一种β-内酰胺化合物、其用途及其制备方法
阅读说明：本技术 一种β-内酰胺化合物、其用途及其制备方法 (Beta-lactam compound, application and preparation method thereof ) 是由 宋丹青 唐胜 游雪甫 李志文 汪燕翔 卢曦 李迎红 胡辛欣 郭志浩 王秀坤 于 2020-06-02 设计创作，主要内容包括：本发明为一种β-内酰胺化合物、其用途及其制备方法,涉及一种下述通式(I)所示化合物,其对于细菌、尤其是革兰阴性菌具有很好的抗菌性,且耐药性低,具有有效治疗多种病症的良好前景(式(I)中,R-(1)、R-(2)各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基,或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；R-(3)、R-(4)各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基,或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；X表示C或者N；Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基,或者羧基。)。(The invention relates to a beta-lactam compound, an application and a preparation method thereof, and relates to a compound shown in a general formula (I), which has good antibacterial property on bacteria, especially gram-negative bacteria, low drug resistance and good prospect of effectively treating various diseases (in the formula (I), R is 1 、R 2 Each independently represents a hydrogen atom, an optionally substituted C1-10 linear or branched alkyl group, or both together form a cycloalkyl group having 3 to 8 ring carbon atoms; r 3 、R 4 Each independently represents a hydrogen atom, an optionally substituted C1-10 linear or branched alkyl group, an optionally substituted C6-12 aryl group, or both of them form a cyclic carbon number of 3Cycloalkyl to 8; x represents C or N; y represents an optionally substituted linear or branched alkenyl or alkynyl group having 2 to 6 carbon atoms, or a carboxyl group. ).)
技术领域
本发明涉及一种新型的β-内酰胺化合物及其制备方法。该β -内酰胺化合物对于细菌、尤其是革兰阴性菌具有很好的抗菌性，且耐药性极低，适于制备性能优异的抗菌剂。
背景技术
目前为止，已经开发出了多种抗菌剂，例如β-内酰胺类，氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯类等。其中，β-内酰胺类、例如下述式所示的氨曲南因其抗菌谱广，抗菌活性强、对β-内酰胺酶等稳定以及毒性低等特点，已经成为治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一。然而氨曲南对部分菌类、尤其是革兰氏阴性菌的抗菌活性不甚理想，针对于此，相继出现氨曲南衍生物的合成与研究。例如以下专利文献1～3中公开了氨曲南的相关衍生物。但是，目前获得的氨曲南衍生物在耐药性方面仍然存在极大的改善空间。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：CN106164072A
专利文献2：US4816582A
专利文献3：国际公开第WO2017/050218A1号
发明内容
发明要解决的问题
本发明的技术问题在于，提供一种针对革兰氏阴性菌的耐药性低、抗菌活性优异的新型的β-内酰胺化合物、其用途及其制备方法。
用于解决问题的技术手段
本发明如下所示。
[1]一种通式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
式(I)中，R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3 至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；X表示C或者N； Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基。
[2]根据[1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物如下述通式(I-1)所示：
式(I-1)中，R1、R2、R3、R4、X的定义同上。
[3]根据[1]或[2]所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物如下述通式(A)所示：
式(A)中，R1、R2、R3、R4的定义同上。
[4]根据[1]～[3]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R3和R4一起形成成环碳数为3至8的环烷基。
[5]根据[1]～[4]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1和R2一起形成成环碳数为3至8的环烷基。
[6]根据[1]～[4]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为下述化合物：
[7]根据[1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物如下述通式(I-2)所示：
式(I-2)中，R5表示任选具有取代基的碳数为3～7的烯基或炔基、X的定义同上。
[8]根据[7]所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物如下述通式(B)所示：
式(B)中，R5的定义同上。
[9]根据[8]所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为选自下述的化合物：
[10]一种通式(I)所示化合物的制备方法，其包括：
步骤a：
通过下述式(1)所示化合物和式(2)所示化合物反应生成式(3)所示的化合物；
上述各式中，PG表示保护基；R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的 C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；X表示C或者N；Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基；
步骤b：
通过上述式(3)和三氟乙酸及三乙基硅烷反应脱去保护基而制备通式(I)所示化合物，
式(I)中，R1、R2、R3、R4、X、Y的定义同上。
[11]一种通式(I)所示化合物在制备革兰氏阴性菌的抗菌剂中的用途，
式(I)中，R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3 至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；X表示C或者N； Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基。
