阅读说明：本技术 Ask1抑制剂及其应用 (ASK1 inhibitor and application thereof ) 是由 王听中 刘斌 于 2018-07-10 设计创作，主要内容包括：本发明涉及通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体。本发明还涉及该化合物的制备方法、包含该化合物的药物制剂及药物组合物。本发明的化合物能够有效抑制ASK1的氨基酸磷酸化,抑制ASK1的激活；因此能够治疗和/或预防ASK1介导的疾病及相关疾病。<Image he="381" wi="700" file="DDA0001725922130000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to a compound shown in a general formula (I), and pharmaceutically acceptable salt, ester or stereoisomer thereof. The invention also relates to a preparation method of the compound, a pharmaceutical preparation containing the compound and a pharmaceutical composition. The compound can effectively inhibit the amino acid phosphorylation of ASK1 and inhibit the activation of ASK 1; therefore, can treat and/or prevent ASK1 mediated diseases and related diseases.)

ASK1抑制剂及其应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及ASK1抑制剂、其药学上可接受的盐、其酯以及它们的立体异构体，含有这些化合物的药物制剂，以及该化合物、其药学上可接受的盐、其酯以及它们的立体异构体在制备治疗和/或预防由ASK1介导的酒精性/非酒精性脂肪肝、自身免疫病症、糖尿病及其并发症、及恶性肿瘤等相关疾病的药物中的用途。

背景技术

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)以依次活化的MAPKKK，MAPKK，MAPK的方式存在。环境信号影响MAPKKK，依次使MAPKK磷酸化，特定的MAPK磷酸化，然后MAPK通过使细胞基质磷酸化而介导细胞响应，包括细胞生长，分化，凋亡和发炎等。

细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)是MAPKKK家族中的一员，是C螺旋区相连的类低聚物，N螺旋区连接硫氧还原酶(Trx)，Trx抑制ASK1的激活。在氧化应激，内质网压力，分子内钙浓度和GPCR信号等刺激条件下，ASK1的硫氧还原酶会解离下来，ASK1自身的氨基酸(人：Thr838，小鼠：Thr845)发生自磷酸化，使MAPKK(如MAPKK3/MAPKK6，MAPKK4/MAPKK7)磷酸化；近而使下游的p38和JNK磷酸化并活化。该通路的激活与肿瘤的生长，代谢类疾病和神经系统疾病息息相关。

ASK1抑制剂的作用机制为抑制ASK1的磷酸化，阻断下游通路的激活，从而达到对酒精性/非酒精性脂肪肝，肿瘤疾病，代谢类疾病和神经退行性疾病的治疗作用。

目前国际上在研的ASK1抑制剂只有Gilead的GS-4997处于临床阶段，正在开展PhaseIII(III期)，已经完成糖尿病肾病，肺动脉高压和非酒精性脂肪肝炎的PhaseII(II期)研究，通过PhaseII的验证，证明该靶点的有效性和安全性。

为了更好的满足市场需求，我们依然希望能够开发出更加高效、低毒、且稳定性较好的新型ASK1抑制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型分子结构的ASK1抑制剂，其能够抑制ASK1磷酸化，可阻滞ASK1所控制的下游通路，从而缓解或治愈相关疾病，具有很好的药效，为ASK1抑制剂用于治疗和/或预防由ASK1介导的酒精性/非酒精性脂肪肝、自身免疫病症、糖尿病及其并发症、及恶性肿瘤等相关疾病的药物中的用途提供了可能性。

本发明的其他目的在于提供上述ASK1抑制剂的合成方法、合成中间体及上述ASK1抑制剂的用途。

本发明人为了实现上述目的持续悉心研究，结果发现下述通式(I)表示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯以及它们的立体异构体可有效抑制ASK1，从而完成了本发明。

具体技术方案如下：本发明还提供了通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体：

其中，

环A选自5-8元杂环基，5-8元杂芳基，其中，每个基团被0-3个P取代，每个P独立的选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、卤素、硝基、氨基、羟基、羧基；

X₁选自CH，C-R或N，R选自羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

X₂，X₃，X₄，X₅，X₆，X₇，X₈独立的选自C-R₄或N，R₄选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、及任选可被氢、卤素、羟基、氧代、-CF₃、-O-CF₃、-N(R₅)(R₆)-、-C(O)-R₅、-C(O)-O-R₆、-C(O)-N(R₅)(R₆)-、-CN、-O-R₅取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基；

