一种雄激素受体降解剂及其应用

文档序号：1916004 发布日期：2021-12-03 浏览：12次 >En<

阅读说明：本技术 一种雄激素受体降解剂及其应用 (Androgen receptor degradation agent and application thereof ) 是由梅德盛何宝坤于 2020-05-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种雄激素受体降解剂及其应用,所述雄激素受体降解剂为具备式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物：本发明的化合物对AR具有良好的降解活性。(Hair brushThe androgen receptor degrading agent is a compound with a structure shown in a formula I or a pharmaceutically acceptable salt, ester, isomer, solvate, prodrug or isotopic marker thereof:)

一种雄激素受体降解剂及其应用

技术领域

本发明属于医药化学领域，具体地涉及一类具有高生物活性的新型雄激素受体降解剂、其制备方法、药物组合物以及在医药方面的用途。

背景技术

前列腺癌(PC)在男性恶性肿瘤中高居发病率第一，死亡率第二。仅中国目前就有150万前列腺癌患者，且年增长率为8.92％。同时我国流行病学研究表明，前列腺癌发病率与经济发展水平密切相关，国内发病率最高的地区为上海市。此癌是一种进展比较迅速的恶性肿瘤，若得不到早期诊治，从发现症状开始，平均存活期只有3-5年。早期PC能通过手术或化疗得到有效的控制。但对于晚期PC，其一般治疗策略是基于雄激素及其受体(AR)的抗雄激素疗法，即手术去势治疗(如双侧睾丸切除术等)和抗雄激素药物治疗。但绝大多数患者经此治疗后，在18-24周会出现病情恶化，出现去势耐受型前列腺癌(CRPC)。此时，现有临床上所使用的主要抗雄激素药物，如恩杂鲁胺和比卡鲁胺等，不再对CRPC具有抑制作用，反而对CRPC具有激动作用、促进肿瘤生长。出现CRPC后，90％患者在2年内死亡。进一步的研究表明，雄激素和它的结合的配体对CRPC的生长是必需的，表明雄激素受体仍是此疾病的重要靶点。但由于AR表达增加、AR突变及AR裂片化等原因，导致现有的抗前列腺癌药物出现耐药性甚至有激动活性。CRPC是个亟待解决的巨大临床问题。

源于诺贝尔奖的蛋白降解靶向嵌和体(PROTAC)技术是种新兴的蛋白质降解技术，其利用细胞内天然存在的蛋白降解途径来清除需要被降解的特异蛋白：通过PROTAC分子，将需降解的靶蛋白和E3泛素化连接酶连接，泛素标签转移到靶蛋白，导致靶蛋白降解。此技术可选择性的降解靶蛋白，为“斩草除根”般清除致病蛋白的治疗策略，尤其适用于发生表达增多、或发生突变的致病蛋白，以解决耐药性问题。同时PROTAC技术可以靶向传统药物技术难以成药的靶点，为重大疾病带来潜在的新治疗方法。PROTAC药物有可能超越有史以来最重要的两个药物开发领域：蛋白激酶抑制剂和单克隆抗体，其属于重大变革性的药物开发技术领域。

Arvinas公司基于PROTAC技术开发的AR降解剂ARV-110(目前未公开化学结构)在临床前模型中对耐药性前列腺癌具有显著抑制效果，已于2019年启动I期临床研究，且在同年被FDA授予快速通道资格，显示出良好发展前景。但由于PROTAC药物分子量一般在1000左右，结构复杂，导致体内外活性、药代性质、纯化存在种种问题(Comput.Struct.Biotec.,2019,17:160–176.)，所以PROTAC技术尚处于早期的开发阶段。此技术还需进行大量、多样性、差异性的研究，以促进“从技术到临床药物”的突变，从而治愈CRPC等，保障人类健康。

PROTAC药物分子均由哑铃型的三部分构成：1)一头为与待降解靶蛋白特异结合的结构部分，是重要的靶向致病蛋白的“导弹引导头”，典型的为传统小分子靶向药物；2)另一头为与E3泛素化连接酶(E3连接酶)结合的结构部分；3)中间为链接子部分(中国药物化学杂志,2019,29(3)：234-240.)。目前基于PROTAC技术高活性AR降解剂(DC₅₀<1.0μM)的哑铃型三结构中，与E3泛素化连接酶(E3连接酶)结合部分目前一般为Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素配体(CN201680014250.8；Comput.Struct.Biotec.,2019,17:160–176.；J.Med.Chem.,2019,62(24):11218-11231.；J.Med.Chem.,2019，62(2)：941-964.)；中间链接子为链状链接子。所以PTOTAC技术AR降解剂的研亢，以靶向AR结构部分研亢为核心，进行分子一体化评价的整体开发策略。

Arvinas在CN201680014250.8中所报道的其中一大系列化合物，以辉瑞开发的AR拮抗剂化合物26(J.Med.Chem.，2011，54：7693-7704，化合物编号为文献中编号)为PROTAC技术的AR特异结合结构部分，所述化合物的结构如下：

Compd.26(辉瑞文献化合物编号)

IC₅₀(LNCaP cell)＝59nM

(J.Med.Chem.，2011，54：7693-7704)。

这类化合物具有良好生物学性质，如化合物174(此化合物编号为专利CN201680014250.8中编号)等对VCaP细胞具有DC50≤50nM的AR降解活性，另外化合物469(此化合物编号为专利CN201680014250.8中编号)等具有良好的药代性质。然而，专利CN201680014250.8中的化合物对VCaP细胞的降解活性还有待进一步提高；同时申请人研亢发现，该专利中的化合物中夹有难以去除的杂质，如此专利编号化合物174和化合物469中均含有分子量M-14的杂质，此杂质难以采用常规纯化技术如柱层析技术等甚至采用制备薄层层析分离，极大的增加了生产和质控的困难。

发明内容

发明要解决的问题

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种对VCaP细胞的降解具有更高活性，且化合物中不含有难以去除的杂质的一类新型雄激素受体降解剂。

用于解决问题的方案

为了解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

一种具备式I结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物：

其中，

R₁选自-CN、-NO₂和-NH₂；

R₂、R₃各自独立地选自氢、氘、卤素、未取代或被卤素取代的C_1-6烷基；

R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地选自氢、氘、未取代或被卤素取代的C_1-6烷基、未取代或被卤素取代的C_2-6烯基、未取代或被卤素取代的C_2-6炔基，或R₄与R₅和/或R₆与R₇以及各自连接的碳原子连接成环；

X、Y各自独立地选自CH和N；

R₈选自氢、氘和未取代或被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_1-6烷基，或R₈与W₁连接成环；

R₉选自氢、氘和未取代或被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_1-6烷基；

R₈和R₉也可连接成环；

A选自羰基、取代或未取代的下列基团：C₆-C₁₀亚芳基和5-10元亚杂芳基，其中，R₁₀、R₁₁各自独立地选自氢、氘、未取代或被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_1-6烷基、未取代或被选自卤素取代的C_2-6烯基、未取代或被卤素取代的C_2-6炔基，或R₁₀与R₁₁以及连接的碳原子连接成环；

W₁选自取代或未取代的C_6-10亚芳基、5-10元亚杂芳基、C_3-12亚环烷基和3-12元亚杂环烷基；

L为链接子；

VHL为E3泛素连接酶结合片段。

优选的，所述VHL为具有以下结构的片段：

其中，

R₁₂和R₁₄分别独立地选自氢和取代或未取代的C_1-6烷基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代；

R₁₃选自氢和-OR₁₈，所述R₁₈选自氢、R₁₉C(＝O)-、取代或未取代的氨基酸残基或取代或未取代的寡聚的氨基酸残基；

R₁₅、R₁₆、R₁₇、R₁₉分别独立地选自H、卤素、取代或未取代的下列基团：C_1-30烷基、C_1-30氘代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-8环烷基、C_4-8环烯基、3-8元杂环基、3-8元杂烯基、3-8元杂炔基、C_4-8杂环烯基、C_4-8杂环炔基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、烯基芳基、烯基杂芳基、炔基芳基、炔基杂芳基、胺基、烷基胺基、烯基胺基、炔基胺基、烷基硫醚，相邻的R₁₅和R₁₆也可连接成环，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、乙酰胺基和C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代；

W₂选自取代或未取代的下列基团：C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代；W₃选自H、卤素、C_1-10烷基、-CN和取代或未取代的下列基团：C_6-10亚芳基、C_5-10亚杂芳基、C_3-8亚环烷基、3-8元亚杂环基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代；

W₄选自取代或未取代的下列基团：C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代。

本发明还提供了一种药物组合物，该组合物包含上述任一所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物和药学上可接受的赋形剂。

优选的，所述药物组合物的形式为水性分散剂、液体、啫哩、糖浆、西也剂、药浆、悬浮液、气雾剂、控释剂、速溶剂、泡腾剂、冻干剂、片剂、粉末、药丸、糖衣完、胶囊、延迟释放剂、延长释放剂、脉冲控释剂、多微粒剂或立即释放剂中的任一种。

本发明还提供了上述任一所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物，或者上述的药物组合物在制备治疗雄性激素受体相关疾病的药物中的应用。

优选的，所述雄性激素受体相关疾病为前列腺癌、乳腺癌、前列腺增生、肯尼迪氏病、多毛症、粉刺、脱发、秃头、肌肉衰竭、性腺功能衰弱、骨质疏松症、胆固醇过高、男性不育、男性性功能不良、贫血肥胖、性欲望低下或忧郁症。

优选的，所述雄性激素受体相关疾病为去势耐受型前列腺癌。

发明的效果

1、本发明化合物理论的AR特异性结合部分为丙二酰胺衍生物(A类化合物)、脲类衍生物(B类化合物)和苯二胺类衍生物(C类化合物)，但是目前尚未见此三类化合物是AR拮抗剂的文献报道；

本专利中三类衍生物

进一步的，申请人检测了一个典型B类化合物活性，惊讶的发现其对AR几乎无抑制作用(IC₅₀>5.0μM)。

出乎意料的是，近来有文献报道B类化合物是eIF2a激酶血红素调节抑制剂(HRI)的激动剂，用于治疗缺铁性贫血、地中海贫血和其它贫血性疾病等(European Journal ofMedicinal Chemistry,2020,187,art.no.11197.DOI:10.1016/j.ejmech.2019.111973.)，如此文中报道的如下化合物：

文献EJMC报道的HRI激动剂

(化合物编号为文献中的化合物编号)

2、本发明的化合物对AR具有良好的降解活性，如化合物10等对VCaP细胞，DC₅₀≦2nM；

3、申请人在研究中亦发现，CN201680014250.8化合物中夹有难以去除的杂质。如此专利编号化合物174和化合物469(化合物编号均为CN201680014250.8中编号)中均有分子量M-14的杂质。此杂质难以采用常规纯化技术如柱层析技术等甚至采用制备薄层层析技术，将其控制在法规中原料药杂质的限度之内。申请人采用制备HPLC技术对化合物469的M-14杂质进行分离纯化，结合核磁和质谱研究确证此M-14为化合物469的结构高度类似物。M-14杂质的存在，给原料药生产和质控带了极大难度，同时显著增加了成本。

在本专利的化合物中，如化合物17等在制备反应体系中也带有M-14杂质的副产物。但显著不同是的，此副产物可以通过常规技术如硅胶柱层析等简单的除去；同时在化合物17的原料药中，也未检测出此M-14的杂质。

具体实施方式

为了更为清晰地描述本发明的内容，现将所涉及的全部术语定义如下：

除非另有定义，本文使用的术语“取代”是被下列取代基所取代：烷基、环烷基、芳基、杂环基、卤素、羟基、烷氧基、氧代、烷酰基、芳基氧基、烷酰基氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基、二取代的胺基(其中2个氨基取代基选自烷基、芳基或芳基烷基)、烷酰基氨基、芳酰基氨基、芳烷酰基氨基、取代的烷酰基氨基、取代的芳基氨基、取代的芳烷酰基氨基、硫基、烷基硫基、芳基硫基、芳基烷基硫基、芳基硫羰基、芳基烷基硫羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、磺酰氨基例如-SO₂NH₂、取代的磺酰氨基、硝基、氰基、羧基、氨基甲酰基例如-CONH₂、取代的氨基甲酰基例如-CONH烷基、-CONH芳基、-CONH芳基烷基或在氮上具有两个选自烷基、芳基或芳基烷基的取代基的情况、烷氧基羰基、芳基、取代的芳基、胍基、杂环基例如吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基等和取代的杂环基。

本文使用的术语“烷基”或“亚烷基”意欲包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基团。例如，“C_1-6烷基”表示具有1个至6个碳原子的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)和戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)。

术语“烯基”表示含一个或多个双键且通常长度为2至20个碳原子的直链或支链的烃基。例如，“C_2-6烯基”含有两个至六个碳原子。烯基包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、己烯基等。

术语“炔基”表示含一个或多个三键且通常长度为2至20个碳原子的直链或支链的烃基。例如，“C_2-6炔基”含有两个至六个碳原子。代表性炔基包括但不限于例如乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、戊炔基、己炔基等。

术语“杂烯基”表示上述定义的“烯基”中的一个或多个碳原子被选自N、O、S的杂原子替换，或者被含有选自N、O、S的杂原子基团所取代。

术语“杂炔基”表示上述定义的“炔基”中的一个或多个碳原子被选自N、O、S的杂原子替换，或者被含有选自N、O、S的杂原子基团所取代。

术语“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。“C_1-6烷氧基”(或烷基氧基)意欲包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)和叔丁氧基。类似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。

术语“羰基”是指由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O)。

术语“环烷基”是指单环或二环的环状烷基。单环的环状烷基指C_3-8的环状烷基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和降莰烷基等。支化环烷基诸如1-甲基环丙基和2-甲基环丙基包括在“环烷基”的定义中。二环的环状烷基包括桥环、螺环或融合环的环烷基。

术语“环烯基”是指单环或二环的环状烯基。单环的环状烯基指C_3-8的环状烯基，包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基和降莰烯基。支化环烯基诸如1-甲基环丙烯基和2-甲基环丙烯基包括在“环烯基”的定义中。二环的环状烯基包括桥环、螺环或融合环的环状烯基。

“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。“卤代烷基”意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或多个卤素的支链和直链饱和脂族烃基团。卤代烷基的实例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。卤代烷基的实例还包括意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或多个氟原子的支链和直链饱和脂族烃基团的“氟烷基”。

