阅读说明：本技术 一种短毛木耳及其培养方法和培养基 (Auricularia polytricha and culture method and culture medium thereof ) 是由 祁亮亮 郎宁 蓝桃菊 吴小建 李俐颖 陈振妮 叶建强 霍秀娟 林艳金 赵智勇 于 2019-08-06 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种短毛木耳及其培养方法和培养基,所述短毛木耳的保藏号为“CGMCC No.17779”。本发明公开了一种新品种的短毛木耳,并且明确其最佳的生长条件,为野生木耳的驯化、栽培及育种等提供了材料和依据。(The invention discloses auricularia polytricha and a culture method and a culture medium thereof, wherein the preservation number of the auricularia polytricha is CGMCC No. 17779. The invention discloses a new variety of auricularia polytricha, and defines the optimal growth conditions thereof, thereby providing materials and basis for domestication, cultivation, breeding and the like of wild auricularia polytricha.)

一种短毛木耳及其培养方法和培养基

技术领域

本发明属于生物领域，尤其涉及一种短毛木耳及其培养方法和培养基。

背景技术

木耳属真菌Auricularia Bull.属于担子门Basidiomycota，伞菌纲Agaricomycetes，木耳目 Auriculariales，木耳科Auriculariaceae，该类真菌大部分种类都生长在阔叶树、倒木、枯枝、树柱或腐烂木上，少数种类也生长在针叶树上，属于木材腐朽菌的一个重要类群，在森林生态系统中发挥重要的物质循环作用。木耳属(Auricularia)是世界广泛分布的木生真菌，木耳属食用菌不仅含有极高的营养价值和药用价值，同时热量又很低，是一种健康美味食药用菌。木耳具有润肺、减肥、清涤肠胃、利于体内有毒物质及时清除和排出的功能。

广西岩溶地形广泛发育，散布于区内各地，形成千奇百怪的岩溶地貌，构成广西地貌的主要特征之一。优越的地理位置及复杂多样的地形地貌为广西生物多样性的发展提供了有利环境，也造就了广西丰富多样的野生木耳种质资源，目前许多广西地区的木耳品种还未被发现。

发明内容

为解决上述问题，本发明公开了一种短毛木耳及其培养方法和培养基。本发明公开了一种新品种的短毛木耳，并且明确其最佳的生长条件，为野生木耳的驯化、栽培及育种等提供材料和依据。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种短毛木耳，所述短毛木耳的保藏号为“CGMCC No.17779”。

进一步的改进，所述短毛木耳的培养温度为20-30℃。

进一步的改进，所述短毛木耳培养时以麦芽浸粉为碳源。

进一步的改进，所述短毛木耳培养时以蛋白胨为氮源。

进一步的改进，所述述短毛木耳培养时的pH值为6。

进一步的改进，包括土豆、葡萄糖、琼脂、碳源、氮源和水；土豆、葡萄糖、琼脂、碳源、氮源和水的质量比为200：20:20：20：20：1000；培养基的pH为6。

进一步的改进，所述碳源为麦芽浸粉；氮源为蛋白胨。

附图说明

图1为WSW-5630短毛木耳图；

图2为WSW-5630短毛木耳在不同碳源培养基上的菌丝图；

图3为WSW-5630短毛木耳在不同碳源培养基上的生长速率图；

图4为WSW-5630短毛木耳在不同氮源培养基上的菌丝图；

图5为WSW-5630短毛木耳在不同氮源培养基上的生长速率图；

图6为WSW-5630短毛木耳在不同pH的培养基上的菌丝图；

图7为WSW-5630短毛木耳在不同pH的培养基上的生长速率图；

图8为WSW-5630短毛木耳在不同温度下培养的菌丝图；

图9为WSW-5630短毛木耳在不同温度下培养的生长速率图。

图10为WSW-5630短毛木耳与其他木耳品种的系统发育树。

具体实施方式

以下结合附图及实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

1.本发明的短毛木耳（AuriculariaVillosula）于2019年5月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。在保藏中心的登记号(保藏号)为CGMCC No.17779，材料名称为：WSW5630。

