Glp-1肽类似物的口服递送
阅读说明：本技术 Glp-1肽类似物的口服递送 (Oral delivery of GLP-1 peptide analogs ) 是由 S.佩切诺夫 P.泰亚吉 J.A.苏布拉摩尼 于 2018-10-30 设计创作，主要内容包括：本发明提供了用于口服施用GLP-1肽类似物的配制品、制备此类配制品的方法、以及使用此类配制品的治疗方法。(The present invention provides formulations for oral administration of GLP-1 peptide analogs, methods of making such formulations, and methods of treatment using such formulations.)
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背景技术
技术领域
本披露涉及用于口服递送GLP-1肽类似物的配制品以及施用这些配制品的方法。
背景
治疗性肽通常通过肠胃外途径(如静脉内或皮下注射)施用。然而，肠胃外施用可能导致例如由于***恐惧症所致的较差患者依从性。相比之下，口服施用是简单且方便的施用方式。不幸的是，肽的口服施用是具有挑战性的，因为这些肽易受胃酸和蛋白酶的降解。蛋白水解酶使肽在胃肠道中降解，并且这种降解可以使这些肽无活性。肽的口服施用也具有挑战性，因为肽在胃肠道中吸收较差。大尺寸的肽使它们难以穿过肠粘液层和穿过紧密连接的上皮细胞层。这些挑战导致生物利用度较差和口服施用的肽的药代动力学(pK)药物概况的高变化性。
胰高血糖素样肽1(GLP-1)肽类似物已显示出治疗2型糖尿病的功效。然而，它们目前仅经由肠胃外施用可用。因此，迫切需要口服施用具有临床上显著的生物利用度的GLP-1肽，这些肽是有效且具有有限的药代动力学变化性。
发明内容
肽(如GLP-1肽类似物)通常是大的两亲性分子，这些分子在口服施用时不进入体循环。为了实现全身性暴露，本发明使这些肽靶向它们的最佳吸收部位并使用提高肽的溶解度的配制品组分和赋形剂来增强吸收，这些赋形剂含有渗透增强剂鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合。本发明还提供了通过一种方法口服递送GLP-1肽类似物的方法论，该方法涉及了解吸收部位并使用赋形剂、渗透增强剂和pH调节剂来提高肽的溶解度以获得改进的吸收。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)双脂化GLP-1肽类似物和(ii)鹅脱氧胆酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)双脂化GLP-1肽类似物和(ii)没食子酸丙酯。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含鹅脱氧胆酸钠。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是150∶1至1∶4。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是145∶1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是29.1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是14∶1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是6.5∶1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是4∶1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是2∶1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是1∶1。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是2∶1至1∶4。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是1∶2。
在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠的量是约1mg至约1500mg。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠的量是约100mg至约800mg。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠的量是约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg或约800mg。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠的量是约50mg、约65mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约260mg、约280mg、约290mg或约299mg。在某些实施例中，鹅脱氧胆酸钠的量是约100mg。在一些实施例中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约15％至约25％。在一些实施例中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约20％至约21％。在一些实施例中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约15％至约65％。在一些实施例中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约30％至约65％。
在某些实施例中，没食子酸丙酯的量是约1mg至约3000mg。在某些实施例中，没食子酸丙酯的量是约200mg至约1600mg。在某些实施例中，没食子酸丙酯的量是约2mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约100mg、约150mg或约200mg。在某些实施例中，没食子酸丙酯的量是约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg。在某些实施例中，没食子酸丙酯的量是约200mg。在一些实施例中，没食子酸丙酯是按重量计该药物组合物的约45％至约55％。在一些实施例中，没食子酸丙酯是按重量计该药物组合物的约40％至约41％。
在某些实施例中，该药物组合物不包含没食子酸丙酯。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含pH调节剂。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含Tris碱。在某些实施例中，Tris碱的量多达300mg。在某些实施例中，Tris碱的量是约30mg至约40mg。在某些实施例中，Tris碱的量是约36mg至约37mg。在某些实施例中，Tris碱是按重量计该药物组合物的约5％至约10％。在某些实施例中，Tris碱是按重量计该药物组合物的约7％至约8％。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物不包含pH调节剂。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物不包含Tris碱。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物包含肠溶包衣，例如在约5至约7.5的pH下溶解的肠溶包衣、在约5.5或以上的pH下溶解的肠溶包衣、或者在约7.0或以上的pH下溶解的肠溶包衣。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含生物粘附剂。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含交联聚丙烯酸聚合物。在某些实施例中，这些交联聚丙烯酸聚合物是呈粉末形式或颗粒形式。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含
在某些实施例中，生物粘附剂或交联聚丙烯酸聚合物或的量是约1mg至约50mg。在某些实施例中，生物粘附剂或交联聚丙烯酸聚合物或
在某些实施例中，是
在某些实施例中，是971P。在某些实施例中，971P的量是约1mg至约2mg。在某些实施例中，971P的量是约14mg至约15mg。在某些实施例中，971P是按重量计该药物组合物的约0.3％至约3％。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物不包含生物粘附剂。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物不包含交联聚丙烯酸聚合物。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含肠溶包衣。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含甲基丙烯酸共聚物。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含
在某些实施例中，肠溶包衣或甲基丙烯酸共聚物或
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含填充剂。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含稀释剂。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含甘露醇。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇的量是约1mg至约150mg。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇的量是约50mg至约100mg。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇的量是约75mg至约150mg。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约5％至约30％。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约5％至约20％。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约10％至约20％。在某些实施例中，填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约15％至约30％。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含崩解剂。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含交聚维酮。在某些实施例中，崩解剂或交聚维酮的量是约25mg至约35mg。在某些实施例中，崩解剂或交聚维酮的量是约28mg至约29mg。在某些实施例中，崩解剂或交聚维酮是按重量计该药物组合物的约1％至约10％。在某些实施例中，崩解剂或交聚维酮是按重量计该药物组合物的约5％至约6％。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含助流剂。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含气相二氧化硅。在某些实施例中，助流剂或气相二氧化硅的量是约1mg至约10mg。在某些实施例中，助流剂或气相二氧化硅的量是约4mg至约5mg。在某些实施例中，助流剂或气相二氧化硅是按重量计该药物组合物的约1％。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含润滑剂。在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含硬脂酰富马酸钠。在某些实施例中，润滑剂或硬脂酰富马酸钠的量是约20mg至约30mg。在某些实施例中，润滑剂或硬脂酰富马酸钠的量是约24mg至约25mg。在某些实施例中，润滑剂或硬脂酰富马酸钠是按重量计该药物组合物的约5％。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物进一步包含癸酸钠。在某些实施例中，该组合物包含约300mg至约2400mg的癸酸钠。在某些实施例中，该组合物包含约300mg的癸酸钠。在某些实施例中，该组合物包含约600mg的癸酸钠。在某些实施例中，该组合物包含约900mg的癸酸钠。在某些实施例中，该组合物包含约1200mg的癸酸钠。在某些实施例中，该组合物包含约2400mg的癸酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含双脂化GLP-1肽类似物和N-(8-(2-羟基苯甲酰基)氨基)辛酸钠(SNAC)。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含双脂化GLP-1肽类似物和癸酸钠。
在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物的量是约0.1mg至约100mg。在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物的量是约0.0625mg至约36mg。在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物的量是约0.25mg至约36mg。在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物的量是约0.125mg、约4.5mg或约36mg。在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物是按重量计该药物组合物的约0.2％至约10％。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1mg至约100mg的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约1mg至约1500mg的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约1mg至约3000mg的没食子酸丙酯，以及(iv)0至约300mg的Tris碱。在某些实施例中，该药物组合物进一步包含填充剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、生物粘附剂和/或肠溶包衣。在某些实施例中，该药物组合物进一步包含甘露醇、交聚维酮、气相二氧化硅、硬脂酰富马酸钠、交联聚丙烯酸聚合物和/或甲基丙烯酸共聚物。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含i)约0.1％至约10％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约10％至约30％的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约20％至约60％的没食子酸丙酯。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1％至约10％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约15％至约25％的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约30％至约50％的没食子酸丙酯。
在某些实施例中，该药物组合物进一步包含(iv)约5％至约20％的甘露醇，(v)0至约10％的Tris碱；(vi)约2％至约10％的交聚维酮，(vii)约0.5％至约5％的气相二氧化硅，和/或(viii)约1％至约15％的硬脂酰富马酸钠。在某些实施例中，该药物组合物包含约3％至约10％的交聚维酮。在某些实施例中，该药物组合物包含约1％至约5％的气相二氧化硅。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.256％至约7.364％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约20.5％的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约40.9％的没食子酸丙酯，(iv)约6.833％至约18.903％的甘露醇，(v)0至约7.815％的Tris碱；(vi)约5.81％的交聚维酮，(vii)约1％的气相二氧化硅，以及(viii)约2％至约10％的硬脂酰富马酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.256％至约7.364％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约20.5％的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约40.9％的没食子酸丙酯，(iv)约6.833％至约18.903％的甘露醇，(v)0至约7.815％的Tris碱；(vi)约5.81％的交聚维酮，(vii)约0.3％至约10％的交联聚丙烯酸聚合物，(viii)约1％的气相二氧化硅，以及(ix)约2％至约10％的硬脂酰富马酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1mg至约40mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约75mg至约125mg的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约150mg至约250mg的没食子酸丙酯。
在某些实施例中，该药物组合物进一步包含(iv)约40mg至约125mg的甘露醇，(v)0至约45mg的Tris碱，(vi)约25mg至约35mg的交聚维酮，(vii)约1mg至约10mg的气相二氧化硅，以及(viii)约20mg至约30mg的硬脂酰富马酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约1.25mg、约4.5mg或约36mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约100mg的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约200mg的没食子酸丙酯，(iv)约94.7mg、约89.6mg或约51.8mg的甘露醇，(v)0至约36.2mg的Tris碱，(vi)约28.4mg的交聚维酮，(vii)约4.9mg的气相二氧化硅，以及(viii)约24.4mg的硬脂酰富马酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约1mg至约10mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约50mg至约150mg的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约100mg至约300mg的没食子酸丙酯。在某些实施例中，该药物组合物进一步包含(iv)约50mg至约150mg的甘露醇，(v)0至约50mg的Tris碱，(vi)约10mg至约45mg的交聚维酮，(vii)约1mg至约10mg的气相二氧化硅，以及(viii)约5mg至约25mg的硬脂酰富马酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约4.5mg的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约100mg的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约200mg的没食子酸丙酯，(iv)约101.8mg至约138mg、约88.1mg至约124.3mg、或约75mg或11.2mg的甘露醇，(v)0至约36.2mg的Tris碱，(vi)0mg、约1.5mg或约14.6mg的交联聚丙烯酸聚合物，(vii)约28.4mg的交聚维酮，(viii)约4.9mg的气相二氧化硅，以及(ix)约12.2mg或24.4mg的硬脂酰富马酸钠。
在某些实施例中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约1至约15mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约100mg至约800mg的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约200mg至约1600mg的没食子酸丙酯。在某些实施例中，该药物组合物包含约300mg至约400mg的鹅脱氧胆酸钠和约600mg至约800mg的没食子酸丙酯。在某些实施例中，该药物组合物进一步包含甘露醇、Tris、气相二氧化硅和/或硬脂酰富马酸钠。在某些实施例中，该药物组合物进一步包含约50mg至约150mg的甘露醇、0至约50mg的Tris碱、约10mg至约45mg的交聚维酮、约1mg至约10mg的气相二氧化硅和/或约5mg至约25mg的硬脂酰富马酸钠。在某些实施例中，该药物组合物进一步包含交联聚丙烯酸聚合物。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物包含肠溶包衣。在某些实施例中，该肠溶包衣包含甲基丙烯酸共聚物。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物包含约1∶2比例的鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物包含Tris碱。在某些实施例中，在此提供的药物组合物不包含Tris碱。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物包含GLP-1肽类似物，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：2-10或12-15中的任一个或其盐(例如，乙酸铵盐)。在某些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：2或其盐(例如，乙酸铵盐)。在某些实施例中，该GLP-1肽包含SEQ ID NO：2以及其乙酸铵盐。在某些实施例中，该GLP-1肽包含SEQ ID NO：2的乙酸铵盐。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物是固体剂型。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物是呈片剂、硬胶囊或软胶囊的形式。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物是立即释放、肠溶包衣、持续释放或延迟释放组合物。
在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物在近端结肠中被吸收。在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物在近端小肠区域中被吸收。在此提供的药物组合物的某些实施例中，GLP-1肽类似物在近端结肠和近端小肠区域中被吸收。
在此提供的药物组合物的某些实施例中，将该药物组合物施用至人产生约0.5％至约35％的生物利用度。
在此提供的药物组合物的某些实施例中，施用该药物组合物产生不超过100％或以上、50％或以上、25％或以上并且在每日重复施用后降低的pK变化性。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物在崩解测试测定中具有约5分钟至约100分钟的崩解时间。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物在溶解测试测定中具有约10分钟至约500分钟的溶解时间。
在某些实施例中，在此提供的药物组合物是少于2克、少于1.5克、少于1.0克或少于0.5克。在某些实施例中，药物组合物是约400mg至约500mg。
在某些实施例中，改进血糖控制的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，治疗或预防由高血糖症或胰岛素释放受损引起或特征在于高血糖症或胰岛素释放受损的疾病或病状的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，治疗或预防糖尿病的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。在某些实施例中，糖尿病是2型糖尿病。
在某些实施例中，减轻体重的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，降低体脂的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，治疗肥胖症的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，治疗或预防由体重过重引起或特征在于体重过重的疾病或病状的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，控制体重的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在某些实施例中，增加脂质氧化的方法包括将在此提供的药物组合物施用至有需要的受试者。
在此提供的这些方法的某些实施例中，受试者患有糖尿病。在某些实施例中，糖尿病是2型糖尿病。
在此提供的这些方法的某些实施例中，受试者的食欲下降。
在此提供的这些方法的某些实施例中，该药物组合物每天施用一次。
在此提供的这些方法的某些实施例中，受试者是人。
在某些实施例中，制备在此提供的药物组合物的方法包括将GLP-1肽类似物、鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯组合成口服药物组合物。
附图说明
图1A示出了SEQ ID NO：3的化学结构、化学式和分子量。
图1B示出了SEQ ID NO：4的化学结构、化学式和分子量。
图1C示出了SEQ ID NO：5的化学结构、化学式和分子量。
图1D示出了SEQ ID NO：6的化学结构、化学式和分子量。
图1E示出了SEQ ID NO：7的化学结构、化学式和分子量。
图1F示出了SEQ ID NO：8的化学结构、化学式和分子量。
图1G示出了SEQ ID NO：9的化学结构、化学式和分子量。
图1H示出了SEQ ID NO：2(MEDI7219)的化学结构、化学式和分子量。
图1I示出了SEQ ID NO：10的化学结构、化学式和分子量。
图1J示出了索马鲁肽(SEQ ID NO：11)的化学结构、化学式和分子量。
图1K示出了SEQ ID NO：12的化学结构、化学式和分子量。
图1L示出了SEQ ID NO：13的化学结构、化学式和分子量。
图1M示出了SEQ ID NO：14的化学结构、化学式和分子量。
图1N示出了SEQ ID NO：15的化学结构、化学式和分子量。
图2示出了(A)在具有胰酶的模拟肠液存在下GLP-1肽类似物和索马鲁肽的体外稳定性以及(B)SEQ ID NO：2(MEDI7219)、SEQ ID NO：6和索马鲁肽(SEQ ID NO：11)的体内浓度对时间曲线。(参见实例6.)
