一种trpv3抑制剂及其制备方法
阅读说明：本技术 一种trpv3抑制剂及其制备方法 (TRPV3 inhibitor and preparation method thereof ) 是由 张众音 吕孟齐 王克威 王聪聪 吴晗 王君霞 孙晓颖 于 2020-12-21 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种TRPV3抑制剂,由R-1基团、R基团和R-2基团依次连接形成,其分子结构通式如式1所示。本发明还公开所述TRPV3抑制剂的制备方法及应用。本发明的TRPV3抑制剂能够特异性抑制TRPV3离子通道,具有巨大的科研和临床价值。(The invention discloses a TRPV3 inhibitor,from R 1 Group, R group and R 2 The groups are connected in sequence to form the compound, and the molecular structural general formula of the compound is shown as formula 1. The invention also discloses a preparation method and application of the TRPV3 inhibitor. The TRPV3 inhibitor can specifically inhibit TRPV3 ion channel, and has great scientific research and clinical values.)
技术领域：
本发明涉及离子通道及有机化合物合成技术领域，尤其涉及一种TRPV3抑制剂及其制备方法。
背景技术：
瞬时受体电位阳离子通道(Transient Receptor Potential cation channel,TRP)是位于细胞膜上的一类重要的非选择性阳离子通道超家族，在人体各个器官的几乎所有细胞中均有表达。TRP通道分为6个亚家族：TRPC(Cannonical,TRPC1-7)，TRPV(Vanilloid,TRPV1-6)，TRPM(Melastatin,TRPM1-8)，TRPP(Polycystin, TRPP2,TRPP3,TRPP5)，TRPML(Mucolipin,TRPML1-3)和TRPA(Ankyrin, TRPA1)。这些通道涉及的功能包括视觉，听觉，嗅觉，味觉和躯体感觉(比如痛觉，机械性刺激，温度感受等)。其中，温度敏感型瞬时受体电位通道包括 TRPV1，TRPV2，TRPV3，TRPV4，TRPM8和TRPA1，在皮肤上表达于皮肤感觉神经元，用于感知外界温度的变化，而TRPV1，TRPV3则在角质形成细胞表达较高，有可能和皮肤炎症以及皮肤屏障的形成相关。
瞬时受体电位阳离子通道，亚族V，成员3(Transient Receptor Potentialcation channel,subfamily V,member 3,TRPV3)基因位于人染色体17P13.2，主要在人体皮肤角质细胞表达，可调节皮肤感觉、影响表皮角质细胞和毛发生长。2002年首次在角质细胞中发现TRPV3，其与TRPVl、TRPV2分别有38％、32％的同源性。TRPV蛋白的结构共性是都含有6个跨膜结构域，蛋白的氨基端(N末端) 和羧基端(C末端)均位于胞内，由第5和第6跨膜结构域共同构成非选择性阳离子通道。研究表明，TRPV3蛋白的主要功能是作为非选择性阳离子通道调节胞内Ca2+平衡，在温度觉、炎症、细胞信号传导、酶和激素分泌、细胞增殖、分化和凋亡等多种生物过程中发挥重要作用。
TRPV3属于第3种热敏通道，在33℃～37℃的温度范围被激活。但是到目前为止，温度性TRPV3通道的门控机制并不十分清楚。像大多数TRP通道一样， TRPV3同时能被一系列非热性刺激物激活；而钌红(RR)是TRPV3的抑制剂，可以抑制其离子通道的活性。TRPV3的热敏感性，还受细胞外钙离子浓度的调节。
TRPV3作为一种阳离子通道在许多信号传导过程中发挥了直接的作用。首先，TRPV3是胞内钙信号产生的重要途径。Ca2+作为非常重要的细胞内第二信使，广泛地参与信号转导过程，在肌肉收缩、神经传递、酶和激素分泌、细胞周期调控、以及细胞分化、程序死亡等多种生物活动中发挥重要作用。当位于细胞膜的TRPV3通道被打开后，胞外Ca2+进入细胞内使胞内Ca2+浓度大幅增加，以胞外阳离子向胞内流动的形式激活下游通路，该离子流主要由两个时相组成：缓慢的第一时相和紧随其后的快速内流的第二时相，使胞内Ca2+浓度大幅增加，产生钙信号。同时，TRPV3通道的N末端包含多个锚蛋白结合部位，锚蛋白与 TRP通道相互作用能够抑制三磷酸肌醇(inosositol trisphosphate，IP3)受体和雷诺定受体调节的胞内钙库Ca2+释放。但是钙离子在细胞中负荷超重则会引发细胞死亡和皮肤脱落，导致皮肤角化过度、皮炎和毛发生长异常的表型。另有研究发现，在极端缺氧和酸性条件下产生的NO可以作为一种不稳定的信号分子，激活角质细胞的TRPV3离子通道，产生非亚硝酸盐依赖的信号转导途径。
