阅读说明：本技术 香豆素-噻唑酯类衍生物及其制备方法和应用 (Coumarin-thiazole ester derivatives, and preparation method and application thereof ) 是由 吕献海 刘浩 夏东国 程祥 巩杰秀 于 2019-09-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种香豆素-噻唑酯类衍生物及其制备方法与应用,属于生物化学技术领域,所述香豆素-噻唑酯类衍生物是以中间体4与中间体7为原料,加入催化量的DCC、DMAP,在0℃下反应10-15小时即可通过一步反应合成目标产物,该合成方法后处理过程简单,通过化学合成的方式合成了24种目标化合物,使得所制备的香豆素-噻唑酯类衍生物具有广谱的抗细菌活性。本申请为开发以香豆素-噻唑酯类衍生物为活性成分的新型抗细菌剂提供了基础。(The invention discloses a coumarin-thiazole ester derivative and a preparation method and application thereof, belonging to the technical field of biochemistry, wherein the coumarin-thiazole ester derivative takes an intermediate 4 and an intermediate 7 as raw materials, a catalytic amount of DCC and DMAP is added, and a target product can be synthesized through one-step reaction after reacting for 10-15 hours at 0 ℃. The application provides a foundation for developing a novel antibacterial agent taking coumarin-thiazole ester derivatives as active ingredients.)

香豆素-噻唑酯类衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，特别是涉及一种香豆素-噻唑酯类衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

耐药型细菌的传播对人类的健康构成重大威胁，提高发病率和死亡率。微生物感染如细菌和真菌引起的死亡约占世界总死亡人数的五分之一。关于抗生素抗性细菌，在过去二十年中，美国食品和药物管理局和欧洲药品管理局已经公开了仅开发和批准了两种新的抗生素类别(脂肽和噁唑烷酮)。

作为细胞的基本核酶，DNA拓扑异构酶(DNA Topo)参与生命过程，如细胞复制，转录和有丝***。细菌拓扑异构酶II(DNA解旋酶)和拓扑异构酶IV(Topo IV)是用于开发新型抗菌剂的有效靶标。Topo II抑制剂有两种主要结构类型，即喹诺酮类和香豆素类。然而，Topo II的喹诺酮结合位点的突变导致对喹诺酮的抗性。为了解决这个问题，一种有效的方法是保留现有的抗生素核心支架并不断改变新化合物而不降低其抗菌活性。

新生霉素作为香豆素类抗生素的代表药物之一，对DNA拓扑异构酶具有良好的抑制作用。香豆素广泛存在于次生植物代谢物中。迄今已发现和描述了1800多种不同的天然香豆素，其中许多具有高水平的生物活性，如杀虫，抗氧化，抗癌，抗HIV，抗真菌，抗菌和抗生素活性。因此，对于香豆素骨架上的修饰改造以发现新型拓扑异构酶II抑制剂是切实可行的，同时对于解决现存的细菌耐药性问题具有重要意义。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种香豆素-噻唑酯类衍生物，本发明提供了24种香豆素-噻唑酯类衍生物，提供了其化学结构并验证了其抗细菌活性。

本发明还有一个目的是提供一种香豆素-噻唑酯类衍生物的制备方法，通过以噻唑与香豆素为原料用不同取代基取代制备一系列香豆素-噻唑酯类衍生物，该方法及所使用设备简单，易于实施。

本发明还提供一种香豆素-噻唑酯类衍生物的应用，通过将所制备的一系列香豆素-噻唑酯类衍生物应用到不同细菌病害中，鉴定结果显示对金黄色葡萄球菌、李斯特菌、大肠杆菌及沙门氏菌的抑制效果显著。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，本发明提供了一种香豆素-噻唑酯类衍生物，结构式如式Ⅰ所示：

其中，R¹为氢或者卤素；R²为二乙氨基；R³为苯基、对氯苯基、间氯苯基、邻氯苯基、对甲苯基、异丁基、萘基；当R¹位置有取代基时，R²位置为氢；当R²位置有取代基时，R¹位置为氢。