图3示出了在各种pH下，没食子酸丙酯、鹅脱氧胆酸钠和SEQ ID NO：2(MEDI7219)的溶解度。(参见实例9.)
图4示出了针对口服GLP-1肽类似物配制品的开发进行测试的片剂制备方法的示例性流程图。(参见实例26.)
图5示出了(A)所达到的硬度值及其与片剂的厚度的关系，(B)所达到的崩解时间及其与片剂的厚度的关系，和(C)未包衣片剂的典型溶解概况。(参见实例26.)
图6示出了两种10mg活性药物成分(API)含量片剂配制品的浓度对时间曲线：口服胶囊中的片剂和耐酸胶囊中的口服片剂(参见实例12)。
图7示出了5mg和10mg活性药物成分(API)含量片剂配制品的片剂配制品的浓度对时间曲线。(参见实例12.)
图8示出了来自第二犬研究的第3组(小肠)和第4组(结肠)的片剂配制品的浓度对时间曲线。(参见实例12.)
图9示出了来自表7中的第2组的片剂的重复剂量设计。(参见实例14.)
图10示出了直至第5天，重复片剂剂量的SEQ ID NO：2(MEDI7219)浓度。(参见实例14.)
图11示出了示例性片剂组合物的溶解概况。(参见实例25.)
图12示出了含有鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的肠溶包衣片剂的临床配制品设计空间和范围。(参见实例24.)
图13示出了含有鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的另外肠溶包衣片剂的临床配制品设计空间和范围。(参见实例24.)
图14示出了含有癸酸钠的肠溶包衣片剂的临床配制品设计空间和范围。(参见实例28.)
具体实施方式
应该领会的是在此示出且描述的这些具体的实现方式是实例，并且不旨在以任何方式在其他方面限制本申请的范围。
在此提及的这些公开的专利、专利申请、网站、公司名称、以及科学文献特此通过引用以其全文结合，达到如同每个被确切并单独地表明而通过引用结合的相同程度。在此引用的任何参考文件与本说明书的具体传授内容之间的任何冲突应以有利于后者的方式来解决。同样，在单词或短语的领域理解的定义与如在本说明书中确切传授的该单词或短语的定义之间的任何冲突应以有利于后者的方式来解决。
I.定义
如在本说明书中所使用的，单数形式“一个/种(a/an)”以及“该”具体地还涵盖它们所提及的术语的复数形式，除非本内容清楚地另外指明。因此，术语“一个/种(a或an)”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”在此可互换地使用。
在此使用术语“约”来意指大约(approximatelv)、在......附近(in the regionof)、粗略地(roughlv)、或在......左右(around)。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过扩展列举的数值的上限和下限将该范围加以修饰。通常，除非另外说明，否则在此使用术语“约”以将数值以高于和低于该规定值的20％的变化加以修饰。
此外，在此使用“和/或”应当理解为在有或没有另一者的情况下，两个指定的特征或组分中的每一者的特定披露。因此，如在此在诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)、以及“B”(单独)。同样，如在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。
应当理解，无论在什么情况下在此用语言“包含”描述方面时，还提供了关于“由......组成”和/或“主要由......组成”描述的其他类似方面。“包含”特定氨基酸序列的肽是指含有氨基酸序列的肽，其中该肽可以包含或可以不包含另外的氨基酸或对其他氨基酸序列的修饰。由特定氨基酸序列“组成”的肽是指仅含有氨基酸序列且不含另外的氨基酸或其他对氨基酸序列的修饰的肽。“包含”由特定氨基酸序列“组成”的氨基酸序列的肽是指含有氨基酸序列且不含另外的氨基酸的肽；然而，肽可以包含其他对氨基酸序列的修饰(例如，酰基部分或棕榈酰基部分)。
在此使用的技术术语和科学术语具有由本申请涉及的领域的普通技术人员通常理解的含义，除非另外定义。在此参考了本领域的技术人员已知的各种方法和材料。阐述肽合成的一般原理的标准参考著作包括W.C.Chan和P.D.White.，“Fmoc Solid PhasePeptide Synthesis：A Practical Approach[Fmoc固相肽合成：实用方法]”，OxfordUniversity Press[牛津大学出版社]，牛津(2004)。例如，the Concise Dictionary ofBiomedicine and Molecular Biology[简明生物医学与分子生物学词典]，Juo，Pei-Show，第2版，2002，CRC出版社；The Dictionary of Cell and Molecular Biology[细胞与分子生物学词典]，第3版，1999，Academic Press[美国学术出版社]；以及the OxfordDictionary Of Biochemistry And Molecular Biology[牛津生物化学与分子生物学辞典]，修订版，2000，Oxford University Press[牛津大学出版社]为技术人员提供了用于本披露中的许多术语的通用词典。
单位、前缀和符号是以它们的国际单位系统(Système International deUnites)(SI)接受的形式表示。数值范围包括限定该范围的数字。除非另外说明，否则氨基酸序列是以氨基至羧基取向从左向右书写。在此提供的小标题不是本披露的不同方面的限制，可以通过作为一个整体参考本说明书来获得这些方面。因此，通过以其全文参考说明书，更充分地定义了紧接着在下文中定义的术语。
术语“肽”、“多肽”、“蛋白质”以及“蛋白质片段”在此可以互换地使用以便指示两个或更多个氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物，并且适用于天然存在的氨基酸聚合物以及非天然存在的氨基酸聚合物。术语“肽”进一步包括已经历翻译后或合成后修饰的肽，这些修饰例如，糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/阻断基团进行的衍生、蛋白水解裂解或通过非天然存在的氨基酸进行的修饰。“肽”可以是包含用来增加半衰期的另外的组分(如Fc结构域或白蛋白结构域)的融合肽的一部分。如在此描述的肽还可以许多不同的途径衍生。
术语“氨基酸”是指天然存在的以及合成的氨基酸，连同与天然存在的氨基酸功能类似的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是通过遗传密码编码的那些氨基酸，以及随后被修饰的那些氨基酸，例如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸盐、以及O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指以下化合物，这些化合物具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构，例如与氢相结合的α碳、羧基基团、氨基基团、以及R基团，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物可以具有修饰的R基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留了与天然存在氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指以下化学化合物，这些化合物具有不同于通常的氨基酸化学结构的、但与天然存在的氨基酸功能类似的结构。术语“氨基酸”和“氨基酸残基”通篇可互换地使用。
术语“分离的”是指肽或核酸通常将根据本披露的状态。分离的肽和分离的核酸将不含或基本上不含在天然状态下与其相关联的材料，如在其天然环境下，或在这种制备是通过在体外或在体内实施的重组DNA技术时在其制备环境(例如细胞培养物)中与其一起存在的其他肽或核酸。肽和核酸可以用稀释剂或佐剂配制，并且仍然为了实用目的可以被分离-例如如果这些肽用于包被微量滴定板用于免疫测定，则这些蛋白质通常将与明胶或其他载体混合，或者当用于诊断或治疗时将与药学上可接受的载体或稀释剂混合。
“重组”肽是指经由重组DNA技术产生的肽。如同已经通过任何适合的技术分离、分级或部分纯化或基本上纯化的天然或重组多肽一样，出于本披露的目的，在宿主细胞中表达的重组产生的肽也被视为分离的。
当提及如在此提供的肽时，术语“片段”、“类似物”、“衍生物”或“变体”包括具有相应的天然肽(例如GLP-1)的至少一些活性的任何肽。如在此所使用，术语“GLP-1肽类似物”是指具有GLP-1的至少一些活性、例如与GLP-1受体结合的肽。“类似物”、“衍生物”或“变体”肽可以含有化学修饰，例如旨在改善代谢稳定性的化学修饰，包括涉及在主肽链合成后的额外化学操作的那些。操作的实例包括内酰胺化、二硫键封闭、脂化和/或聚乙二醇化。
术语“脂质修饰的氨基酸”和“脂化氨基酸”在此可互换地使用，并且是指具有脂质部分连接的氨基酸，典型地为赖氨酸或半胱氨酸。术语“脂化多肽”、“脂蛋白”等是指包含一个或多个脂质修饰的氨基酸的肽或多肽。脂质、脂质部分和接头的代表性实例在WO 2016/198555中提供(参见例如，其中的图1)。
如在此所使用，“蛋白水解降解”意指将肽分解为更小的肽或甚至氨基酸，通常由肽键通过酶的水解所引起。术语“组合物”或“药物组合物”是指含有在此提供的肽或多肽连同例如药学上可接受的、用于向需要治疗的受试者施用的载体、赋形剂、或稀释剂的组合物。
对蛋白水解降解“实质上有抗性”的脂化肽可以在酶通常有活性的条件(例如，适合的pH、温度、其他环境条件)中暴露于该酶中持续一段限定的时间之后，例如至少约50％保持完整。在此提供的脂化肽可对持续以下时间段的蛋白水解降解是实质上有抗性的：至少4小时、至少8小时、至少12小时、至少24小时、至少36小时、至少48小时、至少72小时、至少96小时、至少120小时、至少144小时、至少168小时、至少192小时、至少216小时、至少240小时、或约36小时至约240小时、约48小时至240小时、约72小时至约240小时、约96小时至约240小时、约120小时至约240小时、约144小时至约240小时、约168小时至约240小时、约192小时至约240小时、或约216小时至约240小时。在某些实施例中，在酶通常有活性的条件中暴露于该酶持续一段限定的时间之后，至少约60％的脂化肽保持完整，例如在酶通常有活性的条件中暴露于该酶持续一段限定的时间段之后，至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.1％、至少约99.2％、至少约99.3％、至少约99.4％、至少约99.5％、至少约99.6％、至少约99.7％、至少约99.8％、至少约99.9％、或至少约100％的脂化肽保持完整。
术语“药物组合物”是指含有在此提供的GLP-1激动剂肽连同例如药学上可接受的、用于向需要治疗的受试者(例如人受试者)施用的载体、赋形剂、或稀释剂的组合物。
术语“药学上可接受的”是指以下组合物，这些组合物在合理的医学判断范围内适合于与人以及动物的组织接触而没有过度的毒性或与合理的利益/风险比相当的其他并发症。
术语“药学上可接受的载体”是指不会干扰脂化肽的生物活性的有效性的一种或多种非毒性材料。
“有效量”是在此提供的肽或配制品的量，该量施用至受试者(以单剂量或作为一系列的部分)对治疗是有效的，即降低疾病或病症(或其一种或多种症状)的严重性，改善这种疾病或病症的一种或多种症状，防止这种疾病或病症的进展，引起这种疾病或病症的消退，或者增强或改进另一种疗法的一种或多种治疗效果。
术语“受试者”意指需要用在此提供的肽进行治疗的任何受试者，尤其是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括，但不限于，人、狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛、熊、母牛、猿类、猴子、猩猩和黑猩猩等。在一个方面，受试者是人受试者。
如在此使用的，“有需要的受试者”是指希望治疗的个体，例如，患有由高血糖症或胰岛素释放受损引起或特征在于高血糖症或胰岛素释放受损的病状的受试者，患有糖尿病(例如，2型糖尿病)的受试者，肥胖受试者或希望促进体重或体脂肪减少、体重或体脂肪维持、或在规定时间段预防体重增加或将其体重增加降低到最低限度的有肥胖症倾向的受试者。
术语如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(totreat)”是指治愈和/或停止已诊断的病理病状或病症的进展的治疗性措施。术语如“预防”是指预防和/或减缓所靶向的病理病状或病症发展的防治性或预防性措施。因此，需要治疗的那些包括已患有疾病或病状的那些。需要预防的那些包括容易患上疾病或病状的那些以及有待预防疾病或病状的那些。例如，短语“治疗患有由体重过重引起或特征在于体重过重的疾病或病状的患者”是指将疾病或病状的严重程度降低到受试者不再遭受由此引起的不适和/或功能改变的程度。短语“预防”由体重过重引起或特征在于体重过重的疾病或病状是指降低疾病或病状的可能性和/或降低疾病或病状的发生率(例如与未经治疗的患者相比发生率相对降低)。
术语，如“降低严重程度”是指减慢或减轻经诊断的病理病状或病症的症状的治疗措施。例如，短语“降低糖尿病的严重程度”是指降低疾病的严重程度(例如，与未经治疗的患者相比时症状减轻或葡萄糖控制增加)。
II.GLP-1肽类似物
在此提供了可以口服施用的GLP-1肽类似物。GLP-1肽类似物是具有GLP-1的至少一些活性、例如与GLP-1受体结合的肽。GLP-1(7-36)的天然氨基酸序列是HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(SEQ ID NO：1)。
用于口服施用的示例性GLP-1肽类似物在WO 2015/086686和WO 2016/198544中提供，其各自通过引用以其全文结合在此。
在一些实施例中，GLP-1肽类似物是双脂化GLP-1肽类似物。示例性双脂化GLP-1肽类似物提供于表1中。
表1：示例性双脂化GLP-1肽类似物
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：3的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：3的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：4的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：4的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：5的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：5的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：6的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：6的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：7的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：7的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：8的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：8的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：9的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：9的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：2的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：2的脂化肽或其乙酸铵盐(MEDI7219)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：2的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：2的脂化肽或其乙酸铵盐(MEDI7219)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：10的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：10的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：12的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：12的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：13的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：13的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：14的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物由SEQ ID NO：15的脂化肽或其盐(例如，乙酸铵盐)组成。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物是合成肽。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))被脂化。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))被双脂化。在一些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))含有两个脂化赖氨酸。产生脂化肽的方法在此进一步描述。
在一些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))对蛋白水解降解是实质上有抗性的。例如，在某些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))对DPP-IV、脑啡肽酶、α-胰凝乳蛋白酶、纤溶酶、凝血酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶和/或胃蛋白酶降解是实质上有抗性的。
在一些实施例中，与相应的未脂化肽相比，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))至少维持基本上相同的受体效价。在一些实施例中，与相应的未脂化肽相比，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))至少维持基本上相同的受体选择性。在一些实施例中，与相应的未脂化肽相比，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))至少维持基本上相同的受体效价和选择性。
GLP-1肽类似物的生物活性可以例如通过评估该肽活化受体(例如，GLP-1受体)的能力来进行评价。此类受体的肽活化导致cAMP第二信使的下游累积，这可以在功能活性测定中测量。因此，在某些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))表现出对GLP-1受体的体外效力，如通过cAMP测定中小于200pM、小于100pM、小于50pM、小于25pM、小于20pM、小于15pM、小于10pM、小于5pM或小于4pM的EC50所示。在某些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEO ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))表现出对GLP-1受体的体外效力，如通过cAMP测定中约3.9pM的EC50所示，例如使用如在WO 2016/198544中描述的初级测定，该专利通过引用以其全文结合在此。在某些实施例中，该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))表现出对GLP-1受体的体外效力，如通过cAMP测定中约116pM的EC50所示，例如使用如在WO 2016/198544中描述的INS1e测定，该专利通过引用以其全文结合在此。