此外，角质细胞膜上的TRPV3还可通过Ca2+通道与转化生长因子a(TGF-a)、表皮生长因子受体(EGFR)形成一个复杂的TGF-alpha/TGFR信号转导复合体。 TGFR的激活将导致TRPV3通道活性增加，进而刺激TGF-a释放。而神经递质、 TGF-a和EGF等可分别作用于G蛋白偶联受体和受体酪氨酸激酶，通过PLC激活磷脂酰肌醇(IPs)信号通路，产生第二信使IP3和二酰甘油(diacylglycerol, DAG)。目前认为，这两个信号通路都可激活TRPV3通道。TRPV3通道的激活和信号转导过程还需要转谷酰胺酶1(transglutaminases 1,TGM1)的活化和参与，其是角质细胞增殖分化过程中必不可少的钙离子依赖的交联酶。而能激活TRPV 通道的薄荷醇、肉桂醛和樟脑等能调节磷脂酶C信号传导，从而导致细胞功能改变。
由于TRPV3在皮肤中表达最为丰富，特别是在表皮和发囊角质细胞中。因此可调节和影响表皮角质细胞增殖分化、毛发生长、导致敏感性皮炎和角化性皮肤病的发生。当刺激角质形成细胞中的TRPV3受体会释放包括ATP，前列腺素PGE2和IL-1b在内的炎症介质，支持皮肤炎症信号和疼痛传导，并具有治疗潜力。故角质形成细胞中的TRPV3被激活后，会促进多种因子释放，包括ATP， PGE2，IL-1α，NO，TGF-α和NGF，这些因子会加重炎症过程，这些炎症因子也会支配皮肤的痒感觉纤维，从而产生皮肤瘙痒。由此可见TRP通道异常与人类疾病密切相关，针对这些疾病开发高效专一的TRPV3抑制剂是非常必要的，但现有技术中缺乏特异性的抑制剂，导致TRPV3的生理功能研究进展缓慢。
发明内容
：本发明的目的是提供一种能够特异性抑制TRPV3的有机化合物及其制备方法。
本发明提供一种TRPV3抑制剂，由R1基团、R基团和R2基团依次连接形成，其分子结构通式如式1所示：
其中，
R1基团结构式选自中的一种,R3为卤基；R4选自羟基、烷氧基或烷氧醚基中的一种；R基团为 R2基团选自中的一种， R5选自羟基或烷氧醚基，R6选自卤基、三氟烷氧基或三氯烷氧基中的一种；R7选自烷基、卤基、、三氟烷氧基或三氯烷氧基中的一种；R8选自羟基、烷氧基或烷氧醚基中的一种。
在根据本发明的一个实施方案中，R1选自
中的任一种。
在根据本发明的一个实施方案中，所述R2选自 中的任一种。
优选为(E)-1-(2-氟苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮、(E)-1-环丙基-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮、(E)-1-环丙基-3-(3-(甲氧基甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮、(E)-1-(3,5-二甲氧基-4-(甲氧基甲氧基) 苯基)-3-(3-(甲氧基甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮、(E)-1-(4-羟基-3,5- 二甲氧基苯基)-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮、(E)-1-(4-氟苯基)-3- (3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮、(E)-1-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲氧基) 苯基)丙基-2-烯-1-酮、或(E)-1-环丙基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙基 -2-烯-1-酮。
本发明还提供了上述TRPV3抑制剂的制备方法，包括：
1)将含有R1基团的苯乙酮类化合物溶于有机溶剂中，再加入稀碱液，混合均匀，得到混合溶液；
2)将含有R2基团的苯甲醛类化合物加入到上述混合溶液中，室温下搅拌至反应过夜；
3)萃取、洗涤、干燥、过滤后即得TRPV3抑制剂粗品。
在根据本发明的一个实施方案中，还包括：4)以柱层析法纯化得到的纯化的酯类化合物即TRPV3抑制剂。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤4)中洗脱剂为乙酸乙酯。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤2)还包括以适量饱和NaHCO3水溶液淬灭反应。
在根据本发明的一个实施方案中，所述稀碱液为浓度10％的NaOH溶液或KOH 溶液；所述有机溶剂为无水乙醇。