“卤代烷氧基”或“卤代烷基氧基”表示具有指定数量碳原子的经氧桥连接的如上文所定义的卤代烷基。例如，“C_1-6卤代烷氧基”意欲包括C1、C2、C3、C4、C5和C6卤代烷氧基。卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟乙氧基。类似地，“卤代烷基硫基”或“硫代卤代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的卤代烷基；例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。

术语“芳基”/“亚芳基”，单独或作为较大部分诸如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳基氧基烷基”的部分，是指具有总计6至10个环成员的单环、二环或三环的环系统，其中所述系统中的至少一个环为芳族的且其中所述系统中的每个环含有3至7个环成员。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环系统，其包括但不限于苯基、茚满基、1-萘基、2-萘基和四氢萘基。稠合的芳基可在环烷基环或芳族环的合适位置上连接至另一基团。例如从环系统中画出的箭头线表明键可连接至任意合适的环原子。

术语“杂芳基”/“亚杂芳基”、“杂芳环”、“杂芳环基”或“杂芳环基团”意指稳定的3元、4元、5元、或7元芳香单环或芳香二环或7元、8元、9元、10元、11元、12元、13元或14元芳香多环杂环，其为完全不饱和的、部分不饱和的，且其含有碳原子和1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子；且包括任何以下多环基团，其中上文所定义的任意杂环与苯环稠合。氮和硫杂原子可任选地被氧化。氮原子为取代的或未取代的(即N或NR，其中R为H或如果被定义，则为另一取代基)。杂环可在得到稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接至其侧基。如果所得化合物是稳定的，则本文所述的杂环基可在碳或氮原子上被取代。杂环中的氮可任选地被季铵化。优选地，当杂环中S和O原子的总数超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。优选地，杂环中S和O原子的总数不大于1。芳杂环的实施例包括但不限于吖啶基、氮杂环丁基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、咪唑并吡啶基、假吲25哚基(indolenyl)、二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噻唑并吡啶基、异噁唑基、异噁唑并吡啶基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、二氮杂萘基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑并吡啶基、噁唑烷基、萘嵌间二氮杂苯基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑并吡啶基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四唑基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑并吡啶基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基、喹唑啉基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、1,2,3,4-四氢喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、5,6,7,8-四氢-喹啉基、2,3-二氢-苯并呋喃基、色满基、1,2,3,4-四氢-喹喔啉基和1,2,3,4-四氢-喹唑啉基。本发明还包括含有例如上述杂环的稠环和螺环化合物。

本文使用的术语“环杂烷基”指的是一个单环环杂烷基体系，或为一个二环杂烷基体系。单环的环杂烷基指的是3-8元、且至少含一个选自O、N、S、P的饱和或不饱和但不为芳香性的环状烷基体系。二环杂烷基体系指的是一个环杂烷基融合到一个苯基、或一个环烷基、或一个环烯基、或一个环杂烷基、或一个杂芳基。

本文使用的术语“桥环烃”指的是共用两个或两个以上碳原子的多环化合物。可分为二环桥环烃及多环桥环烃。前者由两个脂环共用两个以上碳原子所构成；后者是由三个以上的环组成的桥环烃。

本文使用的术语“螺环烃”指的是单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环烃。

本文中所用的术语“取代”意指至少一个氢原子被非氢基团替代，条件是维持正常化合价且所述取代得到稳定的化合物。本文所用的环双键为在两个相邻环原子之间形成的双键(例如C＝C、C＝N或N＝N)。

在本发明化合物上存在氮原子(例如胺)的情形下，可通过使用氧化剂(例如mCPBA和/或过氧化氢)进行处理来将这些氮原子转化成N-氧化物以获得本发明的其它化合物。因此，所显示和要求保护的氮原子视为均涵盖所显示氮及其N-氧化物(N→O)衍生物。

当任何变量在化合物的任何组成或式中出现一次以上时，其每次出现时的定义均独立于其在其它每种情况下出现时的定义。因此，例如如果显示基团取代有0-3个R，则所述基团可任选地取代有至多三个R基团，且在每次出现时R独立地选自R的定义。此外，取代基和/或变量的组合仅在上述组合可产生稳定的化合物时才容许存在。

当键合至取代基的键显示为与连接环中的两个原子的键交叉时，则上述取代基可键合至该环上的任一原子。当列举取代基但未指明该取代基中键合至具有给定式的化合物的其余部分上的原子时，则上述取代基可经由该取代基中的任一原子来键合。取代基和/或变量的组合仅在上述组合可产生稳定的化合物时才容许存在。

术语“氨基”/“胺基”单独或者以组合方式表示伯胺基(-NH₂)，仲胺基(-NH-)或叔胺基

术语“C_1-6烷基胺基”单独或者以组合方式表示如上所定义的胺基基团，其中胺基基团的氢原子被至少一个C_1-6烷基所取代，其中“烷基”表示如以上所定义，相应地，“C_1-6烷基胺基”包括甲基胺基、乙基胺基、丙基胺基、异丙基胺基、正丁基胺基、异丁基胺基、2-丁基胺基、叔丁基胺基、正戊基胺基、2-戊基胺基、3-戊基胺基、2-甲基-2-丁基胺基、3-甲基-2-丁基胺基、3-甲基-1-丁基胺基、2-甲基-1-丁基胺基、正己基胺基、2-己基胺基、3-己基胺基、2-甲基-2-戊基胺基、3-甲基-2-戊基胺基、4-甲基-2-戊基胺基、3-甲基-3-戊基胺基、2-甲基-3-戊基胺基、2,3-二甲基-2-丁基胺基、3,3-二甲基-2-丁基胺基等。特别的“C_1-6烷基胺基”是甲基胺基、乙基胺基、异丙基胺基、叔丁基胺基等。

术语“(C_1-6烷基)₂胺基”单独或者以组合方式表示如上所定义的胺基基团，其中氨基基团的氢原子被两个C_1-6烷基所取代，其中“烷基”表示如以上所定义，相应地，“(C_1-6烷基)₂胺基”包括二甲胺基、二乙胺基、甲基乙基胺基等。

本文使用的术语“氨基酸残基”指的是一个氨基酸的碳端羧基或胺基参与了键的形成而失去一分子水，此氨基酸单位称为氨基酸残基。

本文使用的术语“寡聚氨基酸残基”指的是由2-10个氨基酸残基所构成的多肽链中的一个碳端羧基或胺基参与了键的形成而失去一分子水，此寡聚氨基酸单位称为寡聚氨基酸残基。例如氨基酸的氨基酸残基为

本文使用的术语“[Cu]”在本文中指的是含一价铜(Cu⁺)或二价铜(Cu²⁺)试剂，如CuI、CuBr、CuCl、CuI₂、CuBr₂、CuCl₂等。

术语“异构体”包含所有的同分异构形式包括对映异构体、非对映异构体、互变异构体和几何异构体(包括顺反异构体)。因此，本发明中所设计的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或几何异构体(或顺反异构体)的混合物都属于本发明的范围。

本文使用的“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱盐来修饰。药用盐的实例包括但不限于碱性基团(诸如胺)的无机或有机酸盐；及酸性基团(诸如羧酸)的碱金属盐或有机盐。药用盐包括由(例如)无毒的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，上述常规无毒盐包括衍生自例如以下无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；及由例如以下有机酸制备的盐：乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸和羟乙磺酸等。

本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法自含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，可通过在水或有机溶剂或二者的混合物中使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适合碱或酸反应来制备上述盐；通常，优选如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水性介质。合适盐的列表可参见Remington:The Science and Practice ofPharmacy,22nd Edition,25Allen,L.V.Jr.,Ed.；Pharmaceutical Press,London,UK(2012)，通过引用的方式将其披露内容并入本文中。

术语“溶剂化物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂化物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。

术语“酯”用于表示有机酯，包括单酯、二酯、三酯、和更通常地多酯。

术语“同位素衍生物”表示通式(I)中的氢原子被1-6个氘原子(D)所取代得到的同位素衍生物、通式(I)中的碳原子被1-3个碳14原子(14C)所取代得到的同位素衍生物。

本文使用的术语“治疗”包括导致改善病症、疾病、障碍等的任何效果，例如减轻、减少、调节、改善或消除，或改善其症状。

本文使用的术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性的载体的组合，使得所述组合物尤其适用于体内或离体诊断或治疗。碱的实例包括但不限于碱金属(例如钠)氢氧化物、碱土金属(例如镁)氢氧化物、氨等。对于治疗用途，本发明化合物的盐对于治疗用途，本发明化合物的盐预期为是药用的。然而，非药用的酸和碱的盐也可用于例如药用化合物的制备或纯化中。

特定药学及医学术语

术语“癌症”，如本文所用，指一种不能控制的细胞的异常生长，并且在某种条件下能够转移(传播)。这种类型的癌症包括但不限于，固体肿瘤(如膀胱、肠、脑、胸、子宫、心脏、肾、肺、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其它内分泌器官(如甲状腺)、前列腺、皮肤(黑色素瘤)或血液瘤(如非白血性白血病)。

药物组合物和剂量

本发明还提供药用组合物，其包含治疗有效量的与一种或多种药用载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制的一种或多种式(I)化合物，和任选的一种或多种上述其它治疗剂。可通过任意合适方式给予本发明化合物以用于任意上述用途，例如口服，诸如片剂、胶囊剂(各包括持续释放或定时释放制剂)、丸剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、悬浮液(包括纳米悬浮液、微悬浮液、喷雾干燥的分散液)、糖浆和乳液；经舌下；含服；经肠胃外，诸如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注技术(例如以无菌可注射水性或非水性溶液或悬浮液形式)；经鼻，包括向鼻膜给药，诸如通过吸入喷雾；局部，诸如以乳膏剂或软膏剂形式；或经直肠，诸如以栓剂形式。它们可单独给药，但通常使用基于所选给药途径和标准药学实践选择的药物载体给药。

根据本领域技术人员认识范围内的诸多因素来调配药用载体。这些因素包括，但不限于：所调配活性剂的类型和性质；含有活性剂的组合物所要给药的受试者；组合物的预期给药途径；及所靶向的治疗适应症。药用载体包括水性和非水性液体介质及各种固体和半固体剂型。

上述载体可包括除活性剂外的诸多不同成分和添加剂，上述其它成分出于本领域技术人员公知的各种原因包括于制剂中，例如稳定活性剂、粘合剂等。关于合适的药用载体和载体选择中所涉及的因素的描述可参见多个容易获得的来源，例如Allen,L.V.Jr.et.al.Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2Volumes),22ndEdition(2012),Pharmaceutical Press。

当然，本发明化合物的剂量方案取决于已知因素而有所变化，诸如具体药剂的药效学特性及其给药模式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康状况、医学病状和重量；症状的性质和程度；同时治疗的种类；治疗频率；给药途径、患者的肾和肝功能及期望效应。根据一般指导，当用于指定效应时，各活性成分的日口服剂量应为约0.001mg/天至约10-5000mg/天，优选地为约0.01mg/天至约1000mg/天，且最优选地为约0.1mg/天至约250mg/天。在恒速输注期间，静脉内最优选剂量应为约0.01mg/kg/分钟至约10mg/kg/分钟。本发明化合物可以单一日剂量给药，或可以每日两次、三次或四次的分开剂量给药总日剂量。

所述化合物通常以与根据预期给药形式(例如口服片剂、胶囊剂、酏剂和糖浆剂)适当

地选择且与常规药学实践相符合的合适药物稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为药物载体)的混合物形式进行给药。

适于给药的剂型(药物组合物)可含有约1毫克至约2000毫克活性成分/剂量单位。在这些医药组合物中，以组合物的总重量计，活性成分通常将以约0.1-95重量％的量存在。

用于口服给药的典型胶囊剂含有至少一种本发明化合物(250mg)、乳糖(75mg)和硬脂酸镁(15mg)。使该混合物穿过60网目筛，并包装成1号明胶胶囊。

典型的可注射制剂可如下制备：以无菌方式将至少一种本发明化合物(250mg)置于瓶中、以无菌方式冻干并密封。为进行使用，将瓶内容物与2mL生理盐水混合，以产生可注射制剂。

本发明范围包括(单独或与药物载体组合)包含治疗有效量的至少一种本发明化合物作为活性成分的药物组合物。任选地，本发明化合物可单独使用、与本发明其它化合物组合

使用或与一种或多种其它治疗剂(例如抗癌剂或其它药学活性物质)组合使用。

不考虑所选择的给药路径，通过本领域技术人员已知的常规方法来将本发明的化合物(其可以合适的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制成药用剂量形式。

可改变活性成分在本发明的药物组合物中的实际剂量水平，从而获得对于实现特定患者的期望的治疗响应、组成和给药模式有效的而对患者无毒的活性成分量。

选定的剂量水平会取决于多种因素，包括所用的本发明的特定化合物或其酯、盐或酰胺的活性；给药路径；给药时间；所用的特定化合物的排泄速率；吸收速率和程度；治疗的持续时间；与所用的特定化合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质；所治疗的患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和先前的医学史等医学领域公知的因素。

具有本领域普通技术的医生或兽医可容易地确定并开出有效量的所需药物组合物。例如，为了达到所期望的治疗效果，医师或兽医可在低于所需的水平开始药物组合物中所用的本发明化合物的较量，并逐步增加剂量直至实现所期望的效果。通常，合适日剂量的本发明化合物将是有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。此种有效剂量通常取决于上述因素。通常，口服、静脉内、脑室内和皮下剂量的用于患者的本发明化合物的范围为约0.01至约50mg/kg体重/天。如果需要的话，有效日剂量的活性化合物可以两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量在一天当中的适当的间隔分别给药，任选地呈单位剂型形式。在本发明的某些方面中，服药为每天一次给药。

虽然本发明化合物可单独给药，但优选以药物制剂(组合物)形式给予化合物。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

首先，本发明提供了一种具备式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物：

其中，

R₁选自-CN、-NO₂和-NH₂；

R₂、R₃各自独立地选自氢、氘、卤素、未取代或被卤素取代的C_1-6烷基；

X、Y各自独立地选自CH和N；

R₈选自氢、氘和未取代或被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_1-6烷基，或R₈与W₁连接成环；