III.制备脂化肽的方法
虽然已知将脂质和脂质部分附接至肽的不同方法，但是在此提供了制备脂化肽的至少一种代表性方法。
在某些实施例中，脂化肽可以诸如在
可以通过用适合的裂解混合物处理使粗肽从树脂支持体上裂解。在某些实施例中，该混合物由伴随着搅拌(在环境温度下3×1小时)的TFA(95％v/v)、TIPS(2.5％v/v)和水(2.5％v/v)组成。可以将裂解等分部分合并，通过旋转蒸发进行浓缩并且通过添加冷二***进行沉淀，通过离心来分离固体。可以将粗肽在干氮流下干燥，在适合的水性缓冲液中重构，并且在色谱纯化之前进行过滤。
可以将粗单-脂化肽溶解于乙酸/乙腈/水(1∶5∶50v/v)的溶液中并且进行过滤。可以将粗滤液诸如在安捷伦(Agilent)Polaris C8-A固定相(21.2×250mm，5微米)上、用10％-70％、15％-80％或20％-90％MeCN(0.1％TFA v/v)于水(0.1％TFA v/v)中的线性溶剂梯度经30分钟洗脱、使用Varian SD-1 PrepStar双泵系统、通过在210nm处的UV吸收监测来进行色谱分析。然后可以将含肽的部分合并、冷冻(干冰/丙酮)并冻干。
可以将粗双-脂化肽溶解在诸如0.1M碳酸氢铵溶液(1∶5乙腈/水v/v，pH 8.0)中并且进行过滤。可以将粗滤液诸如在沃特世X-桥(Waters X-Bridge)C18固定相(19.0×250mm，5微米)上、用20％-90％针对A的B的线性溶剂梯度经30分钟洗脱、使用Varian SD-1PrepStar双泵系统、通过在210nm处的UV吸收监测来进行色谱分析。(A＝于水中的0.1M碳酸氢铵，B＝于1∶2水/乙腈中的0.1M碳酸氢铵)。然后可以将含肽的部分合并、冷冻(干冰/丙酮)并冻干。
肽序列可以是GLP-1类似物序列，诸如在SEQ ID NO：2中提供的序列。脂质或脂质部分可以是诸如在此披露的任一种，包括但不限于：K(ε-(PEG)2-(PEG)2-γE-硬脂酸酯)；K(ε-γE-棕榈酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-γE-硬脂酸酯)；K(γE-棕榈酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-(PEG)2-硬脂酰基)；K(ε-γE-月桂酰基)；K(ε-γE-γE-月桂酰基)；K(ε-γE-γE-γE-月桂酰基)；K(ε-Ahx-月桂酰基)；K(ε-Ahx-Ahx-月桂酰基)；K(ε-Ahx-Ahx-Ahx-月桂酰基)；K(ε-(PEG)2-月桂酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-月桂酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-(PEG)2-月桂酰基)；K(ε-γE-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-γE-γE-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-γE-γE-γE-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-Ahx-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-Ahx-Ahx-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-Ahx-Ahx-Ahx-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-(PEG)2-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-(PEG)2-12-(4-羧基苯氧基)十二酰基)；K(ε-γE-硬脂酰基)；K(ε-γE-γE-硬脂酰基)；K(ε-γE-γE-γE-硬脂酰基)；K(ε-Ahx-硬脂酰基)；K(ε-Ahx-Ahx-硬脂酰基)；K(ε-Ahx-Ahx-Ahx-硬脂酰基)；K(ε-(PEG)2-硬脂酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-硬脂酰基)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-(PEG)2-硬脂酰基)；K(ε-γE-硬脂酸酯)；K(ε-γE-γE-硬脂酸酯)；K(ε-γE-γE-γE-硬脂酸酯)；K(ε-Ahx-硬脂酸酯)；K(ε-Ahx-Ahx-硬脂酸酯)；K(ε-Ahx-Ahx-Ahx-硬脂酸酯)；K(ε-(PEG)2-硬脂酸酯)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-硬脂酸酯)；K(ε-(PEG)2-(PEG)2-(PEG)2-硬脂酸酯)，以及其任何组分。
IV.制备合成肽的方法
还提供了制备合成肽的方法。
在一些实施例中，这些方法适当地包括在该肽中鉴别用于取代的至少一个天然氨基酸残基。在其他实施例中，这些方法适当地包括在该肽中鉴别用于取代的至少两个天然氨基酸残基。然后可以用α-甲基官能化氨基酸取代所鉴别的天然氨基酸残基。
如通篇所描述，相比于不包含取代的相应合成肽，通过在此提供的方法制备的合成肽适当地维持基本上相同的受体效价和在一些情况下的选择性或表现出增加的受体效价和在一些情况下的选择性。此外，根据在此所描述的方法制备的合成肽还可对蛋白水解降解是实质上有抗性的。
适当地，在此提供的方法中，取代的α-甲基官能化氨基酸对应于被取代的天然氨基酸残基，并且在另外的实施例中，取代的α-甲基官能化氨基酸对应于与被取代的天然氨基酸残基相同的类别。
在另外的实施例中，取代的a-甲基官能化氨基酸可以是α-甲基苯丙氨酸。在示例性实施例中，α-甲基苯丙氨酸取代相应的天然氨基酸，但在这些方法的另外的实施例中，该α-甲基苯丙氨酸并非必须对应于其中发生取代的相同天然氨基酸。
在某些实施例中，根据在此所描述的方法制备的合成肽可以对以下中的一种或多种是实质上有抗性的：DPP-IV、脑啡肽酶、α-胰凝乳蛋白酶、纤溶酶、凝血酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶和胃蛋白酶降解。
在实施例中，可以将合成肽在TGR树脂上制备为C-末端甲酰胺。可以在环境温度下将氨基酸(天然和非天然两者)使用于NMP中的HCTU/DIPEA偶联，用乙酸酐和吡啶的溶液加帽残余官能团。在环境温度下，使用DMF中的哌啶将Fmoc适当地解封闭。
如在此所描述的，在肽中鉴别用于取代的至少一个天然氨基酸残基适当地包括鉴别在对酶促裂解敏感的位点处的氨基酸。鉴别在对酶促裂解敏感的位点处的氨基酸的示例性方法是本领域熟知的。在某些实施例中，鉴别在对酶促裂解敏感的位点处的氨基酸的方法适合地包括在其中酶有活性的条件下(例如，适合的pH、缓冲条件、温度等)将天然肽(例如，野生型肽)暴露于单一酶持续预定的时间量，并且测量该肽的酶降解产物。用于测量酶降解产物的示例性方法包括，例如，反相液相色谱-质谱法。
可以将肽溶液添加至蛋白酶的溶液。可以将肽和酶适当地在约37℃下进行共孵育。可以将经孵育的肽-酶混合物的等分部分周期性地取出，进行淬灭以阻滞蛋白水解活性，并且通过液相色谱-质谱法(LC/MS)进行分析。可以通过UV吸收(例如，在210nm处)以及通过使用质量检测器(ESI+模式)的电离化两者检测分析物。可以将肽的酶促裂解产生的肽种类(片段)进行后处理分析，并且可以使用它们的分子质量来鉴别精确的裂解位置(在每一情况下突出显示易断开的键)。
在实施例中，这些方法可以用于制备合成GLP-1肽类似物。
在另外的实施例中，提供了制备蛋白水解性稳定的肽的方法。适当地，此类方法包括将肽暴露于一种或多种蛋白酶、鉴别是对蛋白水解裂解敏感的位点的至少两个天然氨基酸残基，并且用α-甲基官能化氨基酸取代所鉴别的氨基酸残基。
如通篇所描述，适当地，此类方法提供合成肽，相比于不包含一个或多个取代的相应合成肽，该合成肽维持基本上相同的受体效价和在一些情况下的选择性或表现出增加的受体效价和在一些情况下的选择性。在另外的实施例中，这些方法还提供合成肽，该合成肽对蛋白水解降解是实质上有抗性的。
适当地，在此提供的方法中，取代的α-甲基官能化氨基酸对应于被取代的天然氨基酸残基，并且在另外的实施例中，取代的α-甲基官能化氨基酸对应于与被取代的天然氨基酸残基相同的类别。
在又另外的实施例中，取代的a-甲基官能化氨基酸可以选自α-甲基官能化组氨酸、α-甲基官能化丙氨酸、α-甲基官能化异亮氨酸、α-甲基官能化精氨酸、α-甲基官能化亮氨酸、α-甲基官能化天冬酰胺、α-甲基官能化赖氨酸、α-甲基官能化天冬氨酸、α-甲基官能化甲硫氨酸、α-甲基官能化半胱氨酸、α-甲基官能化苯丙氨酸、α-甲基官能化谷氨酸，α-甲基官能化苏氨酸、α-甲基官能化谷氨酰胺、α-甲基官能化色氨酸、α-甲基官能化甘氨酸、α-甲基官能化缬氨酸、α-甲基官能化鸟氨酸、α-甲基官能化脯氨酸、α-甲基官能化硒代半胱氨酸、α-甲基官能化丝氨酸以及α-甲基官能化酪氨酸。
在另外的实施例中，取代的α-甲基官能化氨基酸可以是α-甲基苯丙氨酸和/或α-甲基赖氨酸。在示例性实施例中，α-甲基苯丙氨酸和/或α-甲基赖氨酸可以取代相应的天然氨基酸，但在这些方法的另外的实施例中，该α-甲基苯丙氨酸和/或α-甲基赖氨酸并非必须对应于其中发生取代的相同天然氨基酸。
在某些实施例中，根据在此所描述的方法制备的合成肽可以对以下中的一种或多种是实质上有抗性的：DPP-IV、脑啡肽酶、α-胰凝乳蛋白酶、纤溶酶、凝血酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶和胃蛋白酶降解。
V.包含GLP-1肽类似物的配制品
在此提供了用于口服施用GLP-1肽类似物的配制品。适当地，此类配制品包含如在此所述的脂化肽(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))和载体，例如药学上可接受的载体。
如在此所述的口服配制品可以被配制用于特定剂型。可以调整剂量方案以提供最佳应答。可能有用的是，以剂量单位形式配制组合物以便施用和剂量统一。如在此所使用的，剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的受试者的单元剂量的物理上离散的单位；每个单位含有经计算与所要求的药物载体联合产生治疗效果的预定量的脂化肽。例如，该口服配制品可以包含约0.1至约100mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的剂量。
该口服配制品可以包含约0.0625至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.25至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.5至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约1至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约3至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约6至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约9至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约18至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以是该口服配制品的约0.0128％至约7.36％。该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以是该口服配制品的约0.0256％至约7.36％。
该口服配制品可以包含约0.25至约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.5至约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约1至约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约3至约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约6至约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约9至约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。
该口服配制品可以包含约0.25至约9mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.5至约9mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约1至约9mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约3至约9mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约6至约9mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。
该口服配制品可以包含约0.25至约6mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.5至约6mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约1至约6mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约3至约6mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。
该口服配制品可以包含约0.0625mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.125mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ IDNO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约0.5mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约1mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约3mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约4.5mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约6mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约9mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约18mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。该口服配制品可以包含约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))。
在一个实施例中，活性药物成分(API)的量可以通过调节纯肽含量来计算，其可以作为测定(包括乙酸铵和水分的含量)来计算，并乘以HPLC纯度。
为了实现全身性暴露，本发明提供了含有渗透增强剂的口服配制品。渗透增强剂可以是，例如，胆汁盐、鹅脱氧胆酸钠、鹅脱氧胆酸、没食子酸酯衍生物、没食子酸丙酯、没食子酸乙酯或其组合。
该渗透增强剂还可以是例如癸酸钠。
在一个例子中，该口服配制品包含鹅脱氧胆酸钠。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约1mg至约1500mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约50mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约65mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约100mg至约800mg。例如，鹅脱氧胆酸钠的量可以是约100mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约120mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约130mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约140mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约150mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约200mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约260mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约280mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约290mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约299mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约300mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约400mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约500mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约600mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约700mg。鹅脱氧胆酸钠的量可以是约800mg。鹅脱氧胆酸钠可以是按重量计该口服配制品的约15％至约25％。鹅脱氧胆酸钠可以是按重量计该口服配制品的约20％至约21％，例如约20.5％。
在一个例子中，该口服配制品包含没食子酸丙酯。没食子酸丙酯的量可以是约1mg至约3000mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约2mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约10mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约20mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约30mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约40mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约50mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约100mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约150mg。没食子酸丙酯的量可以是约200mg至约1600mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约200mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约300mg。没食子酸丙酯的量可以是约400mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约500mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约600mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约700mg。没食子酸丙酯的量可以是约800mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约900mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约1000mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约1100mg。没食子酸丙酯的量可以是约1200mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约1300mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约1400mg。例如，没食子酸丙酯的量可以是约1500mg。没食子酸丙酯的量可以是约1600mg。没食子酸丙酯可以是按重量计该口服配制品的约45％至约55％。没食子酸丙酯可以是按重量计该口服配制品的约40％至约42％，例如约40.9％。