在根据本发明的一个实施方案中，所述苯乙酮类化合物稀碱液的摩尔比为1:2.5-3；所述苯乙酮类人物与苯甲醛类化合的摩尔比为1:1-1.5。
本发明还提供了上述TRPV3抑制剂在制备抑制TRPV3离子通道的试剂中的应用。
本发明进一步提供了上述的TRPV3抑制剂在制备用于抑制TRPV3离子通道的试剂中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明提供的TRPV3抑制剂能够特异性抑制TRPV3离子通道，能够有利于制备TRPV3离子通道的特异性抑制试剂，对于TRPV3离子通道的性质及特性研究有巨大的推动作用。同时，也可以制备用于治疗因TRPV3离子通道活性增强导致的疾病的药物。因此，本发明提供的TRPV3抑制剂对科研和临床研究均有巨大的价值。
具体实施方式
：
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易被本领域人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
室温下，取苯乙酮类化合物溶于无水乙醇中，加10％氢氧化钠溶液搅拌10 分钟后，再加入苯甲醛类化合物，搅拌过夜。反应完成后用乙酸乙酯萃取三次，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后硅胶色谱法纯化得到一系列α,β-不饱和羰基类化合物。其具体结构、名称及合成路线示例如以下实施例所示：
实施例1(E)-1-(2-氟苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(2-氟苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(2-fluorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝15.7Hz,1H),7.66–7.62(m, 2H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.54(s,1H),7.44(d,J＝10.4Hz,1H),7.42–7.39(m, 1H),7.15–7.10(m,3H),3.89(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ189.36, 165.28,162.80,161.93,159.43,143.89,134.78,134.69,131.75,131.66,131.42, 131.39,130.98,130.95,127.41,127.27,125.93,125.34,125.31,117.22,117.00, 116.65,116.43.[M+H]+＝245.0772.
其合成路线为：
室温下，向间氟苯乙酮(200mg,1.45mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.6mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(188.7mg,1.52mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2 ×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:60，得到白色粉末化合物，收率为87％。
实施例2(E)-3-(4-氟苯基)-1-(3-甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-3-(4-氟苯基)-1-(3-甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-3-(4-fluorophenyl)-1-(3-methoxyphenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝15.7Hz,1H),7.65–7.63(m, 2H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.55–7.53(m,1H),7.44(d,J＝10.4Hz,1H),7.42– 7.39(m,1H),7.15–7.10(m,3H),3.89(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ
196.15,162.13,161.16,145.17,130.97,130.83,130.44,130.32,130.26,121.38, 120.13,115.48,115.32,114.86,114.01,55.84.[M+H]+＝257.0980.