R₉选自氢、氘和未取代或被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_1-6烷基；

R₈和R₉也可连接成环；

W₁选自取代或未取代的C_6-10亚芳基、5-10元亚杂芳基、C_3-12亚环烷基和3-12元亚杂环烷基；

L为链接子；

VHL为E3泛素连接酶结合片段。

在一项优选的实施方式中，所述VHL为具有以下结构的片段：

其中，

R₁₂和R₁₄分别独立地选自氢和取代或未取代的C_1-6烷基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基的取代基所取代；

R₁₃选自氢和-OR₁₈，所述R₁₈选自氢、R₁₉C(＝O)-、取代或未取代的氨基酸残基或取代或未取代的寡聚的氨基酸残基；

W₃选自H、卤素、C_1-6烷基、-CN和取代或未取代的下列基团：C_6-10亚芳基、C_5-10亚杂芳基、C_3-8亚环烷基、3-8元亚杂环基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代；

在一项优选的实施方案中，所述L为W₁和VHL的链接子，W₁和VHL之间间隔2-20个化学键。

在一项更优选的实施方案中，W₁和VHL之间间隔5-15个化学键，优选8-12个化学键。

在一项优选的实施方案中，所述L为含有一个或多个二价片段，所述二价片段选自NR^Y1、O、S、SO、SO₂、磺酰胺基、羰基、酰胺基、酯基、取代或未取代的下列基团：亚烯基、亚炔基、亚烷基、亚异吲哚啉酮基、C_6-10亚芳基、C_5-10亚杂芳基、C_3-8亚环烷基、3-15元亚杂环基，C_4-10亚螺环基、4-10元亚杂螺环基、C_5-10亚桥环基和5-10元杂亚桥环基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代，其中R^Y1选自氢、氘、未取代或被卤素取代的C_1-6烷基、未取代或被卤素取代的C_2-6烯基、未取代或被卤素取代的C_2-6炔基。

在一项优选的实施方案中，L为直连键、CR^L1R^L2、O、S、SO、SO2、NR^L3、SO₂NR^L3、SONR^L3、CONR^L3、NR^L3CONR^L4、NR^L3SO₂NR^L4、CO、CR^L1＝CR^L2、炔基、SiR^L1 R^L2、P(O)R^L1、P(O)OR^L1、NR^L3C(＝NCN)NR^L4、NR^L3C(＝NCN)、NR^L3C(＝CNO₂)NR^L4、任选地被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11环烷基、任选地被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的C_3-11杂环基、任选地被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的芳基、任选地被0-6个R^L1和/或R^L2基团取代的芳杂基，其中R^L1或R^L2各自独立地可以连接至其它基团以形成环烷基和/或杂环基部分，所述部分可以进一步被0-4个R^L5基团取代。其中r^L1、r^L2、r^L3、r^L4和r^L5各自独立地选自H、卤代、C_l-8烷基、OC_l-8烷基、SC_l-8烷基、NHC_1-8烷基、N(C_l-8烷基)₂、C_3-11环烷基、芳基、杂芳基、C_3-11杂环基、OC_1-8环烷基、SC_1-8环烷基、NHC_1-8环烷基、N(C_1-8环烷基)₂、N(C_1-8环烷基)(C_1-8烷基)、OH、NH₂、SH、SO₂C_1-8烷基、P(O)(OC_1-8烷基)(C_l-8烷基)、P(O)(OC_1-8烷基)₂、CC-C_1-8烷基、CCH、CH＝CH(C_l-8烷基)、C(C_l-8烷基)＝CH(C_l-8烷基)、Si(OH)₃、Si(C_l-8烷基)₃、Si(OH)(C_l-8烷基)₂、COC_l-8烷基、CO₂H、卤素、CN、CF₃、CHF₂、CH₂F、NO₂、SF₅、SO₂NHC_1-8烷基、SO₂N(C_1-8烷基)₂、SONH(C_1-8烷基)、SON(C_1-8烷基)₂、CONHC_1-8烷基、CON(C_1-8烷基)₂、N(C_1-8烷基)CONH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)CON(C_1-8烷基)₂、NHCONH(C_1-8烷基)、NHCON(C_1-8烷基)₂、NHCONH₂、N(C_1-8烷基)SO₂NH(C_1-8烷基)、N(C_1-8烷基)SO₂N(C_1-8烷基)₂、NHSO₂NH(C_1-8烷基)、NHSO₂N(C_1-8烷基)₂和NHSO₂NH₂。

在一项优选的实施方案中，L为:

在一项优选的实施方案中，R₁为-CN。

在一项优选的实施方案中，R₂为Cl、Br、I或-CF₃。

在一项优选的实施方案中，R₃为H或F。

在一项优选的实施方案中，R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地为甲基。

在一项优选的实施方案中，R₈选自氢、氘和C_1-6烷基，或R₈与W₁连接成5元或6元环。

在一项优选的实施方案中，R₉选自氢、氘和C_1-6烷基。

在一项优选的实施方案中R₁₀、R₁₁各自独立地选自C_1-6烷基或者R₁₀和R₁₁连接成环形成环丙基。

在一项优选的实施方案中，R₁₂和R₁₄分别独立地选自氢和C_1-6烷基。

在一项优选的实施方案中，R₁₃选自氢和-OR₁₈，所述R₁₈选自氢、R₁₉C(＝O)-、取代或未取代的氨基酸残基或取代或未取代的寡聚的氨基酸残基，R₁₉选自H、取代或未取代的下列基团：C_1-30烷基、氘代C_1-30烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、烯基芳基、烯基杂芳基、胺基、烷基胺基、烷基硫醚，所述取代是被1-2个选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、乙酰胺基和C_1-6烷氧基、C_1-6烷基的取代基所取代，胺基、烷基胺基中的取代基也可与N构建成环。

在一项优选的实施方案中，R₁₅、R₁₆和R₁₇分别独立地选自H、卤素、取代或未取代的C_1-6烷基，相邻的R₁₅和R₁₆也可连接成环，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基、3-6元杂环基、C_1-6烷基氨基和(C_1-6烷基)₂氨基的取代基所取代。

在一项优选的实施方案中，A选自羰基、C₆-C₁₀亚芳基和5-10元亚杂芳基，其中，R₁₀、R₁₁各自独立地选自氢、氘、C_1-6烷基，或R₁₀与R₁₁以及连接的碳原子连接成3-6元环；所述C₆-C₁₀亚芳基选自亚苯基和亚萘基，所述5-10元亚杂芳基中的杂芳基选自噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、咪唑基、四氮唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基和吲唑基，优选的，C₆-C₁₀亚芳基为亚苯基，5-10元亚杂芳基为亚吡啶基。

在一项优选的实施方案中，W₁选自取代或未取代的C_6-10亚芳基、5-10元亚杂芳基，所述C₆-C₁₀亚芳基选自亚苯基和亚萘基，所述5-10元亚杂芳基中的杂芳基选自噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、咪唑基、四氮唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基和吲唑基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基的取代基所取代，优选的,W₁选自未取代或被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基的取代基所取代的亚苯基、亚吡啶基、亚喹啉基、亚苯并吡唑基、亚异吲哚啉酮基。

在一项优选的实施方案中，W₂选自取代或未取代的下列基团：C_6-10亚芳基、C_5-10亚杂芳基，优选的，C_6-10亚芳基为亚苯基，C_5-10亚杂芳基为亚噻唑基、亚噻吩基、亚咪唑基、亚吡啶并噻吩基、亚噁唑基、亚苯并吡唑基；

所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代；

W₃选自H、卤素、-CN和取代或未取代的下列基团：C_6-10芳基、C_1-6烷基、C_5-10杂芳基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂和C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_1-6烷基胺基和(C_1-6烷基)₂胺基的取代基所取代；W₄选自取代或未取代的下列基团：C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基，优选为，苯基、异噁唑基、异吲哚啉酮基、环丙基，所述取代是被选自卤素、-OH、-CN、-NH₂、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基和(C_1-6烷基)₂氨基的取代基所取。

在一项优选的实施方案中，所示式Ⅰ化合物选自：

。

本发明还提供了一种药物组合物，该组合包含如上述任一所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物和药学上可接受的赋形剂。

在一项优选的实施方式中，上述药物组合物的形式为水性分散剂、液体、啫哩、糖浆、西也剂、药浆、悬浮液、气雾剂、控释剂、速溶剂、泡腾剂、冻干剂、片剂、粉末、药丸、糖衣完、胶囊、延迟释放剂、延长释放剂、脉冲控释剂、多微粒剂或立即释放剂中的任一种。

本发明还提供了上述任一所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、异构体、溶剂化物、前药或同位素标记物，或者上述药物组合物在制备治疗雄性激素受体相关疾病的药物中的应用。

在一项优选的实施方式中，所述雄性激素受体相关疾病为前列腺癌、乳腺癌、前列腺增生、肯尼迪氏病、多毛症、粉刺、秃头、肌肉衰竭、性腺功能衰弱、骨质疏松症、胆固醇过高、男性不育、男性性功能不良、贫血肥胖、性欲望低下或忧郁症。

在一项优选的实施方式中，所述雄性激素受体相关疾病为去势耐受型前列腺癌。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

这些实施例仅供例证说明的目的，并不限定在此提供的权利要求的范围。

概述。¹H-NMR谱Bruker-400或OXFORD-AS500核磁共振仪，化学位移的单位是百万分之一，内标是四甲基硅烷。耦合常数(J)接近0.1Hz。使用的缩略语如下说明：s,单重峰；d，双重峰；t,三重峰；q,四重峰；qu，五重峰；m，多重峰；br，宽峰。质谱使用Quattro MicroTMAPI三重四极杆质谱仪。

实施例1 N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物1)的制备

叔丁基((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯

将叔丁基((1r，3r)-3-羟基-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯(1.0g,4.1mmoL)加入到到100mL单口瓶中，再加入THF(30mL)，降温到10℃以下后加入NaH(329mg，8.2mmoL)。搅拌30分钟后再加入2-氯-4-氟苄腈(767mg，4.92mmoL)，加料完毕后升温至70℃，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物中加入二氯甲烷和水，分液。有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂w为乙酸乙酯:石油醚＝1:5，得产物1.44g，收率为92％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.56(d,J＝7.4Hz,1H),7.47(d,J＝2.1Hz,1H),7.06(dd,J＝7.5,2.0Hz,1H),6.03(s,1H),2.84(s,1H),1.58(s,2H),0.92(s,6H),0.87(s,6H)。

4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈

将叔丁基((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯(1.44g,3.8mmoL)加入到100ml单口瓶中，再加入盐酸/1.4-二氧六环溶液(4M，10mL)，室温搅拌，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物不做纯化，直接用于下步反应。

1-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸

将环丙烷-1,1-二羧酸(1.45g，11.5mmoL)溶于THF(40mL)中，在冰浴下加入TEA(1.4mL，11.5mmoL)，滴加入SOCl₂(0.8mL，11.5mmoL)。加料完毕，在冰浴下反应1小时。后加入(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.1g，10mmoL)，TLC监测反应完全。加水(20mL)淬灭反应。用DCM(30mL)萃取。有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50-1:20，得目标产物1.43g，收率为44.7％。

1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸

将1-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸(1.43g，6.5mmoL)加入到100mL的单口瓶中，再加入盐酸/1，4-二氧六环溶液(4M，20mL)室温搅拌，TLC监测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物不做纯化，直接用于下步反应。

1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸

将1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(860mg，2.41mmoL)加入到甲醇(10mL)中，再加入2-甲基吡啶-N-甲硼烷(0.28g，2.65mmoL)和2-((5-氧戊基)氧基)乙酸叔丁酯(575mg，2.65mmoL)，室温搅拌，TLC监测反应完全。加水淬灭反应，减压蒸去溶剂，残留物中加入乙酸乙酯和水萃取，分液。有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:30，得目标产物481mg，收率为47.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.40-7.32(m,2H),6.62-6.54(m,2H),4.33(s,2H),3.49(t,J＝7.5Hz,2H),3.11(t,J＝7.6Hz,2H),1.67(m,4H),1.43(s,9H),1.37–1.24(m,2H),1.16(m,2H),1.20–1.12(m,4H)。

2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯

将1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸(481mg，1.15mmoL)用DMF(30mL)溶解再加入4-((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈(300mg，0.95mmoL)，然后依次加入DIPEA(0.76mL)和HATU(522.3mg，1.34mmoL)，室温搅拌，TLC监测反应完全，点板反应完全，减压蒸去DMF，残留物加入水，用DCM萃取。分液，有机相减压蒸去溶剂，残留用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1，得目标产物470mg，收率为72.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.50(s,1H),7.63(d,J＝7.4Hz,1H),7.39-7.27(m,3H),7.08(dd,J＝7.5,2.0Hz,1H),6.77(s,1H),6.62–6.54(m,2H),4.61(s,1H),4.33(s,2H),3.92(s,1H),3.53–3.44(m,3H),3.11(t,J＝7.5Hz,2H),1.80-1.69(m,2H),1.65-1.60(m,4H),1.64–1.49(m,2H),1.43(s,9H),1.37–1.24(m,2H),1.23(s,6H),1.12(s,6H)。

2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸

将2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯(470mg，0.79mmoL)用DCM(4mL)溶解，再加入TFA(4ml)室温搅拌，TLC监测反应完全，旋干TEA用DCM和水萃取，有机层旋干用快速柱层析分离目标产物395mg，收率为92％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.70(d,J＝8.7Hz,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,2H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),6.96(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.62(d,J＝8.9Hz,2H),4.56(s,2H),4.23(s,1H),4.10(q,J＝7.1Hz,1H),3.96(s,2H),3.90(s,1H),3.52(t,J＝6.4Hz,2H),3.08(t,J＝7.0Hz,2H),2.01(s,2H),1.64(dt,J＝13.9,7.0Hz,4H),1.52(d,J＝12,4H),1.24(s,H),1.22(s,6H),1.15(s,6H)。

N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基

-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

将化合物2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸(395mg，0.63mmoL)用加入到DMF(10mL)中，再加入EDCI(242mg，1.26mmoL)，HOBT(171.0mg，1.26mmoL)，DIPEA(0.33mL，1.89mmoL)，搅拌5分钟后再加入(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(304.2mg，0.63mmoL,依据CN201680014250.8制备)。加料完毕后，继续室温搅拌，TLC监测反应完全。减压蒸去DMF，残留物中加入水，用DCM萃取。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50-1:10，得目标产物480mg，收率为72.5％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.45-7.37(m,4H),7.21-7.18(m,2H),7.10(d,J＝4.0Hz,1H),6.95(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.66-6.62(m,1H),5.01-4.97(m,1H),4.70(d,J＝8.0Hz,1H),4.60-4.56(m,1H),4.44(s,1H),4.21(s,1H),3.99-3.95(m,2H),3.92-3.83(m,2H),3.77-3.73(m,1H),3.61-3.56(m,2H),3.12(t,J＝8.0Hz,2H),2.47(s,3H),2.24-2.17(m,1H),1.98-1.92(m,1H),1.71-1.63(m,4H),1.60-1.51(m,5H),1.47(d,J＝8.0Hz,3H),1.21(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1051.4[M+H]⁺。

