一种苯并噻唑衍生物及其医药用途
阅读说明：本技术 一种苯并噻唑衍生物及其医药用途 (Benzothiazole derivative and medical application thereof ) 是由 李文燕 王丽 刘洪涛 洪斌 许艳妮 司书毅 李文雅 姜珊 冀凯 李玥 于 2021-10-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种苯并噻唑衍生物及其医药用途。本发明提供了系列苯并噻唑衍生物,研究发现该系列的苯并噻唑衍生物可以有效抑制PCSK9的转录水平,因而具有开发成PCSK9抑制剂药物的前景,具有开发成治疗通过抑制PCSK9的转录水平进而得到缓解的疾病的药物的前景。(The invention discloses a benzothiazole derivative and medical application thereof. The invention provides a series of benzothiazole derivatives, and researches show that the series of benzothiazole derivatives can effectively inhibit the transcription level of PCSK9, so the derivatives have the prospect of being developed into PCSK9 inhibitor medicines and the prospect of being developed into medicines for treating diseases which are relieved by inhibiting the transcription level of PCSK 9.)
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种苯并噻唑衍生物及其医药用途。
背景技术
心血管疾病(Cardivascular disease,CVD)是一个全球性疾病，每年死于心血管疾病的人数多于其它任何原因的死亡人数，是全球头号死因。动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是CVD的主要病理基础。低密度脂蛋白胆固醇(low densitylipoprotein cholesterol,LDL-C)通过促进泡沫细胞的形成及炎症反应在AS的发生、发展中发挥重要作用。血清LDL-C水平的升高是导致心血管疾病发生的主要危险因素。流行病学研究证实，降低LDL-C可降低心血管疾病风险，LDL-C水平越低，心血管事件的发生率也越低。大量的临床试验证明，降低LDL-C没有下限，对于高风险患者越低的LDL-C水平可能越有益。
低密度脂蛋白受体(LDL receptor,LDLR)介导的低密度脂蛋白(low densitylipoprotein,LDL)清除是决定循环中LDL-C水平的主要因素。细胞表面的LDLR可以与血浆中的LDL结合，介导细胞摄取LDL将其转运至溶酶体降解，而LDLR则重新循环至细胞表面，继续发挥降低LDL的作用。
前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type9,PCSK9)是一种肝脏分泌型蛋白。PCSK9可以在肝细胞通过直接与LDLR结合阻止LDLR循环，从而升高LDL-C水平。PCSK9也可分泌进入血液，血液中的PCSK9可以与细胞表面的LDLR发生特异性结合形成复合物并转运至溶酶体，从而导致LDLR加速降解，LDL-C不能进入肝脏代谢，使LDL-C水平升高。因此，抑制PCSK9可以显著降低血浆LDL-C水平。
2003年，研究人员在两个常染色体显性形式的家族性高胆固醇血症法国家庭中发现两种PCSK9基因突变——S127R和F216L，其可导致严重的家族性高胆固醇血症。2005年，研究人员描述了两种PCSK9功能缺失型突变——Y142X和C679X，这两种突变携带者在非洲裔美国人群中出现频率较高，LDL-C水平只有(100±45)mg/dL，与正常人的(138±42)mg/dL相比减少了28％，患冠心病的风险可下降88％。这一发现确立了PCSK9中两种相对常见的“功能缺失型”突变和低血浆LDL-C水平之间的因果关系。
目前已有两种FDA批准的人类单克隆抗体应用于临床，分别是Alirocumab和Evolocumab。单克隆抗体通过中和PCSK9来抑制PCSK9与LDLR的相互作用，导致LDLR数量增加，最终增强LDL的吸收。在高胆固醇血症和非家族性胆固醇升高的血脂异常患者中，当单独使用Alirocumab或Evolocumab，或者将单克隆抗体与其他降脂药物联合使用时，均可显著降低LDL水平，降幅最高达60％。此外，PCSK9 siRNA药物Inclisiran也于2020年底上市，具有显著的疗效，作为长效降脂药，Inclisiran仅需每年皮下注射给药两次即可有效地降低血液循环中低密度脂蛋白LDL-C的水平，达到降低血脂的效果。PCSK9单抗及siRNA药物可降低心血管事件和肝功能异常的发生率，逆转动脉粥样硬化斑块，但抗体及siRNA制备所导致的成本过高使得其推广受限。
通过小分子化合物来抑制PCSK9的表达一直极具挑战性。目前小分子PCSK9抑制剂的研究正在逐渐增多，部分候选化合物进入临床Ⅰ期研究。与单抗类药物相比，小分子化合物具有药物剂型选择性更多和治疗成本更低的优势。由于PCSK9与LDLR的结合位点缺少药物作用口袋，小分子化合物难以结合，因此通过抑制PCSK9转录水平的表达来降低血浆胆固醇水平成为预防和治疗AS新的方向。因此，寻找小分子PCSK9转录抑制剂对于高血脂症和冠心病的预防和治疗及开发新的降脂药物具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种苯并噻唑衍生物及其医药用途。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