本发明还提供一种所述的香豆素-噻唑酯类衍生物的制备方法，包括以下步骤：

将中间体4与中间体7溶解后，加入DCC、DMAP，在0℃下反应10-15小时，经过纯化得到香豆素-噻唑酯类衍生物。

其中，R¹为氢或者卤素；R²为二乙氨基；R³为苯基、对氯苯基、间氯苯基、邻氯苯基、对甲苯基、异丁基、萘基；其中，当R¹位置有取代基时，R²位置为氢；当R²位置有取代基时，R¹位置为氢。

优选的，所述中间体4的制备方法如下：

将水杨醛1与麦氏酸2溶解后，加入吡啶与醋酸，回流，等待粗品结晶，抽滤后经过醇洗即可得到中间体4，中间体4的制备过程如下所示，在由水杨醛1和麦氏酸2制备中间体4的过程中，中间体3为过渡态产物：

其中，R¹为氢或者卤素；R²为二乙氨基；当R¹位置有取代基时，R²位置为氢；当R²位置有取代基时，R¹位置为氢，a为六氢吡啶、乙酸和乙醇，b为回流2h。

优选的，所述中间体7的制备方法如下：

将化合物5与超干四氢呋喃加入到充满氮气的容器中，降温至零下78℃，然后加入正丁基锂，反应一段时间后，向容器中加入化合物6，继续反应一段时间后，将反应升温至室温继续反应一段时间，反应完成后用水淬灭反应，经过纯化可得到中间体7，中间体7的制备过程如下所示：

其中，R³为苯基、对氯苯基、间氯苯基、邻氯苯基、对甲苯基、异丁基、萘基。

优选的，中间体4和中间体7的摩尔比为1.1:1。

优选的，DCC、DMAP的加入量的摩尔比为1.5:0.1。

优选的，水杨醛1与麦氏酸2的摩尔比为1:1。

优选的，吡啶与醋酸的加入量的摩尔比为4:1。

优选的，化合物5与化合物6的摩尔比为1:3。

优选的，加入正丁基锂后反应0.75h，加入化合物6后反应1h，升温至室温后反应2h。

本发明还提供一种所述的香豆素-噻唑酯类衍生物在作为抗菌剂中的应用。

本发明至少具有以下有益效果：

本发明公开的香豆素-噻唑酯类衍生物是以中间体4与中间体7为原料，加入催化量的DCC、DMAP，在0℃下反应10-15小时即可通过一步反应合成目标产物，该合成方法后处理过程简单。本发明所述方法制备了24种不同的衍生物，并提供了这些衍生物的化学结构同时还验证了其抗细菌活性，结果显示大多数化合物抑制的效果一般；化合物8p对4种细菌均表现出优异的抗菌活性，IC₅₀值分别为21.386,17.142,28.401和15.971μM。在这些化合物中，8i和8v对金黄色葡萄球菌表现出最佳的抗菌活性，8x显示出对抗李斯特菌的最佳抗菌活性。本申请为开发以香豆素-噻唑酯类衍生物为活性成分的新型抗细菌剂提供了基础。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的合成路线图。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。

实施例1

化合物1的制备方法：

(1)将2-羟基苯甲醛1(0.02mol)和麦氏酸2(0.02mol)溶解在乙醇中，然后加入六氢吡啶和乙酸作为催化剂，在乙醇中回流。然后粗产物在溶剂中结晶，过滤并用乙醇洗涤后，得到中间体4；

(2)向在充满氮气的圆底烧瓶中加入4,5-二甲基噻唑(5)(1mL,9.45mmol)和THF，并将混合物冷却至-78℃。然后将正丁基锂(1.9M，6mL，11.3mmol)逐滴加入烧瓶中。将混合物在-78℃下搅拌45分钟。然后加入苯甲醛6(28.4mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。之后，将反应体系升温至室温并反应2小时。最后，加入水以淬灭反应。用乙酸乙酯和水萃取反应混合物。将合并的有机萃取液用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过重结晶(乙酸乙酯/石油醚)纯化所得残余物，得到中间体7；