发明的效果
本发明化合物对于对于革兰氏阴性菌、诸如大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、伤寒沙门菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、雷极普鲁菲登杆菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、嗜麦芽假单胞菌、福氏志贺菌等具有优异的抗菌活性优异，且耐药性低。
具体实施方式
首先，对本发明中的一些表述做以说明。
“任选具有取代基”的含义包括：在一个或多个位置上被其后列出的基团中的任意一个或任意组合所取代；
“卤素”或“卤代”可以是氟、氯、溴或碘；
“C1～X(例如C1～10)烷基”表示具有1～X(例如1～10) 个碳原子的直链或支链烷基；可列举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、丁基、叔丁基、戊基及己基等，其可以解释为包括C1、C2、C3、C4、 C5、C6、C7、C8、...CX(例如C10)在内的各个形态结构的烷基，并不限定于上述列举的例子；
上述各个形态的烷基是指包括直链或支链的各种可能基团，例如丁基，包括正丁基、异丁基、叔丁基。
“C3～X(例如C3～8)环烷基”表示具有3～X(例如3～8) 个成环碳原子的环烷基；可列举出例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基等，其可以解释为包括C3、C4、C5、C6、...CX (例如C8)在内的各个形态结构的环烷基，并不限定于上述列举的例子；
“C6～X(例如C6～12)芳基”表示具有6～X(例如6～12) 个碳原子的芳基；其可以解释为包括C6、C7、C8、...CX(例如 C12)在内的各个形态结构的芳基，并不限定于上述列举的例子；
“C2～X(例如C2～6)烯基”表示具有2～X(例如2～6)个碳原子的直链或支链烯基；其可以解释为包括C2、C3、...CX(例如C6)在内的各个形态结构的烯基，并不限定于上述列举的例子；
“C2～X(例如C2～6)炔基”表示具有2～X(例如2～6)个碳原子的直链或支链炔基；其可以解释为包括C2、C3、...CX(例如C6)在内的各个形态结构的炔基，并不限定于上述列举的例子；
“羧基”是指基团-COOH；
本发明中的取代基选自由任选具有1个以上卤素原子的 C1-C6烷氧基、任选具有1个以上卤素原子的C1-C6烷基、任选具有1个以上卤素原子的C1-C6烷硫基、硫基、氧基、氰基、羟基、硝基及卤素原子组成的组；
本发明的化合物中存在光学异构体、几何异构体时，其包括所有的异构体类别。
在本发明的一个方面，提供下述通式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
式(I)中，R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3 至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；X表示C或者N； Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基。
R1、R2各自独立地表示：
氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；优选表示任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基；更优选表示任选具有取代基的 C1～6的直链或支链烷基；进一步优选表示任选具有取代基的 C1～3的直链或支链烷基；特别优选表示甲基；
R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10 的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；优选表示氢原子、任选具有取代基的C1～6的直链或支链烷基、或者两者一起形成成环碳数为3至6的环烷基；更优选表示氢原子、任选具有取代基的C1～6 的直链或支链烷基、或者两者一起形成成环碳数为3至6的环烷基；特别优选各自为氢原子、异丙基、或者两者一起形成成环碳数为3至6的环烷基。
Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基；优选表示任选具有取代基的碳数为2～4的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基；特别优选表示任选具有取代基的乙烯基、或者任选具有取代基的乙炔基、或者羧基。
作为本发明化合物的形态，可列举如下。
〔形态1〕在本发明通式(I)中的Y表示羧基的化合物，即下述通式(I-1)所示的化合物：
式(I-1)中，R1、R2、R3、R4、X的定义同上。
〔形态2〕在本发明通式(I)中的Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的烯基或炔基的化合物，即下述通式(I-2)所示的化合物：
式(I-2)中，R5表示任选具有取代基的碳数为3～7的烯基或炔基、X的定义同上。
〔形态3〕下述通式(I-1-1)所示的化合物：
式(I-1-1)中，R1、R2各自独立地表示氢原子、甲基或乙基，环A表示成环碳数为3至6的环烷基，X表示C或N。
〔形态4〕下述通式(I-1-2)所示的化合物：
式(I-1-2)中，R1、R2各自独立地表示氢原子、甲基或乙基， R3表示乙基、异丙基、苯基、或成环碳数为3至6的环烷基，X表示C或N。
〔形态5〕下述通式(I-1-3)所示的化合物：
式(I-1-3)中，环A表示成环碳数为3至6的环烷基，环B表示成环碳数为3至6的环烷基，X表示C或N。
〔形态6〕下述通式(A)所示的化合物：
式(A)中，R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3 至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基。
〔形态7〕下述通式(B)所示的化合物：
式(B)中，R5表示任选具有取代基的碳数为3～7的烯基或炔基。
〔形态8〕下述各化合物：
在本发明的另一个方面，提供下述通式(I)所示化合物的制备方法，其包括：
步骤a：
通过下述式(1)所示化合物和式(2)所示化合物反应生成式(3)所示的化合物；
上述各式中，PG表示保护基；
R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10 的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10 的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；X表示C或者N；Y表示任选具有取代基的碳数为2～6的直链或支链的烯基或炔基，或者羧基；
步骤b：
通过上述式(3)和三氟乙酸及三乙基硅烷反应脱去保护基而制备通式(I)所示化合物，
式(I)中，R1、R2、R3、R4、X、Y的定义同上。
作为本发明通式(I)所示化合物的制备方法的形态，可列举如下。
〔形态一〕
通式(A)所示化合物的制备方法，其合成路线如下：
上述各式中，R1、R2各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基，或者两者一起形成成环碳数为3 至8的环烷基；R3、R4各自独立地表示氢原子、任选具有取代基的C1～10的直链或支链烷基、任选具有取代基的C6～12的芳基，或者两者一起形成成环碳数为3至8的环烷基；PG1、PG2表示保护基。
在上述步骤1a(step 1a)中，将化合物7a溶解在溶剂中，并加入三乙胺、分批加入三苯基氯甲烷，在室温下进行反应。反应完全后，获得中间化合物7b。
作为在上述步骤1a的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、氯仿、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇以及它们的混合物。