2.1.1：野生木耳属菌种由发明人采集，具体标本编号及采集地详见表1。

表1供试标本(菌种)编号及采集地

2.1.2试验所需仪器见表2

表2主要仪器型号及厂家

2.1.3培养基配方

(1)PDA培养基：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL，pH值为自然。

(2)20g碳源培养基：葡萄糖、蔗糖、麦芽浸粉、可溶性淀粉、pH值为自然。

(3)20g氮源培养基：蛋白胨、酵母浸粉、硝酸铵、牛肉膏，pH值为自然。

(4)不同酸碱性pH值培养基：用1mol/LHCl溶液和1mol/LNaOH溶液将PDA综合培养基的pH值分别调至pH 5、6、7、8。

2.2试验方法

2.2.1木耳属真菌分类学研究方法

利用经典分类学方法，依据子实体干标本、生态照片及相关野外记录对木耳属真菌进行分类鉴定，并参考《中国菌物资源图鉴》、《中国大型真菌》、《蘑菇博物馆》、《木耳属的分类与系统发育研究》等相关书籍或论文。宏观形态观察主要包括新鲜时子实体大小、形状、颜色，烘干后的颜色、质地、厚度。***面及子实层面颜色等特征；微观形态观察主要包括孢子、担子、髓层、刚毛或柔毛、菌丝等大小、颜色等特征。

2.2.2野生木耳属菌种分离与培养以及菌丝长速测定

利用组织分离的方法对收集得到的野生木耳属真菌进行菌种的分离。即应用无菌操作技术，用75％的酒精棉球对新鲜木耳子实体进行表面擦洗消毒，用手揉捏耳片，再用手将耳片上下两层斜撕，露出胶质体，用镊子在子实体内侧不同部位刮取半粒芝麻大小的组织块，接种到备用的PDA试管或培养皿中，置于26℃霉菌培养箱中培养，每处理重复3次，待菌丝长满试管或长满2/3试管后接种到培养皿中。记录各菌株菌丝体生长速度、长势、密度、颜色、整齐度、气生菌丝、色素产生情况、污染情况等。当生长最快的菌株菌丝体即将长满培养皿时，即可测量各菌株菌落半径，并对其生长速度进行差异显著性分析。菌丝生长速度(mm/d)＝菌落半径(mm)/生长天数(d)。

2.2.3不同碳源、氮源、pH、温度对菌丝体生长的影响

用直径7mm的打孔器将活化好的菌种接种于直径90mm的碳源培养基中心，将碳源、氮源、pH、温度设置4个处理，每个处理4次重复，并设置平行对照。接种后的培养皿置于26℃霉菌培养箱中黑暗培养。接种后待菌种开始萌发后测量，当某一处理长满培养皿时，结束统计，记录菌丝生长天数和菌落半径。并对结果进行分析。

3结果与分析

3.1野生木耳属真菌的物种名称

表3野生木耳属真菌的物种名称

3.2野生木耳属真菌的形态学描述

WSW-5630：短毛木耳A.villosula(如图1所示的WSW-5630短毛木耳)，属广西新记录种。

子实体单生或群生，新鲜时胶质或软胶质，黄褐色或红褐色，不透明或半透明，杯状或盘状，边缘全缘或浅裂，厚1-2mm，灰褐色或深褐色；***面具柔毛；子实层面具少量皱褶。横切面无髓层；柔毛单生，偶簇生，无色透明；孢子腊肠状，无色，薄壁，光滑，具1或2 个大液泡，大小为13-15×5-6μm；担子棒状，3横隔，担孢子梗少见，大小为40-61×4-5μm；具锁状联合。