或者X₄、X₇、X₈选自C-R₄，X₄和X₇或X₇和X₈结合在一起与相连的R₄形成环烷基、杂环基、芳基杂芳基；

R₁选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基、氨基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、羧基C_1-6烷基；

R₂选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基，卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、羧基C_1-6烷基；或R₂和X₂或X₆连同所连接的氮形成杂环基；

R₃选自5-10元杂芳基或5-10元杂环基，所述5-10元杂芳基或5-10元杂环基中的成环杂原子中至少含有一个N，且其中一个N与环B连接；所述5-10元杂芳基或5-10元杂环基被0-3个Q取代；Q选自C_1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、卤素、氰基、硝基、卤代C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、氧代、-O-R₅、-O-C(O)-R₅、-O-C(O)-N(R₅)(R₆)、-S-R₅、-N(R₅)(R₆)、-S(＝O)-R₅、-S(＝O)₂R₅、-S(＝O)₂-N(R₅)(R₆)、-S(＝O)₂-OR₅、-N(R₅)-C(O)-R₆、-N(R₅)-C(O)-O-R₆、-N(R₅)-C(O)-N(R₅)(R₆)、-C(O)-R₅、-C(O)-O-R₅、-C(O)-N(R₅)-R₆或-N(R₅)-S(＝O)₂-R₆，其中所述C_1-6烷基、3-8元环烷基、芳基、杂芳基或杂环基任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧代或-O-R₅取代；

R₅和R₆分别独立地选自氢、C_1-6烷基、3-8元环烷基，或者当R₅和R₆与同一氮原子相连时，R₅和R₆与它们所连接的氮原子一起形成3-12元杂环。

本发明的一些实施方式涉及前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其中所述化合物具有下述式(II)的结构，

环A选自5-6元杂环基，5-6元杂芳基，其中，每个基团被0-3个P取代，每个P独立的选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、卤素、硝基、氨基、羟基、羧基；

X₁选自CH，C-R或N，R选自羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

X₂，X₃，X₄独立的选自C-R₄或N，R₄选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基；

R₁选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基、卤代C_1-6烷氧基、氨基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、羧基C_1-6烷基；

R₂选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、羧基C_1-6烷基；

Rc选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、及任选可被卤素、羟基、氧代、-CF₃、-O-CF₃、–N(R₅)(R₆)-、-C(O)-R₅、-C(O)-O-R₆、-C(O)-N(R₅)(R₆)-、-CN、-O-R₅取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_1-6烷氧基、C_3-8环烷基；

R₃选自5-8元杂芳基或5-8元杂环基，所述5-8元杂芳基或5-8元杂环基中的成环杂原子中至少含有一个N，且其中一个N与环B连接；所述5-8元杂芳基或5-8元杂环基可被0-3个Q取代；Q选自C_1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、卤素、氰基、硝基、卤代C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、氧代、-O-R₅、-O-C(O)-R₅、-O-C(O)-N(R₅)(R₆)、-S-R5、-N(R₅)(R₆)、-S(＝O)-R₅、-S(＝O)₂R₅、-S(＝O)₂-N(R₅)(R₆)、-S(＝O)₂-OR₅、-N(R₅)-C(O)-R₆、-N(R₅)-C(O)-O-R₆、-N(R₅)-C(O)-N(R₅)(R₆)、-C(O)-R₅、-C(O)-O-R₅、-C(O)-N(R₅)-R₆或-N(R₅)-S(＝O)₂-R₆，其中所述C_1-6烷基、3-8元环烷基、芳基、杂芳基或杂环基任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧代或-O-R₅取代；

R₅和R₆分别独立地选自氢、C_1-6烷基、3-6元环烷基，或者当R₅和R₆与同一N原子相连时，R₅和R₆与它们所连接的N原子一起形成3-8元杂环。

本发明的一些实施方式涉及前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其中，

环A选自含1-3个N、O或S的5-6元杂环基，含1-3个N、O或S的5-6元杂芳基，所述杂环基或杂芳基被0-2个P取代，每个P独立的选自卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

X₁选自CH或N；X₂选自N；X₃选自CH；X₄选自C-R₄或N，R₄选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基；

