异物，均为合格。

水分检测结果：试验疫苗右旋糖酐40终浓度为3.5％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.5％；右旋糖酐40终浓度为2.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.25％；右旋糖酐40终浓度为1.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.05％和不含右旋糖酐40、不含维生素C和山梨醇时水分含量均低于质量标准3.0％的限度，检查结果均合格。

病毒滴度检测结果：试验疫苗右旋糖酐40终浓度为3.5％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.5％；右旋糖酐40终浓度为2.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.25％；右旋糖酐40终浓度为1.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.05％和不含右旋糖酐40、不含维生素C和山梨醇的试验疫苗病毒滴度均在6.67lgCCID₅₀/剂及以上，均达到合格标准。

热稳定性试验检测结果：试验疫苗右旋糖酐40终浓度为3.5％、维生素C 和山梨醇的终浓度为0.5％；右旋糖酐40终浓度为2.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.25％；右旋糖酐40终浓度为1.0％、维生素C和山梨醇的终浓度为0.05％和不含右旋糖酐40、不含维生素C和山梨醇时，各批试验疫苗37℃放置72h后，病毒滴度不低于6.50lgCCID₅₀/剂，病毒滴度下降不高于0.50lg，均达到合格标准。

由以上的试验数据和结果可以发现，无论是用现有的稳定剂配方制备的疫苗成品，还是用改良型的稳定剂配方及半成品制备方法制备的疫苗成品，其各项检测结果均能够达到合格的标准。说明在保持稳定剂的稳定效果不变的前提下，将右旋糖酐40的终浓度降低至0％-2.0％；维生素C降低至 0％-0.5％；山梨醇降低至0％-0.5％是可行的。这样不仅可以降低辅料药品所引起的机体潜在过敏反应，同时也可提高产品的溶解速度，提高临床接种的质量和效率并节约生产成本。

按照该改良型的稳定剂配方配制稳定剂，以半成品液量体积的50％计算出稳定剂的液量并与原液稀释液混合即为半成品，半成品配制方法简便，易于操作，同时可降低染菌风险。该半成品经过分装、加塞和冻干后的规格为复溶后0.5ml/瓶，在保证免疫效果不变前提下，产品复溶后的规格为0.5ml/ 瓶与复溶后1.0ml/瓶相比，减少了接种时的疼痛感，降低不良反应可能发生的几率，阻止了活病毒外溢的可能性，同时可以节约生产成本。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。