(3)将中间体4和中间体7溶解在二氯甲烷中至玻璃烧瓶中，然后加入DCC和DMAP作为缩合剂，在0℃下反应10-15小时。在薄层色谱(TLC)监测反应完成后，将混合物真空过滤并浓缩。最后，通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝4：1)分离和纯化上述粗产物，得到化合物1。

化合物1：(4,5-二甲基噻唑-2-基)(苯基)甲基2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯(8a)，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.48(s,1H),7.62–7.54(m,3H),7.42(d,J＝7.4Hz,2H),7.28(dd,J＝11.3,5.7Hz,4H),7.23(t,J＝7.3Hz,1H),2.22(dd,J＝30.7,16.9Hz,6H).¹³CNMR(150MHz,CDCl₃)δ170,162.96,156.71,155.03,148.62,134.35,129.54,128.71,128.42,127.98,127.20,126.45,124.86,118.09,117.79,116.67,116.64,61.92,14.20,11.24.MS(ESI):392.09(C₂₂H₁₇NO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₇NO₄S:C,67.50；H,4.38；N,3.58；O,16.35；S,8.19；Found:C,67.48；H,4.39；N,3.57；O,16.33；S,8.20。

实施例2

化合物2的制备方法与实施例1不同之处，仅在于以对氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物2为(4-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.58(s,1H),7.66–7.58(m,2H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.40–7.26(m,4H),7.15(s,1H),2.27(dd,J＝19.4,11.3Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ162.95,161.71,155.40,153.17,149.54,136.31,134.67,129.66,128.92,128.67,127.90,127.74,124.84,117.78,117.56,116.85,116.05,75.32,14.66,11.22.MS(ESI):426.05(C₂₂H₁₆ClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₆ClNO₄S:C,62.05；H,3.79；Cl,8.32；N,3.29；O,15.03；S,7.53；Found:C,62.04；H,3.80；Cl,8.31；N,3.28；O,15.01；S,7.51。

实施例3

化合物3的制备方法与实施例1不同之处，仅在于以异丁醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物3为1-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2-甲基丙基2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.53(s,1H),7.61(dd,J＝15.8,7.6Hz,2H),7.34–7.28(m,2H),5.95(d,J＝6.6Hz,1H),2.28(d,J＝2.8Hz,6H),2.25(s,1H),0.98(d,J＝6.8Hz,3H),0.93(dd,J＝20.5,6.8Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ169.26,163.24,162.06,156.22,155.25,148.80,134.43,129.59,126.48,125.82,124.77,117.80,116.73,79.04,33.33,18.64,14.63,11.16.MS(ESI):358.10(C₁₉H₁₉NO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₁₉H₁₉NO₄S:C,63.85；H,5.36；N,3.92；O,17.90；S,8.97；Found:C,63.83；H,5.37；N,3.91；O,17.91；S,8.99。

实施例4

化合物4的制备方法与实施例1不同之处，仅在于以1-萘甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物4为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(萘-1-基)甲基2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.62(s,1H),8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.98–7.90(m,2H),7.87(d,J＝8.1Hz,2H),7.67–7.61(m,1H),7.60(d,J＝7.7Hz,1H),7.56–7.46(m,3H),7.38–7.29(m,2H),2.29(d,J＝16.4Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.37,161.73,156.27,155.37,149.48,148.50,134.53,133.83,133.57,130.48,129.64,129.58,128.77,128.15,126.67,125.89,125.39,125.37,124.76,123.72,117.83,116.79,73.43,14.70,11.25.MS(ESI):442.10(C₂₆H₁₉NO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₆H₁₉NO₄S:C,70.73；H,4.34；N,3.17；O,14.50；S,7.26；Found:C,70.72；H,4.32；N,3.18；O,14.51；S,7.25。