其合成路线为：
室温下，向间甲氧基苯乙酮(200mg,1.33mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入 10％NaOH(3.33mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(173.5mg,1.4mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:60，得到白色粉末化合物，收率为83％。
实施例3(E)-1-(对甲苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(对甲苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(p-tolyl)-3-(2,4,5-trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one)
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝16.1Hz,1H),7.84–7.82(m, 1H),7.45–7.44(m,2H),7.28–7.26(m,1H),7.42(d,J＝16.1Hz,1H),6.71(s,1H), 6.42(s,1H),3.85(s,1H),3.84(s,1H),3.83(s,1H),2.34(s,3H).13C NMR(101MHz, DMSO)δ189.74,150.02,144.23,142.03,141.04,135.75,134.96,129.84,129.57, 129.52,129.37,121.38,110.48,108.28,98.74,56.24,56.18,56.11,21.36. [M+H]+＝313.1446.
其合成路线为：
室温下，向对甲基苯乙酮(200mg,1.49mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入 10％NaOH(3.7mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(307mg,1.56mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤 (2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:5，得到纯品为黄色固体，收率为85％。
实施例4(E)-1-(3-甲氧基苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(3-甲氧基苯基)-3-(2,4,5-三甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(3-methoxyphenyl)-3-(2,4,5-trimethoxyphenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝16.1Hz,1H),7.84–7.82(m, 1H),7.45–7.44(m,2H),7.28–7.26(m,1H),7.42(d,J＝16.1Hz,1H),6.71(s,1H), 6.42(s,1H),3.85(s,1H),3.84(s,1H),3.83(s,1H),3.82(s,1H).13C NMR(101MHz, DMSO)δ196.15,161.13,150.05,142.07,141.02,135.78,130.94,130.27,121.34, 120.14,114.82,114.05,110.47,108.23,98.73,56.25,56.16,56.12,55.83. [M+H]+＝329.1386.
其合成路线为：
室温下，向间甲氧基苯乙酮(200mg,1.33mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入 10％NaOH(3.33mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(274mg,1.4mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤 (2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:5，得到纯品为黄色固体，收率为83％。
实施例5(E)-1-环丙基-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-环丙基-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-cyclopropyl-3-(3-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.58(d,J＝16.1Hz,1H),7.27–7.24(m, 1H),7.12–7.10(m,2H),6.93–6.89(m,1H),6.85(d,J＝16.1Hz,1H),2.30–2.23 (m,1H),1.21–1.16(m,2H),1.03–0.99(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ 200.71,158.45,142.84,135.48,130.04,126.28,121.14,117.63,115.18,42.93,14.83, 14.69.[M+H]+＝189.0918.
其合成路线为：
0℃，将间羟基苯甲醛(500mg,4.09mmol)溶于10mL DMF中，加入氢化钠 (196.3mg,4.9mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(410.6mg,5.1mmol)，反应搅拌1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物。室温下，向环丙甲基酮(429mg,2.58mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％NaOH(6.15mmol)，搅拌10分钟后，加入3-(甲氧基甲氧基)苯甲醛(207mg,2.46mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:5，得到纯品为油状化合物。将此产物(230mg,0.99mmol)溶于8mL甲醇溶液中，在搅拌下滴加3N HCl (2.97mmol),反应3小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3× 20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水 Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:5，得到白色固体化合物。收率为73％。
实施例6(E)-1-环丙基-3-(3-(甲氧基甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-环丙基-3-(3-(甲氧基甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-cyclopropyl-3-(3-(methoxymethoxy)phenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.50(d,J＝16.1Hz,1H),7.23(d,J＝7.9 Hz,1H),7.20–7.12(m,2H),7.02–6.96(m,1H),6.78(d,J＝16.1Hz,1H),5.13(s, 2H),3.42(s,3H),2.26–2.11(m,1H),1.12–1.04(m,2H),0.93–0.88(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ200.71,160.53,142.84,135.08,129.64,126.28,120.84, 113.51,113.26,94.93,55.62,42.93,14.83,14.69.[M+H]+＝233.1176.