一种苯并噻唑衍生物，其化学结构式为如下结构式中的一种：
上述苯并噻唑衍生物用于制备PCSK9抑制剂药物的用途。
上述苯并噻唑衍生物用于制备治疗通过抑制PCSK9的转录水平进而得到缓解的疾病的药物的用途。
有益效果：
本发明提供了系列苯并噻唑衍生物，研究发现该系列的苯并噻唑衍生物可以有效抑制PCSK9的转录水平，因而具有开发成PCSK9抑制剂药物的前景，具有开发成治疗通过抑制PCSK9的转录水平进而得到缓解的疾病的药物的前景。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1 2-{[1-(2,6-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
1. 2-氯苯并噻唑-6-甲酸乙酯
将无水CuCl2溶于30mL无水乙腈中，冰浴下加入亚硝酸叔丁酯，将2-氨基苯并噻唑-6-甲酸乙酯分三次加入反应液中，TLC监测反应进程。反应完全后，减压蒸馏除去乙腈，向反应液中加入1N HCl水溶液，依次用水、乙酸乙酯、饱和食盐水洗剂，有机相用无水MgSO4干燥，抽滤，减压浓缩，再进行柱层析分离，得白色固体，产率为79.7％。熔点为134-135℃。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.82(d,J＝1.8Hz,1H),8.13-8.01(m,2H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ165.54,157.38,153.80,136.53,127.98,127.62,124.87,122.87,61.62,14.66,14.58.ESI-MS,m/z:242.1[M+H]+,244.1[M+Na]+.
2. 1-(2,6-二氯苯磺酰基)-4-羟基哌啶
将4-羟基哌啶溶于重蒸的四氢呋喃中，将2,6-二氯苯磺酰氯分三次加入反应瓶中，间隔一小时，每次加完加入吡啶。室温搅拌，7h后反应完全。将反应液减压蒸馏除去溶剂，向反应瓶中加入水，乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸镁干燥后，减压抽滤浓缩，得粗产品黄色油状化合物，收率为83％。粗品无需纯化直接投入下步反应。ESI-MS,m/z:310.0[M+H]+.
3. 2-{[1-(2,6-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯
将1-(2,6-二氯苯磺酰基)-4-羟基哌啶溶于乙腈，加入Cs2CO3，升温至50℃搅拌1h后，加入2-氯苯并噻唑-6-甲酸乙酯，5小时后反应停止。将反应液减压蒸馏除去溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸镁干燥后，减压抽滤浓缩，柱层析分离得到白色粉末状副标题化合物2-{[1-(2,6-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，收率为51％。熔点为116-118℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(d,J＝1.4Hz,1H),8.06(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,2H),7.36-7.32(m,1H),5.45-5.43(m,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),3.67-3.61(m,2H),3.55-3.49(m,2H),2.22-2.17(m,2H),2.12-2.05(m,2H),1.41(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.29,166.31,152.92,135.85,135.35,132.00,131.87,127.82,126.06,123.58,123.42,120.57,76.71,61.32,42.58,30.47,14.59.ESI-MS,m/z:537.0[M+Na]+.
实施例2 2-{[1-(2,4-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和2,4-二氯苯磺酰氯，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(2,4-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为45％。熔点为140-142℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(d,J＝1.1Hz,1H),8.04(dd,J＝16.3,8.4Hz,2H),7.65(d,J＝8.5Hz,1H),7.56(d,J＝1.8Hz,1H),7.39(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),5.42(s,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),3.55-3.39(m,4H),2.20-2.04(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.25,166.32,152.86,139.75,135.34,133.44,133.09,132.31,132.07,131.85,127.83,126.08,123.37,120.45,76.53,61.33,42.66,30.43,14.51.ESI-MS,m/z:537.0[M+Na]+.
