阅读说明：本技术 一种罗望子种仁蛋白的提取方法 (A kind of extracting method of tamarind protein ) 是由 张娜 宋子波 艾连中 于 2019-09-16 设计创作，主要内容包括：一种罗望子种仁蛋白的提取方法,属于植物蛋白提取技术领域,食品加工技术领域。为了解决罗望子种仁中由于多糖存在粘稠度高导致蛋白质提取率低的问题,本发明提供了一种罗望子种仁蛋白的提取方法,将提取多糖后的罗望子种仁粉碎获得种仁粉；经柠檬酸进一步去除多糖残留后,离心收集沉淀；将沉淀与缓冲溶液Tris-HCl混合,调节pH为11.0～13.0,获得的混合物料经加热后进行超声波处理；在pH4.0-5.0条件下离心收集沉淀物,然后经分步提取获得种仁碱溶性球蛋白、种仁清蛋白、种仁盐溶性球蛋白、种仁醇溶蛋白和种仁谷蛋白。本发明可用于规模化的生产罗望子种仁蛋白。(A kind of extracting method of tamarind protein, belongs to vegetable protein extractive technique field, food processing technology field.In order to solve the problems, such as that since there are viscosity height to cause extraction rate of protein low for polysaccharide in tamarind kernel, the present invention provides a kind of extracting methods of tamarind protein, and the tamarind kernel after extraction polysaccharide is crushed and obtains kernel powder；After the further Polysaccharide removing residual of citric acid, precipitating is collected by centrifugation；Precipitating is mixed with buffer solution Tris-HCl, adjusting pH is 11.0~13.0, carries out ultrasonication after the mixed material of acquisition is heated；Sediment is collected by centrifugation under the conditions of pH4.0-5.0, then obtains kernel alkali solubility globulin, kernel albumin, kernel salt dissolubility globulin, kernel alcohol soluble protein and kernel glutelin through step by step arithmetic.The present invention can be used for the production tamarind protein of scale.)

一种罗望子种仁蛋白的提取方法

技术领域

本发明属于植物蛋白提取技术领域，食品加工技术领域，具体涉及一种罗望子种仁蛋白的提取方法。

背景技术

目前较为常见的对罗望子种仁中的蛋白质进行提取的方法为碱溶酸沉法，但没有明确的种仁蛋白沉降等电点，提取率不高；不常见的其他提取方法，借助氯化钠溶液，使蛋白质在其中通过胶束化过程分离，将脱脂的罗望子种仁粉与NaCl溶液充分混合，再通过盐析透析最终得到浓缩蛋白，但蛋白提取率不高，并且没有明确罗望子种仁蛋白所包含的具体蛋白种类及含量。目前工厂提取罗望子种仁多糖后，还有多糖残留导致溶液粘稠影响种仁蛋白的提取，导致罗望子种仁中有价值的蛋白资源没有很好的利用。

发明内容

为了解决罗望子种仁中蛋白质提取率低的问题，并明确罗望子种仁蛋白种类及含量，本发明提供了一种罗望子种仁蛋白的提取方法，包括如下步骤：

步骤一：将提取多糖后的罗望子种仁粉碎、过筛，获得种仁粉；

步骤二：将种仁粉与pH3.6柠檬酸溶液按照1g：(30-50)mL的比例混合，800-1000转/min搅拌30-50min，离心获得沉淀；

步骤三：将步骤二中获得的沉淀与Tris-HCl缓冲溶液混合，所述沉淀与缓冲溶液Tris-HCl混合的比例为1g：(20-40)mL，调节pH值为11.0～13.0，获得混合物料；

步骤四：混合物料于60～70℃条件下，加热40-90min；

步骤五：然后将混合物料进行超声波处理，所述超声波的处理条件为：功率200～250W，时间40～60min；

步骤六：将步骤五中超声波处理后的物料离心，获得的沉淀与上清液，将上清液调节pH4.0～5.0，静置，离心后收集的沉淀物经冷冻干燥后获得种仁碱溶性球蛋白；

步骤七：将步骤六中物料离心获得的沉淀水洗后，按照1g：(20-40)mL的料液比与水混合，800-1000转/min搅拌60-90min，然后离心，获得的上清液经冷冻干燥得到种仁清蛋白，获得的沉淀待用；