其合成路线为：
0℃，将间羟基苯甲醛(500mg,4.09mmol)溶于10mL DMF中，加入氢化钠 (196.3mg,4.9mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(410.6mg,5.1mmol)，反应搅拌1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物。室温下，向环丙甲基酮(429mg,2.58mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％NaOH(6.15mmol)，搅拌10分钟后，加入3-(甲氧基甲氧基)苯甲醛(207mg,2.46mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:5，得到纯品为油状化合物，收率为81％。
实施例7(E)-1-(3,5-二甲氧基-4-(甲氧基甲氧基)苯基)-3-(3-(甲氧基甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(3,5-二甲氧基-4-(甲氧基甲氧基)苯基)-3-(3-(甲氧基甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(3,5-dimethoxy-4-(methoxymethoxy)phenyl)-3-(3-(methoxymethoxy)phenyl)pr op-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.76(d,J＝15.6Hz,1H),7.47(d,J＝15.6 Hz,1H),7.30–7.25(m,1H),7.22–7.15(m,2H),6.92(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H), 6.38(s,1H),6.08(s,1H),5.21(s,4H),3.93(s,6H),3.60(s,3H),3.49(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ189.73,160.54,153.68,153.47,145.14,140.03,135.06, 129.63,128.54,121.38,120.84,113.58,113.27,99.48,99.27,98.24,94.92,56.18, 56.01,55.63,55.39.[M+H]+＝389.1602.
其合成路线为：
0℃，将间羟基苯甲醛(200mg,1.64mmol)溶于5mL DMF中，加入氢化钠 (78.6mg,1.96mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(161mg,2mmol)，反应搅拌 1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物A。0℃，将乙酰丁香酮(200mg,1mmol)溶于10mLDMF中，加入氢化钠(48mg,1.2mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(100.6mg,1.25mmol)，反应搅拌1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物B。室温下，向化合物B(287mg,1.19mmol)的无水乙醇(8mL)溶液中加入10％NaOH(2.98mmol)，搅拌10分钟后，加入化合物A(208mg, 1.25mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl 水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:6，得到纯品为黄色油状化合物，收率为74％。
实施例8(E)-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1- 酮的合成
(E)-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-(3-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.76(d,J＝15.6Hz,1H),7.47(d,J＝15.6 Hz,1H),7.30–7.25(m,1H),7.22–7.15(m,2H),6.92(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H), 6.38(s,1H),6.08(s,1H),3.96(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ189.72, 158.44,148.69,148.49,145.17,143.24,135.47,130.01,128.83,121.38,121.17, 117.63,115.18,99.84,99.69,56.17,56.03.[M+H]+＝301.1075.
其合成路线为：
0℃，将间羟基苯甲醛(200mg,1.64mmol)溶于5mL DMF中，加入氢化钠 (78.6mg,1.96mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(161mg,2mmol)，反应搅拌 1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物A。0℃，将乙酰丁香酮(200mg,1mmol)溶于10mLDMF中，加入氢化钠(48mg,1.2mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(100.6mg,1.25mmol)，反应搅拌1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物B。室温下，向化合物B(287mg,1.19mmol)的无水乙醇(8mL)溶液中加入10％NaOH(2.98mmol)，搅拌10分钟后，加入化合物A(208mg, 1.25mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl 水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:6，得到纯品为黄色油状化合物。将此产物(170mg,0.44mmol)溶于6mL甲醇溶液中，在搅拌下滴加3N HCl (2.6mmol),反应3小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL) 萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:5，得到油状液体化合物，收率为73％。
实施例9(E)-1-(4-氟苯基)-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(4-氟苯基)-3-(3-羟基苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(4-fluorophenyl)-3-(3-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝15.7Hz,1H),7.65–7.63(m, 2H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.55–7.53(m,1H),7.44(d,J＝15.7Hz,1H),7.42– 7.39(m,1H),7.15–7.10(m,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ189.76,168.73, 158.54,145.16,135.48,133.52,131.59,131.48,130.03,121.14,121.03,117.69, 116.02,115.93,115.12.[M+H]+＝243.0820.