实施例2 N-(((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物2)的制备

4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-溴苄腈盐酸盐

除了用4-氟-2-溴苯腈替代2-氯-4-氟苄腈外，本化合物的制备同实施例1中4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈的制备。收率为82％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.56(d,J＝7.4Hz,1H),7.47(d,J＝2.1Hz,1H),7.06(dd,J＝7.5,2.0Hz,1H),6.03(s,1H),2.84(s,1H),1.58(s,2H),0.92(s,6H),0.87(s,6H)。

2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯

除了用4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-溴苄腈盐酸盐替代4-((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯的制备。收率43％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.50(s,1H),7.63(d,J＝7.4Hz,1H),7.39-7.27(m,3H),7.08(dd,J＝7.5,2.0Hz,1H),6.77(s,1H),6.62-6.54(m,2H),4.61(s,1H),4.33(s,2H),3.92(s,1H),3.53-3.44(m,3H),3.11(t,J＝7.5Hz,2H),1.80(m,2H),1.67(m,4H),1.64-1.49(m,2H),1.43(s,9H),1.37-1.24(m,2H),1.23(s,6H),1.12(s,6H)。

2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸

除了用2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

N-(((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

除了用2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率40％。¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.45-7.37(m,4H),7.25(d,J＝4.0Hz,1H),7.20(d,J＝8.0Hz,2H),6.99(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.64(d,J＝8.0Hz,2H),5.06-4.96(m,1H),4.70(d,J＝4.0Hz,1H),4.58(q,J＝4.0Hz,1H),4.45(s,1H),4.19(s,1H),3.99(q,J＝12.0Hz,2H),3.92-3.84(m,2H),3.77-3.73(m,1H),3.60-3.57(m,2H),3.11(t,J＝4.0Hz,2H),2.25-2.20(m,1H),1.98-1.91(m,1H),1.73-1.64(m,4H),1.55-1.50(m,5H),1.47(d,J＝8.0Hz,3H),1.21(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1097.3[M+H]⁺。

实施例3 N-((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-((5-(2-((S)-1-((3r，4S)-3-羟基-4-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物3)的制备

((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯

除了用4-氟-2-碘苯腈替代4-氟-2-氯苯外，本化合物的制备同实施例1中的叔丁基((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯的制备。收率为75％，¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.48(d,J＝8.7Hz,1H),7.35(d,J＝2.4Hz,1H),6.83(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),4.66(d,J＝8.1Hz,1H),3.93(s,1H),3.67(d,J＝8.5Hz,1H),1.45(s,9H),1.17(s,6H),1.13(s,6H)。ESI-MS:371.2[M-Boc+H]⁺。

4-((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-碘苯腈盐酸盐

除了用((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯替代实施例1中的((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯外，本化合物的制备同实施1中的4-((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈的制备。收率为92％。

2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯

除了用4-((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-碘苯腈盐酸盐替代4-((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯的制备。收率52％。MS-ESI:773.3[M+H]⁺。

2-5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸

除了用2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。收率为95％。

N-(((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((3R，4S)-3-羟基-4-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

除了用2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为38％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),8.60(d,J＝4.0Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.48-7.39(m,5H),7.21-7.18(m,2H),7.00(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.65(d,J＝4.0Hz,2H),5.01-4.99(m,1H),4.70(d,J＝12.0Hz,1H),4.61-4.56(m,1H),4.45(s,1H),4.17(s,1H),3.98(q,J＝12.0Hz,2H),3.91-3.82(m,2H),3.77-3.73(m,1H),3.60-3.56(m,2H),3.12(t,J＝8.0Hz,2H),2.47(s,3H),2.25-2.20(m,1H),1.98-1.94(m,1H),1.72-1.65(m,4H),1.57-1.52(m,5H),1.47(d,J＝8.0Hz,3H),1.21(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。ESI-MS:1143.1[M+H]⁺。

实施例4 N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-(6-(2-((((S)-1-(((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)己-1-基-1-基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物4)的制备

1-(4-碘-苯基氨基甲酰基)-环丙烷甲酸甲酯

将环丙烷-1,1-二羧酸甲酯(1.51g，10.5mmoL)溶于无水THF(20mL),加入三乙胺(1.5mL，10.5mmoL)降温至-10℃，慢慢滴入氯化亚砜(0.76mL,10.5mmoL)，滴加过程中将温度控制在-8℃，并维持该温度反应1h。将对碘苯胺(2g,9.1mmoL)的无水四氢呋喃THF(5mL)加入反应体系中，加毕室温反应2h，TLC监测反应完全。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:4-1:1得2.5g，收率为69.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.65(d,J＝8Hz,2H),7.41(d,J＝8Hz,2H),3.77(s,3H),1.89-1.80(m,2H),1.77-1.67(m,2H)。MS-ESI:346.0[M+H]⁺。

1-(4-(6-叔丁氧基羰基甲氧基-己基-1-炔基)-苯基氨基甲酰基)-环丙烷甲酸甲酯

将1-(4-碘-苯基氨基甲酰基)-环丙烷甲酸甲酯(1.0g,2.9mmoL)、己基-5-乙氧基乙酸叔丁酯(680mg,3.2mmoL)、碘化亚铜(110mg,0.58mmol)、PdCl₂(PPh₃)₂(127mg,0.29mmoL)加入到100mL三口瓶中，加入DMF(20mL)、TEA(1.2mL，8.7mmoL)，氮气保护置换3次，然后升温至60℃反应过夜，TLC监测反应完全。反应液加水淬灭，DCM萃取。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得1.0g，收率83.3％。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ＝10.98(s,1H),7.61–7.58(d,J＝12Hz,2H),7.43–7.41(d,J＝9Hz,2H),4.04(d,J＝0.8Hz,2H),3.82(s,3H),3.65(t,J＝6.2Hz,2H),2.52(t,J＝6.8Hz,2H),2.13(t,J＝1.2Hz,1H),1.95–1.71(m,5H),1.69(t,J＝1.2Hz,1H),1.56(s,9H)。MS-ESI:430.3[M+H]⁺。

1-(4-(6-叔丁氧基羰基甲氧基-己-1-炔基)-苯基氨基甲酰基)-环丙烷甲酸

将1-(4-(6-叔丁氧基羰基甲氧基-己-1-炔基)-苯基氨基甲酰基)-环丙烷甲酸甲酯(1g,2.3mmoL)溶于甲醇(10mL)和水(10mL)的混合溶液中，加入氢氧化钠(373mg,9.2mmoL)，室温搅拌过夜。TLC监测反应完全。用0.2M稀盐酸将反应液pH值调至中性，减压蒸去溶剂，高真空干燥，不做纯化直接用于下步反应。

叔丁基2-((6-(4-(1-(((((1r,r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)己基-5-炔基-1-基氧基)乙酸酯

除了用1-(4-(6-叔丁氧基羰基甲氧基-己-1-炔基)-苯基氨基甲酰基)-环丙烷甲酸替代1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸，以及用EDCI/HOBt替代HATU外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯的制备。收率为71.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.07(s,1H),7.62(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.6Hz,1H),7.44–7.36(m,1H),7.03–6.90(m,2H),6.84(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),4.02(s,2H),3.62(t,J＝6.2Hz,2H),2.50(t,J＝6.8Hz,2H),2.11(s,1H),1.75(s,2H),1.82–1.67(m,2H),1.66(s,2H),1.54(s,9H),1.31(s,3H),1.30–1.15(m,12H)。MS-ESI:676.2[M+H]⁺。

1-((6-(4-(1-(((((1r,3)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺基))苯基)己基-5-炔基-1-基氧基)乙酸

除了用叔丁基2-((6-(4-(1-(((((1r,r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)己基-5-炔基-1-基氧基)乙酸酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸。

N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-(6-(2-((((S)-1-((((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)己-1-基-1-基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

除了用2-((6-(4-(1-(((((1r,3)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺基))苯基)己基-5-炔基-1-基氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率72.8％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.51-7.47(m,2H),7.45-7.39(m,4H),7.35-7.32(m,2H),7.11(d,J＝4.0Hz,1H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),5.00-4.97(m,1H),4.71-4.68(m,1H),4.58(t,J＝8.0Hz,2H),4.44(s,1H),4.22(s,1H),4.0(d,J＝4.0Hz,2H),3.91(s,1H),3.87-3.84(m,1H),3.76-3.73(m,1H),3.64(t,J＝8Hz,2H),2.47(s,3H),2.21-2.19(m,1H),1.98-1.94(m,1H),1.85-1.82(m,2H),1.77-1.71(m,2H),1.58-1.56(m,4H),1.50(d,J＝8.0Hz,3H),1.22(s,6H),1.15(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1046.0[M+H]⁺。

实施例5 N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-(6-(2-((((S)-1-(((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)己酰基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物5)的制备

将N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-N-(4-(6-(2-((((S)-1-((((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)己-1-基-1-基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(100mg，0.095mmoL)加入到水(2mL)中，再加入少量沸石，回流反应过夜。LC-MS监测反应完全。降至室温，用二氯甲烷萃取，减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50-1:10，收率为62.3％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,2H),7.74-7.69(m,3H),7.44-7.35(m,4H),7.11(d,J＝4.0Hz,1H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),5.01-4.97(m,1H),4.70-4.68(m,1H),4.60-4.54(m,1H),4.44(s,1H),4.23(s,1H),3.99-3.91(m,3H),3.86-3.83(m,1H),3.76-3.72(m,1H),3.58(t,J＝8Hz,2H),3.05(t,J＝8Hz,2H),2.47(s,3H),2.24-2.17(m,1H),1.98-1.91(m,1H),1.80-1.67(m,4H),1.60-1.57(m,5H),1.48(d,J＝4.0Hz,3H),1.22(s,6H),1.15(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1064.3[M+H]⁺。

实施例6 N-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基丁基)-N-(4-((1-(2-(3-((S)-1-(((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)脲基)乙基哌啶-4-基乙炔基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物6)的制备

4-((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-碘苯胺(1.0g,4.57mmoL)和4-乙炔基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.15g,5.48mmoL)加至100mL三口瓶中，再加入DMF(20mL)、CuI(0.18g,0.91mmoL)和PdCl₂(PPh₃)₂(0.2g,0.457mmoL)。置换氮气三次，注入三乙胺(1.9mL,13.71mmoL)，升温60℃反应3h，TLC监测反应完全。加入乙酸乙酯和水，分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:10-1:1，得产物1.2g，收率88.2％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.14-6.96(m,2H),6.48(d,J＝8.2Hz,2H),5.38(s,2H),3.62(ddd,J＝13.3,6.1,3.9Hz,2H),3.10(s,2H),2.76(tt,J＝8.4,3.9Hz,1H),1.77(ddt,J＝13.2,6.7,3.6Hz,2H),1.45(ddd,J＝12.9,8.6,3.7Hz,2H),1.39(s,9H)。

4-(哌啶-4-基乙炔基)苯胺

将4-((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g,4mmoL)加至50mL单口瓶中，加入二氯甲烷(10mL)，三氟乙酸(5mL)，室温搅拌2h,TLC监测反应完全，减压蒸去溶剂，残留物不做纯化，直接用于下步反应。

(2-(4-(((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯

将4-(哌啶-4-基乙炔基)苯胺(0.1g,0.33mmoL)加至25mL单口瓶中，加入DMF(5mL)，碳酸铯(0.54g,1.66mmoL)，Boc-溴乙胺(98mg,0.43mmoL)，室温搅拌过夜，TLC监测反应完全。加入有机溶剂乙酸乙酯和水，分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50-1:20，得产物78mg，收率为62.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.08-6.94(m,2H),6.64(t,J＝5.8Hz,1H),6.55-6.40(m,2H),5.36(s,2H),3.01(q,J＝6.6Hz,2H),2.67(s,2H),2.29(t,J＝7.0Hz,2H),2.11(s,2H),1.79(d,J＝12.0Hz,2H),1.53(tq,J＝9.4,6.2,4.7Hz,2H),1.36(s,9H)。MS-ESI:344.4[M+H]⁺。

1-((4-((1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)哌啶-4-基乙炔基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸

除了用2-(4-(((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯替代(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率为27.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.87(s,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,2H),7.35(d,J＝8.2Hz,2H),7.11(t,J＝5.8Hz,1H),4.42(s,1H),3.02-3.18(m,6H),2.48(t,J＝7.0Hz,2H),2.09(d,J＝15.7Hz,2H),1.89(t,J＝7.2Hz,2H),1.37(m,9H)。MS-ESI:356.3[M+H]⁺。

叔丁基(2-(4-((4-(1-(((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸酯

除了用1-((4-((1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)哌啶-4-基乙炔基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸替代1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸，缩合剂由HATU改为EDCI/HOBT外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯的制备。收率为87.5％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56(d,J＝8.7Hz,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),7.38-7.33(m,2H),6.94(d,J＝2.4Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),6.55(s,1H),6.14(s,1H),4.01(s,1H),3.93(d,J＝7.8Hz,1H),3.58(d,J＝6.0Hz,2H),3.25(s,2H),3.12(s,2H),2.39(s,2H),2.02(d,J＝9.9Hz,2H),1.73(q,J＝4.9Hz,2H),1.42(q,J＝4.9Hz,2H),1.37(s,9H),1.19(d,J＝6.5Hz,12H)。MS-ESI:716.3[M+H]⁺。

N-(4-((1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基)乙炔基)苯基)-N-((1r，3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

除了用叔丁基(2-(4-((4-(1-(((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

4-硝基苯基(2-(4-((4-(1-((((1r，3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸酯

将化合物N-(4-((1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基)乙炔基)苯基)-N-((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(0.49mmoL)加入到25mL单口瓶中，加入DCM(15mL)、TEA(0.2mL,1.47mmoL)，最后加入4-硝基苯基碳酰氯(128mg,0.63mmoL)室温搅拌反应2h，TLC监测反应完全，直接进行下步反应。