R₃选自含1-4个N、O或S的5-8元杂芳基，含1-4个N、O或S的5-8元杂环基，所述5-8元杂芳基或5-8元杂环基中的成环杂原子中至少含有一个N，且其中一个N与环B连接；所述杂芳基或杂环基可被0-3个Q取代；Q选自C_1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元环烷基烷基、5-8元芳基、5-8元芳基烷基、5-8元杂芳基、5-8元杂芳基烷基、5-8元杂环基、5-8元杂环基烷基，其中所述C_1-6烷基、3-8元环烷基、5-8元芳基、5-8元杂芳基或5-8元杂环基任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧代或-O-R₅取代。

本发明的一些实施方式涉及前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其中，

R₃选自含1-4个N、O或S的5-8元单环杂芳基，含1-4个N、O或S的5-8元单环杂环基，所述5-8元杂芳基或5-8元杂环基中的成环杂原子中至少含有一个N，且其中一个N与环B连接；所述杂芳基或杂环基可被0-3个Q取代；Q选自C_1-6烷基、3-6元环烷基、3-8元环烷基烷基、5-8元芳基、5-8元芳基烷基、5-8元杂芳基、5-8元杂芳基烷基、5-8元杂环基、5-8元杂环基烷基；

环A与相并连的环形成如下基团：

其中，环A被0-1个P取代，每个P独立的选自卤素、甲基、乙基、环丙基、异丙基、丁基、环戊基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。

本发明的一些实施方式涉及前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其中，

R₁选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

R₂选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

X₄选自C-R₄或N，R₄选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基；

R₃选自

且R₃可被0-1个Q取代，Q选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、3-6元环烷基；

Rc选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基。

本发明的一些实施方式涉及前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其中所述化合物具有下述式(III)的结构，

X₁选自CH或N；

P选自不存在、卤素、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、环戊基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基；

X₄选自C-R₄或N，R₄选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷基；

R₁选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

R₂选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

Rc选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

Q选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、3-6元单环环烷基；

选自单键或者双键。

本发明的一些实施方式涉及前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其中，

X₁选自CH或N；

P选自不存在、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、环戊基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基；

X₄选自C-R₄或N，R₄选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、环戊基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基；

R₁选自氢、羟基、氨基、羧基、硝基、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、环戊基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基；

R₂选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基；

Rc选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基；

Q选自氢、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丁基、环戊基、环己基；

选自单键或者双键。

上述各实施方案之间以及各实施方案所涉及的各特征之间可以任意组合，所得到的技术方案均记载于本文中，属于本发明的技术方案。

本发明的一些实施方式中，前述通式(I)、(II)(Ⅲ)所述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体的结构见表1：

本发明所述的“药学上可接受的盐”是指可药用的酸和碱的加成盐和溶剂化物。

本发明所述的“酯”是指药学上可接受的酯，尤其指如下酯，其在活体内水解且包括容易在人体内分解留下母体化合物(通式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)所述的化合物)或其盐的酯。

本发明通式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)所示的化合物的“立体异构体”是指当式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)、化合物存在不对称碳原子时，会产生对映异构体；当化合物存在碳碳双键或环状结构时，会产生顺反异构体；当化合物存在酮或肟时，会产生互变异构体，本发明的一些实施方式中，立体异构体包括但不限于：对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物。

本发明还提供上述通式(Ⅱ)表示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯以及它们的立体异构体的制备方法。

具体而言，所述制备方法，其包括但不限于下述工艺路线(其中，各缩写所代表的定义如下：

DPPA：叠氮磷酸二苯酯

Y₁选自氟原子、氯原子、溴原子或碘原子；Y₂选自氟原子、氯原子、溴原子、碘原子或羟基；Y₃选自氟原子、氯原子、溴原子、碘原子或羧基C_1-6烷基；环A、X₁、X₂、X₃、X₄、R₁、R₂、R₃、Rc如前文所述。

具体的示例性步骤如下：

1、中间体1的制备

将原料1(购买或制备)和原料2(购买或制备)溶于有机溶剂中，加入催化剂，碱性化合物，加热(100-150℃)，过滤，浓缩，柱层析得中间体1。所述碱性化合物选自氢氧化钠、氢氧化锂、碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠，优选碳酸铯；所述有机溶剂选自吡啶、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯、1,4-二氧六环、四氢呋喃等，优选1,4-二氧六环。