在一个例子中，该口服配制品包含鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯。鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例可以是约150∶1至约1∶4。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约149.5∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约145∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约29∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约14∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约6.5∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约4∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约2∶1。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约1∶1。鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例可以是约2∶1至约1∶4。鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例可以是约1∶1至约1∶4。鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例可以是约1∶1至约1∶3。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约1∶2。
在一个例子中，该口服配制品包含从约300mg至约1800mg的组合量的鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯。因此，鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合量可以是，例如，约300mg、约600mg、约1200mg、约1800mg或约2400mg。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合量是约300mg。在一个例子中，该口服配制品包含从约50mg至约300mg的组合量的鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合量是约75mg。在一个例子中，鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合量是约150mg。
在此提供的口服配制品还可以包含pH调节剂或pH稳定赋形剂。该pH调节剂或pH稳定赋形剂可以例如维持口服配制品中的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))和/或渗透增强剂(例如鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯)的最大溶解度。该pH调节剂或pH稳定剂可以例如，在片剂崩解和溶解时在另外可变的肠pH环境中允许弱碱性pH。弱碱性pH对于肽和鹅脱氧胆酸钠溶解度可以是有益的，其进而增加GLP-1肽类似物的全身生物利用度。该pH调节剂或pH稳定赋形剂可以是例如磷酸盐、甘氨酸盐、柠檬酸盐或Tris碱。
该pH调节剂或pH稳定赋形剂可以是例如Tris碱。pH调节剂(例如，Tris碱)的量可以是0至300mg。pH调节剂(例如，Tris碱)的量可以是约30mg至约40mg、约35mg至约40mg或约36至约37mg，例如约36.2mg。Tris碱可以是按重量计该口服配制品的约5％至约10％或约7％至约8％，例如，约7.41％或约7.815％。如以下实例中所提供的，pH调节剂可以增加口服片剂配制品中肽的口服生物利用度。生物利用度的这种增加可以经由(i)使GI道环境的pH增加至有利于肽溶解的pH值的pH调节剂和(ii)存在于所述配制品中的渗透增强剂赋形剂的协同作用来实现。
在以下实例中，胃肠道中肽的吸收部位可以显著增加该肽的绝对口服生物利用度。在此显示，与递送至胃相比，将口服肽配制品递送至近端结肠和近端小肠产生显著更高的绝对口服生物利用度。使吸收部位与配制品的最佳调节相匹配以在该位点处获得所希望的溶解度是本发明的一个实施例。
如在此所提供的，为了增加口服配制品中给出的肽的绝对口服生物利用度，可以经由在指定pH下溶解的肠溶包衣来控制此类配制品在胃肠道内的递送部位。例如，该口服配制品可以在约5至约7.5的pH下溶解。因此，该口服配制品的pH可以是约5、约5.5、约6.0、约7.0或约7.5。在一个例子中，该口服配制品的pH是约5.5。在一个例子中，该口服配制品的pH是约7.0。片剂在特定pH值下的溶解可以用聚合物的肠溶包衣控制，这些肠溶包衣在胃的低pH下是不可溶的，并且在5.5或以上的pH下是可溶的。为了具有最佳的GLP-1肽激动剂(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))吸收，在口服配制品稳定后溶液的pH可以是约7.0至约9.0。如在此所提供的，肠溶包衣聚合物可以是甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸酯共聚物或甲基丙烯酸共聚物。如在此所提供的，肠溶包衣聚合物可以是甲基丙烯酸共聚物(例如，)。
在此提供的用于口服施用的药物组合物可以包含粘膜粘附剂，例如交联聚丙烯酸聚合物(例如，卡波姆，例如
如在此所提供的，该口服配制品可以是持续或延迟释放配制品。诸如交联聚丙烯酸聚合物(例如，卡波姆，例如)或甲基丙烯酸共聚物(例如，)的赋形剂可以用于持续或延迟释放配制品中。肠溶包衣可以例如允许片剂在胃的苛刻低pH环境中完整，并且当片剂达到pH为5.5或以上的近端肠时溶解。这允许GLP-1激动剂肽继续完整并且在溶解时易于全身吸收。
交联聚丙烯酸聚合物(例如
该口服配制品可以包含，例如，约1mg至约50mg的交联聚丙烯酸聚合物，例如该口服配制品可以包含，例如，约1mg至约2mg，例如约1.5mg的交联聚丙烯酸聚合物，例如
交联聚丙烯酸聚合物(例如
该口服配制品中交联聚丙烯酸聚合物，例如(例如，71G)的量可以是约4.9mg至约48.8mg。该口服配制品中交联聚丙烯酸聚合物，例如
除Carbopol 71G之外，其他等级的Carbopol聚合物(如Carbopol971P)可以用于实现控制释放。交联聚丙烯酸聚合物，例如(例如，Carbopol 971P)的量可以是例如按重量计该口服配制品的约0.3％至约3％。在一个例子中，交联聚丙烯酸聚合物，例如(例如，Carbopol 971P)的量是按重量计该口服配制品的约0.63％。在一个例子中，交联聚丙烯酸聚合物，例如(例如，Carbopol971P)的量是按重量计该口服配制品的约3％。
该口服配制品中交联聚丙烯酸聚合物，例如
药物组合物可以包含肠溶包衣。该肠溶包衣可以包含例如甲基丙烯酸共聚物。甲基丙烯酸共聚物(例如，
该药物组合物还可以包含填充剂和/或稀释剂，例如，以用于在制造时为药物粉末共混物提供适合的性质。因此，该药物组合物可以包含甘露醇。药物组合物可以包含例如按重量计该药物组合物的约1％至约30％或约5％至约30％的甘露醇。药物组合物可以包含按重量计该药物组合物的约10％至约20％的甘露醇。药物组合物可以包含按重量计该药物组合物的约15％至约30％的甘露醇。药物组合物可以包含按重量计该药物组合物的约5％至约20％的甘露醇。药物组合物可以包含，例如约1mg至约150mg或约50mg至约100mg的甘露醇。
例如，在一些实施例中，药物组合物(例如，含有Tris碱的药物组合物)包含按重量计该药物组合物的约1％至约20％，例如约1％至约9.35％、约5％至约20％、约9.76％至约18.39％、约10％至约20％、约10.57％至约19.30％、约10.57％至约19.4％、约1％、约9.35％、约9.76％、约18.3％或约18.39％的甘露醇。药物配制品(例如，含有Tris碱的药物配制品)中甘露醇的量可以是约4.9mg、约45.7mg、约46.82mg、约51.8mg、约65.1mg、约75mg、约84.7mg、约88.1mg、约89.6mg、约94.7mg、约94.8mg、约101.8mg。
在一些实施例中，药物组合物(例如，不含Tris碱的药物组合物)包含按重量计该药物组合物的约17％至约30％，例如约17.98％至约26.78％的甘露醇。药物配制品(例如，不含Tris碱的药物配制品)中甘露醇的量可以是约87.9mg、约125.3mg或约130.9mg。
该药物组合物还可以含有崩解剂，例如，允许片剂崩解并充分接触胃肠液以被溶解并全身吸收的崩解剂。因此，该药物组合物可以包含交聚维酮(例如，Kollidon CL)。例如，在一些实施例中，药物组合物(例如含有或缺乏Tris碱的药物组合物)包含按重量计该药物组合物的约1％至约10％、约5％至约6％或约5.81％的交聚维酮(例如，Kollidon CL)。在一些实施例中，药物组合物(例如含有或缺乏Tris碱的药物组合物)包含约25mg至约35mg、约28mg至约29mg或约28.4mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)。
该药物组合物可以包含助流剂，例如，确保在片剂制造期间的粉末流动的助流剂。因此，该药物组合物可以包含气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)。例如，在一些实施例中，药物组合物(例如，含有或缺乏Tris碱的药物组合物)包含按重量计该药物组合物的约0.5％至约5％或约1％的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)。在一些实施例中，药物组合物(例如，含有或缺乏Tris碱的药物组合物)包含约1mg至约10mg或约4mg至约5mg，例如约4.9mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)。
该药物组合物可以包含润滑剂，例如，防止在片剂制造期间的共混物粘附的润滑剂。因此，该药物组合物可以包含硬脂酰富马酸钠。例如，在一些实施例中，药物组合物(例如，含有或缺乏Tris碱的药物组合物)包含按重量计该药物组合物的约1％至约10％或约5％的硬脂酰富马酸钠。在一些实施例中，药物组合物(例如，含有或缺乏Tris碱的药物组合物)包含约20mg至约30mg或约24mg至约25mg，例如约24.4mg的硬脂酰富马酸钠。在一些实施例中，药物组合物(例如，含有Tris碱的药物组合物)包含约12mg至约13mg，例如约12.2mg的硬脂酰富马酸钠。
在此提供的口服配制品可以包含约0.0625mg至约36mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约100mg至约800mg的鹅脱氧胆酸钠；约200mg至约1600mg的没食子酸丙酯；约0mg至约120mg的Tris碱；和/或约0mg至约120的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol 971P)，任选地进一步包含填充剂(例如，甘露醇)、崩解剂(例如，交聚维酮如Kollidon CL)、助流剂(例如，气相二氧化硅如Aerosil 300)和/或润滑剂(例如，硬脂酰富马酸钠)。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，立即释放口服配制品)可以包含按重量计该口服配制品的约0.1％至约10％的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约10％至约30％的鹅脱氧胆酸钠；约15％至约60％的没食子酸丙酯；约5％至约20％的甘露醇、0％至约10％的Tris碱、约2％至约10％的崩解剂(例如，交聚维酮如Kollidon CL)、约1％至约5％的助流剂(例如，气相二氧化硅如Aerosil 300)和/或约1％至约15％的润滑剂(例如，硬脂酰富马酸钠)。这种口服配制品可以任选地包含肠溶包衣，例如使该配制品的重量增加约10％至约15％的甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，控制释放口服配制品)可以包含按重量计该口服配制品的约0.1％至约10％的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约10％至约30％的鹅脱氧胆酸钠；约15％至约60％的没食子酸丙酯；约5％至约20％的甘露醇、0％至约10％的Tris碱、约2％至约10％的崩解剂(例如，交聚维酮如Kollidon CL)、约0.1％至约15％的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol 971P)、约1％至约5％的助流剂(例如，气相二氧化硅如Aerosil 300)和/或约1％至约15％的润滑剂(例如，硬脂酰富马酸钠)。这种口服配制品可以任选地包含肠溶包衣，例如使该配制品的重量增加约10％至约15％的甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，立即释放片剂)可以包含约4.5mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约100mg的鹅脱氧胆酸纳；约200mg的没食子酸丙酯；约101mg至约102mg，例如约101.8mg的甘露醇；约36mg至约37mg，例如约36.2mg的Tris碱；约28mg至约29mg，例如约28.4mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)；约4mg至约5mg，例如约4.9mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)；和/或约12mg至约13mg，例如约12.2mg的硬脂酰富马酸钠。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，控制释放片剂)可以包含约4.5mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约100mg的鹅脱氧胆酸纳；约200mg的没食子酸丙酯；约88mg至约89mg，例如约88.1mg的甘露醇；约36mg至约37mg，例如约36.2mg的Tris碱；约1mg至约2mg，例如约1.5mg(或约0.3％)的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol971P)；约28mg至约29mg，例如约28.4mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)；约4mg至约5mg，例如约4.9mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)；和/或约24mg至约25mg，例如约24.4mg的硬脂酰富马酸钠。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，控制释放片剂)可以包含约4.5mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约100mg的鹅脱氧胆酸纳；约200mg的没食子酸丙酯；约75mg的甘露醇；约36mg至约37mg，例如约36.2mg的Tris碱；约14mg至约15mg，例如约14.6mg(或约3％)的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol 971P)；约28mg至约29mg，例如约28.4mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)；约4mg至约5mg，例如约4.9mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)；和/或约12mg至约13mg，例如约12.2mg的硬脂酰富马酸钠。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，立即释放片剂)可以包含约1mg至约10mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约50mg至约150mg的鹅脱氧胆酸纳；约100mg至约300mg的没食子酸丙酯；约50mg至约150mg的甘露醇；约15mg至约50mg的Tris碱；约10mg至约45mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)；约1mg至约10mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)；和/或约5mg至约25mg的硬脂酰富马酸钠。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，控制释放片剂)可以包含约1mg至约10mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约50mg至约150mg的鹅脱氧胆酸纳；约100mg至约300mg的没食子酸丙酯；约35mg至约135mg的甘露醇；约15mg至约50mg的Tris碱；约1mg至约2mg，例如约1.5mg(或约0.3％)的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol971P)；约28mg至约29mg，例如约28.4mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)；约1mg至约10mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)；和/或约10mg至约50mg的硬脂酰富马酸钠。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品(例如，控制释放片剂)可以包含约1mg至约10mg的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))；约50mg至约150mg的鹅脱氧胆酸纳；约100mg至约300mg的没食子酸丙酯；约25mg至约125mg的甘露醇；约15mg至约50mg的Tris碱；约14mg至约15mg，例如约14.6mg(或约3％)的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol971P)；约28mg至约29mg，例如约28.4mg的交聚维酮(例如，Kollidon CL)；约1mg至约10mg的气相二氧化硅(例如，Aerosil 300)；和/或约5mg至约25mg的硬脂酰富马酸钠。这种口服配制品可以任选地包含约60mg至约61mg，例如约61.2mg的肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)。
在此提供的口服配制品中，肠溶包衣，例如甲基丙烯酸共聚物包衣(例如，Eudragit包衣)可以包含例如，按重量计该口服配制品的约85％至约86％，例如约85.5％的甲基丙烯酸共聚物(例如，Eudragit)和约14％至约15％，例如约14.5％的肠溶包衣增塑剂(例如，PlasACRYL)。
如在此提供的口服配制品可以包含salcaprozate钠(即，N-(8-(2-羟基苯甲酰基)氨基)辛酸钠(SNAC))。
如在此提供的口服配制品可以包含癸酸钠。该配制品可以包含，例如，约300mg癸酸钠至约2400mg癸酸钠。该配制品可以包含，例如，约300mg癸酸钠。该配制品可以包含，例如，约600mg癸酸钠。该配制品可以包含，例如，约900mg癸酸钠。该配制品可以包含，例如，约1200mg癸酸钠。该配制品可以包含，例如，约2400mg癸酸钠。