实施例3 2-{[1-(2,3-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和2,3-二氯苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(2,3-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体收率为42％。熔点为144-146℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(d,J＝1.2Hz,1H),8.05(td,J＝8.2,1.5Hz,2H),7.70-7.65(m,2H),7.36(t,J＝8.0Hz,1H),5.45-5.42(m,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),3.60-3.42(m,4H),2.22-2.04(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.28,166.33,152.84,139.03,136.17,134.74,134.60,131.84,130.90,130.45,127.83,126.09,123.37,120.63,76.60,61.33,42.70,30.51,14.63.ESI-MS,m/z:537.0[M+Na]+.
实施例4 2-{[1-(2-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和2,三氟甲基苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(2-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为47％。熔点为102-104℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.36(d,J＝1.4Hz,1H),8.17-8.15(m,1H),8.05(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.93-7.91(m,1H),7.73-7.71(m,2H),7.65(d,J＝8.5Hz,1H),5.44-5.40(m,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),3.53-3.36(m,4H),2.21-2.04(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.28,166.33,152.88,138.06,133.01,132.45,132.12,131.84,128.82,127.81,126.05,124.08,123.40,121.35,120.47,76.61,61.32,42.53,30.29,14.59.ESI-MS,m/z:537.0[M+Na]+.
实施例5 2-{[1-(4-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和4-三氟甲基苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(4-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为50％。熔点为152-154℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.34(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.3Hz,2H),7.84(d,J＝8.3Hz,2H),7.62(d,J＝8.5Hz,1H),5.34-5.30(m,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),3.32-3.19(m,4H),2.23-2.09(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.13,166.31,152.81,140.28,134.99,134.66,131.83,128.28,127.83,126.59,126.11,123.53,120.48,76.06,61.34,43.09,30.04,14.53.ESI-MS,m/z:537.0[M+Na]+.
实施例6 2-{[1-(3-氟苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和3-氟苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(3-氟苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为46％。熔点为124-126℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.34(s,1H),8.06-8.03(m,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.60-7.53(m,2H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(t,J＝7.6Hz,1H),5.32-5.31(m,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),3.30-3.17(m,4H),2.23-2.08(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.17,166.30,163.96,161.45,152.83,138.60,138.53,131.82,127.81,126.07,123.34,120.41,115.11,76.17,61.32,43.15,30.03,14.49.ESI-MS,m/z:486.6[M+Na]+.
实施例7 2-{[1-(2,6-二氟苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和2，6-二氟苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(2,6-二氟苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为41％。熔点为160-162℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝1.2Hz,1H),8.05(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.58-7.51(m,1H),7.06(t,J＝8.8Hz,2H),5.41-5.38(m,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),3.52-3.40(m,4H),2.24-2.09(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.05,166.10,161.02,158.48,152.55,131.57,127.64,125.92,123.41,123.31,120.37,115.80,76.30,61.13,42.47,30.04,14.37.ESI-MS,m/z:505.1[M+Na]+.
实施例8 2-{[1-(2-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和2-三氟甲氧基苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(2-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为45％。熔点为112-114℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.35(d,J＝1.2Hz,1H),8.06-8.01(m,2H),7.65-7.62(m,2H),7.45-7.40(m,2H),5.40-5.37(m,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),3.51-3.30(m,4H),2.21-2.03(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.27,166.33,152.91,146.36,134.75,132.02,131.85,131.01,127.80,126.03,123.40,121.72,120.46,119.13,76.64,61.31,42.72,30.46,14.58.ESI-MS,m/z:553.0[M+Na]+.
实施例9 2-{[1-(3-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例1步骤的方法，除第二步原料为4-羟基哌啶和3-三氟甲氧基苯磺酰氯外，其他与实施例1相同，制备得到副标题化合物2-{[1-(3-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，为白色粉末固体，收率为47％。熔点为100-102℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.34(s,1H),8.04(dd,J＝8.5,1.2Hz,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.64-7.60(m,3H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),5.32-5.30(m,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),3.31-3.16(m,4H),2.23-2.06(m,4H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(CDCl3,101MHz)δ174.17,166.31,152.79,149.64,138.72,131.81,127.82,126.10,123.53,123.40,121.78,120.43,120.27,76.16,61.33,43.11,30.02,14.52.ESI-MS,m/z:553.0[M+Na]+.