N-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基丁基)-N-(4-((1-(2-(3-((S)-1-(((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)脲基)乙基哌啶-4-基乙炔基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

向上步反应液中直接加入TEA(0.2mL,1.47mmoL)，接着加入(0.35g,0.73mmoL)的(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺，室温搅拌过夜，TLC监测反应完全，加有机溶剂二氯甲烷和水萃取，分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50-1:10，得产物150mg，收率为26.3％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,2H),7.45-7.34(m,6H),7.12(d,J＝4.0Hz,1H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),5.03-4.97(m,1H),4.63(s,3H),4.58(t,J＝4.0Hz,1H),4.45(s,1H),4.42(s,1H),4.24(s,1H),4.00-3.89(m,2H),3.75-3.72(m,1H),3.61-3.56(m,1H),3.40-3.34(m,2H),3.20-2.99(m,4H),2.47(s,3H),2.25-2.16(m,3H),1.99-1.92(m,5H),1.61-1.57(m,4H),1.52(d,J＝8.0Hz,3H),1.22(s,6H),1.16(s,6H),1.03(s,9H)。MS-ESI:1086.3[M+H]⁺。

实施例7 N-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基丁基)-N-(4-((1-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)乙炔基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物7)的制备

2-(4-(((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯

除了用2-溴乙酸叔丁酯替代Boc-溴乙胺外，本化合物的制备同实施例6中的2-(4-(((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备。收率为76.9％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.22-7.15(m,2H),6.62-6.54(m,2H),3.72(s,3H),3.23(s,2H),2.81(q,J＝8.6,6.2Hz,2H),2.61(s,1H),2.42(d,J＝10.3Hz,2H),2.01-1.88(m,2H),1.80(qd,J＝8.9,4.6Hz,2H)。MS-ESI:315.3[M+H]⁺。

1-((4-((1-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)乙炔基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸

除了用2-(4-(((4-氨基苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯替代(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率为27.8％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.36(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝8.3Hz,2H),3.81(d,J＝6.4Hz,5H),3.62(s,2H),3.29(s,2H),2.99(s,1H),2.38(s,2H),2.05(d,J＝38.0Hz,2H),1.75(s,2H),1.69(s,2H)。MS-ESI:427.4[M+H]⁺。

叔丁基2-(4-((4-(1-((((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙酸酯

除了用1-((4-((1-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)乙炔基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸替代1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸，缩合剂由HATU改为EDCI,HOBT外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯的制备。收率为50％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.67(s,1H),7.56(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),7.50-7.43(m,2H),7.40-7.32(m,2H),6.94(d,J＝2.3Hz,1H),6.78(dt,J＝8.8,2.2Hz,2H),4.00(s,1H),3.92(d,J＝7.7Hz,1H),3.14(s,2H),2.89-2.79(m,2H),2.63(s,1H),2.44(s,2H),1.89-1.74(m,6H),1.68(q,J＝5.1Hz,2H),1.49-1.42(m,9H),1.18(dd,J＝8.3,1.8Hz,12H)。MS-ESI:687.2[M+H]⁺。

2-(4-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙酸

除了用叔丁基2-(4-((4-(1-((((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙酸酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

N-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-氯苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基丁基)-N-(4-((1-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)哌啶-4-基)乙炔基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺

除了用2-(4-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)乙炔基)哌啶-1-基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为27％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.52-7.50(m,2H),7.46-7.41(m,4H),7.37-7.34(m,2H),7.12(d,J＝4.0Hz,1H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),5.02-4.98(m,1H),4.67(s,7H),4.58(t,J＝8.0Hz,1H),4.44(s,1H),4.25(s,1H),3.93(s,1H),3.88-3.85(m,1H),3.75(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),3.08(s,2H),2.86-2.84(m,1H),2.48(s,3H),2.21-2.18(m,1H),2.04-1.95(m,4H),1.85-1.82(m,1H),1.60-1.58(m,5H),1.53(d,J＝4.0Hz,3H),1.23(s,6H),1.17(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1057.4[M+H]⁺。

实施例8(3S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-3-羧酰胺(化合物8)的制备

叔丁基(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酸酯

将叔丁基(4-溴苯基)氨基甲酸酯(7.23g，25.28mmoL)、4-甲基噻唑(5g，50.5mmoL)、醋酸钯(57mg，0.25mmoL)和乙酸钾(4.95g，50.50mmoL)加入到N，N-二甲基乙酰胺(100mL)，置换三次氮气，于80℃搅拌18h，TLC监测反应完全。冷却至室温，过滤反应混合物。向滤液中加入到(150mL)，并在室温下将所得混合物搅拌4h。过滤反应混合物。过滤收集固体，并在50℃的烘箱中干燥，得灰色固体3.48g，收率82％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),7.42(dd,J₁＝11.6Hz，J₂＝7.2Hz,2H),7.29(d,J＝8.1Hz,2H),4.12(d,J＝6.2Hz,2H),2.41(s,3H),1.36(s,9H)。

(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)甲酰胺盐酸盐

将叔丁基(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酸酯(502mg，1.65mmoL)溶于甲醇(3mL)中，再加入盐酸/1,4二氧六环(4.0M,8mL)，室温搅拌，TLC监测反应完成。减压蒸去溶剂，高真空干燥，不做纯化直接用于下步反应，得固体440mg。

叔丁基(2S，4R)-4-羟基-2-(((1s)-1-(4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-1-羧酸盐

将(2S，4R)-l-((叔丁氧基)羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(480mg，2.08mmoL)加入二氯甲烷(10mL)和DIPEA(894mg，6.925mmoL)的混合溶液中，再加入HOBT(790mg，2.08mmoL)、HATU(790mg，2.08mmoL)、(lS)-l-(4-(4-甲基-l，3-噻唑-5-基)苯基)乙烷-l-胺(440mg，1.385mmoL)。加料完毕，在室温下搅拌12小时。TLC监测反应完全。加入水(5mL×2)，分液。减压蒸去溶剂，残留物快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50。得黄色产物510mg，收率为58.8％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68(s,1H),7.36(dd,J＝22.3,7.8Hz,4H),4.48(m,2H),3.77-3.60(m,1H),3.52(dd,J＝11.2,4.6Hz,1H),2.51(s,3H),2.01-2.11(m,1H),1.66-1.73(m,2H),1.56-1.48(m,2H),1.43(d,J＝6.6Hz,9H)。MS-ESI:432.1[M+H]⁺。

(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-l-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐

将叔丁基(2S,4R)-4-羟基-2-(((1s)-1-(4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰]吡咯烷-1-羧酸盐(510mg，11.59mmoL)溶于甲醇(3mL)中，加入盐酸/1,4二氧六环(4.0M,5mL)。加料完毕，室温搅拌30分钟，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物高真空干燥，不做近一步纯化直接用于下步反应，得到固体405mg。

叔丁基((S)-l-((2S,4R)-4-羟基-2-((S)-l-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-l-基)-3，3-二甲基-l-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸酯

将(2S)-2-((叔丁氧基)羰基)氨基-3,3-二甲基丁酸(424mg，1.83mmoL)加入二氯甲烷(10mL)中，再依次加入DIPEA(237mg，6.35mmoL)、HATU(698mg，1.91mmoL)、HOBt(248mg,1.91mmoL)、(2S,4R)-4-羟基-N-((lS)-l-(4-(4-甲基-l，3-噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(405mg，1.27mmoL)。加料完毕，继续在室温下搅拌12小时。TLC监测反应完全。加入水，分液。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:30，得淡黄色固体550mg，收率为81％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68(s,1H),7.44(m,1H),7.40-7.29(m,4H),5.18(d,J＝9.0Hz,1H),4.76(t,J＝8.0Hz,1H),4.64-4.45(m,2H),4.31(dd,J＝14.9,5.1Hz,1H),4.12(dd,J＝20.3,10.3Hz,2H),2.62-2.53(m,1H),2.51(s,3H),2.12(dd,J＝13.4,8.2Hz,1H),1.52-1.42(m,2H),1.40(s,9H),0.90(s,9H)。MS-ESI:545.3[M+H]⁺。

(3S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁醇)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-3-羧酰胺

将叔丁基((S)-1-((3R,4S)-3-羟基-4-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸酯(80mg,0.15mmoL)加入到甲醇(2mL)中，加入盐酸/1,4二氧六环(4.0M,4mL)。加料完毕，室温搅拌，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物高真空干燥，不做纯化直接用于下步反应。

叔丁基(4-硝基苯基)1,4-苯基胺基二碳酸酯

将化合物(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g,4.8mmoL)、TEA(1.46g,14.4mmol)加入到DCM(15mL)中，再加入氯甲酸对硝基苯酯(1.25g,6.24mmoL)。加料完毕，室温反应2h，TLC监测反应完全。不做纯化，直接用于下步反应。

叔丁基(4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基氨基甲酸酯

前一步反应液中加入TEA(6mL)、4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈盐酸盐(1.5g,6.24mmoL)。加料完毕，室温反应2h，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1,得产物1.2g，收率49％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,1H),8.46(s,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.34-7.20(m,5H),7.01(dd,J＝8.7,1.9Hz,1H),6.19(d,J＝8.8Hz,1H),4.26(s,1H),3.71(d,J＝8.8Hz,1H),1.45(s,9H),1.13(d,J＝10.6Hz,6H),1.03(d,J＝12.6Hz,6H)。

1-(4-氨基苯基)-3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲

将叔丁基(4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基氨基甲酸酯(600mg)溶于DCM(2mL)中，盐酸/1,4二氧六环(4.0M,8.0mL)。加料完毕，室温搅拌。反应40分钟，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物经高真空干燥，不做纯化直接用于下步反应。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯

除了用1-(4-氨基苯基)-3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲替代1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸外，本化合物的制备同实施例1中的1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率51％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.22(d,J＝2.3Hz,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,2H),7.01(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.46(d,J＝8.5Hz,2H),6.03(d,J＝8.8Hz,1H),4.25(s,1H),3.93(s,2H),3.70(d,J＝8.8Hz,1H),3.43(t,J＝6.3Hz,2H),2.93(t,J＝6.5Hz,2H),1.59-1.46(m,4H),1.42(s,9H),1.14(s,6H),1.04(s,6H)。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。

(3S，4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-3-羧酰胺的制备

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，用HATU替代EDCI，以及用(3S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁醇)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-3-羧酰胺替代(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为67％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.47-7.44(m,4H),7.42-7.40(m,2H),7.20-7.09(m,3H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.30(d,J＝8.0Hz,1H),4.71-4.68(m,1H),4.53-4.47(m,2H),4.38-4.34(m,1H),4.20(s,1H),3.96(q,J＝16.0Hz,2H),3.89-3.78(m,3H),3.76-3.61(m,2H),3.55-3.50(m,2H),2.47(s,3H),2.27-2.17(m,1H),2.12-1.99(m,1H),1.67-1.60(m,2H),1.57-1.50(m,2H),1.47-1.40(m,2H),1.23(s,6H),1.13(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:969.4[M+H]⁺。

实施例9(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-(4-(3-((1r，3r)-3-)(3-氯-4-氰基苯酚))-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯氧基)戊基)氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)苯基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物9)的制备

(5-(4-硝基-苯氧基)-戊氧基)-乙酸叔丁酯

将对硝基苯酚(323mg,2.32mmoL)、(5-羟基-戊氧基)-乙酸叔丁酯(506mg,2.32mmol)、三苯基膦(913mg,3.48mmoL)加入到25mL单口瓶中，加入无水THF(10.0mL),在冰浴下缓慢滴加DEAD(606mg,3.48mmoL)。加毕室温反应过夜，TLC监测反应完全。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得656mg，收率83.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.30-8.15(m,2H),7.06-6.87(m,2H),4.10(d,J＝4.3Hz,2H),4.10(s,2H),3.59(dd,J＝15.1,8.8Hz,2H),2.01-1.82(m,2H),1.79–1.58(m,2H),1.51(s,9H)。MS-ESI:362.0[M+Na]⁺。

(5-(4-氨基-苯氧基)戊氧基)-乙酸叔丁酯

将(5-(4-硝基-苯氧基)-戊氧基)-乙酸叔丁酯(362mg,1.16mmoL)、无水乙醇(10mL)加入到单口瓶(25mL)中，加入锌粉(754mg,11.6mmoL)和醋酸(3mL)。室温反应1h，TLC监测反应完全。硅藻土过滤，减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得产物158mg，收率44.1％。

2-((5-(4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯氧基)戊基)乙酸叔丁酯

将4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈盐酸盐(177mg,0.56mmoL)和三乙胺(170mg,1.68mmoL)加入DCM(2.0mL)中。在冰浴和N₂保护下加入三光气(55mg，0.18mmoL)。继续反应1小时，随后加入(5-(4-氨基-苯氧基)戊氧基)-乙酸叔丁酯(158mg，0.51mmoL)。加料完毕，室温搅拌过夜。TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得产物115mg，收率为33.5％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.58(d,J＝6.6,2H),7.26-7.19(m,4H),6.99-6.89(m,4H),6.80(dd,J＝8.7,2.4Hz,2H),4.13(s,2H),4.12(m,1H),4.02(m,1H),4.10-3.89(m,2H),3.63(m,2H),1.91-1.72(m,4H),1.54(s,9H),1.29-1.17(m,2H),1.19(s,6H)1.13(s,6H)。

2-((5-(4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯氧基)戊基)氧基)乙酸

除了用2-((5-(4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯氧基)戊基)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-(4-(3-((1r，3r)-3-)(3-氯-4-氰基苯酚))-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯氧基)戊基)氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)苯基)吡咯烷-2-羧酰胺

除了用2-((5-(4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯氧基)戊基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺。收率64.5％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.45-7.37(m,4H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.15-7.11(m,1H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.87-6.83(m,2H),5.01-4.94(m,1H),4.70(d,J＝8.0Hz,1H),4.59-4.54(m,1H),4.44(s,1H),4.18(s,1H),4.03-3.94(m,4H),3.76-3.69(m,1H),3.65-3.54(m,2H),3.26-3.20(m,1H),2.47(s,3H),2.24-2.19(m,1H),1.98-1.87(m,1H),1.83-1.80(m,2H),1.76-1.69(m,2H),1.65-1.56(m,2H),1.50(d,J＝8.0Hz,3H),1.23(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:984.1[M+Na]⁺。