实施例5

化合物5的制备方法与实施例1不同之处，仅在于以间氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物5为(3-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.61(s,1H),7.81(d,J＝7.7Hz,1H),7.67–7.59(m,2H),7.57(s,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.38–7.28(m,4H),2.31(d,J＝4.2Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ161.63,161.52,156.23,155.35,149.46,148.94,133.18,129.94,129.71,129.66,128.78,127.27,124.81,117.80,117.59,116.81,72.29,14.75,11.26.MS(ESI):426.05(C₂₂H₁₆ClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₆ClNO₄S:C,62.05；H,3.79；Cl,8.32；N,3.29；O,15.03；S,7.53；Found:C,62.03；H,3.77；Cl,8.31；N,3.30；O,15.05；S,7.51。

实施例6

化合物6的制备方法与实施例1不同之处，仅在于以邻氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物6为(2-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.60(s,1H),7.80(d,J＝6.8Hz,1H),7.66–7.59(m,2H),7.56(s,1H),7.38(d,J＝7.7Hz,1H),7.31(dt,J＝23.3,7.8Hz,4H),2.30(d,J＝4.5Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ161.62,161.50,156.23,155.33,149.47,135.59,133.16,129.94,129.68,128.77,128.13,127.27,118.02,117.78,117.54,116.78,72.27,14.74,11.25.MS(ESI):426.05(C₂₂H₁₆ClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₆ClNO₄S:C,62.05；H,3.79；Cl,8.32；N,3.29；O,15.03；S,7.53；Found:C,62.03；H,3.78；Cl,8.30；N,3.28；O,15.04；S,7.55。

实施例7

化合物7的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为甲基以及以间氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物7为(3-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基-6-甲基-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.55(s,1H),7.79(dd,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.55(s,1H),7.43(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),7.38(d,J＝7.7Hz,2H),7.30(ddt,J＝9.0,7.5,4.0Hz,2H),7.22(d,J＝8.5Hz,1H),2.39(s,3H),2.30(d,J＝5.0Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ161.69,161.59,156.52,153.49,149.54,148.91,135.83,134.71,129.93,129.69,129.29,128.77,127.28,117.53,117.24,116.48,72.21,20.63,14.75,11.27.MS(ESI):440.06(C₂₃H₁₈ClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₃H₁₈ClNO₄S:C,62.80；H,4.12；Cl,8.06；N,3.18；O,14.55；S,7.29；Found:C,62.81；H,4.13；Cl,8.04；N,3.17；O,14.53；S,7.28。

实施例8

化合物8的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为溴以及以对甲基苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物8为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(对甲苯基)甲基6-溴-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.49(s,1H),7.75(d,J＝2.2Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,2H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),7.21–7.15(m,3H),2.34(s,3H),2.30(d,J＝10.5Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.53,161.18,155.50,154.12,148.57,147.69,138.80,137.14,134.73,131.65,129.43,127.26,126.49,119.26,118.54,117.33,76.12,21.19,14.68,11.22.MS(ESI):484.01(C₂₃H₁₈BrNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd forC₂₃H₁₈BrNO₄S:C,57.03；H,3.75；Br,16.50；N,2.89；O,13.21；S,6.62；Found:C,57.01；H,3.76；Br,16.51；N,2.88；O,13.20；S,6.63。

实施例9

化合物9的制备方法与实施例1不同之处，仅在于R¹为溴，其他步骤同实施例1的步骤。化合物9为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(苯基)甲基6-溴-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.50(s,1H),7.79–7.67(m,2H),7.58(d,J＝7.3Hz,2H),7.35(dt,J＝28.0,7.0Hz,3H),7.24–7.17(m,2H),2.29(d,J＝8.7Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.28,161.27,155.50,154.09,148.57,147.85,137.62,137.19,131.68,128.82,128.73,127.22,119.23,118.75,118.52,117.34,76.14,14.68,11.23.MS(ESI):470.00(C₂₂H₁₆BrNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₆BrNO₄S:C,56.18；H,3.43；Br,16.99；N,2.98；O,13.61；S,6.82；Found:C,56.17；H,3.42；Br,16.97；N,2.96；O,13.60；S,6.83。