实施例10 2-{[1-(2,6-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠的制备
根据实施例1制备2-{[1-(2,6-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯，将酯溶于四氢呋喃中，加入10％NaOH水溶液和无水乙醇。室温搅拌，2h后反应完全。反应液减压蒸馏浓缩，将浓缩的反应液置于冷藏室冷藏，8h后反应瓶中有大量白色固体生成，减压抽滤，蒸馏水洗涤滤饼，滤饼经真空干燥后到副标题化合物2-{[1-(2,6-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为79％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.29(s,1H),7.91(dd,J＝8.3,1.2Hz,1H),7.70(d,J＝7.7Hz,2H),7.62-7.60(m,1H),7.51(d,J＝8.3Hz,1H),5.36-5.32(m,1H),3.60-3.56(m,2H),3.40-3.35(m,2H),2.18-2.14(m,2H),1.90-1.81(m,2H).13C NMR(DMSO-d6,101MHz)δ172.01,169.38,149.66,137.05,134.88,134.68,134.42,132.62,130.47,128.02,123.06,119.33,76.82,42.88,30.47.HRMS:C19H15Cl2N2NaO5S2 H for[M+Na]+,calculated 508.9775found 508.9748.
实施例11 2-{[1-(2,4-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠的制备
根据实施例10步骤的方法，以2-{[1-(2,4-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯(实施例2)为原料，制备得到副标题化合物2-{[1-(2,4-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为82％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(d,J＝1.1Hz,1H),7.99(d,J＝8.6Hz,1H),7.95(d,J＝2.0Hz,1H),7.90(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),7.67(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),5.32-5.28(m,1H),3.51-3.46(m,2H),3.30-3.24(m,2H),2.15-2.12(m,2H),1.88-1.82(m,2H).13C NMR(DMSO-d6,101MHz)δ172.05,169.60,149.72,138.96,136.82,135.23,133.23,132.71,132.38,132.17,130.47,128.42,127.95,123.18,123.04,119.46,119.25,76.88,43.04,30.39.HRMS:C19H15Cl2N2NaO5S2 H for[M+Na]+,calculated 508.9775found 508.9764.
实施例12 2-{[1-(2,3-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯的制备
根据实施例10步骤的方法，以2-{[1-(2,3-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯(实施例3)为原料，制备得到副标题化合物2-{[1-(2,3-二氯苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为91％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.28(s,1H),7.99(t,J＝6.9Hz,2H),7.91(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(t,J＝8.0Hz,1H),7.50(d,J＝8.3Hz,1H),5.34-5.30(m,1H),3.55-3.51(m,2H),3.33-3.29(m,2H),2.16-2.13(m,2H),1.88-1.82(m,2H).13C NMR(DMSO-d6,101MHz)δ172.08,169.73,149.77,138.79,136.69,135.35,135.10,130.61,130.49,129.62,129.14,128.06,123.14,119.37,76.82,43.07,30.52.HRMS:C19H15Cl2N2NaO5S2H for[M+Na]+,calculated 508.9775found508.9755.
实施例13 2-{[1-(2-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠的制备根据实施例10步骤的方法，以2-{[1-(2-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯(实施例4)为原料，制备得到副标题化合物2-{[1-(2-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为92％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.28(s,1H),8.10(d,J＝7.5Hz,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,1H),7.96-7.88(m,3H),7.50(d,J＝8.3Hz,1H),5.34-5.30(m,1H),3.51-3.47(m,2H),3.32-3.26(m,2H),2.17-2.14(m,2H),1.92-1.84(m,2H).13C NMR(DMSO-d6,101MHz)δ172.09,169.64,149.76,137.75,136.72,134.02,131.49,130.48,129.14,128.05,126.81,126.49,124.47,123.12,121.75,119.36,76.78,43.10,30.42.HRMS:C20H16F3N2NaO5S2Na for[M-H]-,calculated485.0438found 485.0438.