实施例10(3S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-1-(4-(噻唑-5-基))苯基)乙基)吡咯烷-3-羧酰胺(化合物10)的制备

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。收率为53％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.97(s,1H),8.14(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.63-7.61(m,2H),7.38-7.36(m,2H),7.15-7.10(m,3H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.71-6.69(m,2H),4.99-4.93(m,1H),4.70(d,J＝8.0Hz,1H),4.59-4.53(m,1H),4.43(s,1H),4.17(s,1H),4.00(q,J＝16.0Hz,2H),3.85-3.83(m,2H),3.76-3.72(m,1H),3.60-3.56(m,2H),3.11(t,J＝8.0Hz,2H),2.21-2.17(m,1H),1.96-1.89(m,1H),1.73-1.68(m,4H),1.62-1.50(m,2H),1.45(d,J＝4.0Hz,3H),1.22(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。ESI-MS:969.2[M+H]⁺。

实施例11(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物11)的制备

1-((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-3-(4-硝基苯基)脲

将4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-溴苯腈盐酸盐(400mg，1.12mmoL和三乙胺(136mg,1.34mmol)加入DCM(15mL)中，搅拌15分钟后全溶。再加入1-异氰酸酯-4-硝基苯(166mg,1.01mmoL)，室温搅反应，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:6-1:1。得产物500mg，收率为92％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.37(s,1H),8.15(d,J＝9.3Hz,2H),7.86(d,J＝8.7Hz,1H),7.61(d,J＝9.3Hz,2H),7.36(d,J＝2.3Hz,1H),7.04(dt,J＝10.4,5.2Hz,1H),6.55(d,J＝8.6Hz,1H),4.29(s,1H),3.72(d,J＝8.5Hz,1H),1.16(s,6H),1.06(s,6H)。

1-(4-氨基苯基)-3-((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲

将1-((1r，3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-3-(4-硝基苯基)脲(450mg,0.93mmoL)加入甲醇(10mL)中，再加入氯化铵(494mg,9.26mmoL)和铁粉(259mg,4.63mmoL)，于80℃反应，TLC监测反应完全。过滤，滤渣用二氯甲烷/甲醇＝10/1洗涤。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:6-1:1。得白色固体106mg，收率为25％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6):δ8.09(s,1H),7.86(d,J＝7.2Hz,1H),7.35(s,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,3H),6.46(d,J＝7.2Hz,2H),6.04(d,J＝7.4Hz,1H),4.68(s,2H),4.24(s,1H),3.69(d,J＝7.7Hz,1H),1.08(d,J＝38.2Hz,12H)。在此反应中发现了大量的脱溴副产物。

2-(5-(4-(3-((1r,3r)3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酸叔丁酯

除了用1-(4-氨基苯基)-3-((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲替代1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸，本化合物的制备同实施例1中的1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率为收率82％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ7.53(dd,J＝10.9,4.9Hz,1H),7.11-7.02(m,3H),6.83-6.75(m,1H),6.59(dd,J＝8.6,4.4Hz,2H),5.98(s,1H),4.75(d,J＝8.7Hz,1H),3.96(d,J＝4.7Hz,2H),3.88(d,J＝8.5Hz,2H),3.67-3.47(m,2H),3.13(dd,J＝15.0,8.0Hz,2H),1.79-1.72(m,1H),1.71-1.64(m,2H),1.54(td,J＝8.6,4.2Hz,1H),1.49(S,9H),1.13(s,6H),1.04(s,6H)。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酸

除了用2-(5-(4-(3-((1r,3r)3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。

(3S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-溴-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-3-羧酰胺

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为73％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)：δ8.88(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.48-7.37(m,5H),7.26(d,J＝4.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,2H),7.00(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,2H),5.00-4.97(m,1H),4.70(d,J＝4.0Hz,1H),4.60-4.54(m,1H),4.44(s,1H),4.16(s,1H),4.03-3.92(m,1H),3.86-3.83(m,2H),3.76-3.73(m,1H),3.60-3.56(m,2H),3.15-3.05(m,2H),2.47(s,3H),2.25-2.19(m,1H),1.97-1.91(m,1H),1.73-1.65(m,4H),1.58-1.54(m,2H),1.47(d,J＝4.0Hz,3H),1.22(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1027.1[M+H]⁺。

实施例12(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-碘-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物12)的制备

(4-(3-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯

将4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-碘苄腈盐酸盐(410mg,1.0mmol)和三乙胺(0.42mL,3mmol)加入到DCM(15.0mL)中，在冰浴下缓慢加入三光气(100mg,0.36mmoL)。加料完毕后，继续在冰浴下下反应1.5h。再加入(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(230mg,1.1mmoL)。加料完毕，室温搅拌过夜，TLC监控反应完成。过滤，滤饼用DCM洗涤，干燥得产物200m g，收率34.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,1H),8.48(s,1H),7.75(d,J＝12.0Hz,1H),7.49(d,J＝4.0Hz,1H),7.23-7.30(m,4H),7.03(dd,J＝4.0Hz,1H),6.20(d,J＝12Hz,1H),4.21(s,1H),3.70(d,J＝8.0Hz,1H),1.46(s,9H),1.14(s,6H),1.04(s,6H)。

MS-ESI:605.0[M+H]⁺。

1-(4-氨基苯基)-3-((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲

除了用(4-(3-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)胺基)戊基)氧代)乙酸叔丁酯

除了用1-(4-氨基苯基)-3-((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲替代1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸外，2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)胺基)戊基)氧代)乙酸叔丁酯的制备同实施例1中的1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率为54.3％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.48(d,J＝8Hz,1H),7.32(s,1H),7.06-7.08(m,2H),6.81(d,J＝12Hz,1H),6.60-6.67(m,2H),5.98(s,1H),4.75(d,J＝8.0Hz,1H),3.94-3.98(m,2H),3.86-3.89(m,2H),3.50-3.58(m,2H),3.11-3.18(m,2H),1.63-1.70(m,4H),1.47(s,9H),1.12(s,6H),1.04(s,6H)。MS-ESI:705.1[M+H]⁺。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧乙酸

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-碘-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5)-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(4-氰基-3-碘苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺。收率为52.6％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),8.64(d,J＝4.0Hz,1H),7.66-7.64(m,1H),7.60-7.55(m,1H),7.47-7.34(m,5H),7.13(d,J＝4.0Hz,1H),7.02-6.98(m,1H),6.66(d,J＝4.0Hz,1H),6.17-6.06(m,1H),4.97-5.02(m,1H),4.70(d,J＝4.0Hz,1H),4.58(q,J＝4.0Hz,1H),4.45-4.40(m,1H),4.13(s,1H),4.00(q,J＝4.0Hz,2H),3.86-3.82(m,1H),3.78-3.72(m,1H),3.63-3.54(m,2H),3.12-3.08(m,1H),2.47(s,3H),2.25-2.20(m,1H),1.97-1.91(m,1H),1.73-1.63(m,3H),1.59-1.51(m,2H),1.47(d,J＝4.0Hz,3H),1.22-1.20(m,6H),1.13-1.12(m,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1075.3[M+H]⁺。

实施例13(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((6-(4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2，4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)己基-5-炔-1-基)氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-羧酰胺(化合物13)的制备

1-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-3-(4-碘苯基)脲

将4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈盐酸盐(1.2g,3.83mmoL)溶于DCM(40mL)中，降温至0℃。N₂保护下加入三光气(372mg,1.25mmoL)反应1h。再随后加入4-碘代苯胺(762mg,3.48mmol)室温搅拌过夜。TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得产物1.0g，收率49.9％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,2H),7.34-7.23(m,3H),7.04(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),6.33(d,J＝8.7Hz,1H),4.31(s,1H),3.73(d,J＝8.7Hz,1H),1.18(s,6H),1.09(s,6H)。MS-ESI:524.0[M+H]⁺。

叔丁基2-((6-(4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)己基-5-炔-1-基)氧基)乙酸酯

将1-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-3-(4-碘苯基)脲(200mg,0.38mmoL)、2-(己-5-炔-1-基氧)乙酸叔丁酯(89mg,0.42mmoL)、碘化亚铜(15mg,0.08mmoL)、PdCl₂(PPh₃)₂(17mg,0.04mmoL)加入到25mL三口瓶中，加入DMF(5mL)和TEA(0.16mL,1.2mmoL)，氮气保护置换3次，然后升温至60℃反应过夜，TLC监测反应完全。加水淬灭反应，DCM萃取。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得147mg，收率为63.9％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.60(d,J＝8.7,1H),7.38-7.29(m,4H),6.98(d,J＝2.4Hz,1H),6.82(dd,J＝8.7Hz,2.4Hz,1H),4.01(s,2H),4.00(s,1H),3.95(d,J＝8.7Hz,1H),3.61(t,J＝6.3Hz,2H),2.48(t,J＝6.9Hz,2H),1.88-1.79(m,2H),1.78-1.70(m,2H),1.54(s,9H),1.21(d,J＝5.9Hz,12H)。

2-((6-(4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)己基-5-炔-1-基)氧基)乙酸

除了用叔丁基2-((6-(4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)己基-5-炔-1-基)氧基)乙酸酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((6-(4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)己基-5-炔-1-基)氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-羧酰胺

除了用2-((6-(4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)己基-5-炔-1-基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率55.5％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,2H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.56-7.48(m,2H),7.45-7.37(m,4H),7.12(d,J＝4.0Hz,1H),6.97(dd,J＝4.0Hz,4.0Hz,1H),6.40(d,J＝8.0Hz,1H),5.00-4.93(m,1H),4.70-4.66(m,1H),4.60-4.54(m,1H),4.44(s,1H),4.21(s,1H),3.98(q,J＝8.0Hz,2H),3.88-3.83(m,1H),3.76-3.72(m,1H),3.63-3.54(m,4H),3.04-3.00(m,2H),2.47(s,3H),2.24-2.17(m,1H),1.97-1.91(m,1H),1.79-1.67(m,4H),1.58-1.52(m,2H),1.49(d,J＝8.0Hz,3H),1.25(s,6H),1.16(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:977.2[M+H]⁺。

实施例14(3S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-2-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-3-羧酰胺(化合物14)的制备

2-(((5-((2-氟-4-硝基苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯

除了用2-氟-4-硝基苯胺替代1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸外，本化合物的制备同实施例1中的1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率为65.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.54-6.42(m,1H),6.33(dd,J＝13.8,2.4Hz,1H),6.25(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),4.25(s,1H),3.93(d,J＝2.3Hz,2H),3.42(t,J＝6.5Hz,2H),2.92(s,2H),1.59-1.46(m,4H),1.45-1.39(m,9H),1.39-1.31(m,2H)。

2-(((5-((4-氨基-2-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯

将2-(((5-((2-氟-4-硝基苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯(3.8g,10.7mmoL)溶于甲醇(40mL)中，再加入Pd/C(50wt％)(800mg)，置换3次H₂，室温搅拌过夜。TLC监测反应完全。用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(5mL×3)洗涤。减压蒸去溶剂，残留物不做纯化，直接用于下步反应。得3.2g，收率为92.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.51-6.43(m,1H),6.33(dd,J＝13.8,2.4Hz,1H),6.25(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),4.52(s,2H),4.25(s,1H),3.93(d,J＝2.3Hz,2H),3.42(t,J＝6.5Hz,2H),2.92(s,2H),1.62-1.46(m,4H),1.41(d,J＝5.4Hz,9H),1.39-1.31(m,2H)。

3-2-(((5-((2-氟-4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氨基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯

将(((5-((4-氨基-2-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯(200mg，0.613mmoL)和三乙胺(186mg，1.842mmoL)溶于二氯甲烷(5.0mL)中，再加入4-硝基苯基碳酰氯(160mg，0.796mmoL)。室温反应2小时，TLC监测反应完全，直接用于下步反应。

2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-2-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯

向前一步反应液加入用三乙胺碱化的4-(((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈(192mg，0.613mmoL)，室温反应过夜，TLC监测完全。加入水，分液。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得产物102mg，收率为26％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.54(d,J＝8.7Hz,1H),6.98(dd,J＝12.2,2.0Hz,1H),6.91(t,J＝6.9Hz,2H),6.76(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),6.64(t,J＝8.9Hz,1H),6.18(s,1H),4.80(d,J＝8.6Hz,1H),3.96(d,J＝4.7Hz,2H),,3.54(t,J＝6.3Hz,2H),3.14(t,J＝7.0Hz,2H),1.74-1.50(m,6H),1.47(d,J＝5.0Hz,9H),1.14(s,6H),1.09(s,6H)。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-2-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸

除了用2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-2-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。

(3S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-2-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-3-羧酰胺

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-2-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为26％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.45-7.37(m,4H),7.20-7.16(m,1H),7.11(d,J＝4.0Hz,1H),6.97(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.86-6.84(m,1H),6.73-6.69(m,1H),5.01-4.98(m,1H),4.69-4.68(m,1H),4.60-4.54(m,1H),4.44(s,1H),4.18(s,1H),4.03-3.92(m,2H),3.85-3.83(m,2H),3.76-3.72(m,1H),3.59-3.53(m,2H),3.15(t,J＝8.0Hz,2H),2.48(s,3H),2.24-2.19(m,1H),1.98-1.93(m,1H),1.75-1.64(m,4H),1.58-1.54(m,2H),1.49(d,J＝8.0Hz,3H),1.23(s,6H),1.15(s,6H),1.03(s,9H)。ESI-MS:1001.3[M+H]⁺。

实施例15(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2),2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-3-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-羧酰胺(化合物15)的制备

2-(((5-((3-氟-4-硝基苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯

除了用2-氟-4-硝基苯胺替代1-((4-氨基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸外，本化合物的制备同实施例1中的1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸的制备。收率为84％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94(t,J＝9.0Hz,2H),6.34(ddd,J＝13.3,9.2,2.5Hz,1H),5.24-5.17(m,2H),3.99-3.88(s,2H),3.53(dt,J＝15.7,5.9Hz,2H),3.27-3.12(m,2H),1.86-1.69(m,2H),1.56-1.51(m,2H),1.51-1.39(m,9H)。

2-(((5-((4-氨基-3-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯的合成

除了用2-(((5-((3-氟-4-硝基苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯替代2-(((5-((2-氟-4-硝基苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例13中的(((5-((4-氨基-2-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯的制备。收率90％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.51-6.43(m,1H),6.33(dd,J＝13.8,2.4Hz,1H),6.25(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),4.52(s,2H),4.25(s,1H),3.93(d,J＝2.3Hz,2H),3.42(t,J＝6.5Hz,2H),2.92(s,2H),1.62-1.46(m,4H),1.41(d,J＝5.4Hz,9H),1.39-1.31(m,2H)。