在包含在此提供的癸酸钠的配制品中，癸酸钠与GLP-1肽类似物(例如，SEQ IDNO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的比例可以是例如10∶1至150∶1。癸酸钠与GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的比例可以是例如15∶1。癸酸钠与GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的比例可以是例如50∶1。癸酸钠与GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的比例可以是例如150∶1。
在此提供的包含癸酸钠的配制品可以包含肠溶包衣，例如具有5.5的pH或具有7.0的pH的肠溶包衣。包含癸酸钠的配制品可以包含交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol)，例如，约0.9％的交联聚丙烯酸聚合物(例如，Carbopol)。
如在此所提供的，该口服配制品可以是固体、液体或凝胶(例如，脂质凝胶)。
固体剂型包括例如片剂和胶囊。片剂包括例如，耐酸胶囊中的片剂、肠溶包衣片剂和微型片剂。微型片剂可以是肠溶包衣的或未包衣的，并负载在耐酸胶囊的肠溶包衣胶囊中。固体剂型(例如，片剂)可以是多单元微粒(MUP)配制品。
液体剂型包括例如，溶液(例如，在水性介质中的溶液)和悬浮液(例如，在基于油的自乳化系统中的悬浮液)。
在此提供的口服配制品可以是控制释放配制品。
在此提供的口服配制品可以包含肠溶包衣。在此提供的口服配制品可以包含聚合物层，例如以获得控制释放或粘膜粘附性质。
如在此提供的，在此提供的口服配制品中施用的GLP-1肽类似物(例如，SEQ IDNO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以在近端结肠中被吸收。在此提供的口服配制品中施用的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以在近端小肠区域中被吸收。在此提供的口服配制品中施用的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以在近端结肠和近端小肠区域中被吸收。
此类口服配制品提供GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的高生物利用度和低药代动力学变化性。此外，此类口服配制品使肽能够具有最佳溶解度，从而能够更好地吸收。在本发明的一个方面，在此鉴别的药物赋形剂在维持GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的溶解度以及破坏紧密连接方面充当双重试剂并充当渗透增强剂。
在此提供的用于口服施用的药物组合物可以包含赋形剂，这些赋形剂提供GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的最佳溶解度和渗透增强作用以提高生物利用度并降低变化性。在一些实施例中，在一种或多种渗透增强剂从药物配制品中释放后，GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))从药物组合物中释放。这种顺序释放可以提高生物利用度并降低GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))的变化性。
在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约2克或更少。在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约1.9克或更少、约1.8克或更少、约1.7克或更少、约1.6克或更少、约1.5克或更少、约1.4克或更少、约1.3克或更少、约1.2克或更少、约1.1克或更少、约1克或更少、约0.9克或更少、约0.8克或更少、约0.7克或更少、约0.6克或更少或约0.5克或更少。
在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约400mg至约500mg。在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约450mg至约500mg。在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约475mg至约500mg。
在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约2克。在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约1.5克。在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约1克。在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约0.5克。
在某些实施例中，在此提供的用于口服施用的药物组合物可以是约488毫克。
VI.通过口服施用GLP-1肽类似物进行的治疗方法
在此提供了口服施用GLP-1肽类似物的方法。
例如，在此提供了治疗受试者的方法，这些方法包括将在此提供的口服配制品中的GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))施用至有需要的受试者。
如在此提供的，口服施用GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以用于治疗或预防由高血糖症或胰岛素释放受损引起或特征在于高血糖症或胰岛素释放受损的疾病或病状。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来治疗糖尿病。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来治疗2型糖尿病。
在某些实施例中，口服施用GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))改进血糖控制、提供体重控制、改进β细胞功能和/或质量、降低胃酸分泌和胃排空的速率或其任何组合。
在某些实施例中，GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以抑制胃运动和/或促进胰岛素释放。GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))因此可以用于加速消除过量脂肪组织、诱导可持续的体重减轻并改进血糖控制。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来治疗肥胖症。在某些实施例中，该受试者患有2型糖尿病。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来减轻体重。在某些实施例中，该受试者患有2型糖尿病。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来降低体脂。在某些实施例中，脂肪是肝脏脂肪。肝脏脂肪的减少可以导致胰岛素敏感性增强和/或肝功能改善。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来控制体重。
在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来预防体重增加、预防脂肪增加(例如，肝脏脂肪)、促进体重减轻、促进脂肪减少(例如，肝脏脂肪)、减轻过重体重、减少脂肪(例如，肝脏脂肪)或治疗肥胖(例如通过控制食欲、进食、食物摄取和/或卡路里摄取)，包括病态肥胖。在某些实施例中，在此的方法包括通过将GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))口服施用至有需要的受试者来治疗或预防由体重过重或体脂过量引起或特征在于体重过重或体脂过量的疾病或病状。
在某些实施例中，口服施用是饮食和运动的辅助。施用还可以减轻体重或治疗肥胖症。在某些实施例中，该受试者具有27至40kg/m2的BMI。在某些实施例中，该受试者具有30至39.9kg/m2的BMI。在某些实施例中，该受试者具有至少40的BMI。在某些实施例中，该受试者超重。在某些实施例中，该受试者是肥胖的。
可以于在此描述的各种方法中口服施用GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸盐(MEDI7219))的受试者包括哺乳动物，例如人、狗、猫、灵长类动物、牛、绵羊、马、猪等。因此，在一些实施例中，该受试者是人。
该GLP-1肽类似物(例如，SEQ ID NO：2或其乙酸铵盐(MEDI7219))可以在适合的诊断后尽快口服施用(例如在数小时或数天内)。在某些实施例中，每天一次口服施用该药物配制品。在某些实施例中，每天两次口服施用该药物配制品。
示例性药物组合物和方法
在此提供了用于口服施用的药物组合物。
在一个例子(I1)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)双脂化GLP-1肽类似物和(ii)鹅脱氧胆酸钠。
在一个例子(I2)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)双脂化GLP-1肽类似物和(ii)没食子酸丙酯。
在I2的一个例子(I3)中，该药物组合物进一步包含鹅脱氧胆酸钠。
在I3的一个例子(I4)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是150∶1至1∶4。在I4的一个例子(I5)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是145∶1。在I4的一个例子(I6)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是29∶1。在I4的一个例子(I7)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是14∶1。在I4的一个例子(I8)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是6.5∶1。在I4的一个例子(I9)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是4∶1。在I4的一个例子(I10)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是2∶1。在I4的一个例子(I11)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是1∶1。在I3的一个例子(I12)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是2∶1至1∶4。在I12的一个例子(I13)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是1∶2。
在I1和I3-I13中任一项的一个例子(I14)中，鹅脱氧胆酸钠的量是约1mg至约1500mg。在I14的一个例子(I15)中，鹅脱氧胆酸钠的量是约100mg至约800mg。在I14的一个例子(I16)中，鹅脱氧胆酸钠的量是约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg或约800mg。在I14的一个例子(I17)中，鹅脱氧胆酸钠的量是约50mg、约65mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约260mg、约280mg、约290mg或约299mg。在I14的一个例子(I18)中，鹅脱氧胆酸钠的量是约100mg。
在I1和I3-I13中任一项的一个例子(I19)中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约15％至约25％。在I19的一个例子(I20)中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约20％至约21％。
在I1和I3-I13中任一项的一个例子(I21)中，鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约15％至约65％，任选地其中鹅脱氧胆酸钠是按重量计该药物组合物的约30％至约65％。
在I2-I21中任一项的一个例子(I22)中，没食子酸丙酯的量是约1mg至约3000mg。在I22的一个例子(I23)中，没食子酸丙酯的量是约200mg至约1600mg。在I22的一个例子(I24)中，没食子酸丙酯的量是约2mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约100mg、约150mg或约200mg。在I22的一个例子(I25)中，没食子酸丙酯的量是约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg或约1600mg。在I22的一个例子(I26)中，没食子酸丙酯的量是约200mg。
在I2-I21中任一项的一个例子(I27)中，没食子酸丙酯是按重量计该药物组合物的约45％至约55％。在I27的一个例子(I28)中，没食子酸丙酯是按重量计该药物组合物的约40％至约41％。
在I1和I41-I21的一个例子(I29)中，该药物组合物不包含没食子酸丙酯。
在I1-I29中任一项的一个例子(I30)中，该药物组合物进一步包含pH调节剂。
在I1-I30中任一项的一个例子(I31)中，该药物组合物进一步包含Tris碱。在I31的一个实例(I32)中，Tris碱的量多达300mg。在I32的一个例子(I33)中，Tris碱的量是约30mg至约40mg。在I32的一个例子(I34)中，Tris碱的量是约36mg至约37mg。在I31的一个例子(I35)中，Tris碱是按重量计该药物组合物的约5％至约10％。在I31的一个例子(I36)中，Tris碱是按重量计该药物组合物的约7％至约8％。
在I1-I29中任一项的一个例子(I37)中，该药物组合物不包含pH调节剂。在I1-I29中任一项的一个例子(I38)中，该药物组合物不包含Tris碱。
在I1-I38中任一项的一个例子(I39)中，该药物组合物包含在约5至约7.5的pH下溶解的肠溶包衣。在I1-I38中任一项的一个例子(I40)中，该药物组合物包含在约5.5或以上的pH下溶解的肠溶包衣。在I1-I38中任一项的一个例子(I41)中，该药物组合物包含在约7.0或以上的pH下溶解的肠溶包衣。
在I1-I41中任一项的一个例子(I42)中，该药物组合物进一步包含生物粘附剂。在I1-I41中任一项的一个例子(I43)中，该药物组合物进一步包含交联聚丙烯酸聚合物。在I43的一个例子(I44)中，这些交联聚丙烯酸聚合物是呈粉末形式或颗粒形式。在I1-I41中任一项的一个例子(I45)中，该药物组合物进一步包含在I42-I45中任一项的一个例子(I46)中，生物粘附剂或交联聚丙烯酸聚合物或
在I45的一个例子(I55)中，该是
在I45的一个例子(I59)中，该是
在I1-I41中任一项的一个例子(I63)中，该药物组合物不包含生物粘附剂。在I1-I41中任一项的一个例子(I64)中，该药物组合物不包含交联聚丙烯酸聚合物。
在I1-I64中任一项的一个例子(I65)中，该药物组合物进一步包含肠溶包衣。在I1-I64中任一项的一个例子(I66)中，该药物组合物进一步包含甲基丙烯酸共聚物。在I1-I64中任一项的一个例子(I67)中，该药物组合物进一步包含
在I1-I72中任一项的一个例子(I73)中，该药物组合物进一步包含填充剂。在I1-I72中任一项的一个例子(I74)中，该药物组合物进一步包含稀释剂。在I1-I72中任一项的一个例子(I75)中，该药物组合物进一步包含甘露醇。在I73-I75中任一项的一个例子(I76)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇的量是约1mg至约150mg。在I76的一个例子(I77)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇的量是约50mg至约100mg。在I76的一个例子(I78)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇的量是约75mg至约150mg。在I73-I75中任一项的一个例子(I79)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约5％至约30％。在I79的一个例子(I80)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约5％至约20％。在I79的一个例子(I81)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约10％至约20％。在I79的一个例子(I82)中，该填充剂、稀释剂或甘露醇是按重量计该药物组合物的约15％至约30％。
在I1-I82中任一项的一个例子(I83)中，该药物组合物进一步包含崩解剂。在I1-I82中任一项的一个例子(I84)中，该药物组合物进一步包含交聚维酮。在I83或I84的一个例子(I85)中，崩解剂或交聚维酮的量是约25mg至约35mg。在I85的一个例子(I86)中，崩解剂或交聚维酮的量是约28mg至约29mg。在I83或I84的一个例子(I87)中，该崩解剂或交聚维酮是按重量计该药物组合物的约1％至约10％。在I87的一个例子(I88)中，该崩解剂或交聚维酮是按重量计该药物组合物的约5％至约6％。
在I1-I88中任一项的一个例子(I89)中，该药物组合物进一步包含助流剂。在I1-I88中任一项的一个例子(I90)中，该药物组合物进一步包含气相二氧化硅。在I89或I90的一个例子(I91)中，助流剂或气相二氧化硅的量是约1mg至约10mg。在I91的一个例子(I92)中，助流剂或气相二氧化硅的量是约4mg至约5mg。在I89或I90的一个例子(I93)中，该助流剂或气相二氧化硅是按重量计该药物组合物的约1％。
在I1-I93中任一项的一个例子(I94)中，该药物组合物进一步包含润滑剂。在I1-I93中任一项的一个例子(I95)中，该药物组合物进一步包含硬脂酰富马酸钠。在I94或I95的一个例子(I96)中，润滑剂或硬脂酰富马酸钠的量是约20mg至约30mg。在I96的一个例子(I97)中，润滑剂或硬脂酰富马酸钠的量是约24mg至约25mg。在I94或I95的一个例子(I98)中，该润滑剂或硬脂酰富马酸钠是按重量计该药物组合物的约5％。
在I1-I98中任一项的一个例子(I99)中，其进一步包含癸酸钠。
在一个例子(I100)中，一种用于口服施用的药物组合物包含双脂化GLP-1肽类似物和N-(8-(2-羟基苯甲酰基)氨基)辛酸钠(SNAC)。
在一个例子(I101)中，一种用于口服施用的药物组合物包含双脂化GLP-1肽类似物和癸酸钠。在I101的一个例子(I102)中，该组合物包含约300mg至约2400mg的癸酸钠。在I102的一个例子(I103)中，该组合物包含约300mg的癸酸钠。在I102的一个例子(I104)中，该组合物包含约600mg的癸酸钠。在I102的一个例子(I105)中，该组合物包含约900mg的癸酸钠。在I102的一个例子(I106)中，该组合物包含约1200mg的癸酸钠。在I102的一个例子(I107)中，该组合物包含约2400mg的癸酸钠。
在I1-I107中任一项的一个例子(I108)中，该GLP-1肽类似物的量是约0.1mg至约100mg。在I1-I107中任一项的一个例子(I109)中，该GLP-1肽类似物的量是约0.0625mg至约36mg。在I1-I107中任一项的一个例子(I110)中，该GLP-1肽类似物的量是约0.25mg至约36mg。在一个例子(I111)中，该GLP-1肽类似物的量是约0.125mg、约4.5mg或约36mg。在I1-I107中任一项的一个例子(I112)中，该GLP-1肽类似物是按重量计该药物组合物的约0.2％至约10％。
在一个例子(I113)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1mg至约100mg的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约1mg至约1500mg的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约1mg至约3000mg的没食子酸丙酯，以及(iv)0至约300mg的Tris碱。在I113的一个例子(I114)中，该药物组合物进一步包含填充剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、生物粘附剂和/或肠溶包衣。在I113的一个例子(I115)中，该药物组合物进一步包含甘露醇、交聚维酮、气相二氧化硅、硬脂酰富马酸钠、交联聚丙烯酸聚合物和/或甲基丙烯酸共聚物。