步骤八：然后，将步骤七获得的沉淀，按照1g：(20-40)mL的料液比与NaCl溶液混合，800-1000转/min搅拌60-90min，离心获得上清液为种仁盐溶性球蛋白，获得的沉淀待用；

步骤九：然后，将步骤八获得的沉淀，按照1g：(20-40)mL的料液比与乙醇溶液混合，800-1000转/min搅拌60-90min，离心获得上清液为种仁醇溶蛋白，获得的沉淀待用；

步骤十：然后，将步骤九获得的沉淀，按照1g：(20-40)mL的料液比与NaOH溶液混合，800-1000转/min搅拌60-90min，离心获得上清液为种仁谷蛋白。

进一步地限定，步骤一中所述提取多糖后的罗望子种仁中多糖残留量为2.0-3.5g/100g。

进一步地限定，步骤一中所述过筛的目数为80-120目。

进一步地限定，步骤二中所述沉淀中多糖残留量为0.5-1.5g/100g。

进一步地限定，步骤三中所述沉淀与缓冲溶液Tris-HCl的比例为1g：40mL。

进一步地限定，步骤三中所述调节pH值使用的试剂为食品级氢氧化钠。

进一步地限定，步骤五中所述超声波的处理条件为功率为200W，时间为60min。

进一步地限定，步骤六中所述调节pH值使用的试剂为食品级盐酸。

进一步地限定，步骤六中所述pH为4.6。

进一步地限定，步骤六中所述静置，时间为30-60min。

进一步地限定，步骤七中所述沉淀与水混合的比例为1g：40mL。

进一步地限定，步骤八中所述NaCl溶液浓度为5％(质量)，沉淀与NaCl溶液混合的比例为1g：40mL。

进一步地限定，步骤九中所述乙醇溶液的浓度为70％(体积)，沉淀与乙醇溶液混合的比例为1g：40mL。

进一步地限定，步骤十中所述NaOH溶液的浓度为0.25％(质量)，沉淀与NaOH溶液混合的比例为1g：40mL。

有益效果

本发明提供了一种罗望子种仁蛋白提取工艺，相比现有技术具有以下优点：

1.本发明解决了罗望子多糖溶液粘稠的问题，罗望子种仁蛋白提取工艺能够显著提高了种仁蛋白的溶出率，从而提高了种仁蛋白的提取率。

2.本发明确定了罗望子种仁蛋白的等电点为4.0-5.0。

3.通过采用超声波对种仁粉混合液进行处理，对种仁粉具有空化作用，能够有效的促进种仁蛋白分离，从而显著的提高了多糖与蛋白的分离率，有效的提高了蛋白纯度，能够降低种仁蛋白的粘稠程度，从而进一步的提高了蛋白提取率，使废弃的种仁蛋白得到充分的加工利用。

4.本发明还同时确定了罗望子种仁的蛋白种类及含量。

5.本发明为罗望子的开发提供广阔空间，为大批量规模化的生产罗望子种仁蛋白提供前提条件。

具体实施方式

本发明所述原料、试剂以及仪器设备均可通过商业化途径购买获得。

实施例一：罗望子种仁蛋白提取方法。

按照下述步骤依次进行：

步骤一：将提取多糖后的罗望子种仁(多糖残留量为2.25g/100g)放入粉碎机中进行粉碎，过100目筛，获得种仁粉；

步骤二：将种仁粉与pH3.6柠檬酸溶液混合，所述种仁粉与pH3.6柠檬酸混合的比例为1g：50mL，800转/min搅拌30min，离心，重复3次混合离心，获得沉淀，沉淀中多糖残留量为0.89g/100g；