在上述步骤1b(step 1b)中，将化合物7b溶解在1,4-二氧六环/水(50:50)中，并加入氢氧化钠，继续搅拌反应直至原料消失。减压蒸出1,4-二氧六环，调节pH至2-3，搅拌、过滤，水洗滤饼，至滤液中性，收集并干燥滤饼，得到化合物7c。
在上述步骤1(step 1)中，将化合物1、二苯基溴甲烷分散于有机溶剂中，并于室温下搅拌，加入DBU(1,8-二氮杂二环- 十一碳-7-烯)，升温至70-80℃，搅拌反应直至原料不再减少后，降温至室温。萃取反应液，合并有机相，干燥，浓缩得残余物，柱层析分离得化合物2。
作为在上述步骤1的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤2(step 2)中，将化合物2、二苯基磷酰羟胺分散于有机溶剂中,氮气抽排3-4次，于0℃搅拌，然后加入叔丁醇钠，恒温搅拌反应直至反应物转化完全，向反应液中加入饱和氯化钠溶液,搅拌并滤除不溶物，得到化合物3。
作为在上述步骤2的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤3(step 3)中，将化合物7c分散于有机溶剂中,室温搅拌下，加入化合物3的甲醇溶液，恒温搅拌反应直至原料转化完全，柱层析得到化合物4。
作为在上述步骤3的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：甲醇、乙醇、异丙醇、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤4(step 4)中，将化合物4分散于有机溶剂中,分别加入HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯)、NaHCO3、化合物8，室温搅拌反应直至原料转化完全，柱层析得到化合物5。
作为在上述步骤4的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤5(step 5)中，将化合物5溶解于有机溶剂中,于 -5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷及三氟乙酸，恒温反应至反应完全，室温减压蒸除溶剂，分离得到目标产物、即通式(A) 所示化合物。
作为在上述步骤5的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：无水二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
〔形态二〕
通式(B)所示化合物的制备方法，其合成路线如下：
上述各式中，R5表示任选具有取代基的碳数为3～7的烯基或炔基，PG2表示保护基。
在上述步骤1(step 1)中，将化合物7溶于有机溶剂中,加入三乙胺,分批加入三苯基氯甲烷,室温搅拌反应直至反应完全后，萃取、干燥浓缩，得到化合物8。
作为在上述步骤1的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤2(step 2)中，将化合物8溶于有机溶剂中,加入K2CO3,加入烯丙基溴,室温搅拌反应直至反应完全后，萃取、干燥浓缩，得到化合物9。
作为在上述步骤2的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤3(step 3)中，将化合物9溶于1,4-二氧六环/ 水(50:50)，于室温搅拌，加入氢氧化钠,继续搅拌反应直至原料消失，减压蒸出1,4-二氧六环,将pH调至2-3，搅拌、过滤，水洗至滤液中性，得到化合物10。
在上述步骤4(step 4)中，将化合物10分散于有机溶剂中,分别加入HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲；六氟磷酸酯)、NaHCO3、化合物8，室温搅拌反应直至原料转化完全，柱层析得到化合物11。
作为在上述步骤4的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在上述步骤5(step 5)中，将化合物11溶解于有机溶剂中,于 -5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷及三氟乙酸，恒温反应至反应完全，室温减压蒸除溶剂，分离得到目标产物、即通式(B) 所示化合物。
作为在上述步骤5的反应中使用的有机溶剂，可列举出例如：无水二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等。
在本发明的又一个方面，提供上述通式(I)所示化合物或其盐在制备革兰氏阴性菌的抗菌剂中的用途。
接下来，本发明化合物的具体例如下所示。
通式(I)中的R1～R4均为氢原子、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1～R4均为甲基、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4均为乙基、Y为羧基、 X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为氢原子、R4为丙基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为氢原子、R4为丁基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4均为丙基、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4均为丁基、Y为羧基、 X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4均为戊基、Y为羧基、 X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4均为己基、Y为羧基、 X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环丙基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环丁基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环戊基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环己基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环庚基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环辛基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为乙基、R4为氢原子、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为异丙基、R4为氢原子、 Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为苯基、R4为氢原子、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为环丙基、R4为氢原子、 Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为环丁基、R4为氢原子、 Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为环戊基、R4为氢原子、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3为环己基、R4为氢原子、 Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1为氢原子、R2为乙基、R3、R4一起形成环丙基、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1为氢原子、R2为乙基、R3、R4一起形成环丁基、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1为氢原子、R2为乙基、R3、R4一起形成环戊基、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1为氢原子、R2为乙基、R3、R4一起形成环己基、Y为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环丙基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环丁基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环戊基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环己基、Y 为羧基、X为C原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环丙基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环丁基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环戊基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为甲基、R3、R4一起形成环己基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环丙基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环丁基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环戊基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I)中的R1、R2均为乙基、R3、R4一起形成环己基、Y 为羧基、X为N原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为烯丙基、X为C原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为炔丙基、X为C原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为烯丁基、X为C原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为炔丁基、X为C原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为烯丙基、X为N原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为炔丙基、X为N原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为烯丁基、X为N原子的化合物；
通式(I-2)中的R5为炔丁基、X为N原子的化合物；
等等。
本发明的化合物并不限定于上述列出的各个化合物例。
本发明的“药学上可接受的盐”是指确保本发明化合物自身具备的生物学有效性、且典型地在生物学或其他方面不具有不良性能的盐。在多种情形之下，通过氨基和/或羧基或与其类似的基团的存在，本发明的化合物能够形成酸和/或碱盐。
药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。
可以与本发明化合物形成无机盐的无机碱，可以列举例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氨等。
可以与本发明化合物形成无机盐的无机酸，可以列举例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以与本发明化合物形成有机盐的有机碱，可以列举例如伯胺、仲胺、叔胺、乙二胺、丙二胺、丁二胺、苯甲胺、苯乙胺等。
可以与本发明化合物形成有有机盐的有机酸，可以列举例如甲酸、乙酸、丙酸、草酸、柠檬酸、苯甲酸等。
实施例
以下，利用制造例及试验例等对本发明进行更详细的说明，但本发明不仅仅限定于这些例子。
化合物(A-1)～(A-7)的具体合成路线如下所示：
<制造例>
制造例1：化合物(A-1)的合成
步骤1a(Step 1a):将化合物7a(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g) 中,加入三乙胺(2.0mmol),分批加入三苯基氯甲烷(1.2mmol), 室温搅拌反应6小时，TLC监测，反应完全后，加入水/乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥浓缩，柱层析分离得目标化合物7b.
步骤1b(Step 1b):将化合物7b(1.0mmol)溶于1,4-二氧六环 (5v/g)/水(5v/g)，于室温搅拌，加入氢氧化钠(5.0mmol),继续搅拌反应，TLC监测，原料消失，减压蒸出1,4-二氧六环,将pH 调至2-3，搅拌10分钟，过滤，水洗滤饼，至滤液中性，收集并干燥滤饼，得化合物7c。
步骤1(Step 1):将化合物1a(1.0mmol)、二苯基溴甲烷(1.1mmol)分散于甲苯溶液(10.0v/g)中，并于室温下搅拌，加入DBU(1.5mmol)，升温至70-80℃，搅拌反应12-16小时， TLC监控原料不再减少后，降温至室温，加入水(10.0v/g╳2) 萃取反应液，乙酸乙酯(10v/g╳2)反洗水层，合并有机相，干燥，浓缩得残余物，柱层析分离得透明油状化合物2a(后固化) [1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)7.42–7.31(m,10H),6.96(s, 1H),1.44(dd,J＝8.1,4.9Hz,2H),1.25(dd,J＝8.1,4.9Hz,2H)]。
步骤2(Step 2):将化合物2a(1.0mmol)、二苯基磷酰羟胺(1.1 mmol)分散于无水四氢呋喃溶液(10.0v/g)中,氮气抽排3-4 次，于0℃搅拌，然后加入叔丁醇钠(1.5mmol)，恒温搅拌反应 1-2小时，TLC监控，反应物转化完全，向反应液中加入饱和氯化钠溶液(5.0v/g),搅拌30分钟后，滤除不溶物，乙酸乙酯洗涤滤饼，向滤液中加入乙酸乙酯(10.0v/g)，水(5.0v/g)，分液，水洗有机相一次，合并水相，乙酸乙酯反洗水相，合并有机相，干燥，浓缩得油状物3a[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)7.46– 7.27(m,10H),6.84(s,1H),6.36(s,2H),1.30–1.22(m,4H)]。
步骤3(Step 3):化合物7c分散于甲醇(10.0v/g)中,室温搅拌下，加入化合物3a的甲醇溶液，恒温搅拌反应30分钟，TLC 监测，原料转化完全，减压蒸出溶剂，柱层析分离的类白色固体化合物4a[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)8.84(s,1H),7.51– 7.15(m,25H),6.86(s,2H),1.48–1.28(m,4H)]。
步骤4(Step 4):将化合物4a(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g), 室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8(1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，柱层析分离得类白色泡状固体化合物5a[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.29(d,J＝7.9Hz, 1H),8.91(s,1H),7.45–7.43(m,3H),7.36–7.33(m,6H),7.32– 7.22(m,15H),6.86(s,1H),6.76(d,J＝0.5Hz,1H),4.56(d,J＝ 7.9Hz,1H),1.50–1.40(m,5H),1.30(m,2H),1.20(s,2H)]。