其合成路线为：
0℃，将间羟基苯甲醛(200mg,1.64mmol)溶于4mL DMF中，加入氢化钠 (78.6mg,1.92mmol)，搅拌15分钟后加入氯甲基甲醚(161mg,2mmol)，反应搅拌 1小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到油状化合物。室温下，向4-氟苯乙酮(214mg,1.3mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％NaOH(3mmol)，搅拌10分钟后，加入3-(甲氧基甲氧基)苯甲醛(169mg, 1.2mmol)，室温搅拌过夜。乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl 水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:15，得到纯品为油状化合物。将此产物(286mg,1mmol)溶于甲醇溶液中，在搅拌下滴加3N HCl(3mmol),反应3 小时。饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:10，得到白色固体化合物。收率为73％。
实施例10(E)-1-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(4-氟苯基)-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(4-fluorophenyl)-3-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.84(d,J＝16.0Hz,1H),7.87(d,J＝7.5 Hz,2H),7.62(d,J＝7.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),6.94(d,J＝8.2Hz,2H), 6.57(d,J＝16.0Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ189.75,168.72,149.85, 145.14,133.52,131.59,131.47,130.27,130.03,129.73,127.57,121.38,116.05, 115.89,114.23,114.05.[M+H]+＝311.0693.
其合成路线为：
室温下，向对氟苯乙酮(200mg,1.45mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.6mmol)，搅拌10分钟后，加入对三氟甲氧基苯甲醛(289mg,1.52mmol)，室温搅拌6小时。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:80，得到纯品为白色固体，收率为86％。
实施例11(E)-1-环丙基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-环丙基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-cyclopropyl-3-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.60(d,J＝16.1Hz,1H),7.27–7.24(m, 1H),7.12–7.10(m,2H),6.95–6.93(m,1H),6.91(d,J＝16.1Hz,1H),2.30–2.23 (m,1H),1.21–1.16(m,2H),1.03–0.99(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ 200.74,149.83,142.83,130.48,130.28,130.19,129.74,126.28,114.24,114.15, 42.98,14.86,14.68.[M+H]+＝257.0788.
其合成路线为：
室温下，向环丙甲基酮(200mg,2.4mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(5.9mmol)，搅拌10分钟后，加入对三氟甲氧基苯甲醛(475mg,2.5mmol)，室温搅拌6小时。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether(1:60～1:40)，得到纯品为白色固体，收率为88％。实施例12(E)-1-(2-溴苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(2-溴苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(2-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(d,J＝7.8Hz,1H),7.58–7.52(m, 2H),7.44–7.37(m,3H),7.36–7.31(m,1H),7.12–7.06(m,2H),7.02(d,J＝16.1 Hz,1H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ194.50,165.54,163.03,145.19,141.09, 133.48,131.46,130.61,130.52,129.19,127.41,125.90,125.87,119.50,116.35, 116.13.[M+H]+＝304.9982.
其合成路线为：
室温下，向邻溴苯乙酮(200mg,1mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(2.5mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(131mg,1.06mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×
20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为透明油状液体，收率为82％。
实施例13(E)-1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(4-bromophenyl)-3-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91–7.86(m,2H),7.78(d,J＝15.7Hz, 1H),7.68–7.61(m,4H),7.40(d,J＝15.7Hz,1H),7.17–7.08(m,2H).13C NMR (101MHz,CDCl3)δ189.17,165.46,162.95,144.10,136.85,131.98,130.98,130.51, 130.02,128.00,121.15,116.34,116.12.[M+H]+＝304.9980.
