一种二氢杨梅素的制备方法
阅读说明：本技术 一种二氢杨梅素的制备方法 (Preparation method of dihydromyricetin ) 是由 邹雨池 陈金峰 王后记 王攀 于 2021-07-14 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种二氢杨梅素的制备方法,属于天然产物分离提纯技术领域。本发明的制备方法包括以下步骤：以藤茶为原料,利用乙酸乙酯回流提取,浓缩除杂,获得粗提物浓缩液；在粗提物浓缩液中加入活性炭脱色过滤,所得滤液结晶后得粗晶；将粗晶在乙醇溶液中加热溶解,过滤,结晶,干燥,即得二氢杨梅素。利用本发明的制备方法,得到的二氢杨梅素产物纯度达到98％以上,总得率达到75％-80％,高纯度且高得率,操作流程简单,投入成本低,适用于大规模推广应用。(The invention provides a preparation method of dihydromyricetin, belonging to the technical field of separation and purification of natural products. The preparation method comprises the following steps: using vine tea as a raw material, performing reflux extraction by using ethyl acetate, and concentrating and removing impurities to obtain a crude extract concentrated solution; adding activated carbon into the crude extract concentrated solution for decolorization and filtration, and crystallizing the obtained filtrate to obtain crude crystals; heating and dissolving the coarse crystal in ethanol solution, filtering, crystallizing, and drying to obtain dihydromyricetin. By utilizing the preparation method, the purity of the obtained dihydromyricetin product reaches more than 98 percent, the total yield reaches 75 to 80 percent, and the dihydromyricetin product has high purity, high yield, simple operation process and low investment cost and is suitable for large-scale popularization and application.)
技术领域
本发明属于天然产物分离提纯技术领域，尤其涉及一种二氢杨梅素的制备方法。
背景技术
藤茶，学名为显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz.)W.T.Wang)，是葡萄科(Vitaceae Michx)蛇葡萄属(Ampelopsis)的一种野生木质落叶藤本植物，俗称山甜茶、甘露茶、白毛猴、白茶、白茶饼等。文献报道藤茶及其提取物有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗炎镇痛、广谱抗菌、降血糖、降血脂、保肝等作用，药理实验证明其功效主要是由黄酮类化合物尤其是二氢杨梅树皮素(Dihydromyricetin)和杨梅树皮素(Myricetin)所致。化学成分分析表明，藤茶中黄酮总含量高达40％左右，其中二氢杨梅素的含量达到20％以上，所以从藤茶中开发二氢杨梅素的技术研究具有重要的意义和应用前景。