步骤5(Step 5):将上述白色固体5a(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷(10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0 mmol)及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5-6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMC ODS-A,5um, 10*250mm,2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物(A-1)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.40(d,J＝7.9Hz,1H), 6.89(s,1H),4.62(d,J＝8.0Hz,1H),1.44(s,3H),1.36(m,4H), 1.25(s,3H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ(ppm)173.7,169.8, 161.9,111.6,68.3,63.3,61.3,60.2,23.8,21.0,16.2.13C NMR(151 MHz,DMSO)δ173.7,169.8,161.9,111.6,68.3,63.3,61.3,60.2, 23.8,21.0,16.2.HRMS:cacled forC14H17N5O9S2[M-H]462.0396, found 462.0394
制造例2：化合物(A-2)的合成
化合物(A-2)的合成方法，参见(A-1)。
2b:1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)7.44(d,J＝7.4Hz, 4H),7.37(t,J＝7.6Hz,4H),7.29(t,J＝7.3Hz,2H),6.83(s,1H), 5.87(s,1H),2.47–2.40(m,2H),2.16–2.07(m,2H),1.89–1.74 (m,2H).；
3b:1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)7.35(ddd,J＝46.9, 31.4,7.3Hz,10H),6.85(s,1H),6.11(s,2H),2.35(ddd,J＝13.4, 7.2,3.7Hz,2H),2.22–2.09(m,2H),1.92–1.74(m,2H).；
4b:1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)8.58(s,1H),7.50– 7.15(m,25H),6.78(s,1H),6.12(s,1H),2.42(s,2H),2.25–2.22 (m,2H),1.96–1.69(m,2H).(含有50％杂质，参考Z21e)；
(A-2):1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.56(d,J＝7.3Hz, 1H),6.89(s,1H),4.66(d,J＝7.8Hz,1H),2.45(s,2H),2.35– 2.19(m,2H),1.99–1.79(m,2H),1.46(s,3H),1.32(s,3H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ(ppm)173.6,170.3,161.8,129.5,128.8, 126.7,111.5,83.7,68.4,61.4,30.6,30.5,23.7,21.0,13.9.HRMS: cacled for C15H19N5O9S2[M+Na]500.0516,found 500.0500.
制造例3：化合物(A-3)的合成
步骤1:将化合物1c(1.0mmol)、二苯基溴甲烷(1.1 mmol)分散于甲苯溶液(10.0v/g)中，并于室温下搅拌，加入DBU (1.5mmol)，升温至70-80℃，搅拌反应12-16小时，TLC监控原料不再减少后，降温至室温，加入水(10.0v/g╳2)萃取反应液，乙酸乙酯(10v/g╳2)反洗水层，合并有机相，干燥，浓缩得残余物，柱层析分离得透明油状化合物2c(后固化)[1H NMR(600 MHz,DMSO)δ(ppm)7.45–7.24(m,10H),6.80(s,1H),5.27(s, 1H),2.03–1.91(m,2H),1.79–1.63(m,6H)]。
步骤2:将化合物2c(1.0mmol)、二苯基磷酰羟胺(1.1mmol) 分散于无水四氢呋喃溶液(10.0v/g)中,氮气抽排3-4次，于0℃搅拌，然后加入叔丁醇钠(1.5mmol)，恒温搅拌反应1-2小时， TLC监控，反应物转化完全，向反应液中加入饱和氯化钠溶液 (5.0v/g),搅拌30分钟后，滤除不溶物，乙酸乙酯洗涤滤饼，向滤液中加入乙酸乙酯(10.0v/g)，水(5.0v/g)，分液，水洗有机相一次，合并水相，乙酸乙酯反洗水相，合并有机相，干燥，浓缩得油状物3c,未进一步纯化，直接用于下一步反应。
步骤3:化合物7c分散于甲醇(10.0v/g)中,室温搅拌下，加入化合物3c的甲醇溶液，恒温搅拌反应30分钟，TLC监测，原料转化完全，减压蒸出溶剂，柱层析分离的类白色固体化合物 4c[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)8.86(s,1H),7.50–7.17(m, 25H),6.80(s,1H),6.78(s,1H),2.11–1.94(m,4H),1.69–1.68(d, 4H)]。
步骤4:将化合物4c(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g),室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8 (1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，柱层析分离得类白色泡状固体化合物 5c[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.35(d,J＝7.6Hz,1H), 8.88(s,1H),7.48–7.17(m,25H),6.80(s,1H),6.68(s,1H),4.57 (d,J＝7.7Hz,1H),2.16–1.90(m,4H),1.81–1.57(m,4H),1.45 (s,3H),1.27(s,3H)]。
步骤5:将上述白色固体5c(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷 (10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0mmol) 及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5-6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌 1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMC ODS-A,5um,10*250mm, 2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物 (A-3)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.51(d,J＝7.6Hz,1H), 6.86(s,1H),4.63(d,J＝7.7Hz,1H),2.09–1.97(m,4H),1.73– 1.64(m,4H),1.46(s,3H),1.29(s,3H).13C NMR(151MHz, DMSO)δ(ppm)174.83,163.48,161.82,149.85,140.60,110.92, 92.84,68.28,61.44,35.83,24.64,24.51,23.75,20.91.HRMS: cacled for C16H21N5O9S2[M-H]490.0708,found 490.0700.