实施例14 2-{[1-(4-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠的制备根据实施例10步骤的方法，以2-{[1-(4-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯(实施例5)为原料，制备得到副标题化合物2-{[1-(4-三氟甲基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为89％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.28(d,J＝1.1Hz,1H),8.11(d,J＝7.3Hz,1H),8.06-8.04(m,1H),7.96-7.89(m,3H),7.51(d,J＝8.3Hz,1H),5.34-5.31(m,1H),3.51-3.46(m,2H),3.33-3.27(m,2H),2.19-2.14(m,2H),1.92-1.84(m,2H).13C NMR(DMSO-d6,101MHz)δ172.08,171.99,169.65,149.71,140.15,136.75,133.43,131.50,130.43,128.89,128.06,127.14,123.10,119.36,76.57,43.58,29.95.HRMS:C20H16F3N2NaO5S2Na for[M-H]-,calculated485.0438 found485.0459.
实施例15 2-{[1-(2-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠的制备
根据实施例10步骤的方法，以2-{[1-(2-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯(实施例8)为原料，制备得到副标题化合物2-{[1-(2-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为84％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.27(d,J＝1.0Hz,1H),7.97(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.91-7.83(m,2H),7.64(dd,J＝15.4,7.7Hz,2H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),5.29-5.25(m,1H),3.41-3.37(m,2H),3.21-3.16(m,2H),2.17-2.13(m,2H),1.88-1.81(m,2H).13C NMR(DMSO-d6,101MHz)δ172.03,169.71,149.74,145.48,136.72,136.02,131.87,130.46,130.39,128.00,124.12,123.13,122.07,121.55,119.39,118.97,76.56,43.07,30.40.HRMS:C20H16F3N2NaO6S2H for[M-H]-,calculated 501.0407found501.0411.
实施例16 2-{[1-(3-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠的制备
根据实施例10步骤的方法，以2-{[1-(3-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸乙酯(实施例9)为原料，制备得到副标题化合物2-{[1-(3-三氟甲氧基苯磺酰基)-哌啶]-4-基氧基}苯并噻唑-6-甲酸钠，为白色粉末固体，收率为94％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.26(s,1H),7.90(d,J＝8.3Hz,1H),7.84(d,J＝5.1Hz,2H),7.85-7.80(m,3H),7.48(d,J＝8.3Hz,1H),5.22-5.18(m,1H),3.28-3.26(m,2H),3.03(t,J＝8.5Hz,2H),2.16-2.13(m,2H),1.92-1.83(m,2H).HRMS:C20H16F3N2NaO6S2H for[M-H]-,calculated501.0407found 501.0426.
实施例17药理活性测试
1、实验材料
MEM培养基及胎牛血清购自Hyclone；G418购自美国Invitrogen公司；荧光素酶检测试剂盒(LuciferaseAssay System)购自Promega公司。
2、实验方法
2.1细胞培养
人肝癌细胞株HepG2细胞培养于含10％胎牛血清的MEM培养基中；PCSK9p-LucHepG2(基于荧光素酶报告体系的人PCSK9转录抑制剂高通量筛选细胞模型)培养于含500μg·mL-1G418和10％胎牛血清的MEM培养基中；所有细胞都在5％CO2培养箱中37℃贴壁培养。
2.3活性筛选
取对数生长期的PCSK9p-Luc HepG2细胞，以细胞数约5×105/mL接种于96孔透明底白板，每孔加入单细胞悬液100μL。6-8h待细胞贴壁后，移除原培养基，用PBS漂洗细胞一次。每孔分别加入5μg/ml化合物溶液，每个化合物每个浓度设两个复孔。18-24h后移除培养基，用PBS轻轻漂洗后，每孔加入25μl细胞裂解液，37℃裂解细胞30-45min。待细胞完全裂解后，每孔迅速加入50μl萤火虫荧光素酶检测试剂，立即将分析白板放入酶标仪中检测。根据如下公式计算待测样品对PCSK9启动子活性的抑制率：
抑制率(％)＝(加入空白对照样品DMSO后的荧光素酶活性-加入化合物后的荧光素酶活性)/加入空白对照样品DMSO后的荧光素酶活性×100％。
3、实验结果
上述实验结果表明，本发明提供的苯并噻唑衍生物可以有效抑制PCSK9的转录水平，因而具有开发成PCSK9抑制剂药物的前景，具有开发成治疗通过抑制PCSK9的转录水平进而得到缓解的疾病的药物的前景。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
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