其合成路线为：
室温下，向对溴苯乙酮(200mg,1mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(2.5mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(131mg,1.06mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2×
20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为白色固体，收率为82％。
实施例14(E)-1-(2-氯苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(2-氯苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1-(2-chlorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59–7.54(m,2H),7.50–7.44(m,3H), 7.44–7.40(m,1H),7.39–7.34(m,1H),7.13–7.03(m,3H).13C NMR(101MHz, CDCl3)δ189.17,165.46,162.95,144.10,136.85,131.98,130.98,130.51,130.02, 128.00,121.15,116.34,116.12.[M+H]+＝261.0488.
其合成路线为：
室温下，向邻氯苯乙酮(200mg,1.3mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.23mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(168.6mg,1.4mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2× 20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为白色固体，收率为83％。
实施例15(E)-1-(4-氯苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(4-氯苯基)-3-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1-(4-chlorophenyl)-3-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99–7.93(m,2H),7.79(d,J＝15.7Hz, 1H),7.68–7.61(m,2H),7.52–7.46(m,2H),7.41(d,J＝15.7Hz,1H),7.16–7.09 (m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.55,166.97,164.44,143.55,136.59, 134.39,134.36,133.26,131.17,131.08,129.63,129.31,121.97,115.95,115.73. [M+H]+＝261.0482.
其合成路线为：
室温下，向对氯苯乙酮(200mg,1.3mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.23mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(168.6mg,1.4mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2× 20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为白色固体，收率为83％。
实施例16(E)-3-(4-溴苯基)-1-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-3-(4-溴苯基)-1-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-3-(4-bromophenyl)-1-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09–8.01(m,2H),7.75(d,J＝15.7Hz, 1H),7.58–7.54(m,2H),7.53–7.47(m,3H),7.22–7.15(m,2H).13C NMR(101 MHz,CDCl3)δ188.53,166.98,164.44,143.61,134.37,134.34,133.69,132.27, 131.17,131.08,129.83,124.96,122.06,115.95,115.74.[M+H]+＝304.9979.
其合成路线为：
室温下，向对氟苯乙酮(200mg,1.45mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.62mmol)，搅拌10分钟后，加入对溴苯甲醛(281mg,1.52mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2× 20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为白色固体，收率为85％。
实施例17(E)-3-(4-氯苯基)-1-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-3-(4-氯苯基)-1-(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-3-(4-chlorophenyl)-1-(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08–8.03(m,2H),7.76(d,J＝15.7Hz, 1H),7.60–7.56(m,2H),7.48(d,J＝15.7Hz,1H),7.42–7.38(m,2H),7.22–7.15 (m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.55,166.97,164.44,143.55,136.59, 134.39,134.36,133.26,131.17,131.08,129.63,129.31,121.97,115.95,115.73. [M+H]+＝261.0482.
其合成路线为：
室温下，向对氟苯乙酮(200mg,1.45mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.62mmol)，搅拌10分钟后，加入对氯苯甲醛(281mg,1.52mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2× 20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为白色固体，收率为85％。
实施例18(E)-1,3-双(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮的合成
(E)-1,3-双(4-氟苯基)丙基-2-烯-1-酮
(E)-1,3-bis(4-fluorophenyl)prop-2-en-1-one
产品1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08–8.02(m,2H),7.78(d,J＝15.7Hz, 1H),7.67–7.61(m,2H),7.43(d,J＝15.6Hz,1H),7.21–7.15(m,2H),7.15–7.08 (m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.60,166.92,165.39,164.39,162.88, 143.73,134.47,134.44,131.14,131.04,130.45,130.36,121.27,121.25,116.30, 116.08,115.90,115.69.[M+H]+＝245.0780.