实施例10

化合物10的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为溴以及以对氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物10为(4-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基6-溴-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.49(s,1H),7.77–7.71(m,2H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.27(s,1H),7.25(s,1H),7.16(s,1H),2.31(d,J＝13.6Hz,6H).¹³CNMR(150MHz,CDCl₃)δ162.69,161.27,155.49,154.14,148.75,148.04,137.32,136.12,134.82,131.69,128.97,128.67,119.18,118.64,118.56,117.42,75.50,14.68,11.24.MS(ESI):503.96(C₂₂H₁₅BrClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₅BrClNO₄S:C,52.35；H,3.00；Br,15.83；Cl,7.02；N,2.77；O,12.68；S,6.35；Found:C,52.36；H,3.02；Br,15.84；Cl,7.03；N,2.78；O,12.67；S,6.33。

实施例11

化合物11的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为溴以及以异丁醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物11为1-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2-甲基丙基-6-溴-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.45(s,1H),7.76(d,J＝2.1Hz,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.24(s,1H),5.96(d,J＝6.6Hz,1H),2.44(dq,J＝13.5,6.7Hz,1H),2.31(d,J＝4.1Hz,6H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),1.00(d,J＝6.8Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ162.97,161.68,155.56,154.04,148.14,147.29,137.07,131.61,126.57,119.26,118.53,117.32,79.33,33.35,18.66,14.70,11.23.MS(ESI):436.01(C₁₉H₁₈BrNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₁₉H₁₈BrNO₄S:C,52.30；H,4.16；Br,18.31；N,3.21；O,14.67；S,7.35；Found:C,52.31；H,4.15；Br,18.30；N,3.22；O,14.65；S,7.34。

实施例12

化合物12的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为溴以及以1-萘甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物12为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(萘-1-基)甲基6-溴-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.52(s,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.94(s,1H),7.89(dd,J＝17.6,7.6Hz,3H),7.73(dd,J＝4.8,2.0Hz,1H),7.71(d,J＝4.2Hz,1H),7.69–7.65(m,1H),7.57–7.47(m,3H),2.29(d,J＝17.3Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.13,161.30,155.58,154.11,148.59,147.95,137.17,133.82,133.38,131.66,130.90,130.43,129.68,128.81,128.25,126.73,125.94,125.36,123.64,119.25,118.83,118.52,117.34,73.64,14.72,11.27.MS(ESI):520.01(C₂₆H₁₈BrNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd forC₂₆H₁₈BrNO₄S:C,60.01；H,3.49；Br,15.35；N,2.69；O,12.30；S,6.16；Found:C,60.02；H,3.47；Br,15.36；N,2.68；O,12.31；S,6.15。

实施例13

化合物13的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为溴以及以间苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物13为(3-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基6-溴-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.51(s,1H),7.79–7.69(m,3H),7.55(s,1H),7.40(dd,J＝7.6,1.0Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),7.24(d,J＝8.8Hz,1H),2.31(d,J＝5.3Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ161.39,161.09,155.54,154.09,149.01,147.94,137.21,131.68,130.03,129.74,128.74,127.29,119.22,118.68,118.53,117.37,72.47,14.76,11.28.MS(ESI):503.96(C₂₂H₁₅BrClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₅BrClNO₄S:C,52.35；H,3.00；Br,15.83；Cl,7.02；N,2.77；O,12.68；S,6.35；Found:C,52.36；H,3.02；Br,15.82；Cl,7.01；N,2.75；O,12.67；S,6.37。

实施例14

化合物14的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为硝基以及以间氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物14为(3-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基-6-硝基-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ10.56(s,1H),8.71(d,J＝2.7Hz,1H),8.34(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.63–7.60(m,1H),7.47(dd,J＝5.2,3.9Hz,1H),7.37–7.34(m,2H),7.22(d,J＝9.2Hz,1H),7.07(s,1H),2.34(s,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ187.26,163.13,161.17,149.21,142.25,133.10,130.63,130.47,130.13,127.90,127.77,124.67,114.98,77.15,14.75,11.38.MS(ESI):471.03(C₂₂H₁₅ClN₂O₆S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₅ClN₂O₆S:C,56.12；H,3.21；Cl,7.53；N,5.95；O,20.39；S,6.81；Found:C,56.10；H,3.20；Cl,7.52；N,5.93；O,20.38；S,6.82。