经文献报道，藤茶中二氢杨梅素的提取方法主要包括有机溶剂提取法、碱提取法、酶提取法及超临界流体萃取等。如陈雁梅等公开了一种酶法提取藤茶茎中二氢杨梅素的工艺，产物纯度为23.4％，提取率为30.65％，相较于醇提法提取率提升10％，但纯度未变；韦星船等以微波装置和压力蒸汽灭菌器为提取装置，稀碱水为溶剂提取藤茶中二氢杨梅素，二氢杨梅素的提取率为30.94％；CN109053665A(公开日期：2018.12.21)公开了一种藤茶中提取二氢杨梅素的方法，采用微波动态循环阶段连续逆流提取技术，得到的二氢杨梅素产物纯度达到84.2％，但得率仅有16.3％；CN105037310A(公开日期：2015.11.11)公开了一种同时提取杨梅素和二氢杨梅素的工艺，产物中二氢杨梅素纯度达到98％，但得率仅有25％。上述碱液提取法及酶解方法提取过程中会用到酸碱溶液，后序处理较复杂，不符合人体健康需求及对企业的环保要求；超临界萃取法、微波动态循环阶段连续逆流提取技术等需要设备成本较高，且上述方法得到的二氢杨梅素纯度较低，即便纯度达到要求，得率依旧较低，致使大量二氢杨梅素在提取、纯化过程中造成浪费，不利于大规模生产应用。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种二氢杨梅素的制备方法，将藤茶通过乙酸乙酯回流提取后，经真空浓缩、活性炭脱色、重结晶去除杂质，得到的终产品二氢杨梅素纯度达到98％以上，总得率达到75％以上。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
一种二氢杨梅素的制备方法，包括以下步骤：以藤茶为原料，利用乙酸乙酯回流提取，浓缩除杂，获得粗提物浓缩液；在粗提物浓缩液中加入活性炭脱色过滤，所得滤液结晶后得粗晶；将粗晶在乙醇溶液中加热溶解，过滤，结晶，干燥，即得二氢杨梅素。
优选的是，所述藤茶原料粉碎至≤20目。
优选的是，所述回流提取包括：藤茶原料以6-12倍体积乙酸乙酯70-80℃回流提取2-3h，提取2-3次；所述倍数为g/ml或kg/L。
优选的是，所述浓缩除杂包括：将回流提取液浓缩体积至藤茶原料质量的0.4-0.6倍，再加入浓缩液4-8倍体积蒸馏水继续浓缩，回收净残留乙酸乙酯。
优选的是，所述活性炭添加量为20-50g活性炭/kg藤茶原料。
优选的是，所述脱色时进行搅拌，持续20-40min。
优选的是，所述乙醇溶液质量浓度为40-60％。
优选的是，所述加热溶解的温度为70-80℃。
优选的是，所述浓缩为真空浓缩，温度为50-70℃，真空度为-0.03Mp～-0.07Mp。
优选的是，所述干燥为真空干燥，温度为50-60℃，真空度为-0.04Mp～-0.08Mp。
相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明提供了一种二氢杨梅素的制备方法，以乙酸乙酯作为提取溶剂，提取出藤茶原料中的二氢杨梅素，通过浓缩回收残留乙酸乙酯，利用活性炭吸附二氢杨梅素中含有的叶绿素等杂质，再通过乙醇溶液溶解结晶，得到最终产物二氢杨梅素纯度达到98％以上，总得率达到75％以上，且操作流程简单，投入成本低，利用大规模推广应用。
附图说明
图1：实施例1所述方法制得二氢杨梅素HPLC检测图谱；
图2：实施例2所述方法制得二氢杨梅素HPLC检测图谱；
图3：实施例3所述方法制得二氢杨梅素HPLC检测图谱；
图4：本发明二氢杨梅素制备方法流程图。
具体实施方式
本发明提供了一种二氢杨梅素的制备方法，包括以下步骤：以藤茶为原料，利用乙酸乙酯回流提取，浓缩除杂，获得粗提物浓缩液；在粗提物浓缩液中加入活性炭脱色过滤，所得滤液结晶后得粗晶；将粗晶在乙醇溶液中加热溶解，过滤，结晶，干燥，即得二氢杨梅素。
本发明优选藤茶原料进行粉碎，粒径为≤20目。将藤茶粉碎至适宜的粒径，其表面积增加，利于二氢杨梅素的溶出。作为可实施的方式，本发明藤茶原料为藤茶的干茎或干叶，或干燥茎叶混合物。
本发明优选回流提取步骤包括：藤茶原料以6-12倍体积乙酸乙酯70-80℃回流提取2-3h，提取2-3次。进一步优选乙酸乙酯用量为藤茶原料的10倍体积；进一步优选回流提取温度为75℃；进一步优选提取时间为3h，提取2次。
本发明回流提取结束后，将提取液混合，浓缩除杂。优选浓缩除杂步骤包括：将回流提取液浓缩体积至藤茶原料质量的0.4-0.6倍，再加入浓缩液4-8倍体积蒸馏水继续浓缩，回收净残留乙酸乙酯，得到粗提物浓缩液。进一步优选浓缩体积至藤茶原料质量的0.5倍，再加入浓缩液6倍体积的蒸馏水继续浓缩，回收净残留乙酸乙酯。优选浓缩为真空浓缩，温度为50-70℃，真空度为-0.03Mp～-0.07Mp；进一步优选浓缩温度为60℃，真空度为-0.05Mp。