2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-3-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯

将化合物4-(((1r，3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈盐酸盐(188mg，0.6mmoL)和三乙胺(182mg，1.8mmoL)加入至二氯甲烷(10.0mL)中，此体系在冰水浴下后加入三光气(59.4mg，0.2mmoL)。加料完毕后室温反应3小时，再加入2-(((5-((4-氨基-3-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸叔丁酯(215mg，0.66mmoL)，室温反应过夜。TLC监测反应完全。加入水，分液。减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1。得产物200mg，收率52.9％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.52(d,J＝8.7Hz,1H),6.95-6.78(m,4H),6.72(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),4.36(dd,J＝8.4,4.6Hz,1H),3.91(s,3H),3.85-3.75(m,2H),3.65-3.54(m,2H),3.47(t,J＝6.6Hz,2H),1.63-1.57(m,2H),1.54-1.47(m,2H),1.46(s,9H),1.40-1.23(m,2H),1.10(s,6H),0.92(s,6H)。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-3-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸

除了用2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-3-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2),2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-3-氟苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-羧酰胺

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-3-氟苯基)氨基)戊基)氧)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为57.7％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.69-7.66(m,1H),7.46-7.37(m,4H),7.06(d,J＝4.0Hz,1H),7.00(d,J＝4.0Hz,1H),6.93-6.89(m,3H),5.01-4.98(m,1H),4.68-4.54(m,3H),4.44(s,1H),4.08(s,1H),3.97(q,J＝8.0Hz,2H),3.76-3.71(m,2H),3.67-3.58(m,2H),3.52-3.35(m,2H),2.48(s,3H),2.24-2.19(m,1H),1.98-1.94(m,1H),1.67-1.62(m,2H),1.58-1.52(m,2H),1.50(d,J＝8.0Hz,3H),1.47-1.43(m,2H),1.11(s,6H),1.03(s,9H),0.96(s,6H)。ESI-MS:1001.3[M+H]⁺。

实施例16(2S)-1-(((S)-2-(2-(4-(4'-(3-((1r,3r))-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-[1,1'-联苯]-4-基)丁氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-羧酰胺(化合物16)的制备

2-(丁-3-炔-1-基氧基)乙酸叔丁酯

将化合物3-丁炔-1-醇(2.5g,35.71mmoL)加至250mL单口瓶中，加入甲苯(50mL)和水(50mL)，然后加入四丁基硫酸氢胺(2.43g,7.14mmoL)。加料完毕，室温搅拌1h,加入2-溴乙酸叔丁酯(8.31g,42.85mmoL)反应过夜。TLC检测反应完全，直接向反应液中加入乙酸乙酯和水，分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:50-1:10，得产物4.2g，收率为64％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.99(s,2H),3.65(t,J＝7.0Hz,2H),2.51(td,J＝7.0,2.7Hz,2H),1.98(t,J＝2.7Hz,1H),1.46(s,9H)。

2-((4-(4'-硝基-[1,1'-联苯]-4-基)丁-3-炔-1-基)氧基)乙酸叔丁酯

将化合物4-碘-4'-硝基-1,1'-联苯(2.5g,7.69mmoL)加至100mL单口瓶中，再加入DMF(15mL)、2-(丁-3-炔-1-基氧基)乙酸叔丁酯(2.12g,11.53mmoL)、CuI(0.3g，1.54mmoL)、TEA(2.33g，23.07mmoL)和PdCl₂(PPh₃)₂(0.34g，0.769mmoL)。再N₂气保护下，加热60℃搅拌过夜。TLC检测反应完全，直接向反应液中加入乙酸乙酯和水。分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:30-1:10，得产物2.3g，收率78.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.34-8.25(m,2H),7.77-7.68(m,2H),7.54(q,J＝8.5Hz,4H),4.05(s,2H),3.77(t,J＝7.1Hz,2H),2.79(t,J＝7.1Hz,2H),1.49(s,9H)。

2-(4-(4'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)丁氧基)乙酸叔丁酯

将2-((4-(4'-硝基-[1,1'-联苯]-4-基)丁-3-炔-1-基)氧基)乙酸叔丁酯(1g,2.62mmoL)加至100mL单口瓶中，加入MeOH(20mL)，PtO₂(0.1g,10％/w/w)，置换H₂三次，室温下搅拌过夜。TLC检测反应完全，过滤，滤液减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:10-1:1，得产物0.585g，收率为63％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.47-7.38(m,2H),7.36-7.27(m,2H),7.23-7.14(m,2H),6.72-6.52(m,2H),5.18(s,2H),3.92(s,2H),3.44(t,J＝6.3Hz,2H),2.57(t,J＝7.5Hz,2H),1.70-1.57(m,2H),1.55-1.46(m,2H),1.41(s,9H)。

2-(4-(4'-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-(1,1'-联苯基)-4-基)丁氧基)乙酸叔丁酯

将化合物4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈盐酸盐(157mg，0.5mmol)加至50mL单口瓶中，加入DCM(5mL)，在冰浴下缓慢加入TEA(303mg,3.0mmoL)和三光气(49mg,0.165mmoL)。加料完毕，继续在冰浴下反应3h。再加入2-(4-(4'-氨基-(1,1'-联苯)-4-基)丁氧基)乙酸叔丁酯(213mg,0.6mmoL)，室温下搅拌反应过夜。TLC检测反应完全，向反应液中加入乙酸乙酯和水。分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5-1:1，得产物130mg，收率为40％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.72(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.62-7.40(m,6H),7.30-7.17(m,3H),7.02(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.33(d,J＝8.8Hz,1H),4.29(s,1H),3.93(s,2H),3.73(d,J＝8.7Hz,1H),3.45(t,J＝6.2Hz,2H),2.61(t,J＝7.4Hz,2H),1.63(p,J＝7.4Hz,2H),1.52(p,J＝6.3Hz,2H),1.41(s,9H),1.27-1.20(m,2H),1.17(s,6H),1.07(s,6H)。

2-(4-(4'-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-(1,1'-联苯基)-4-基)丁氧基)乙酸

除了用2-(4-(4'-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-(1,1'-联苯基)-4-基)丁氧基)乙酸叔丁酯替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

(2S)-1-(((S)-2-(2-(4-(4'-(3-((1r,3r))-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-(1,1'-联苯)-4-基)丁氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-羧酰胺

除了用2-(4-(4'-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)-(1,1'-联苯基)-4-基)丁氧基)乙酸替代1-((4-((5-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)戊基)氨基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸外，本化合物的制备同实施例1中的2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酰胺基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸叔丁酯的制备。收率59.0％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.53-7.49(m,4H),7.45-7.37(m,6H),7.28(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(t,J＝4.0Hz,1H),6.96(d,J＝4.0Hz,1H),4.99-4.94(m,1H),4.68(s,1H),4.59-4.55(m,1H),4.43(s,1H),4.19(s,1H),3.96(d,J＝4.0Hz,2H),3.88-3.83(m,2H),3.76-3.73(m,1H),3.58(t,J＝8.0Hz,2H),2.70(t,J＝8.0Hz,2H),2.47(s,3H),2.25-2.18(m,1H),1.97-1.92(m,1H),1.79-1.77(m,2H),1.71-1.67(m,2H),1.48(d,J＝8.0Hz,3H),1.25(s,6H),1.16(s,6H),1.03(s,9H)。ESI-MS:1030.1[M+H]⁺。

实施例17(3R,5S)-1-(S)-2-(2-(5-(4-(3-(1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨)-3,3-二甲基丁酰基)-5-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基乙酸酯(化合物17)的制备

(S)-(1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸酯叔丁基

将(S)-(1-(4-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(30.0g，100mmoL)、4-甲基噻唑(19.8g，200mmoL)、醋酸钯(226mg，1.0mmoL)和乙酸钾(19.6g，20mmol)加入到500mL三口瓶中，加入N,N-二甲基乙酰胺(200mL)，置换氮气三次，于120℃反应5h。TLC监测反应完全，冷却至室温，过滤。向滤液中加入乙酸乙酯(800mL)，用水(500mL)洗涤三次，分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5，得产物22.6g，收率71.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.67(s,1H),7.41(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(d,J＝8.3Hz,3H),4.86-4.80(m,1H),2.53(s,3H)。

(S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺盐酸盐

除了用(S)-(1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸酯叔丁基替代叔丁基((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯外，本化合物的制备同实施例1中的4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈的制备。

(2S,4R)-4-乙酰氧基-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羧酸

将Boc-L-羟脯氨酸(2.0g,8.65mmoL)加入到100mL的单口瓶中，加入吡啶(20mL)，最后加入醋酸酐(8.2mL,86.5mmoL)，室温搅拌3h，TLC监测反应完全。减压蒸去溶剂，残留物不做纯化，直接用于下步反应。

(2S,4R)-4-乙酰氧基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

将(2S,4R)-4-乙酰氧基-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羧酸(214mg,0.82mmoL)加入到50mL的单口瓶中，再依次加入二氯甲烷(10mL)、DIPEA(0.33mL,1.89mmoL)、HOBT(106mg,0.82mmoL)和(S)-1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺盐酸盐(0.63mmol)，最后加入HATU(300mg,0.82mmoL)，室温搅拌1h。TLC监测反应完全，加水(5ml×2)萃取，分液，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为甲醇:二氯甲烷＝1:50，得产物180mg，收率为60.3％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.73(s,1H),7.40-4.45(m,4H),5.31-5.00(m,2H),4.65-4.23(m,1H),3.75(td,J＝6.7,4.0Hz,2H),3.23(dd,J＝7.5,4.2Hz,2H),2.55(s,3H),2.08(s,3H),1.53-1.48(m,12H)。

(3R,5S)-5-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-乙酸基酯

除了用(2S,4R)-4-乙酰氧基-2-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯替代叔丁基((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯外，本化合物的制备同实施例1中的4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈的制备。

(3R,5S)-1-((S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基乙酸酯

将Boc-L-叔亮氨酸(189mg,0.82mmoL)加入25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(10mL)、DIPEA(0.33mL，1.88mmoL)、HOBt(110mg,0.82mmoL)、(3R,5S)-5-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-乙酸基酯(0.38mmol)，最后加入HATU(300mg,0.82mmoL)，室温下搅拌2小时。TLC监测反应完全，加水(5mL x 2)洗涤，有机相减压蒸去溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚＝1:5，得产物130mg，收率为58.3％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.69(s,1H),7.38(q,J＝8.3Hz,4H),5.32(s,1H),5.19(d,J＝9.5Hz,1H),5.07(t,J＝7.2Hz,1H),4.76(t,J＝7.6Hz,1H),4.22(d,J＝9.5Hz,1H),4.10-4.03(m,1H),3.71(dd,J＝11.8,4.3Hz,1H),2.82-2.73(m,2H),2.52(s,3H),2.13(dd,J＝13.5,9.3Hz,1H),2.04(s,3H),1.46(d,J＝6.9Hz,3H),1.42(s,9H),1.01(s,9H)。

(3R,5S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-乙酸酯

除了用(3R,5S)-1-((S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基乙酸酯替代叔丁基((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸酯外，本化合物的制备同实施例1中的4-((1r,3r)-3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)-2-氯苄腈的制备。不做纯化，直接用于下步反应。

(3R,5S)-1-(S)-2-(2-(5-(4-(3-(1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨)-3,3-二甲基丁酰基)-5-((((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基乙酸酯

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸外，以及用(3R,5S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-乙酸酯替代替代(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率53.2％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.45-7.37(m,4H),7.11-7.07(m,3H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.63(d,J＝8.0Hz,2H),6.04(d,J＝12.0Hz,1H),5.33-5.32(m,1H),5.02-4.96(m,1H),4.60-4.55(m,2H),4.17(s,1H),4.12(d,J＝12.0Hz,1H),3.99(q,J＝8.0Hz,2H),3.89-3.83(m,2H),3.60-3.56(m,2H),3.09(t,J＝8.0Hz,2H),2.47(s,3H),2.41-2.35(m,1H),2.14-2.07(m,1H),2.03(s,3H),1.71-1.63(m,4H),1.59-1.53(m,2H),1.48(d,J＝4.0Hz,3H),1.21(s,6H),1.14(s,6H),1.03(s,9H)。MS-ESI:1025.5[M+H]⁺。

实施例18(3R,5S)-1-((S)-2-(2-(4-((4-(3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-腈基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)胺基)丁氧基)乙酰基)-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)胺基甲酰基)吡咯烷-3-基乙酸酯(化合物18)

在化合物17制备的最后一步中，经快速柱层析分离得到一个杂质，经结构确证是化合物18。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.46-7.37(m,4H),7.11-7.06(m,3H),6.96(dd,J＝4.0,4.0Hz,1H),6.65(d,J＝8.0Hz,2H),5.36-5.32(m,1H),5.03-4.98(m,1H),4.60-4.55(m,3H),4.17(s,1H),4.12(d,J＝12.0Hz,1H),3.99(q,J＝8.0Hz,2H),3.89-3.83(m,2H),3.61-3.59(m,2H),3.12(t,J＝8.0Hz,2H),2.48(s,3H),2.41-2.36(m,1H),2.14-2.07(m,1H),2.02(s,3H),1.78-1.72(m,4H),1.50(d,J＝8.0Hz,3H),1.22(s,6H),1.14(s,6H),1.04(s,9H)。MS-ESI:1011.5[M+H]⁺。

实施例19(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-((5-((4-(3-(3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基))苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物19)的制备

(S)-(1-(4-溴苯基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

将(S)-(1-(4-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.0g，16.7mmoL)加入加入到DMF(10mL)。冰浴条件下加入氢化钠(801.5mg，20.1mmoL)，慢慢升至室温反应30分钟，加入碘甲烷(2.85g，20.1mmoL)室温反应2小时，TLC检测反应完全。反应液用饱和氯化铵溶液淬灭，加入乙酸乙酯和水，分液。有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物5.1g，洗脱剂为PE:EA＝10:1，收率97.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.50(dd,J＝8.8,2.2Hz,2H),7.19(d,J＝8.3Hz,2H),5.52–5.34(m,1H),2.61(s,3H),1.51(s,9H)。MS-ESI:314.3[M+H]⁺。