步骤三：将步骤二中的沉淀与Tris-HCl缓冲溶液混合，沉淀与缓冲溶液的比例为1g：20mL，添加食品级氢氧化钠调节pH11.0，得到混合物料；

步骤四：将混合物料放入保持在60℃的水浴锅中进行加热，搅拌60min；

步骤五：将加热搅拌后的物料进行200W超声波处理，时间为60min；

步骤六：将超声波处理后的物料4000r/min离心15min，上清液中用食品级盐酸调节pH到4.0，静置30min，8000r/min离心15min收集沉淀物冷冻24h，冻干机干燥，获得罗望子种仁碱溶性蛋白；

步骤七：将步骤六中物料离心获得的沉淀水洗后，按照1g：20mL的料液比与水混合，800转/min搅拌90min，然后离心，获得的上清液经冷冻干燥得到种仁清蛋白，获得的沉淀待用；

步骤八：然后，将步骤七获得的沉淀，按照1g：20mL的料液比与质量浓度为5％的NaCl溶液混合，800转/min搅拌90min，离心获得上清液为种仁盐溶性球蛋白，获得的沉淀待用；

步骤九：然后，将步骤八获得的沉淀，按照1g：20mL的料液比与体积浓度为70％的乙醇溶液混合，800转/min搅拌90min，离心获得上清液为种仁醇溶蛋白，获得的沉淀待用；

步骤十：然后，将步骤九获得的沉淀，按照1g：20mL的料液比与质量浓度为0.25％的NaOH溶液混合，800转/min搅拌90min，离心获得上清液为种仁谷蛋白。

实施例二：罗望子种仁蛋白提取方法。

按照下述步骤依次进行：

步骤一：将提取多糖后的罗望子种仁(多糖残留量为2.10g/100g)放入粉碎机中进行粉碎，过80目筛，获得种仁粉；

步骤二：将种仁粉与pH3.6柠檬酸溶液混合，所述种仁粉与pH3.6柠檬酸混合的比例为1g：30mL，1000转/min搅拌50min，离心，重复3次混合离心，获得沉淀，沉淀中多糖残留量为1.06g/100g；

步骤三：将沉淀与Tris-HCl缓冲溶液混合，沉淀与缓冲溶液的比例为1g：30mL，添加食品级氢氧化钠调节pH11.0得到混合物料；

步骤四：将混合物料放入保持在65℃的水浴锅中进行加热，搅拌60min；

步骤五：向加热搅拌后的物料进行250W超声波处理，时间为50min；

步骤六：将超声波处理后的物料4000r/min离心15min，上清液中用食品级盐酸调节pH到4.5，静置60min，8000r/min离心15min收集沉淀物冷冻24h，冻干机干燥，获得罗望子种仁碱溶性蛋白；

步骤七：将步骤六中物料离心获得的沉淀水洗后，按照1g：30mL的料液比与水混合，1000转/min搅拌60min，然后离心，获得的上清液经冷冻干燥得到种仁清蛋白，获得的沉淀待用；

步骤八：然后，将步骤七获得的沉淀，按照1g：30mL的料液比与质量浓度为5％的NaCl溶液混合，1000转/min搅拌60min，离心获得上清液为种仁盐溶性球蛋白，获得的沉淀待用；

步骤九：然后，将步骤八获得的沉淀，按照1g：30mL的料液比与体积浓度为70％的乙醇溶液混合，1000转/min搅拌60min，离心获得上清液为种仁醇溶蛋白，获得的沉淀待用；

步骤十：然后，将步骤九获得的沉淀，按照1g：30mL的料液比与质量浓度为0.25％的NaOH溶液混合，1000转/min搅拌60min，离心获得上清液为种仁谷蛋白。

实施例三:罗望子种仁蛋白提取方法。

按照下述步骤依次进行：

步骤一：将提取多糖后的罗望子种仁(多糖残留量为2.02g/100g)放入粉碎机中进行粉碎，过120目筛，获得种仁粉；

步骤二：将种仁粉与pH3.6柠檬酸溶液混合，所述种仁粉与pH3.6柠檬酸混合的比例为1g：50mL，800转/min搅拌30min，离心，重复3次混合离心，获得沉淀，沉淀中多糖残留量为0.97g/100g；