在一个例子(I116)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1％至约10％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约10％至约30％的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约20％至约60％的没食子酸丙酯。
在一个例子(I117)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1％至约10％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约15％至约25％的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约30％至约50％的没食子酸丙酯。在I116或I117的一个例子(I118)中，该药物组合物进一步包含(iv)约5％至约20％的甘露醇，(v)0至约10％的Tris碱；(vi)约2％至约10％的交聚维酮，(vii)约0.5％至约5％的气相二氧化硅，和/或(viii)约1％至约15％的硬脂酰富马酸钠。
在I116-I118中任一项的一个例子(I119)中，该药物组合物包含约3％至约10％的交聚维酮。在I116-I119中任一项的一个例子(I120)中，该药物组合物包含约1％至约5％的气相二氧化硅。
在一个例子(I121)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.256％至约7.364％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约20.5％的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约40.9％的没食子酸丙酯，(iv)约6.833％至约18.903％的甘露醇，(v)0至约7.815％的Tris碱；(vi)约5.81％的交聚维酮，(vii)约1％的气相二氧化硅，以及(viii)约2％至约10％的硬脂酰富马酸钠。
在一个例子(I122)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.256％至约7.364％的双脂化GLP-1肽类似物，(ii)约20.5％的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约40.9％的没食子酸丙酯，(iv)约6.833％至约18.903％的甘露醇，(v)0至约7.815％的Tris碱；(vi)约5.81％的交聚维酮，(vii)约0.3％至约10％的交联聚丙烯酸聚合物，(viii)约1％的气相二氧化硅，以及(ix)约2％至约10％的硬脂酰富马酸钠。
在一个例子(I123)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约0.1mg至约40mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约75mg至约125mg的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约150mg至约250mg的没食子酸丙酯。在I123的一个例子(I124)中，该药物组合物进一步包含(iv)约40mg至约125mg的甘露醇，(v)0至约45mg的Tris碱，(vi)约25mg至约35mg的交聚维酮，(vii)约1mg至约10mg的气相二氧化硅，以及(viii)约20mg至约30mg的硬脂酰富马酸钠。
在一个例子(I125)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约1.25mg、约4.5mg或约36mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约100mg的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约200mg的没食子酸丙酯，(iv)约94.7mg、约89.6mg或约51.8mg的甘露醇，(v)0至约36.2mg的Tris碱，(vi)约28.4mg的交聚维酮，(vii)约4.9mg的气相二氧化硅，以及(viii)约24.4mg的硬脂酰富马酸钠。
在一个例子(I126)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约1mg至约10mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约50mg至约150mg的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约100mg至约300mg的没食子酸丙酯。在I126的一个例子(I127)中，进一步包含(iv)约50mg至约150mg的甘露醇，(v)0至约50mg的Tris碱，(vi)约10mg至约45mg的交聚维酮，(vii)约1mg至约10mg的气相二氧化硅，以及(viii)约5mg至约25mg的硬脂酰富马酸钠。
在一个例子(I128)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约4.5mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约100mg的鹅脱氧胆酸钠，(iii)约200mg的没食子酸丙酯，(iv)约101.8mg至约138mg、约88.1mg至约124.3mg、或约75mg或11.2mg的甘露醇，(v)0至约36.2mg的Tris碱，(vi)0mg、约1.5mg或约14.6mg的交联聚丙烯酸聚合物，(vii)约28.4mg的交聚维酮，(viii)约4.9mg的气相二氧化硅，以及(ix)约12.2mg或24.4mg的硬脂酰富马酸钠。
在一个例子(I129)中，一种用于口服施用的药物组合物包含(i)约1至约15mg的双脂化GLP-1肽类似物；(ii)约100mg至约800mg的鹅脱氧胆酸钠，以及(iii)约200mg至约1600mg的没食子酸丙酯。在I129的一个例子(I130)中，该药物组合物包含约300mg至约400mg的鹅脱氧胆酸钠和约600mg至约800mg的没食子酸丙酯。在I129或I130的一个例子(I131)中，该药物组合物进一步包含甘露醇、Tris、气相二氧化硅和/或硬脂酰富马酸钠。在I129-I131中任一项的一个例子(I132)中，该药物组合物进一步包含约50mg至约150mg的甘露醇、0至约50mg的Tris碱、约10mg至约45mg的交聚维酮、约1mg至约10mg的气相二氧化硅和/或约5mg至约25mg的硬脂酰富马酸钠。在I129-I132中任一项的一个例子(I133)中，该药物组合物进一步包含交联聚丙烯酸聚合物。
在I116-I133中任一项的一个例子(I134)中，该药物组合物包含肠溶包衣。在I134的一个例子(I135)中，该肠溶包衣包含甲基丙烯酸共聚物。
在I113-I135中任一项的一个例子(I136)中，鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的比例是约1∶2。在I113-I136中任一项的一个例子(I137)中，该药物组合物包含Tris碱。在I113-I136中任一项的一个例子(I138)中，该药物组合物不包含Tris碱。
在I1-I138中任一项的一个例子(I139)中，该GLP-1肽类似物包含SEQ ID NO：2-10或12-15中的任一个或其盐。在I139的一个例子(I140)中，该GLP-1肽类似物包含SEQ IDNO：2或其盐。在I140的一个例子(I141)中，该GLP-1肽包含SEQ ID NO：2以及其乙酸铵盐。在I140的一个例子(I142)中，该GLP-1肽包含SEQ ID NO：2的乙酸铵盐。
在I1-I142中任一项的一个例子(I143)中，该药物组合物是固体剂型。在I1-I142中任一项的一个例子(I144)中，该药物组合物是呈片剂、硬胶囊或软胶囊的形式。
在I1-I144中任一项的一个例子(I145)中，该药物组合物是立即释放、肠溶包衣、持续释放或延迟释放组合物。
在I1-I145中任一项的一个例子(I146)中，该GLP-1肽类似物在近端结肠中被吸收。在I1-I146中任一项的一个例子(I147)中，该GLP-1肽类似物在近端小肠区域中被吸收。在I1-I147中任一项的一个例子(I148)中，该GLP-1肽类似物在近端结肠和近端小肠区域中被吸收。
在I1-I148中任一项的一个例子(I149)中，将该药物组合物施用至人产生约0.5％至约35％的生物利用度。在I1-I149中任一项的一个例子(I150)中，施用该药物组合物产生不超过100％或以上、50％或以上、25％或以上并且在每日重复施用后降低的pK变化性。
在I1-I150中任一项的一个例子(I151)中，该药物组合物在崩解测试测定中具有约5分钟至约100分钟的崩解时间。在I1-I151中任一项的一个例子(I152)中，该药物组合物在溶解测试测定中具有约10分钟至约500分钟的溶解时间。
在I1-I152中任一项的一个例子(I153)中，该药物组合物是少于2克、少于1.5克、少于1.0克或少于0.5克。在I1-I152中任一项的一个例子(I155)中，该药物组合物是约400mg至约500mg。
在此还提供了方法。
在一个例子(I155)中，一种改进血糖控制的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I156)中，一种治疗或预防由高血糖症或胰岛素释放受损引起或特征在于高血糖症或胰岛素释放受损的疾病或病状的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I157)中，一种治疗或预防糖尿病的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在I157的一个例子(I158)中，该糖尿病是2型糖尿病。
在一个例子(I159)中，一种减轻体重的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I160)中，一种降低体脂的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I161)中，一种治疗肥胖症的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I162)中，一种治疗或预防由体重过重引起或特征在于体重过重的疾病或病状的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I163)中，一种控制体重的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在一个例子(I164)中，增加脂质氧化的方法包括将I1-I154中任一项的药物组合物施用至有需要的受试者。在I156和I159-I164中任一项的一个例子(I165)中，该受试者患有糖尿病。在I165的一个例子(I166)中，该糖尿病是2型糖尿病。在I156-I166中任一项的一个例子(I167)中，该受试者的食欲下降。在I156-I167中任一项的一个例子(I168)中，该药物组合物每天施用一次。在I156-I168中任一项的一个例子(I169)中，该受试者是人。
在一个例子(I170)中，一种制备I3-I28、I30-I99和I108-I156中任一项的药物组合物的方法包括将GLP-1肽类似物、鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯组合成口服药物组合物。
***
相关领域的普通技术人员容易清楚的将是在不背离任何这些实施例的范围的情况下，可以对在此所述的这些方法和应用做出其他适合的修改和适配。以下实例仅出于说明的目的被特此包括并且不旨在是限制性的。
实例
材料和方法
以下材料和方法用于以下实例中的血浆(例如，大鼠或狗血浆)中GLP-1肽类似物的定量测量。这些方法使用与岛津(Shimadzu)超高效液相色谱(UHPLC)耦合的SCIEX 6600三重TOF质谱仪。该方法的特异性通过保留时间、单反应监测(SRM)模式的选定质量和MS/MS(MS2)模式中的选定片段质量来确保。MEDI7219(SEQ ID NO：2)及其变体具有复杂的碎裂模式。存在超过20个具有相似信号强度的碎片离子。然而，利用三重飞行时间(TOF)收集所有碎片离子并对多个高分辨率碎片离子求和的能力显著增强测定灵敏度。从血浆(一种复杂的生物基质)分析目标分析物。尽管使用有机溶剂的蛋白质沉淀可以减少基质干扰，但仍然存在显著背景。通过三重TOF质谱仪提供的高质量精度进一步消除了背景噪声，从而增强信号：噪声(S/N)并允许改进量化。
以下试剂和材料用于提取GLP-1激动剂血浆：
·水(HPLC级)
·乙腈(HPLC级)
·甲酸(HPLC级)
·甲醇(HPLC级)
·GLP-1激动剂肽(SEQ ID NO：3，MEDI7219(SEQ ID NO：2)等)
·Eppendorf蛋白质低结合管
·Eppendorf蛋白质低结合96孔板(1mL)
·汇集的血浆(物种取决于研究，所测试的大鼠和狗血浆)
·分析柱：沃特世BEH C18 100mm 2.1mm 1.7μm柱
·沉淀溶液乙腈∶水＝3∶1(v/v)
·重构溶液：乙腈∶水＝1∶4(v/v)
血浆提取程序使用以下步骤：
·将样品、标准品和质量对照孵育直到它们达到室温。然后将它们在60℃孵育2分钟并冷却至室温，涡旋并离心。
·将70μL的样品、标准品或质量对照转移到1mL 96孔板中。
·在每个孔中，添加420uL的沉淀溶液。将板密封并在板振荡器上以600rpm振荡10分钟。
·将板在18G、2500RFC、20℃下离心10分钟。
·小心地取出板，并且用200uL多通道移液管将上层澄清上清液提取到新的96孔蛋白质低结合板中。每孔提取上清液两次，并且合并上清液。
·将板置于TurboVap中，并用加热的(65℃)氮气在60华氏度(Fh)下完全干燥提取的上清液。
·在板完全干燥后，盖上板并在室温下孵育至少30分钟，直到板恢复回到环境温度。
·向每个孔中添加150μL的重构溶液。用可刺穿的密封垫覆盖该板，并以600rpm振荡10分钟。
·将样品在制备当天提交至LC-MS/MS
使用以下步骤进行液相色谱法(LC)：
·流动相A：水中的0.2％(v/v)甲酸
·流动相B：乙腈中的0.2％(v/v)甲酸
·洗涤溶液：甲醇∶乙腈∶水＝5∶4∶1(v/v/v)
·另外的LC参数总结在以下表中：
·所采用的液相色谱条件
分析柱
沃特世BEH C18 100mm
柱温度
60℃
流速
0.7mL/min
典型起始压力
9700psi
自动进样器温度
20℃
注入体积(环路尺寸)
40μL(50μL)
高分辨率SCIEX 6600仪器上的数据采集如下进行：
·注入样品并如上所述用反相色谱法分离，然后电离并用三重TOF质谱仪进行分析。
·每个样品的数据文件包括两个实验。实验1是TOF全扫描(m/z 400-1900)，并且实验2是靶标化合物的产物离子扫描。
·与传统的MRM实验不同(其中仅监测靶标分析物中的产物离子中的一种)，在三重TOF仪器中，监测并记录整个MS/MS谱。
·每种GLP-1肽类似物的前体和碎片离子在下文以下表中列出：
GLP-1肽类似物的前体和碎片离子质量
·实验1和实验2的诸如仪器采集参数的另外信息在附录A中提供，并且特异于MEDI7219(SEQ ID NO：2)。
然后如下进行使用高分辨率SCIEX 6600仪器获得的数据的定量：
·对于定量，生成使用以每个碎片离子的精确质量为中心的0.2Da m/z提取窗口的提取离子色谱图(XIC)。从化合物的结构计算精确的质量。窄m/z窗口确保了提取的峰面积的特异性。
·对于每个前体离子，多个碎片离子用于基于以下生成XIC：
·MS2谱中的强峰强度；
·m/z范围：400-1900；
·与来自结构的预测的碎裂模式一致。
·对色谱图求积分，并且使用Signal Finder算法计算峰面积，并使用SCIEX的
·通过质量对照样品控制测定的质量。
·实验1或实验2均可以用于以高分辨率模式定量GLP-1肽类似物。
如下进行传统三重四极仪器(SCIEX 5500)上的数据采集：
·注入样品并如上所述用反相色谱法分离，然后电离并用三重四极质谱仪进行分析。
·每个样品的数据文件包括一个SRM实验。监测靶标化合物的两种产物离子。
然后如下进行使用传统三重四极仪器(SCIEX 5500)获得的数据的定量：
·使用所监测到的两种中具有更高信号强度的产物离子来生成用于分析的色谱图。
·通过对从上述SRM扫描生成的色谱图积分并计算峰面积来实现靶标分析物的定量。通过使用峰面积对分析物浓度的线性拟合的回归分析获得未知样品中的靶标分析物的浓度，按1/(浓度)2加权。
·通过质量对照样品控制测定的质量。
实例1
使用Caco-2细胞系模型的体外研究揭示了癸酸钠、烷基糖、胆汁盐以及胆汁盐与没食子酸丙酯组合作为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)肽类似物的渗透增强剂。
Caco-2细胞系是异质人上皮结肠直肠腺癌细胞的连续细胞系，该细胞系当在特定条件下培养时变得分化且极化，以使得它们在形态和功能上的表型类似于内衬小肠的肠上皮细胞。Caco-2细胞表达紧密连接、微绒毛和许多为此类肠上皮细胞所特有的酶和转运蛋白。Caco-2细胞最常用作紧密连接单层，该单层为药物通过提供物理和生物化学屏障，并且因此充当人小肠粘膜的体外模型以预测口服施用的药物的吸收。通过Cyprotex US有限公司(马萨诸塞州，美国)进行Caco-2渗透性测定以评估不同渗透增强剂的功效。将Caco-2细胞在Transwell过滤器上生长，直至达到约1000欧姆/cm2的跨上皮电阻。将细胞与含有测试样品的培养基一起在细胞层的顶端(顶)侧上，并与空白培养基一起在细胞层的基底(下)侧上孵育3小时。在三小时后分别收集来自顶端侧和基底侧的培养基，并评价每一例上存在的肽的量。表2给出各种测试样品的渗透系数(Papp)，这些样品包括在不同赋形剂存在下的SEQID NO：3GLP-1肽。
使用以下等式计算所有多肽的表观渗透系数(Papp)：Papp＝dQ/dt x 1/A C0
其中dQ/dt是在时间dt跨Caco-2屏障转运的溶质的量，C0是在时间零点的顶端室中的溶质浓度，并且A是与顶端溶液接触的上皮的横截面积。
25mg/mL的鹅脱氧胆酸钠产生SEQ ID NO：3肽跨Caco-2细胞层的最高渗透性(Papp＝10.3)。
表2：Caco-2中各种渗透增强剂对SEQ ID NO：3肽的渗透性的影响。
实例2
进行下一个Caco-2研究以评价另外的赋形剂增强SEQ ID NO：3肽跨紧密连接细胞层的渗透性的能力。此研究的细节列于表3中。鹅脱氧胆酸钠(25mg/mL)和没食子酸丙酯(12.5mg/mL)的组合产生SEQ ID NO：3肽的最高渗透性(Papp＝43.1)。
表3：Caco-2研究中各种渗透增强剂对SEQ ID NO：3肽的渗透性的影响。
实例3
进行以下Caco-2研究以评价在各种渗透增强剂存在下不同肽的渗透性。表4提供了该研究的细节。通过将转运的分子的累积量除以原始负载量来计算渗透率(％)。通过HPLC分析在孵育预定时间段后起始样品以及顶端和基底溶液中肽的浓度。25mg/mL的鹅脱氧胆酸钠影响每种测试的肽的最高渗透性(表4)。
表4：Caco-2研究中各种渗透增强剂对脂化肽的渗透性的影响。
样品描述
渗透率(％)
0.1mg/mL SEQ ID NO：3
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
12.6
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
1.7
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，25mg/mL壳聚糖
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，5.0mg/mL壳聚糖
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，25mg/mL Tri-Me-壳聚糖
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，5.0mg/mL Tri-Me-壳聚糖