制造例4：化合物(A-4)的合成
步骤1:将化合物1d(1.0mmol)、二苯基溴甲烷(1.1 mmol)分散于甲苯溶液(10.0v/g)中，并于室温下搅拌，加入DBU (1.5mmol)，升温至70-80℃，搅拌反应12-16小时，TLC监控原料不再减少后，降温至室温，加入水(10.0v/g╳2)萃取反应液，乙酸乙酯(10v/g╳2)反洗水层，合并有机相，干燥，浓缩得残余物，柱层析分离得透明油状化合物2d(后固化) 1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)7.44–7.26(m, 10H),6.84(s,1H),5.37(d,J＝6.0Hz,1H),3.95(dd,J＝5.8,5.2 Hz,1H),2.07–1.95(m,1H),0.86(d,J＝6.9Hz,3H),0.78(d,J＝ 6.8Hz,3H)]。
步骤2:将化合物2d(1.0mmol)、二苯基磷酰羟胺(1.1mmol) 分散于无水四氢呋喃溶液(10.0v/g)中,氮气抽排3-4次，于0℃搅拌，然后加入叔丁醇钠(1.5mmol)，恒温搅拌反应1-2小时， TLC监控，反应物转化完全，向反应液中加入饱和氯化钠溶液 (5.0v/g),搅拌30分钟后，滤除不溶物，乙酸乙酯洗涤滤饼，向滤液中加入乙酸乙酯(10.0v/g)，水(5.0v/g)，分液，水洗有机相一次，合并水相，乙酸乙酯反洗水相，合并有机相，干燥，浓缩得油状物 1H NMR(600MHz, CDCl3)δ7.37–7.26(m,10H),7.00(s,1H),4.11(d,J＝5.3Hz, 1H),2.11–2.06(m,1H),0.92(d,J＝6.9Hz,3H),0.87(d,J＝6.9Hz,3H)]。
步骤3:化合物7c分散于甲醇(10.0v/g)中,室温搅拌下，加入化合物3d的甲醇溶液，恒温搅拌反应30分钟，TLC监测，原料转化完全，减压蒸出溶剂，柱层析分离的类白色固体化合物 4d[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)8.84(s,1H),7.51–7.15 (m,25H),6.86(s,1H),6.81(s,1H),4.49(d,J＝5.9Hz,1H),2.18 –2.04(m,1H),0.86(dd,J＝19.0,6.7Hz,6H).杂质1H NMR (600MHz,DMSO)δ(ppm)8.82(s,1H),7.48–7.11(m,25H),6.81 (s,1H),6.27(s,1H)]。
步骤4:将化合物4d(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g),室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8 (1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，柱层析分离得类白色泡状固体化合物5d，直接用于下一步反应。
步骤5:将上述白色固体5d(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷 (10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0mmol) 及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5-6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌 1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMC ODS-A,5um,10*250mm, 2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物 (A-4)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.58(d,J＝7.5Hz,1H), 6.89(s,1H),4.65(d,J＝7.6Hz,1H),4.37(d,J＝5.2Hz,1H), 2.13–2.07(m,1H),1.45(s,3H),1.30(s,3H),1.00–0.86(m, 6H)。13C NMR(151MHz,DMSO)δ172.2,170.2,164.4,163.5, 161.8,11.7,111.4,87.6,68.1,61.4,30.1,23.8,21.1,18.8,18.2. HRMS:cacled for C15H21N5O9S2[M+Na]502.0673,found 502.0677
制造例5：化合物(A-5)的合成
步骤1:将化合物1e(1.0mmol)、二苯基溴甲烷(1.1 mmol)分散于甲苯溶液(10.0v/g)中，并于室温下搅拌，加入DBU (1.5mmol)，升温至70-80℃，搅拌反应12-16小时，TLC监控原料不再减少后，降温至室温，加入水(10.0v/g╳2)萃取反应液，乙酸乙酯(10v/g╳2)反洗水层，合并有机相，干燥，浓缩得残余物，柱层析分离得透明油状化合物2e(后固化)[1H NMR(600 MHz,DMSO)δ(ppm)7.43–7.26(m,10H),6.84(s,1H),5.37(d,J ＝6.0Hz,1H),3.95(dd,J＝5.9,5.0Hz,1H),2.07–1.98(m,1H), 0.86(d,J＝6.9Hz,3H),0.78(d,J＝6.8Hz,3H)]。
步骤2:将化合物2e(1.0mmol)、二苯基磷酰羟胺(1.1mmol) 分散于无水四氢呋喃溶液(10.0v/g)中,氮气抽排3-4次，于0℃搅拌，然后加入叔丁醇钠(1.5mmol)，恒温搅拌反应1-2小时， TLC监控，反应物转化完全，向反应液中加入饱和氯化钠溶液 (5.0v/g),搅拌30分钟后，滤除不溶物，乙酸乙酯洗涤滤饼，向滤液中加入乙酸乙酯(10.0v/g)，水(5.0v/g)，分液，水洗有机相一次，合并水相，乙酸乙酯反洗水相，合并有机相，干燥，浓缩得油状物3e[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)7.43–7.40(m, 4H),7.37–7.34(m,4H),7.31–7.27(m,2H),6.89(s,1H),6.20(s, 2H),3.94(d,J＝5.8Hz,1H),1.95(m,1H),0.82(m,6H)]。
步骤3:化合物7c分散于甲醇(10.0v/g)中,室温搅拌下，加入化合物3e的甲醇溶液，恒温搅拌反应30分钟，TLC监测，原料转化完全，减压蒸出溶剂，柱层析分离的类白色固体化合物 4e[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)8.57(s,1H),7.39–7.19(m, 25H),6.84(s,1H),6.12(s,1H),4.27(d,J＝5.8Hz,1H),2.09– 1.92(m,1H),0.91–0.79(m,6H)]。