2、中间体2的制备

方法一：将中间体1溶于有机溶剂，加入氨水，加热(100-150℃)，反应5-10小时，分离，得中间体2。所述有机溶剂选自吡啶、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯、1,4-二氧六环、四氢呋喃等，优选N-甲基吡咯烷酮。

方法二：将中间体1溶于有机溶剂，加入碱性化合物，反应，用酸性试剂调节pH＝3-4，浓缩，反相制备，将制备的化合物溶于有机溶剂，加入叠氮化试剂，碱性溶剂，加热，过滤，浓缩，柱层析，将柱层析得到的化合物溶于有机溶剂，加入酸性试剂，反应，浓缩，得中间体2。所述有机溶剂选自吡啶、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯、1,4-二氧六环、四氢呋喃等，优选四氢呋喃、叔丁醇、二氯甲烷；碱性溶剂优选三乙胺，酸性试剂优选盐酸、三氟乙酸；叠氮化试剂优选DPPA。

3、式(Ⅱ)化合物的制备

将中间体2与原料3(购买或制备)溶于有机溶剂中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(或草酰氯、三乙胺)，20-30℃反应15-20小时，柱层析，得式(Ⅱ)化合物。有机溶剂选自吡啶、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯、1,4-二氧六环、四氢呋喃等，优选吡啶、二氯甲烷。

本发明还提供了一种药物组合物，其含有前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，及任选的一种或多种第二治疗活性剂。所述第二治疗活性剂包括但不限于FXR激动剂，ACC抑制剂，BTK抑制剂。

在本发明一些

具体实施方式

中，所述药物组合物还包含一种或多种药用载体和/或稀释剂。

本发明还提供了一种药物制剂，其含有前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，及一种或多种药用载体和/或稀释剂；所述药物制剂为临床上或药学上可接受的任一剂型。

在本发明的一些实施方式中，上述药物制剂可以以口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。用于口服给药时，所述药物组合物可制成口服制剂，例如可以制成常规的口服固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，上述药物制剂也可制成注射剂、包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配置注射剂时，可以不加入附加剂，也可以根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。

本发明的药物组合物或药物制剂中可用的药用载体和/或稀释剂可以是药物制剂领域中任何常规的载体和/或稀释剂，特定载体和/或稀释剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，药用载体和/或稀释剂可以包括药学领域常规的溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。

在本发明的一种具体实施方式中，前述的药物制剂可以进一步包含一种或多种第二治疗活性剂。所述第二治疗活性剂包括但不限于FXR激动剂，ACC抑制剂，BTK抑制剂。

本发明还提供了前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，前述的药物组合物、前述的药物制剂在制备用于治疗和/或预防ASK1介导的疾病及相关疾病的药物中的用途。

在本发明的一些实施方式中，所述ASK1介导的疾病及相关疾病选自非酒精性脂肪肝、自身免疫病症、糖尿病及其并发症、心-肾疾病、纤维化疾病、呼吸道疾病、肺动脉高压、多发性硬化症、代谢性疾病、动脉粥样硬化、胆汁酸紊乱、原发性硬化性胆管炎、胆固醇结石、脂肪肝、肝硬化、肝炎、肝脏衰竭、胆汁郁积、胆结石病、心肌梗塞、中风、血栓、肿瘤和神经退行性疾病；优选地，所述糖尿病及其并发症包括糖尿病肾病；所述呼吸道疾病包括：慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化、急性肺损伤；所述肿瘤疾病包括胃癌、肝癌、息肉病、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、食管癌等过度增殖性疾病。

本发明还提供了前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构、前述的药物制剂或前述的药物组合物在治疗/或预防疾病中的应用。本发明还提供了前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体、前述的药物制剂或前述的药物组合物在治疗/或预防ASK1介导的疾病及相关疾病中的应用；所述ASK1介导的疾病及相关疾病选自非酒精性脂肪肝、自身免疫病症、糖尿病及其并发症、心-肾疾病、纤维化疾病、呼吸道疾病、肺动脉高压、多发性硬化症、代谢性疾病、动脉粥样硬化、胆汁酸紊乱、原发性硬化性胆管炎、胆固醇结石、脂肪肝、肝硬化、肝炎、肝脏衰竭、胆汁郁积、胆结石病、心肌梗塞、中风、血栓、肿瘤和神经退行性疾病；优选地，所述糖尿病及其并发症包括糖尿病肾病；所述呼吸道疾病包括：慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化、急性肺损伤；所述肿瘤疾病包括胃癌、肝癌、息肉病、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、食管癌等过度增殖性疾病。