其合成路线为：
室温下，向对氟苯乙酮(200mg,1.45mmol)的无水乙醇(5mL)溶液中加入10％ NaOH(3.62mmol)，搅拌10分钟后，加入对氟苯甲醛(189mg,1.52mmol)，室温搅拌过夜。EtOAc(3×20mL)萃取，有机相合并后用饱和NaCl水溶液洗涤(2× 20mL)，过滤后用无水Na2SO4干燥。滤液浓缩后，通过柱层析分离纯化，洗脱剂为EtOAc:petroleum ether＝1:30，得到纯品为白色固体，收率为82％。
实施例19抑制活性测试
通过全细胞膜片钳技术对化合物进行TRPV3通道的抑制活性测试，将 HEK-293细胞种入小皿中，次日对小皿内HEK-293细胞进行hTRPV3质粒瞬时转染，4小时后换液置于37℃，5％CO2孵箱内培养过夜，第三天用膜片钳放大系统进行全细胞电流记录，先灌流含2-APB(50μM)的细胞外液，再灌流含不同浓度的抑制剂和2-APB(50μM)细胞外液。记录2-APB诱导的mTRPV3 通道介导的最大外向电流及抑制剂和2-APB同时作用下hTRPV3通道介导的外向电流，根据hTRPV3通道介导的全细胞电流的外向电流抑制率计算出半数有效浓度(IC50)。
测试化合物对TRPV3通道的抑制活性的结果如下所示，阳性对照为连翘酯苷B(其抑制活性IC50＝7μM)。结果如表1所示。
表1实施例1-18得到的化合物的TRPV3抑制活性：
化合物编号
抑制率(％)
化合物编号
抑制率(％)
化合物编号
抑制率(％)
1
78.4
7
70.7
13
41.2
2
58.3
8
72.3
14
53.6
3
50.3
9
83.6
15
42.4
4
56.8
10
87.3
16
50.8
5
82.6
11
89.4
17
40.4
6
71.5
12
47.6
18
56
由在50μM的单浓度抑制率得出，化合物1-30在50μM浓度下的抑制率都很好，其中化合物1、5、6、7、8、9、10和11在该浓度下表现出对TRPV3 的抑制率最好。
表2化合物对TRPV1单浓度下(50μM)的抑制率
化合物编号
抑制率(％)
化合物编号
抑制率(％)
化合物编号
抑制率(％)
1
3.2
7
2.7
13
3.6
2
4.4
8
2.5
14
3.1
3
2.5
9
3.1
15
3.9
4
3.7
10
2.6
16
2.5
5
3.5
11
3.8
17
3.6
6
2.7
12
2.3
18
3.5
由表2可以看出，化合物1-30在50μM浓度下对TRPV1的抑制率很低，因此，化合物1-18对TRPV1的抑制活性很弱。
表3化合物对TRPV4单浓度下(50μM)的抑制率
化合物编号
抑制率(％)
化合物编号
抑制率(％)
化合物编号
抑制率(％)
1
3.2
7
2.4
13
1.8
2
1.4
8
2.5
14
2.4
3
2.4
9
3.3
15
3.8
4
2.6
10
3.6
16
4.2
5
3.7
11
2.1
17
3.9
6
4.7
12
2.6
18
2.5
由表3可以看出，化合物1-18在50μM浓度下对TRPV4的抑制率很低，因此，化合物118对TRPV4的抑制活性很弱。
由表2和表3得知，1-30化合物对TRPV1和TRPV4几乎没有抑制活性，这表明该化合物能够作为一种特异性的高效TRPV3抑制剂，可以应用为针对 TRPV3过度表达引起的皮肤瘙痒及炎症的候选药物。
上述发明内容及具体实施方式意在证明本发明所提供技术方案的实际应用，不应解释为对本发明保护范围的限定。本领域技术人员在本发明的精神和原理内，当可作各种修改、等同替换、或改进。本发明的保护范围以所附权利要求书为准。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种再生四氯苯醌的制备方法