(S)-甲基(1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸酯叔丁基

将(S)-(1-(4-溴苯基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g，9.58mmoL)、4-甲基噻唑(1.9g，19.2mmoL)、醋酸钯(21.3mg，0.095mmoL)和乙酸钾(1.9g，19.2mmoL)加入到DMF(20mL)，置换三次氮气，升温至90℃搅拌过夜。冷却至室温后过滤，加入乙酸乙酯和水，分液。有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物1.4g，洗脱剂PE:EA＝5:1，收率为45.2％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(s,1H),7.45(d,J＝8.3Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),2.67(s,3H),2.58(s,3H),1.57(d,J＝7.1Hz,3H),1.54(s,9H)。MS-ESI:333.3[M+H]⁺。

(S)-N-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-胺盐酸盐

将(S)-甲基(1-(4-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸酯叔丁基(1.4g，4.2mmoL)加入到HCl/1,4-二氧六环(4M，12mL)，室温搅拌2h，TLC检测反应完全，反应液减压蒸馏直接用于下一步反应。

(2S,4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

将((S)-N-甲基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-1-胺盐酸盐(1.13g，4.2mmoL)加入到二氯甲烷(30mL)，再依次加入DIPEA(2.2mL，12.6mmoL)、HOBT(850mg，6.3mmoL)、(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(971mg，4.2mmoL)和HATU(2.4g，6.3mmoL)。室温搅拌过夜。TLC监测反应完全。减压蒸馏除去溶剂。残留物加入DCM和水，分液。减压蒸馏溶剂，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为DCM:MeOH＝30:1，得到目标产物1.7g，收率为91.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)；δ8.73(s,1H),7.49-7.44(m,2H),7.35-7.31(m,2H),6.13-6.06(m,1H),4.66-4.62(m,1H),3.83-3.79(m,2H)，3.57-3.53(m,1H)，2.84(s,3H),2.34-2.24(m,2H),1.60(d,J＝7.1Hz,3H),1.50(s,9H)。MS-ESI:446.3[M+H]⁺。

(2S,4R)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐

将(2S，4R)-4-羟基-2-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.7g，3.82mmoL)加入加入到1.4-二氧六环(10mL)中，加入HCl/1,4-二氧六环(4.0M，15mL)，室温搅拌2h，TLC检测反应完全，反应液减压蒸馏直接用于下一步反应。

叔丁基((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(甲基((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基甲酸酯

将(2S,4R)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐(300mg，0.79mmoL)加入到二氯甲烷(5mL)中，随后加入DIPEA(0.41mL，2.36mmoL)、HOBt(160mg,1.18mmoL)、(S)-2-(((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(182mg，0.79mmoL)，最后加入HATU(448mg，1.18mmoL)，室温下搅拌过夜。TLC检测反应完全,反应液减压蒸馏除去DMF。残留物加入DCM和水。分液，有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，洗脱剂为DCM:MeOH＝30:1，得到目标产物155mg，收率35.2％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.73(s,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),6.07-6.03(m,1H),5.39-5.30(m,2H),5.06(t,J＝10.0Hz,2H),4.63(s,1H),4.29-4.24(m,2H),3.89-.86(m,1H),2.91(s,3H),2.60(s,3H),2.16-2.06(m,2H),1.59(d,J＝10.0Hz,3H),1.46(s,9H),1.11(s,9H)。MS-ESI:559.3[M+H]⁺。

(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐

将叔丁基((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(甲基((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧丁丁-2-基)氨基甲酸酯(150mg0.27mmoL)加入100mL单口瓶中，加入1,4-二氧六环(3mL)，加入HCl/1,4-二氧六环(4M，3mL)反应1h。TLC检测反应完全，减压蒸去溶剂，高真空干燥，残留物不做纯化直接用于下一步反应。

(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-((5-((4-(3-(3-(3-氯-4-氰基苯氧基))-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基))苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺

除了用2-((5-((4-(3-(3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸，以及用((2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺盐酸盐替代(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为61.1％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.89(s,1H),7.72-7.67(m,2H),7.51-7.47(m,2H),7.39-7.36(m,1H),7.10-7.03(m,3H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(d,J＝8.0Hz,2H),4.97-4.91(m,1H),4.76(d,J＝16.0Hz,1H),4.60(d,J＝24.0Hz,2H),4.16(s,1H),4.05-3.90(m,3H),3.85-3.83(m,2H),3.66-3.54(m,2H),3.13-3.07(m,2H),2.49(s,3H),2.33-2.27(m,1H),2.08-2.00(m,1H),1.90(s,3H),1.74-1.62(m,5H),1.56(d,J＝8.0Hz,3H),1.21(s,6H),1.13(s,6H),1.07(s,9H)。MS-ESI:997.5[M+H]⁺。

实施例20(3R,5S)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r,3r)-3-(3--4-腈基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氧基)戊基)氧基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-3-基乙酸酯(化合物20)的制备

除了用2-((5-((4-(3-(3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)脲基)苯基)氧基)戊基)氧基)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸，以及用(3R,5S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-乙酸酯替代(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率为73％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.88(s,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),7.48-7.35(m,4H),7.26-7.23(m,2H),7.11(d,J＝2.3Hz,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,1H),6.88-6.83(m,2H),5.33-5.31(m,1H),5.01(q,J＝7.1Hz,1H),4.60-4.55(m,2H),4.18(s,1H),4.12(d,J＝12.0Hz,1H),4.01-3.94(m,4H),3.94-3.86(m,2H),3.69-3.56(m,2H),2.48(s,3H),2.41-2.36(m,1H),2.15-2.08(m,1H),2.04(s,3H),1.91-1.80(m,2H),1.77-1.70(m,1H),1.67-1.55(m,2H),1.50(d,J＝6.7Hz,3H),1.24(s,6H),1.15(s,6H),1.06(s,9H)。MS-ESI:1026.2[M+H]⁺。

实施例21(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物21)的制备

3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基-1-(4-硝基苯基)尿素

将1-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-3-(4-硝基苯基)尿素(256mg，0.58mmoL)加入25mL单口瓶中，加入DMF(3mL)，降温至0℃。加入60％氢化钠(28mg，0.69mmoL)，维持0℃反应30分钟。最后加入碘甲烷(99mg，0.69mmoL)，维持在0℃反应2小时，TLC检测反应完全。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入EA和水萃取分液，有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物130mg，洗脱剂PE:EA(2：1)，收率49.2％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.37-8.33(m,2H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),7.53-7.50(m,2H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),6.80(dd,J＝8.7Hz 2.4Hz,1H),4.72(d,J＝7.9Hz,1H),3.94-3.92(m,1H),3.42(s,3H),1.20(s,6H),1.10(s,6H)。MS-ESI:457.2[M+H]⁺。

1-(4-氨基苯基)-3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲

将3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基-1-(4-硝基苯基)尿素(130mg，0.28mmoL)加入25mL三口瓶中，加入甲醇(5mL)，Pd/C(39mg，30％wt)，置换三次氢气，室温搅拌3小时，TLC检测反应完全。反应液加硅藻土过滤，滤液减压蒸馏，得到目标产物120mg，收率99.1％。MS-ESI:427.3[M+H]⁺。

叔丁基2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸酯

将1-(4-氨基苯基)-3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲(120mg，0.28mmoL)加入25mL单口瓶中，加入甲醇(3mL)，然后依次加入2-甲基吡啶-N-甲硼烷(67.3mg，0.31mmoL)和2-((5-氧戊基)氧基)乙酸叔丁酯(67.3mg，0.31mmoL)，室温搅拌3小时，TLC检测反应完全。反应液加水淬灭，反应液减压蒸馏，加入EA和水萃取分液，有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物139.0mg，洗脱剂PE:EA(2：1)，收率78.4％。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56(d,J＝8.7Hz,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),6.93(d,J＝2.0Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7Hz 2.1Hz,1H),6.70(d,J＝8.1Hz,2H),4.54(d,J＝8.6Hz,1H),4.00(s,2H),3.89(s,1H),3.59(t,J＝6.2Hz,2H),3.25(s,3H),3.19(t,J＝6.9Hz,2H),1.74-1.60(m,4H),1.61-1.57(m,2H),1.53(s,9H),1.20(s,6H),1.15(s,6H),0.98(s,6H)。MS-ESI:627.5[M+H]⁺。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸

将叔丁基2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸酯(135mg，0.22mmoL)加入25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)，室温搅拌2小时，TLC检测反应完全。将反应液减压蒸馏直接用于下一步反应。

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺

将(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-甲基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺(34.6mg，0.07mmoL)、2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1-甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸(41mg,0.07mmoL)、HOBt(39mg,0.28mmoL)、DMF(2mL)加入到25mL单口瓶中，降温至-20℃，加入EDCI(55mg,0.28mmoL)，反应过夜，次日TLC检测反应完全，加入DCM和水萃取分液，有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物15mg，洗脱剂DCM：MeOH(20：1)，收率22％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.48-7.38(m,4H),7.13-7.06(m,3H),6.88(d,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),6.70(d,J＝8.7Hz,2H),5.06-5.01(m,1H),4.78-4.73(m,2H),4.62-4.59(m,1H),4.49(s,1H),4.08(s,1H),4.02(d,J＝9.8Hz,2H),3.88(m,1H),3.79(m,2H),3.65(m,2H),3.21–3.15(m,4H),2.47(s,3H),2.19(m,1H),1.99–1.96(m,1H),1.74–1.73(m,4H),1.64-1.60(m,3H),1.52(d,J＝7.0Hz,3H),1.09(s,6H),1.03(s,9H),0.94(s,6H)。MS-ESI:997.5[M+H]⁺。

实施例22(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧代)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物22)的制备

3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基-1-(4-硝基苯基)尿素

将1-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-3-(4-硝基苯基)尿素(256mg，0.58mmoL)加入25mL单口瓶中，加入DMF(3mL)，降温至0℃。加入60％氢化钠(70.0mg，1.74mmoL)，维持0℃反应30分钟。最后加入碘甲烷(332.0mg，0.69mmoL)，维持在0℃反应2小时，TLC检测反应完全。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，加入EA和水萃取分液，有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物201mg，洗脱剂PE:EA(2：1)，收率74.0％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.22(d,J＝8.0Hz,2H),7.55(d,J＝8.7Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),6.95(d,J＝2.4Hz,1H),6.79(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.04(s,1H),3.65(s,1H),3.37(s,3H),2.57(s,3H),1.36(s,6H),1.24(s,6H)。

1-(4-氨基苯基)-3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲

将3-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基-1-(4-硝基苯基)尿素(180mg，0.38mmoL)加入25mL三口瓶中，加入甲醇(5mL)，Pd/C(36mg，20％wt)，置换三次氢气，室温搅拌3小时，TLC检测反应完全。反应液加硅藻土过滤，滤液减压蒸馏，得到目标产物150mg，收率90％。不做纯化，直接用于下步反应。MS-ESI:441.5[M+H]⁺。

叔丁基2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸酯

将1-(4-氨基苯基)-3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲(150mg，0.34mmoL)加入25mL单口瓶中，加入甲醇(4mL)，然后依次加入2-甲基吡啶-N-甲硼烷(82.0mg，0.38mmoL)和2-((5-氧代戊基)氧基)乙酸叔丁酯(82.2mg，0.38mmoL)，室温搅拌3小时，TLC检测反应完全。反应液加水淬灭，反应液减压蒸馏，加入EA和水萃取分液，有机相减压蒸馏，残留物用快速柱层析分离，得到目标产物141.0mg，洗脱剂PE:EA(2：1)，收率65％。MS-ESI:641.3[M+H]⁺。

2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸

将叔丁基2-((5-((4-(3-(((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸酯(130mg，0.20mmoL)加入25mL单口瓶中，加入二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2mL)，室温搅拌2小时，TLC检测反应完全。将反应液减压蒸去溶剂，残留物高真空干燥，得残留物105mg。不做纯化，直接用于下一步反应。

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((5-((4-(3-((1r，3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺

除了用2-((5-((4-(3-(((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-1,3-二甲基脲基)苯基)氨基)戊基)氧)乙酸替代2-((5-((4-(1-((((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)氨基)戊基)氧基)乙酸，以及用(3R,5S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-5-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-乙酸酯替代(2S,4R)-1-((S)-2-(l2-氮杂基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-羧酰胺外，本化合物的制备同实施例1中的N-((1r,3r)-3-(3-氯-4-氰基苯氧基)-2,2,4,4-四甲基环基)-N-(4-((5-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙氧基)戊基)氨基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺的制备。收率51％。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87(s,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.48-7.35(m,4H),7.13-7.00(m,3H),6.88(d,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),6.64(d,J＝8.0Hz,2H),5.06-5.01(m,1H),4.80-4.55(m,4H),4.44(s,1H),4.14(s,1H),3.99(q,J＝8.0Hz,2H),3.80-3.60(m,2H),3.76(m,3H),3.52(s,1H),3.09(t,J＝8.0Hz,2H),2.47(s,3H),2.41(s,3H),2.125-2.15(m,1H),2.10-1.80(m,2H),1.71-1.63(m,4H),1.59-1.53(m,2H),1.47(d,J＝4.0Hz,3H),1.20(s,6H),1.05(s,6H),1.03(s,9H)。MS-ESI:1011.3[M+H]⁺。

实施例23 PROTAC化合物活性检测(Western Blot法)

将VCap细胞铺于12孔板，次日细胞密度达到80％-90％，加入终浓度分别为0.03、0.1、0.3、1.0、3.0、10.0、30.0、100.0、300.0和1000.0nM的不同化合物。加药24h后，去除细胞培养基并用冷PBS清洗细胞，每孔加入60μL蛋白裂解液，用Tip将细胞吹刮下并混匀细胞裂解液。然后，将细胞裂解液于4℃下12000rpm离心15min，取上清并加入15μL5X蛋白上样缓冲液，混匀后100℃水浴10min；取出放冰上冷却后，离心1min，上清用于蛋白质免疫印迹检测。蛋白质免疫印迹检测后，检测结果用Image J软件统计雄激素受体的表达量，再根据受体的表达量计算每个化合物降解雄激素受体的DC₅₀。

在本试验中，化合物DC₅₀按照活性强弱分为四层次，其中++++(DC₅₀≦2nM)；+++(2<DC₅₀≦10nM)；++(10<DC₅₀≦50nM)；+(DC₅₀>50nM)。

本发明化合物DC₅₀如下表所示。

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