实施例15

化合物15的制备方法与实施例1不同之处，仅在于R¹为氯，其他步骤同实施例1的步骤。化合物15为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(苯基)甲基6-氯-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.51(s,1H),7.59(dd,J＝9.7,4.3Hz,4H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.36–7.28(m,2H),7.20(s,1H),2.30(d,J＝8.8Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.29,161.21,155.64,153.63,148.58,148.03,137.59,134.45,130.19,128.86,128.77,128.61,127.23,118.69,118.30,76.15,14.72,11.28.MS(ESI):426.05(C₂₂H₁₆ClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₆ClNO₄S:C,62.05；H,3.79；Cl,8.32；N,3.29；O,15.03；S,7.53；Found:C,62.04；H,3.78；Cl,8.31；N,3.28；O,15.04；S,7.55。

实施例16

化合物16的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为氯以及以对氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物16为(4-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基-6-氯-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.51(s,1H),7.62–7.58(m,2H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(dd,J＝20.7,8.5Hz,3H),7.16(s,1H),2.31(d,J＝14.0Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ162.71,161.30,155.53,153.68,148.72,148.11,136.13,134.81,134.50,130.24,128.96,128.67,124.33,123.42,118.71,118.68,118.29,75.49,14.66,11.23.MS(ESI):460.01(C₂₂H₁₅Cl₂NO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₅Cl₂NO₄S:C,57.40；H,3.28；Cl,15.40；N,3.04；O,13.90；S,6.96；Found:C,57.41；H,3.29；Cl,15.41；N,3.03；O,13.91；S,6.97。

实施例17

化合物17的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为氯以及以1-萘甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物17为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(萘-1-基)甲基6-氯-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.52(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H),8.12(s,1H),7.94(s,1H),7.91(d,J＝7.0Hz,1H),7.88(d,J＝7.9Hz,3H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.31(d,J＝8.9Hz,2H),2.30(s,3H),2.28(s,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.06,162.66,158.44,153.48,153.09,152.11,146.95,139.44,134.06,132.71,130.45,128.38,127.85,119.08,118.24,118.18,108.68,62.17,14.15,14.05.MS(ESI):476.06(C₂₆H₁₈ClNO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₆H₁₈ClNO₄S:C,65.61；H,3.81；Cl,7.45；N,2.94；O,13.45；S,6.74；Found:C,65.60；H,3.80；Cl,7.46；N,2.96；O,13.43；S,6.75。

实施例18

化合物18的制备方法与实施例1不同之处，在于R¹为氯以及以间氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物18为(3-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基6-氯-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),7.72(s,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,2H),7.55–7.50(m,2H),7.32(s,1H),7.30(s,1H),1.94(d,J＝11.5Hz,3H),1.83(d,J＝12.7Hz,3H).¹³CNMR(150MHz,CDCl₃)δ163.30,162.65,158.45,156.12,154.48,153.09,152.10,146.98,139.45,134.07,132.72,130.45,128.38,127.85,119.07,118.24,118.19,62.18,14.15,14.06.MS(ESI):460.01(C₂₂H₁₅Cl₂NO₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₂H₁₅Cl₂NO₄S:C,57.40；H,3.28；Cl,15.40；N,3.04；O,13.90；S,6.96；Found:C,57.41；H,3.27；Cl,15.41；N,3.03；O,13.92；S,6.95。

实施例19

化合物19的制备方法与实施例1不同之处，在于R²为二乙氨基以及以对甲基苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物19为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(对甲苯基)甲基7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),7.66(s,1H),7.35(d,J＝8.9Hz,1H),7.28(s,1H),6.59(d,J＝8.8Hz,2H),6.47(d,J＝5.6Hz,2H),6.42(s,1H),3.51(s,4H),2.41(s,3H),2.31-2.30(d,J＝6Hz,6H),1.25-1.22(t,J＝6Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ165.13,164.23,160.17,158.45,158.19,156.89,153.62,152.83,151.62,149.09,142.03,130.94,129.88,117.96,109.45,109.14,107.69,107.33,97.05,96.76,61.10,14.33,12.40,12.38.MS(ESI):477.18(C₂₇H₂₈N₂O₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₇H₂₈N₂O₄S:C,68.05；H,5.92；N,5.88；O,13.43；S,6.73；Found:C,68.04；H,5.91；N,5.87；O,13.41；S,6.74。