野生木耳真菌的分类检索表：

ⅰ.子实体***面具明显绒毛或密毛.............................毛木耳

ⅰ.子实体***面具不明显或不具绒毛或密毛.....................ⅱ

ⅱ.子实层具明显迷宫状、星网状褶皱...........................皱木耳

ⅱ.子实层平滑或具褶皱......................................ⅲ

ⅲ.子实层具褶皱，横切面无髓层.. ............................短毛木耳

ⅲ.子实层光滑或具少量短皱褶，具髓层.........................脆木耳。

以上分类检索表说明本发明的短毛木耳为未发现的品种。

3.3.1不同碳源对木耳属各菌株菌丝生长的影响

如图2和3所示，WSW-5630短毛木耳菌株在以麦芽浸粉为碳源的培养基上菌丝较浓密粗壮，菌落洁白，长势良好，边缘整齐，菌丝体生长速度最快，长速为4.675mm/d，而在其他处理中的菌丝生长速度等于或低于4.00mm/d；在葡萄糖、可溶性淀粉上长势稍好；在蔗糖、对照组上长势较差，菌落稀疏。综合菌丝长势及长速，麦芽浸粉为WSW-5630短毛木耳菌丝生长的最佳碳源。

表4短毛木耳不同碳源处理的生长差异显著性分析

WSW-5630短毛木耳菌株在麦芽浸粉和蔗糖处理组与对照组比较中差异极显著，葡萄糖、可溶性淀粉处理组与对照组比较中差异不显著，麦芽浸粉处理组与对照组比较中差异达到极显著水平。

3.3.2不同氮源对木耳属各菌株菌丝生长的影响

如图4和5所示，WSW-5630短毛木耳菌株在以蛋白胨为氮源的培养基上菌丝较浓密粗壮，菌落洁白，长势旺盛，边缘整齐，无气生菌丝，菌丝体生长速为3.775mm/d；在酵母浸粉上的菌落呈泡沫状；在牛肉膏上菌落洁白、菌丝浓密，长势良好，气生菌丝少；在对照组上长势一般，气生菌丝多，但长速是最快；在硝酸铵上长势弱，长速也是最慢。综合菌丝长势及长速，蛋白胨为WSW-5630短毛木耳菌丝生长的最佳氮源。

表5短毛木耳不同氮源处理生长差异的显著性分析

如表5所示，WSW-5630短毛木耳菌株在蛋白胨、酵母浸粉、硝酸铵处理组与对照组比较中差异极显著，在牛肉膏处理组与对照组比较中差异不显著。

3.3.3木耳属各菌株对pH酸碱度适应性研究

如图6和7所示，WSW-5630短毛木耳菌丝在pH值为5～8的条件下均能生长，在pH 值为6时菌丝粗壮浓密，菌落灰白且呈网状，生长速度最快，为4.225mm/d；在pH值为7 和8时，菌丝较粗壮浓密，菌落洁白，但pH值为7时，长速最差；在pH值为5时菌落呈网状、菌丝纤细稀疏，气生菌丝多。综合菌丝长势及长速，pH值为8时是WSW-5630短毛木耳菌丝生长的最佳值。

表6短毛木耳菌丝不同处理生长差异的显著性分析

WSW-5630短毛木耳在四个处理之间比较中的差异不显著。

(2)如图8和9所示，在WSW-5630短毛木耳在20℃和25℃时菌落灰白、稀疏，气生菌丝多，生长规则；在30℃时菌落密致且呈泡沫状、菌丝纤细，气生菌丝少，边缘不整齐，长速最快，长速为3.967mm/d；35℃时菌丝不萌发。综合菌丝长势及长速，温度为30℃菌时为WSW-5630短毛木耳菌丝生长的最适值。

表7为短毛木耳不同温度处理生长差异的显著性分析

WSW-5630短毛木耳在温度梯度四个处理之间差异极显著。

4.基于ITS序列，用贝叶斯方法，构建的系统发育树，如图10所示。碱基替换模型为TIMef，运行代数为100万代。从发育树看被发明的短毛木耳也为一个新的品种，图中底部画有横线的WSW-5630即为本发明的短毛木耳。

发明人食用上述短毛木耳后没有任何异常反应，因此其可以作为食物。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但并不仅仅限于说明书和实施方案中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里所示。