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，25mg/mL辛基β-D-吡喃葡萄糖苷
2.0
0.1mg/mL SEQ ID NO：3，5.0mg/mL辛基β-D-吡喃葡萄糖苷
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：4，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
14.3
0.1mg/mL SEQ ID NO：4，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
0
0.1mg/mL SEQ ID NO：5，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
10.4
0.1mg/mL SEQ ID NO：5，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
3.2
0.1mg/mL SEQ ID NO：6，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
13.3
0.1mg/mL SEQ ID NO：6，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
1.21
0.1mg/mL SEQ ID NO：7，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
10.3
0.1mg/mL SEQ ID NO：7，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
2.1
0.1mg/mL SEQ ID NO：8，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
11.6
0.1mg/mL SEQ ID NO：8，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
1.7
0.1mg/mL SEQ ID NO：9，25mg/mL鹅脱氧胆酸纳
13.9
0.1mg/mL SEQ ID NO：9，5.0mg/mL鹅脱氧胆酸纳
3.1
总之，体外Caco-2研究揭示了没食子酸丙酯和鹅脱氧胆酸钠的协同功效。单独没食子酸丙酯未显示跨细胞层的肽渗透性(并且因此无生物利用度)(表3)。单独鹅脱氧胆酸钠展示14.3％肽渗透性的最大值(表4)。然而，在组合中，没食子酸丙酯和鹅脱氧胆酸钠展示43.1％的肽渗透(表3)。
实例4
在作为体内系统的大鼠中进行十二指肠内(ID)研究，以证明在Caco-2研究中获得的渗透增强剂的功效。将包含GLP-1肽类似物的溶液配制品在小肠的十二指肠区段中注射到大鼠中。第一项ID研究涉及使用作为渗透增强剂的癸酸钠和SEQ ID NO：3GLP-1肽类似物。表5提供了此大鼠ID研究的细节。绝对生物利用度(％F)是在口服或在当前实例中十二指肠内后全身药物暴露的百分比表示的量度，用静脉内(IV)施用药物溶液产生施用至全身暴露。绝对生物利用度，(％F)被计算为IV施用的AUC的全身或血液药物浓度曲线下面积(AUC)的百分比(调整至经由这些施用途径给与的药物量)。获得的配制品细节和药代动力学参数在表5中列出。虽然SEQ ID NO：3在无任何配制品干预、在十二指肠内施用的情况下具有低绝对生物利用度(％F)(0.035％)，但是通过添加50mg/kg癸酸钠，SEQ ID NO：3肽的生物利用度被提高约20倍(至0.71％)(参见表5)。在施用50mg/kg癸酸钠后，胃肠(GI)道组织在显微镜评价时看起来正常。
表5：用于测试癸酸钠作为渗透增强剂的体内功效的大鼠十二指肠内研究的设计和结果。
实例5
在初始大鼠ID研究之后，进行第二大鼠ID施用研究以评价从Caco-2模型研究中鉴别的渗透增强剂的影响。即，测试了十四烷基麦芽糖苷、鹅脱氧胆酸钠以及鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的组合对SEQ ID NO：3肽的口服生物利用度的影响(表6)。
该第二大鼠ID研究揭示，针对1mg/kg剂量的SEQ ID NO：3肽测试的最有效的渗透增强剂(PE)是50mg/kg鹅脱氧胆酸钠与25mg/kg没食子酸丙酯的组合，该组合使SEQ ID NO：3肽口服生物利用度增加约20倍至0.39％(表6)。相比之下，在第一大鼠ID研究中1mg/kgSEQ ID NO：3肽剂量的渗透的最佳改进仅是约5倍(至0.15％)，其是用50mg/kg癸酸钠实现的(表5)。
表6：用于评价在Caco-2研究中鉴别的渗透增强剂的体内功效的十二指肠内研究中SEQ ID NO：3肽溶液配制品的设计和药代动力学参数。
实例6
用在禁食状态模拟肠液(FASSIF)中评价了单或双脂化肽的蛋白水解抗性。如通过Galia，Nicolaides，Reppas和Dressman：Pharm.Res.[药物研究]15(1998)698-705所描述来制备FASSIF/P(禁食状态模拟肠液+USP)的新鲜悬浮液。所得配制品在蛋白水解上相当于约375个单位/mL(375kU/L)并且不经储存立即使用。最初将用于评价的肽(1.0mg，约250纳摩尔)溶解于不含的预加温的FASSIF(200μL)中，向该FASSIF添加预加温的新鲜(100μL)以引发潜在消化。在瞬息间涡旋Eppendorf反应管之后，将混合物在37℃下在恒温水浴中孵育实验的持续时间。将共孵育的肽-酶混合物的25μL等分部分周期性地取出(t＝0、5m、10m、15m、30m、1h、2h)，并且通过添加10％TFA于1∶1水/乙腈中的溶液(75μL)立即淬灭，以阻滞蛋白水解活性。将淬灭的样品离心(7800RPM，3分钟)以沉淀固体，并如下通过LC/MS和/或分析型RP-HPLC来分析上清液的30μL等分部分。
LC/MS方法：用10％-90％MeCN(0.1％TFA v/v)于水(0.1％TFA v/v)中的线性二元梯度以1.5mL min-1在环境温度下经30分钟洗脱Agilent Polaris C8-A柱(4.6×100mm，3微米)，其中检测通过在210nm处的UV吸收和使用沃特世3100质量检测器(ESI+模式)的电离化两者进行。根据分子量鉴别衍生自酶水解的肽片段，从而找出裂解位点。
分析型RP-HPLC方法：使用10％-90％MeCN(0.1％TFA v/v)于水(0.1％TFA v/v)中的线性二元梯度以1.5mL min-1在40℃下经10或15分钟洗脱Agilent Polaris C8-A柱(4.6×100mm，3微米)，其中检测通过在210nm处的UV吸收进行。手动积分(AUC)实现对实验时程内的剩余完整肽的估计(图2A)。
进行第三大鼠ID输注研究以将稳定化肽MEDI7219(SEQ ID NO：2)和SEQ ID NO：6的生物利用度与索马鲁肽，H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glv-Gln-Ala-Ala-Lvs(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-17-羧基十七酰基)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH(SEQ ID NO：11)，(诺和诺德公司(Novo Nordisk))(一种未稳定化GLP-1肽类似物)的生物利用度进行比较，索马鲁肽在它的序列中仅具有Aib用于保护免于循环DPP-IV肽酶，(表7和图2B)。在相似条件下SEQ ID NO：6和MEDI7219(SEQID NO：2)稳定化肽两者均具有比索马鲁肽显著更高的经由ID途径的绝对生物利用度，这最可能是由于它们改进了胃肠蛋白酶稳定性。
表7：用于比较MEDI7219(SEQ ID NO：2)和SEQ ID NO：6肽配制品的生物利用度与索马鲁肽配制品的生物利用度的大鼠十二指肠内研究的设计和结果。
实例7
以下大鼠ID研究比较了在大鼠中十二指肠内施用后用新的渗透增强剂配制品配制的MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的口服生物利用度。将所有测试物品制备为50mM Tris、150mM甘露醇、0.02％聚山梨醇酯80(pH 8.5)中的溶液。表8给出配制品和药代动力学分析细节。在所测试的渗透增强剂中，鹅脱氧胆酸和没食子酸乙酯的组合与鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合同样作用或比鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合更好地作用，分别提供2.14％和1.96％的生物利用度。鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的对照产生1.45％的生物利用度。表8：用于评估用各种渗透增强剂配制的MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的口服生物利用度的大鼠十二指肠内研究的研究设计和药代动力学参数。
此研究比较了在大鼠中十二指肠内施用后在另外的渗透增强剂配制品中配制的MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的口服生物利用度。鹅脱氧胆酸和没食子酸乙酯与鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯同样作用或比鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯更好地作用，与对照鹅脱氧胆酸纳、没食子酸丙酯组中F＝1.45％相比，提供F＝2.14％和1.96％。
实例8
进行下一大鼠ID施用研究以评估含有新的没食子酸酯衍生物、2-(3，4，5-三羟基苯甲酰氧基)乙酸钠和丁酸钠、胆酸钠与没食子酸丙酯、癸酸钠与没食子酸丙酯，癸酸钠与没食子酸丙酯和柠檬酸、以及蔗糖单十二烷酸酯的MEDI7219(SEQ ID NO：2)配制品的口服生物利用度和药代动力学。
表9：用于评估用各种渗透增强剂配制的MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的口服生物利用度的大鼠十二指肠内研究的设计和结果。
新的没食子酸酯衍生物和2-(3，4，5-三羟基苯甲酰氧基)乙酸钠和丁酸钠不能用作所测试的肽的渗透增强剂。添加鹅脱氧胆酸钠可提高这些赋形剂的生物利用度。没食子酸丙酯与胆酸钠的组合导致没有生物利用度，这与用没食子酸丙酯与鹅脱氧胆酸钠的组合获得的最高观察到的生物利用度相反。癸酸钠和没食子酸丙酯的组合产生约0.6％的中等生物利用度。因此，癸酸钠可以改进口服施用的肽的生物利用度。添加柠檬酸使MEDI7219(SEQ ID NO：2)暴露降低至低于定量水平。
实例9
渗透增强剂鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯以及MEDI7219(SEQ ID NO：2)GLP-1肽类似物的溶解度独立地进行研究，并且还在pH范围为5.0至9.0的磷酸盐缓冲液中组合进行研究。将已知量的渗透增强剂、肽或两者与递增量的缓冲液组合，直到渗透增强剂和/或肽完全溶解。图3和表9-13示出溶解度数据。没食子酸丙酯在pH 7.5和以上具有低溶解度。鹅脱氧胆酸钠的最佳溶解度是在pH 7.5和以上的范围内。鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯的组合在pH 7.0以上是可溶的。MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的溶解度在pH 7.0至9.0的范围内增加。添加鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯不会改变MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的溶解度概况，其保持在pH 7.0至9.0的范围内。
因此，为了具有最佳的MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽吸收，在剂型稳定后溶液的pH应在7.0至9.0的范围内。该最佳pH可以通过添加缓冲盐来实现，这些缓冲盐在胃肠(GI)道中在剂型崩解/溶解部位处产生并维持正确的pH范围。在该组合物中鉴别的这些赋形剂使肽能够具有最佳溶解度，从而能够更好地吸收。在本发明的一个方面，在此鉴别的药物赋形剂在维持肽的溶解度以及破坏紧密连接和提供渗透增强剂的作用方面充当双重试剂。
表10：没食子酸丙酯在磷酸盐缓冲液中的溶解度。
表11：鹅脱氧胆酸钠在磷酸盐缓冲液中的溶解度。
表12：没食子酸丙酯和鹅脱氧胆酸钠在磷酸盐缓冲液中的溶解度。
表13：MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽在磷酸盐缓冲液中的溶解度。
表14：在没食子酸丙酯和鹅脱氧胆酸纳存在下MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽磷酸盐缓冲液中的溶解度。
实例10
系统(一种电子口服药物递送和监测装置)用于确定溶液配制品的区域吸收。呈胶囊形式，
表15：犬科动物吸收部位研究中的设计和SEQ ID NO：3的药代动力学参数。
利用给药胶囊的此研究揭示了犬科动物的GI道的近端结肠中的最高SEQ ID NO：3肽吸收，其次是近端小肠区域。因此，近端结肠和近端小肠代表用于SEQ IDNO：3肽递送的最佳区域，以实现肽的高生物利用度。相比之下，当使动物通过口服管饲给药到胃中时，观察到显著较低的生物利用度。
实例11
进行另外的吸收部位研究以评价在将IntelliCap胶囊口服施用至犬科动物(比格犬)后，SEQ ID NO：5GLP-1肽类似物溶液配制品的最佳吸收部位。研究了将SEQ ID NO：5肽递送至近端小肠(在通过幽门后)、远端小肠(在通过回盲肠前)和近端结肠(在通过回盲肠后)。表16中提供了该研究的细节。此研究的结果证实了用SEQ ID NO：3肽(实例10)进行的第一吸收部位研究的发现，其中在比格犬的GI道的近端结肠中观察到最大吸收，其次是近端小肠区域。
表16：犬科动物吸收部位研究中的设计和在溶液配制品给药后SEQ ID NO：5肽的药代动力学参数。
在比格犬的GI道的近端结肠中观察到最大SEQ ID NO：5肽吸收，其次是近端小肠区域。
实例12
进行第三吸收部位研究以评价犬科动物中的吸收部位和耐酸胶囊中的片剂配制品。给药至狗的片剂配制品组合物提供于表17中。片剂制造方法是如下：将所有成分通过US筛#35(0.5mm开口)，并使用压粒机压实所得粉末。将压实的材料再次通过US筛#35(0.5mm开口)以形成颗粒。然后将片剂在0.30至0.45吨的负荷和34至42N的硬度下压制以确定片剂崩解时间，发现在这些条件下片剂崩解时间是4.40至6.30分钟。将此研究中的片剂置于耐酸胶囊(表18，第1组和第2组)或(表18，第3组和第4组)中。PK参数在表18中进行了描述，并且PK概况在图6-图8中提供。表17提供了使用
表17：在吸收部位犬科动物研究中测试的片剂配制品组合物。
表18：吸收部位犬科动物研究的设计和在片剂后SEQ ID NO：6肽的药代动力学参数。
表19：使用IntelliCap测量的平均胃肠传输时间，hh：mm和范围(最小-最大hh：mm)
发现靶向小肠和结肠的
实例13
使用从犬科动物中测试的上述配制品获得的药代动力学数据对片剂配制品进行优化，其表明鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的组合提供有利的结果(表20)。在此研究中测试的配制品含有MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽，而SEQ ID NO：6肽用于实例12中的先前犬科动物研究的片剂配制品中。在给药前将片剂置于耐酸胶囊中(一片/胶囊)。第8组配制品的生物利用度最高(10.7％)，PK变化性最小(26％)。(表20)。此配制品含有0.1mg/kg MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽和300mg由1∶2比例的鹅脱氧胆酸钠与没食子酸丙酯组成的总渗透增强剂(PE)。与2∶1比例的这些渗透增强剂相比(第9组，表20)，这种比例更好地起作用。此研究还证实了Tris碱作为pH稳定剂的效用。
表20：犬科动物研究中的设计和在耐酸胶囊中的片剂给药后MEDI7219(SEQ IDNO：2)的药代动力学参数。
实例14
在以下犬科动物研究中进一步建立了片剂优化。此研究的目的是评价第8组片剂配制品(实例13，表20)作为肠溶包衣(EC)片剂的性能并评价此配制品的重复给药。将在pH5.5或以上溶解的Eudragit配方作为肠溶包衣施加至片剂。在此犬科动物研究中测试的配制品在表21中列出。重复给药方案在图9中示出。在第0天施用肠溶包衣片剂，然后进行1周清除。在清除后，动物在第7、8、9、10和11天接受另外的剂量。研究的多个给药臂中MEDI7219(SEQ ID NO：2)的药代动力学概况在图10中示出。
表21：犬科动物中的设计和给药后MEDI7219(SEQ ID NO：2)肠溶包衣片剂的药代动力学参数。
肠溶包衣第2组片剂配制品(表21)(其包括1mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)、100mg鹅脱氧胆酸钠和200mg没食子酸丙酯)产生4.6％的绝对生物利用度，但具有92％的高PK变化性。肠溶包衣片剂的重复给药产生一致的生物利用度，在随后的给药日具有降低的PK变化性。
实例15
执行下一犬科动物研究(表22)以确认来自先前研究(实例14，第2组配制品，表21)的配制品在1、3和10mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽剂量下的性能。第二目标是探讨呈肠溶包衣片剂形式的围绕第2组配制品设计的具有不同比例和量的渗透增强剂的配制品组合物的对生物利用度和药代动力学变化性的影响。测试了以下配制品变量：1∶1、1∶2和1∶3的鹅脱氧胆酸钠：没食子酸丙酯比例；1∶2比例的150、300和450mg渗透增强剂；以及1、3和10mg肽剂量。所有片剂用在pH 5.5和以上溶解的Eudragit配方肠溶包衣。
此研究的设计和结果在表22中描述。已证实了肠溶包衣片剂中的第2组配制品(1mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽、100mg鹅脱氧胆酸钠和200mg没食子酸丙酯)的绝对口服生物利用度＞4％。结果表明肽生物利用度取决于剂量，对于1mg剂量为4.2％，对于3mg剂量为15.5％，并且对于10mg剂量为7.5％。与第2组配制品(即，50mg鹅脱氧胆酸钠和100mg没食子酸丙酯)相比，较低量的渗透增强剂仍产生对于3mg剂量11.1％且对于10mg剂量13.5％的非常高的生物利用度。因此，较低量的渗透增强剂增强了10mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)的生物利用度。
表22：犬科动物中的设计和给药后MEDI7219(SEQ ID NO：2)肠溶包衣片剂的药代动力学参数。
实例16
使用MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽和渗透增强剂制备了十种不同的多单元微粒(MUPS)配制品(表23)。MUPS配制品的制造方法是如下。在水中制备MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽、鹅脱氧胆酸钠和没食子酸丙酯的溶液，并在Glatt Mini流化床涂布机中喷涂到糖球上。在干燥后，将涂覆有肽和渗透增强剂的糖球包衣以产生表23中所描述的组合物。表23中提供了此犬科动物研究的设计和结果的细节。
表23：犬科动物中的设计和MEDI7219(SEQ ID NO：2)MUPS配制品口服给药的药代动力学参数。
实例17
在下一犬科动物研究中，评价了MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽的生物粘附和控制释放配制品组合物的生物性能。表24提供了此研究的配制品细节。发现静脉内暴露数据在先前的研究中是一致的，并且用于计算绝对口服生物利用度
表24：犬科动物中的设计和MEDI7219(SEQ ID NO：2)控制释放和生物粘附片剂配制品的药代动力学参数。
如表24中所示，含有Carbopol 71G的配制品与立即释放肠溶包衣片剂可比较地表现好，而Eudragit RSPO持续释放配制品表现不佳。
也可以经由添加其他控制释放赋形剂来实现控制释放。例如，Carbopol 971P可以以0.3#至3.0％的水平用于片剂中。在pH 5.5或pH 7.0溶解的肠溶包衣(作为实例)可以用于精细控制肠溶包衣开始溶解的肠部位。