实施例20

化合物20的制备方法与实施例1不同之处，在于R²为二乙氨基，其他步骤同实施例1的步骤。化合物20为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(苯基)甲基7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),7.67(s,1H),7.35(d,J＝12.1Hz,1H),7.29–7.27(m,1H),7.25(s,1H),6.60(s,2H),6.47(s,2H),6.43(s,1H),3.48-3.44(m,4H),2.41-2.39(t,J＝6Hz,6H),1.25-1.22(m,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ165.03,162.10,156.15,153.32,150.75,147.43,141.68,128.59,128.28,126.52,124.60,123.79,119.07,115.79,108.04,105.46,92.07,73.65,49.16,14.53,14.06,11.26.MS(ESI):463.16(C₂₆H₂₆N₂O₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₆H₂₆N₂O₄S:C,67.51；H,5.67；N,6.06；O,13.84；S,6.93；Found:C,67.50；H,5.66；N,6.05；O,13.85；S,6.94。

实施例21

化合物21的制备方法与实施例1不同之处，在于R²为二乙氨基以及以1-萘甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物21为(4,5-二甲基噻唑-2-基)(萘-1-基)甲基7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.48(d,J＝7.8Hz,1H),8.29(t,J＝8.1Hz,1H),7.93(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(t,J＝7.3Hz,1H),7.86–7.82(m,2H),7.53–7.45(m,3H),7.32(t,J＝8.4Hz,1H),6.57(d,J＝14.6Hz,1H),6.43(d,J＝7.7Hz,1H),3.46–3.39(m,4H),2.27(t,J＝8.0Hz,6H),1.25-1.19(m,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ164.20,162.28,158.67,157.82,153.09,149.73,148.33,133.81,131.22,130.62,128.64,126.52,125.75,125.45,125.37,123.95,109.50,108.14,107.73,96.73,72.59,45.06,14.69,12.40,11.23.MS(ESI):513.18(C₃₀H₂₈N₂O₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₃₀H₂₈N₂O₄S:C,70.29；H,5.51；N,5.46；O,12.48；S,6.25；Found:C,70.28；H,5.50；N,5.48；O,12.46；S,6.24。

实施例22

化合物22的制备方法与实施例1不同之处，在于R²为二乙氨基以及以间氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物22为(3-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.48(s,1H),7.58(s,1H),7.50(d,J＝7.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.9Hz,1H),7.31–7.28(m,2H),7.15(s,1H),6.60(d,J＝8.9Hz,1H),6.45(s,1H),3.45(q,J＝7.1Hz,4H),2.31(s,3H),2.29(s,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.59,162.54,158.74,157.75,153.22,149.77,148.53,140.34,134.46,131.30,129.88,128.61,128.37,127.41,127.33,125.51,124.69,109.59,107.72,96.75,74.41,45.10,14.67,12.41,11.21.MS(ESI):497.12(C₂₆H₂₅ClN₂O₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₆H₂₅ClN₂O₄S:C,62.83；H,5.07；Cl,7.13；N,5.64；O,12.88；S,6.45；Found:C,62.81；H,5.06；Cl,7.11；N,5.65；O,12.89；S,6.44。