步骤4:将化合物4e(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g),室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8 (1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，柱层析分离得类白色泡状固体化合物5e，直接用于下一步反应。
步骤5:将上述白色固体5e(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷 (10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0mmol) 及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5-6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌 1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMC ODS-A,5um,10*250mm, 2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物 (A-5)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ9.53(d,J＝7.4Hz,1H),6.87(s, 1H),4.62(d,J＝7.5Hz,1H),4.31(d,J＝5.7Hz,1H),2.08(dd,J ＝13.1,6.6Hz,1H),1.45(s,3H),1.30(s,3H),0.96(dd,J＝15.5, 6.7Hz,6H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ172.4,169.9,166.0, 163.6,161.8,111.2,110.1,87.6,68.2,61.4,30.2,23.9,20.9,19.0, 18.3.HRMS:cacled forC15H21N5O9S2[M+Na]502.0673,found 502.0661
制造例6：化合物(A-6)的合成
步骤3:化合物7c分散于甲醇(10.0v/g)中,室温搅拌下，加入化合物3a的甲醇溶液，恒温搅拌反应30分钟，TLC监测，原料转化完全，减压蒸出溶剂，柱层析分离的类白色固体化合物 4e[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)8.84(s,1H),7.51–7.15(m, 25H),6.86(s,2H),1.48–1.28(m,4H)]。
步骤4:将化合物4e(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g),室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8 (1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，柱层析分离得类白色泡状固体化合物 5e[1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.29(d,J＝7.9Hz,1H), 8.91(s,1H),7.45–7.43(m,3H),7.36–7.33(m,6H),7.32–7.22 (m,15H),6.86(s,1H),6.76(d,J＝0.5Hz,1H),4.56(d,J＝7.9Hz, 1H),1.50–1.40(m,5H),1.30(m,2H),1.20(s,2H)]。
步骤5:将上述白色固体5e(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷 (10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0mmol) 及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5-6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌 1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMC ODS-A,5um,10*250mm, 2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物 (A-6)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.40(d,J＝7.9Hz,1H), 6.89(s,1H),4.62(d,J＝8.0Hz,1H),1.44(s,3H),1.36(m,4H), 1.25(s,3H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ(ppm)173.7,169.8, 161.9,111.6,68.3,63.3,61.3,60.2,23.8,21.0,16.2.13C NMR(151 MHz,DMSO)δ173.7,169.8,161.9,111.6,68.3,63.3,61.3,60.2, 23.8,21.0,16.2.HRMS:calcd forC13H16N6O9S2[M-H]463.0347。
制造例7：化合物(A-7)的合成
步骤1:将化合物1g(1.0mmol)、二苯基溴甲烷(1.1 mmol)分散于甲苯溶液(10.0v/g)中，并于室温下搅拌，加入DBU (1.5mmol)，升温至70–80℃，搅拌反应12-16小时，TLC监控原料不再减少后，降温至室温，加入水(10.0v/g╳2)萃取反应液，乙酸乙酯(10v/g╳2)反洗水层，合并有机相，干燥，浓缩得残余物，柱层析分离得透明油状化合物2g(后固化)。
步骤2:将化合物2g(1.0mmol)、二苯基磷酰羟胺(1.1mmol) 分散于无水四氢呋喃溶液(10.0v/g)中,氮气抽排3-4次，于0℃搅拌，然后加入叔丁醇钠(1.5mmol)，恒温搅拌反应1-2小时， TLC监控，反应物转化完全，向反应液中加入饱和氯化钠溶液 (5.0v/g),搅拌30分钟后，滤除不溶物，乙酸乙酯洗涤滤饼，向滤液中加入乙酸乙酯(10.0v/g)，水(5.0v/g)，分液，水洗有机相一次，合并水相，乙酸乙酯反洗水相，合并有机相，干燥，浓缩得油状物3g,未进一步纯化，直接用于下一步反应。
步骤3:化合物7c分散于甲醇(10.0v/g)中,室温搅拌下，加入化合物3g的甲醇溶液，恒温搅拌反应30分钟，TLC监测，原料转化完全，减压蒸出溶剂，得类白色固体化合物4g粗品。直接用于下一步反应
步骤4:将化合物4g(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g),室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8 (1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，得类白色泡状固体化合物5g粗品。直接用于下一步反应。