实例18
MEDI7219(SEQ ID NO：2)配制品在以下犬科动物研究中进行了微调，该研究旨在优化肠溶包衣片剂配制品组合物：
-评价较低PE剂量配制品150和75mg量的性能
-评价MEDI7219(SEQ ID NO：2)肽剂量3和6mg的影响：了解是否存在介于3与10mg之间的肽浓度趋势。
-评价肠溶包衣pH 5.5或7.0对生物利用度的影响
-评价Tris碱在肽的溶解度和生物利用度中的作用
-评价控制释放和MA组分含量对较低PE剂量片剂的影响(未决DOE 2)
表25中的结果表明渗透增强剂剂量从150mg减少至75mg也降低了绝对口服生物利用度(F％)。MEDI7219(SEQ ID NO：2)剂量水平(3mg对6mg)对150mg的渗透增强剂量的F％没有影响。不存在显示Tris碱含量对F％的影响的明显趋势。在这种研究条件下，肠溶包衣pH(5.5对7.0)似乎对保持其他配制品变量恒定的F％没有显著影响。较高的Carbopol 71G量(即5％)似乎对F％没有明显影响；然而，使用持续释放片剂观察到更高的变化性。发现静脉内暴露数据在先前的研究中是一致的，并且用于计算绝对口服生物利用度。
表25：犬科动物中的设计和MEDI7219(SEQ ID NO：2)控制释放和生物粘附片剂配制品的药代动力学参数。
实例19
MEDI7219(SEQ ID NO：2)配制品在以下犬科动物研究(比格犬)中进行了微调。目的是研究有或无Tris碱的MEDI7219(SEQ ID NO：2)肠溶包衣片剂配制品组合物对生物性能的影响。研究设计和结果提供在表26。
表26：研究设计。
此研究表明，不含Tris碱的MEDI7219(SEQ ID NO：2)片剂仍然产生有意义的口服生物利用度。与无Tris片剂5.2％相比，新鲜制备的具有Tris的MEDI7219(SEQ ID NO：2)片剂产生更高的生物利用度12.4％。具有Tris的压制片剂产生降低的生物利用度3.8％；但在没有Tris的情况下，生物利用度为9.6％。发现静脉内暴露数据在先前的研究中是一致的，并且用于计算绝对口服生物利用度。
实例20
在以下犬科动物研究中研究了MEDI7219(SEQ ID NO：2)配制品，该研究被设计用于比较不同的片剂递送系统和口服递送的肠溶包衣片剂配制品组合物中的肽。该研究旨在：
-评价在口服施用至比格犬后在n-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸钠(SNAC)肠溶包衣、癸酸钠肠溶包衣和Na CDC/PG肠溶包衣片剂中配制的MEDI7219(SEQ ID NO：2)的药代动力学参数；并且
-评价在口服施用至比格犬后，在SNAC肠溶包衣和Na CDC/PG肠溶包衣片剂中配制的SEQ ID NO：10的肽的药代动力学参数。
表27中的结果证明，用对照Na CDC/PG肠溶包衣片剂平台展现了最佳MEDI7219生物利用度：F％为5.92并且PK变化性为54.2％。癸酸钠肠溶包衣片剂展现与Na CDC/PG平台相当的MEDI7219(SEQ ID NO：2)F(4.46％)和PK变化性(58.6％)。SEQ ID NO：10的肽展现1.93％的口服F和52.3％的PK变化性，以及比MED17219(SEQ ID NO：2)更长的T1/2(33小时对10小时)，从而在类似的配制品中产生更高的AUC(23700对13500ng·hr/mL)。SNAC提供MEDI7219(SEQ ID NO：2)的1.1％的F％，并且提供SEQ ID NO：10的肽的0.61％的F％。发现静脉内暴露数据在先前的研究中是一致的，并且用于计算当前研究中的绝对口服生物利用度。
表27：犬科动物中的设计以及MEDI7219(SEQ ID NO：2)和SEQ ID NO：10肠溶包衣片剂配制品的药代动力学参数。
实例21
如果根据溶剂化物和制备程序形成不同的结晶多晶型物形式，则可以存在鹅脱氧胆酸钠，其中多晶型物A和B是最常见的水合物形式。设计了以下犬科动物研究以评价鹅脱氧胆酸钠(Na CDC)多晶型物A和B对口服施用至比格犬后在肠溶包衣片剂中配制的MEDI7219(SEQ ID NO：2)药代动力学参数的影响。
表28中的结果表明，与多晶型物B片剂相比(F＝1.79％，CV＝56.0％)，Na CDC多晶型物A片剂产生类似的MEDI7219(SEQ ID NO：2)药代动力学参数(F＝2.34％，CV＝76.4％)。从多晶型物A到多晶型物B的变化或反之亦然不应导致生物性能的显著差异。其他多晶型物形式可以用于本披露中描述的配制品中。
表28：犬科动物中的设计和MEDI7219(SEQ ID NO：2)肠溶包衣片剂配制品的药代动力学参数。
实例22
在以下犬科动物研究中研究了MEDI7219(SEQ ID NO：2)配制品，该研究旨在：
-探讨具有变化比例的鹅脱氧胆酸钠(Na CDC)与没食子酸丙酯(PG)的配制品组合物的影响；并且
-探讨肠溶包衣片中渗透增强剂(PE)和MEDI7219剂量的量对口服施用至比格犬后生物利用度和PK变化性的影响。
表29中的结果表明，150mg PE片剂中较低比例的Na CDC∶PG在狗中表现出良好的MEDI7219生物利用度：具有2∶1Na CDC∶PG比例的配制品产生F约7％，而具有1∶2Na CDC∶PG比例的配制品产生F约6％。具有6.5∶1Na CDC∶PG比例(130mg Na CDC，20mg PG)的片剂仍然具有良好的MEDI7219 F约4％。具有150mg Na CDC且无PG的片剂展现F约2％。含有75mg PE、65mg Na CDC：10mg PG(6.5∶1比例)的较低重量片剂展现F约1％至2％的暴露。
表29：犬科动物中的设计和MEDI7219(SEQ ID NO：2)肠溶包衣片剂配制品的药代动力学参数。
实例23
在以下犬科动物研究中研究了MEDI7219(SEQ ID NO：2)配制品，该研究旨在探讨肠溶包衣片剂中的约6.5∶1比例的鹅脱氧胆酸纳(Na CDC)与没食子酸丙酯(PG)的配制品组合物。
表30中的结果表明，4∶1比例，120mg Na CDC和30mg PG、3mg MEDI7219片剂实现MEDI7219F约5.7％，其中在Cmax下的PK变化性(CV)为52.8％。14∶1Na CDC∶PG比例，140mg NaCDC和10mg PG、3mg MEDI7219片剂在狗中实现MEDI7219生物利用度F约4.6％，其中在Cmax下的PK变化性为84.4％。29∶1Na CDC∶PG比例，145mg Na CDC和5mg PG、3mg MEDI7219片剂在狗中实现MEDI7219生物利用度F约3.8％，其中在Cmax下的PK变化性为135.3％。含有150mgNa CDC片剂的无PG配制品实现F约0.6％。
表30：犬科动物中的设计和MEDI7219(SEQ ID NO：2)肠溶包衣片剂配制品的药代动力学参数。
实例24
用于施用至人的示例性口服配制品在表31-表36中示出。可以灵活地制备这些组合物以调节肽剂量、渗透增强剂剂量和片剂重量。可以调整给与至人患者的片剂重量和片剂数量，以达到引发所希望的药效学反应的所需剂量。临床配制品设计空间和范围在图12中示出。
另外的临床配制品设计空间在图13中示出。在此临床配制品设计空间中，研究了从0.5至36mg的MEDI7219肽范围，渗透增强剂范围为从100mg Na CDCA与200mg PG至600mgNa CDCA与1200mg PG。在此研究中，渗透增强剂的比例保持在恒定1∶2比例，并且至多给药六片。片剂是肠溶包衣的并含有Tris碱。在给定肽和渗透增强剂水平下使用具有Tris碱的肠溶包衣片剂中的MEDI7219实现可靠暴露后，评价了不含Tris碱的肠溶包衣片剂和有或无Tris碱的肠溶包衣控制释放片剂。
表31：立即释放肠溶包衣片剂的组合物的实例。
示例性口服配制品可以包含从0.25至36mg MED17219(SEQ ID NO：2)的肽范围以及从100mg鹅脱氧胆酸钠(Na CDC)和200mg没食子酸丙酯(PG)至800mg鹅脱氧胆酸钠和1600mg没食子酸丙酯范围的渗透增强剂。渗透增强剂剂Na CDC∶PG的比例可以是1∶2。可以使用Tris碱和控制释放赋形剂(例如Carbopol 71G 1％-10％和Carbopol 971P 0.3％-3％)。
表32：立即释放肠溶包衣片剂的组合物的另外实例。
另外的示例性口服配制品可以包括在含有300mg渗透增强剂至800-2400mg鹅脱氧胆酸钠和1600-0mg没食子酸丙酯的片剂中，在含有总量为2400mg的渗透增强剂中，从0.25至36mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)的肽范围以及从100-300mg鹅脱氧胆酸钠(NaCDC)和200-0mg没食子酸丙酯(PG)范围内的渗透增强剂。渗透增强剂剂Na CDC∶PG的比例在不含没食子酸丙酯的片剂中可以是1∶2至X∶0。可以使用Tris碱和控制释放赋形剂(例如Carbopol71G1％-10％和Carbopol 971P 0.3％-3％)。
表33：4.5mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)立即释放和控制释放Carbopol 971P片剂组合物(4.5mg标称MEDI7219(SEQ ID NO：2)强度)的实例。
表34：4.5mg MEDI7219(SEQ ID NO：2)立即释放和控制释放Carbopol 971P片剂组合物(4.5mg标称MEDI7219(SEQ ID NO：2)强度)的另外实例。
表35：肠溶包衣的立即释放(EC)片剂和肠溶包衣的控制释放(EC-CR)片剂的实例组合物。
表36：肠溶包衣的立即释放(EC)片剂和肠溶包衣的控制释放(EC-CR)片剂的另外实例组合物。
用于(i)立即释放肠溶包衣片剂(pH 5.5)和肠溶包衣控制释放片剂(pH 7.0)的示例性Eudragit肠溶包衣组合物配方在表37中示出。表37：Eudragit肠溶包衣配方组合物(EC)片剂。
*按组分的干重计
实例25
在以下实例中，用5％硬脂酰富马酸钠代替硬脂酸镁(1％)。Carbopol 71G在硬脂酰富马酸钠存在下未产生所希望的活性物质释放，并且因此被粉末级Carbopol 971P代替。需要较少的Carbopol 971P(0.3％和1％)来获得与使用Carbopol 71G(2.5％和5％)相同的释放概况。制备片剂，重量为488.8mg。片剂组合物的实例提供在表38和表39中。实例溶解概况提供在图11中。
表38：MEDI7219(SEQ ID NO：2)控制释放片剂的实例组合物。
表39：MEDI7219(SEQ ID NO：2)控制释放片剂的另外实例组合物。
实例26
如图4中所总结进行片剂制备。称量制备所需数量的片剂所需的所有成分。将助流剂(Aerosil)的重量分成0.33％和0.66％，并且将润滑剂(硬脂酰富马酸钠)的重量分成2％和3％。将所有成分通过US筛尺寸34(0.500mm开口)。称量MEDI7219(SEQ ID NO：2)和甘露醇(MEDI7219(SEQ ID NO：2)的10倍)并通过筛#60(0.250mm开口)。擦拭并用刮刀敲击以回收任何堵塞的材料。称量剩余量的甘露醇并使其通过同一筛#60以从筛上冲洗掉所有MEDI7219(SEQ ID NO：2)。称量没食子酸丙酯、Tris碱和Pruv(颗粒内)并通过35号筛并在Turbula混合器中与来自步骤2的上述共混物混合10分钟。称量鹅脱氧氧胆酸钠、交聚维酮和
为了制备肠溶包衣的控制释放(EC-CR)片剂，在碾压之前，将控制释放聚合物(Carbopo1)与鹅脱氧胆酸钠、Tris碱、交聚维酮和0.33％Aerosil一起添加。
在施加肠溶衣之前，片剂表征和工艺参数的规范(488.8mg片剂)显示在以下表40中。
表40：片剂表征和规范工艺参数(488.8mg片剂)。
属性
方法
接受准则
硬度(牛顿)
硬度测定仪
40-55N
厚度(mm)
游标卡尺
5.60-5.90mm
崩解时间(min)
崩解仪
5-17分钟
未包衣片剂重量(mg)
称重天平
488.8mg±5％
脆度(％)
称重天平
≤1.0％
在包衣期间的重量增加
称重天平
11％-13％
与增加片剂厚度相比的244.4mg未包衣的立即释放片剂硬度(A)和崩解时间(B)的实例在图5中示出。图5C示出未包衣片剂的累积释放概况。
使用配备有1.3L盘的Vector LDCS3盘式涂布机进行肠溶包衣。排气温度设定为≤31℃。设定在45℃的入口温度可以达到所希望的排气温度。入口空气流量设定为＞10CFM。盘速度设定为8-10rpm。喷涂速率是大约4g/min。在包衣完成后的干燥时间是约3小时。包衣片剂的重量增加11％-13％。以下表41提供了肠溶包衣的立即释放和控制释放244.4mg片剂在工艺释放规定方面的比较。
表41：立即释放和控制释放244.4mg片剂在工艺释放规范方面的工艺参数(在肠溶包衣前)的比较
溶解参数：
a.在0.1N HCl中的稳定性：少于5％的活性物质在2小时后释放
b.溶解速率EC-IR片剂：在60分钟内溶解不少于75％
c.溶解速率EC-CR片剂：对于1％Carbopol 71G或0.3％Carbopol 971P在4小时内并且对于3％Carbopol 71G或1.0％Carbopol 971P在6小时内释放100％。
实例27
表42中提供了用于施用至人的不含Tris的另外的示例性片剂。
表42：
实例28
还评价了癸酸钠作为渗透增强剂的功效。癸酸钠是C10饱和脂肪酸钠盐，它据信通过松开紧密连接来增加渗透性。狗中的体内研究表明，含有癸酸钠的肠溶包衣片剂中MEDI7219的生物利用度与表中含有NaCDC和没食子酸丙酯的MEDI7219的生物利用度相当。(参见27，上文)。癸酸钠和NaCDC/PG也产生相似的MEDI7219暴露(Cmax和AUC)、相似的半衰期以及相似的达到Cmax的中值时间。参见表43。
表43：基于片剂组分的MEDI7219暴露
表44中提供了另外的示例性癸酸钠片剂配制品。
表44：基于癸酸钠的MEDI7219配制品
用于施用至人的包含癸酸钠的示例性肠溶包衣片剂的临床配制品设计空间和范围在图14中示出。
***
具体实施例的以上描述将充分地揭示本披露的总体性质，使得在不脱离本披露的一般概念的情况下，其他人可以无需过多的实验通过应用本领域的技术内的知识，容易地针对此类具体实施例的各种应用进行修改和/或改编。因此，基于在此提出的传授内容和指导，此类改编和修改旨在处于所披露的实施例的含义和等效范围内。应了解，在此的措辞或术语是出于描述而非限制的目的，这样使得本说明书的术语或措辞应由熟练的技术人员根据传授内容和指导进行解释。
本披露的宽度和范围应当不限于以上描述的示例性实施例中的任一个，而应当仅根据以下权利要求书和它们的等效物来限定。
在本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请、和/或其他文件出于所有目的通过引用以其全部内容而结合，在程度上就像每个单独的出版物、专利、专利申请、和/其他文件被单独地指出以出于所有目的通过引用而结合相同。
序列表
<110> 米迪缪尼有限责任公司（MEDIMMUNE LLC）
<120> GLP-1肽类似物的口服递送
<130> ORPEP-200-PSP
<150> US 62/579186
<151> 2017-10-31
<160> 15
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GLP-1 7-36
<400> 1
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1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 2
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> AIB
<220>
<221> 修饰的残基
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<220>
<221> 修饰的残基
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<221> 修饰的残基
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<220>
<221> 修饰的残基
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<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<220>
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<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<222> (2)..(2)
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
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<220>
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His Xaa Glu Gly Ser Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Lys Glu Gly
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<210> 10
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
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<220>
<221> 修饰的残基
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<220>
<221> 修饰的残基
<222> (25)..(25)
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His Xaa Glu Gly Ser Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Lys Leu Glu Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
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<220>
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<210> 12
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> α-Me-Phe
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
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<222> (13)..(13)
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<220>
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<210> 15
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> α-Me-Phe
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> α-Me-Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Lys(ε-(PEG)2-(PEG)2-γGlu-硬脂酰基)
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> α-Me-Lys
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> α-Me-Phe
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (25)..(25)
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<400> 15
His Xaa Glu Gly Ser Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Lys Leu Glu Gly
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20 25 30