实施例23

化合物23的制备方法与实施例1不同之处，在于R²为二乙氨基以及以邻氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物23为(2-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸甲酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.48(s,1H),7.81(d,J＝7.7Hz,1H),7.54(s,1H),7.38(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝9.0Hz,1H),7.32(d,J＝7.6Hz,1H),7.28(d,J＝7.7Hz,1H),6.59(dd,J＝8.9,2.1Hz,1H),6.44(s,1H),3.44(q,J＝7.1Hz,4H),2.30(d,J＝6.2Hz,6H).¹³CNMR(150MHz,CDCl₃)δ162.51,162.47,158.68,157.80,153.12,149.74,148.72,136.20,133.17,131.23,129.62,129.60,128.88,128.18,127.73,127.16,109.53,107.73,96.74,71.56,45.07,14.73,12.41,11.23.MS(ESI):497.12(C₂₆H₂₅ClN₂O₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcdfor C₂₆H₂₅ClN₂O₄S:C,62.83；H,5.07；Cl,7.13；N,5.64；O,12.88；S,6.45；Found:C,62.84；H,5.09；Cl,7.11；N,5.65；O,12.90；S,6.44。

实施例24

化合物24的制备方法与实施例1不同之处，在于R²为二乙氨基以及以对氯苯甲醛代替实施例1步骤(2)中的苯甲醛，其他步骤同实施例1的步骤。化合物24为(4-氯苯基)(4,5-二甲基噻唑-2-基)甲基7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸酯，结构式如下所示：

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.46(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(dd,J＝14.3,8.7Hz,3H),7.14(s,1H),6.59(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),6.43(d,J＝1.8Hz,1H),3.44–3.40(m,4H),2.30-2.27(m,6H),1.22(t,J＝6Hz,6H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ163.87,162.66,158.71,156.87,153.20,149.79,148.48,136.94,134.34,131.31,129.91,128.79,128.69,127.33,109.62,107.67,96.67,74.49,45.11,14.70,12.41,10.93.MS(ESI):497.12(C₂₆H₂₅ClN₂O₄S,[M+H]⁺).Anal.Calcd for C₂₆H₂₅ClN₂O₄S:C,62.83；H,5.07；Cl,7.13；N,5.64；O,12.88；S,6.45；Found:C,62.85；H,5.06；Cl,7.12；N,5.65；O,12.89；S,6.46.

实施例25香豆素-噻唑酯类衍生物抗细菌活性的研究实验对象：实施例1-24分别制备的香豆素-噻唑酯类衍生物，即化合物1-化合物24。

待测菌液的制备：从新鲜菌种斜面沾取少量的菌苔，接种在适合细菌生长的液体培养基中，将细菌放在37℃的培养箱中培养18-24h。培养后加入2-3mL的无菌生理盐水，用无菌的接种针将菌体充分的洗下，用管口带棉花的无菌吸管从斜面中吸出悬液于无菌试管中，然后进行计数。细菌再用MH培养基稀释50倍，使其最终浓度为10³-10⁵cfu/mL。

对照药物：新生霉素，环丙沙星，加替沙星，左氧氟沙星。

药敏板的制备：将化合物配成1mg/mL的母液，以二倍稀释法稀释成50、25、12.5、6.25、3.125μg/ml的溶液，选取50、12.5、6.25，3.125μg/mL四个浓度进行实验。以96孔板第一条为空白对照，加入100ul培养基，第二条为阳性对照，加入100μL菌悬液。其余的孔中加入90μl的菌悬液和10μL的药物溶液。每个药物溶液浓度平行3次。

培养：细菌放在37℃的培养箱中培养24h后加入2mg/mL的MTT溶液50μL作用4-5h后，每孔再加入50μL用PBS配制的2mg/mL MTT溶液作用12h后用酶标分析仪在600nm下测各孔的OD值。

实验结果见表1：

表1 香豆素-噻唑酯类衍生物的抗细菌活性

结果表明：本发明所述香豆素-噻唑酯类衍生物对金黄色葡萄球菌、李斯特菌、大肠杆菌及沙门氏菌四种细菌显示出比较强的抑制活性，其中，化合物8p对4种细菌均表现出优异的抗菌活性，IC₅₀值分别为21.386,17.142,28.401和15.971μM。在这些化合物中，8i和8v对金黄色葡萄球菌表现出最佳的抗菌活性，8x显示出对抗李斯特菌的最佳抗菌活性。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。