步骤5:将上述白色固体5g(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷 (10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0mmol) 及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5–6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMC ODS-A,5um,10*250mm, 2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物 (A-7)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ9.37(s,1H),6.72(s,1H),4.60 (d,1H),4.22(s,1H),2.02(s,1H),1.43(s,3H),1.29(s,3H),0.93 (s,6H).HRMS:calcd for C17H23N5O9S2[M-H]504.0864,found 504.0850。
化合物(B-1)和(B-2)的具体合成路线如下所示：
制造例8：化合物(B-1)的合成
步骤1(Step 1):将化合物7(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g) 中,加入三乙胺(2.0mmol),分批加入三苯基氯甲烷(1.2mmol), 室温搅拌反应6小时，TLC监测，反应完全后，加入水/乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥浓缩，得目标化合物粗品8a。
步骤2(Step 2):将化合物8a(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g) 中,加入K2CO3(2.0mmol),加入烯丙基溴(1.2mmol),室温搅拌反应6小时，TLC监测，反应完全后，加入水/乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥浓缩，得目标化合物粗品9a。
步骤3(Step 3):将化合物9a(1.0mmol)溶于1,4-二氧六环(5 v/g)/水(5v/g)，于室温搅拌，加入氢氧化钠(5.0mmol),继续搅拌反应，TLC监测，原料消失，减压蒸出1,4-二氧六环,将pH 调至2-3，搅拌10分钟，过滤，水洗滤饼，至滤液中性，收集并干燥滤饼，得化合物10a。
步骤4(Step4):将化合物10a(1.0mmol)溶于DMF(10.0v/g), 室温搅拌，分别加入HATU(1.2mmol),NaHCO3(2.0mmol),化合物8(1.3mmol),继续恒温搅拌反应12小时，监控反应至原料消失。加入乙酸乙酯(10.0v/g)稀释，水洗2次，乙酸乙酯反洗一次，合并有机相，干燥，浓缩，得类白色泡状固体化合物11a。直接用于下一步反应。
步骤5(Step 5):将上述白色固体11a(1.0mmol)溶于无水二氯甲烷(10.0v/g)，于-5～-10℃搅拌，向其中加入三乙基硅烷(2.0 mmol)及三氟乙酸(100.0mmol)，恒温反应5-6小时，TLC监测至反应完全，室温减压蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯，室温搅拌1小时，过滤，乙酸乙酯洗滤饼3次，收集滤饼，干燥，将上述固体，溶于甲醇/水中，pre-HPLC(YMCODS-A,5um, 10*250mm,2.5mL/min,2％-50％乙腈/0.1％甲酸水)制备分离得目标产物(B-1)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.60(d,J＝7.8Hz,1H), 6.85(s,1H),6.00–5.60(m,1H),5.36–5.31(m,1H),5.24-5.21 (m,1H),4.64(dd,J＝5.4,1.3Hz,2H),4.62(d,J＝7.8Hz,1H), 1.44(s,3H),1.26(s,4H).HRMS:calcd for C13H17O7N5S2[M-H]+ 418.0486,found 418.0484.
制造例9：化合物(B-2)的合成
化合物(B-2)的合成方法参见化合物(B-1)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ(ppm)9.64(d,J＝7.8Hz,1H), 6.89(s,1H),4.76(s,2H),4.61(d,J＝7.8Hz,1H),3.57(t,J＝2.4 Hz,1H),1.44(s,3H),1.28(s,3H).HRMS:calcd forC13H14O7N5S2 [M-H]+416.0329,found 416.0315.
<活性试验测定>
抗菌活性评价方法(MIC测定)
本研究按照CLSI/NCCLS标准，采用平皿琼脂二倍稀释法以及Denlay多点接种器(Multipoint Inoculator A400)进行抑菌活性测定试验，用水解酪蛋白胨(Mueller-Hinton agar)肉汤以及脑心浸液扩增试验菌株。本研究使用的菌株购自ATCC以及中国医院临床分离的细菌菌株，以氨曲南、多粘菌素或者左氧氟沙星为阳性对照药。用水解酪蛋白肉汤将药物稀释成128.0、64.0、32.0、16.0、 8.0、4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.06和0.03μg/mL等各种所需浓度，分别置于平皿内，充分混匀。试验菌株接种后，于35℃恒温培养18小时，观察菌株生长情况，无菌生长的平皿中所含药物浓度就是测定的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)。本发明中的化合物A-1～A-7、B-1～B-2以及作为对照的氨曲南(AZN)、粘菌素B以及左氧氟沙星的抗菌活性如下述表1～表4所示。
表1
表2
表3
表4
备注：表中的ESBLs表示β-内酰胺酶；NDM-1表示I型新德里金属β-内酰胺酶；CRE表示碳青霉烯类耐药肠杆菌；其中的(+)表示存在此种耐药、(-)表示不存在此种耐药；若耐药项下没有任何记载，表示不限定该菌通过特定的酶表现耐药。
根据表1～4可知，与作为对照的氨曲南、粘菌素B以及左氧氟沙星相比，本发明的β-内酰胺化合物对于细菌、尤其是革兰阴性菌的最小抑菌浓度低、抗菌性优异，且耐药性极低，适于制备性能优异的抗菌剂。
产业上的可利用性
本发明的β-内酰胺化合物适用于制备抗菌性优异且耐药性极低的抗菌剂。
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