步骤三：将沉淀与Tris-HCl缓冲溶液混合，沉淀与缓冲溶液的比例为1g：40mL，添加食品级氢氧化钠调节pH12.5得到混合物料；

步骤四：将混合物料放入保持在65℃的水浴锅中进行加热，搅拌90min；

步骤五：向加热搅拌后的物料进行200W超声波处理，时间为60min；

步骤六：将超声波处理后的物料4000r/min离心15min，上清液中用食品级盐酸调节pH到4.6，静置30min，8000r/min离心15min收集沉淀物冷冻24h，冻干机干燥，获得罗望子种仁碱溶性球蛋白。

步骤七：将步骤六中物料离心获得的沉淀水洗后，按照1g：40mL的料液比与水混合，900转/min搅拌80min，然后离心，获得的上清液经冷冻干燥得到种仁清蛋白，获得的沉淀待用；

步骤八：然后，将步骤七获得的沉淀，按照1g：40mL的料液比与质量浓度为5％的NaCl溶液混合，900转/min搅拌80min，离心获得上清液为种仁盐溶性球蛋白，获得的沉淀待用；

步骤九：然后，将步骤八获得的沉淀，按照1g：40mL的料液比与体积浓度为70％的乙醇溶液混合，900转/min搅拌80min，离心获得上清液为种仁醇溶蛋白，获得的沉淀待用；

步骤十：然后，将步骤九获得的沉淀，按照1g：40mL的料液比与质量浓度为0.25％的NaOH溶液混合，900转/min搅拌80min，离心获得上清液为种仁谷蛋白。

对比例:罗望子种仁蛋白提取方法。

步骤一：将罗望子种仁放入粉碎机中进行粉碎至100目；

步骤二：将种仁粉(100g)与1M NaCI溶液(800ml)充分混合，添加食品级氢氧化钠调节pH值到10；

步骤三：室温搅拌30分钟；

步骤四：将混合物以6000r/min离心15分钟，然后用1M NaC1溶液(200ml)萃取两次。将上清液用食品级盐调节pH为4-6，在饱和溶液中加入固体硫酸铵(盐析)，沉淀出罗望子种仁蛋白；悬浮液以8000r/min离心20min得到沉淀蛋白；

步骤五：沉淀蛋白经2～4℃蒸馏水透析48h，然后冷冻干燥透析袋中的蛋白质，得到浓缩蛋白。

通过凯式定氮法依据GB5099.5-2016检测本发明提取获得的蛋白的提取率以及纯度，结果如下：

表1.罗望子种仁碱溶性蛋白提取率以及纯度检测

	碱溶性球蛋白提取率％	蛋白纯度(％)	原料多糖残留(％)
				实施例一	60.31％	61.81％	2.02
实施例二	65.67％	66.52％	2.10
				实施例三	68.03％	68.63％	2.25
对比例	38.30％	40.5％	未测

由表1可见，利用本发明方法从罗望子种仁中提取蛋白质，提取率和纯度较现存提取方法均有明显提高，可达68％左右。本发明还考察了提取的碱溶性球蛋白的起泡性及起泡稳定性，以实施例1为例，将提取得到的碱溶性球蛋白配制成10mg/mL的溶液，10000r高速剪切2min，测量泡沫体积，及30min后泡沫体积，结果表明起泡性和起泡稳定性较好，碱溶性球蛋白的起泡性及起泡稳定性分别为80％、75％。

本发明还同时确定了罗望子种仁中其他蛋白种类和含量，以实施例三为例，检测罗望子种仁其他蛋白质含量如下：

表2.实施例三提取获得的罗望子种仁其他蛋白种类及含量

蛋白种类	种仁清蛋白	盐溶性球蛋白	种仁醇溶蛋白	种仁谷蛋白
					含量	3.18％	1.31％	0.44％	15.31％