本发明还提供了一种治疗疾病的方法，该方法包括向有需要的患者给药治疗有效量的前述的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体、前述的药物制剂或前述的药物组合物，其中，所述疾病为ASK1介导的疾病及相关疾病；所述ASK1介导的疾病及相关疾病选自非酒精性脂肪肝、自身免疫病症、糖尿病及其并发症、心-肾疾病、纤维化疾病、呼吸道疾病、肺动脉高压、多发性硬化症、代谢性疾病、动脉粥样硬化、胆汁酸紊乱、原发性硬化性胆管炎、胆固醇结石、脂肪肝、肝硬化、肝炎、肝脏衰竭、胆汁郁积、胆结石病、心肌梗塞、中风、血栓、肿瘤和神经退行性疾病；优选地，所述糖尿病及其并发症包括糖尿病肾病；所述呼吸道疾病包括：慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化、急性肺损伤；所述肿瘤疾病包括胃癌、肝癌、息肉病、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、食管癌等过度增殖性疾病。

本发明所述的“卤素”是指氟、氯、溴和碘，优选氟和氯。

本发明所述的“氧代”是指取代基结构中的任一C原子可被氧化为“-C(O)-”；若含有杂原子，其杂原子可形成氧化物，如可被氧化成

S任选被氧化为S(O)或S(O)₂

本发明所述的“卤代”是指取代基中的任一氢可被一个或多个相同或不同的卤素取代。“卤素”如前文所定义。

本发明所述的“C_1-6烷基”指含有1-6个碳原子的烃部分去除一个氢衍生的直链或支链的烷基，如甲基、乙基、丙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基和1-甲基-2-甲基丙基等。

本发明所述的“C_1-6烷氧基”是指前文所定义的“C_1-6烷基”通过氧原子与母体连接的基团，即“C_1-6烷基-O-”基团，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基和正己氧基等。

与“C_1-6烷氧基”类似的，”氨基C_1-6烷基”是指H₂N-C_1-6烷基-，其C_1-6烷基上的一个氢被氨基取代；“羟基C_1-6烷基”是指HO-C_1-6烷基-，其C_1-6烷基上的一个氢被羟基取代；“羧基C_1-6烷基”是指HO(O)C-C_1-6烷基-，其C_1-6烷基上的一个氢被羧基取代；“C_1-6烷基氨基”是指C_1-6烷基-NH-；“C_1-6烷基酰氨基”是指C_1-6烷基-C(O)-NH-；“C_1-6烷基氨酰基”是指C_1-6烷基-NH-C(O)-；“C_1-6烷基磺酰基”是指C_1-6烷基-S(O)₂-；“C_1-6烷基磺酰氨基”是指指C_1-6烷基-S(O)₂-NH-；“C_1-6烷基磺酰氧基”是指C_1-6烷基-S(O)₂-O-；“C_1-6烷基羰基氧基”是指C_1-6烷基-C(O)-O-；“C_1-6烷氧基C_1-6烷基”是指C_1-6烷基-O-C_1-6烷基-，“羧基C_1-6烷氧基”是指HO(O)C-C_1-6烷基-O-。

本发明所述的术语“卤代C_1-6烷基”、“卤代C_1-6烷氧基”是指该基团的C_1-6烷基中的氢被一个或多个卤素取代；所述“卤素”如前文所定义。

本发明所述的“环烷基”、“芳基”、“杂环基”及“杂芳基”，包括单环系统和稠环系统(双环系统或者多环系统)，单环是指仅以一个环的形式存在，稠环是指两个及两个以上环以并、螺、桥的连接方式所形成的多环系结构。所述的稠并环是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的环原子(即共用一个键)所形成的稠环结构。所述的桥环是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个非相邻的环原子所形成的稠环结构。所述的螺环是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的稠环结构。本发明以原子个数所限定的环烷基、芳基、杂环基、杂芳基，在不特别指明的情况下，包括所能够形成的单环和稠环结构。