去除乙酸乙酯后，粗提物浓缩液还含有叶绿素等杂质，通过在粗提物浓缩液中添加活性炭，可有效吸附叶绿素，去除杂质。本发明优选活性炭添加量为20-50g活性炭/kg藤茶原料；进一步优选35g活性炭/kg藤茶原料。优选吸附时进行搅拌，吸附时间持续20-40min；进一步优选30min。
吸附完成后，将粗提物浓缩液过滤，滤液放冷析晶，再次过滤，得粗晶。
将得到的粗晶在乙醇溶液中加热溶解，优选乙醇溶液质量浓度为40-60％，进一步优选乙醇溶液质量浓度为50％；优选加热温度为70-80℃，进一步优选加热温度为75℃。乙醇溶液用量以能够完全溶解粗晶为标准，优选藤茶原料2倍体积。
溶解完成后，趁热过滤，去除杂质得滤液，放冷析晶后再次过滤。优选得到滤液后进行一次浓缩，更优选浓缩体积至藤茶原料质量的1倍。
将过滤后的晶体进行干燥，即得高纯度二氢杨梅素。优选干燥方式为真空干燥，温度为50-60℃，真空度为-0.04Mp～-0.08Mp；进一步优选温度为55℃，真空度为-0.06Mp。
本发明中所述的倍数均为质量体积比(m/v)g/ml或kg/L。如5倍体积指：1g固体材料使用5ml的对应溶液；1kg固体材料使用5L的对应溶液。
通过高效液相色谱法(HPLC法)检测终产物中二氢杨梅素含量(纯度)，并计算总得率。
液相色谱条件：WondaCrat DOS-(25μm,250mm*4.6mmID)，检测波长为290nm，流速为1ml/min，流动相为ACN-0.4％H3PO4(20:80)，柱温40℃，柱压9.4Mp。
总得率＝(终产物质量×二氢杨梅素纯度)/(原料质量×二氢杨梅素含量)×100％。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。本发明实施例中所使用的藤茶中二氢杨梅素含量为29.3％。
实施例1
一种二氢杨梅素制备方法，包括以下步骤：
1.取藤茶原料1kg(二氢杨梅素含量为29.3％)，粉碎至粒径≤20目，用10倍体积乙酸乙酯75℃回流提取3h，提取2次。合并提取液，浓缩至0.5L，加入浓缩液6倍体积蒸馏水继续浓缩，回收净残留乙酸乙酯，得到粗提物浓缩液。
2.将粗提物浓缩液转移至脱色罐，加入活性炭35g，搅拌，脱色30min。过滤，滤液放冷析晶，再次过滤，得粗晶。
3.粗晶用2L 50％乙醇溶液75℃加热溶解，趁热过滤。滤液浓缩至1L，放冷析晶，过滤。滤渣55℃，-0.06Mp真空干燥，得高纯度二氢杨梅素221.3g，HPLC检测最终产物中二氢杨梅素纯度为98.79％(附图1)，总得率为74.6％。
实施例2
一种二氢杨梅素制备方法，包括以下步骤：
1.取藤茶原料1kg(二氢杨梅素含量为29.3％)，粉碎至粒径≤20目，用6倍体积乙酸乙酯70℃回流提取3h，提取3次。合并提取液，浓缩至0.4L，加入浓缩液4倍体积蒸馏水继续浓缩，回收净残留乙酸乙酯，得到粗提物浓缩液。
2.将粗提物浓缩液转移至脱色罐，加入活性炭20g，搅拌，脱色40min。过滤，滤液放冷析晶，再次过滤，得粗晶。
3.粗晶用2L40％乙醇溶液80℃加热溶解，趁热过滤。滤液浓缩至1L，放冷析晶，过滤。滤渣50℃，-0.04Mp真空干燥，得高纯度二氢杨梅素225.1g，HPLC检测最终产物中二氢杨梅素纯度为98.83％(附图2)，总得率为75.9％。
实施例3
一种二氢杨梅素制备方法，包括以下步骤：
1.取藤茶原料1kg(二氢杨梅素含量为29.3％)，粉碎至粒径≤20目，用12倍体积乙酸乙酯80℃回流提取2h，提取2次。合并提取液，浓缩至0.6L，加入浓缩液8倍体积蒸馏水继续浓缩，回收净残留乙酸乙酯，得到粗提物浓缩液。
2.将粗提物浓缩液转移至脱色罐，加入活性炭50g，搅拌，脱色20min。过滤，滤液放冷析晶，再次过滤，得粗晶。
3.粗晶用2L 60％乙醇溶液70℃加热溶解，趁热过滤。滤液浓缩至1L，放冷析晶，过滤。滤渣60℃，-0.08Mp真空干燥，得高纯度二氢杨梅素226.0g，HPLC检测最终产物中二氢杨梅素纯度为98.96％(附图3)，总得率为76.3％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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