本发明所述的“环烷基”，是指单环环烷基，双环环烷基系统或者是多环环烷基系统。这些基团可以饱和或不饱和、但不是芳族。例如3-12元环烷基、3-10元环烷基、5-10元环烷基等；更为具体地，单环环烷基可以为3-6元环烷基，3-8元环烷基，5-6元环烷基、3-5元环烷基等，实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、1,4-环己二烯基、环庚烯基、1,4-环庚二烯基、环辛烯基、1,5-环辛二烯基等。并环环烷基可以为6-12元并环环烷基、7-10元并环环烷基，其代表性实例包括但不限于双环[3.1.1]庚烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.2.2]壬烷、双环[3.3.1]壬烷和双环[4.2.1]壬烷。螺环环烷基，可以为6-12元螺环基、7-11元螺环基等，其实例包括但不限于：

所述的桥环环烷基可以为6-12元桥环基、7-11元桥环基，其实例包括但不限于：

本发明所述的“3-8元环烷基”在不特别指明的情况下，包括所能够形成的单环和稠环结构。

本发明所述的“杂环基”是指至少一个环碳原子被选自O、S、N的杂原子替代的非芳香性的环状基团，优选1-3个杂原子，1-4个杂原子，同时包括碳原子、氮原子和硫原子可以被氧代。

“杂环基”，是指单环杂环基、稠杂环基系统，包括饱和、部分饱和的杂环基，但不包括芳环，例如3-12元杂环基、5-10元杂环基等；更为具体地，单杂环基可以为3-10元杂环基、3-8元饱和杂环基、5-8元杂环基、3-6元杂环基、4-7元杂环基、5-7元杂环基、5-6元杂环基、5-6元含氧杂环基、5-6元含氮杂环基、5-6元饱和杂环基等。饱和单杂环基的实例包括但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢噻吩基、咪唑烷基、吡唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、1,2-噻唑烷基、1,3-噻唑烷基、四氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、1,4-二氧杂环己烷基、1,4-氧硫杂环己烷基；部分饱和单杂环基的实例包括但不限于4,5-二氢异噁唑基、4,5-二氢噁唑基、2,5-二氢噁唑基、2,3-二氢噁唑基、3,4-二氢-2H-吡咯基、2,3-二氢-1H-吡咯基、2,5-二氢-1H-咪唑基、4,5-二氢-1H-咪唑基、4,5-二氢-1H-吡唑基、4,5-二氢-3H-吡唑基、4,5-二氢噻唑基、2,5-二氢噻唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、2H-噻喃基、4H-噻喃基、2,3,4,5-四氢吡啶基、1,2-异噁嗪基、1,4-异噁嗪基或6H-1,3-噁嗪基等。

稠杂环包括并杂环基、螺杂环基、桥杂环基，可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的，但不是芳香性的。

所述的并杂环基可以为6-12元并环基、7-11元并环基、6-10元并环基、6-12元饱和并环基、7-11元饱和并环基、，其实例包括但不限于：3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷、3,8-二氮杂双环[4.2.0]辛烷基、3,7-二氮杂双环[4.2.0]辛烷基、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯、八氢吡咯并[3,4-b]吡咯、八氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基、八氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶、2,3-二氢苯并呋喃-2-基、2,3-二氢苯并呋喃基-3-基、二氢吲哚-1-基、二氢吲哚-2-基、二氢吲哚3-基、2,3-二氢苯并噻吩-2-基、八氢-1H-吲哚基、八氢苯并呋喃基。

所述的螺杂环基可以为6-12元螺杂环基、7-11元螺杂环基、7-11元饱和螺杂环基、6-12元饱和螺环基，其实例包括但不限于：

所述的桥杂环基可以为6-12元桥杂环基、7-11元桥杂环基、6-12元饱和桥环基、7-11元饱和桥杂环基的实例包括但不限于：

本发明所述的3-12元杂环基、5-12元杂环基、5-10元杂环基、5-8元杂环基、5-6元杂环基、3-8元杂环基、4-6元杂环基，在不特别指明的情况下，包括所能够形成的单环和稠环结构。

本发明所述的芳基，是指芳香性的环状基团，包括指单环系统、双环系统或多环系统，可以为6-12元芳基、6-10元芳基，包括“6-8元单环芳基”，例如苯基等；包括“8-12元稠环芳基”，例如萘等。

本文所用的术语“杂芳基”是指至少一个环碳原子被选自O、S、N的杂原子替代的芳香性的环状基团，优选1-3个杂原子、1-4个杂原子，同时包括碳原子、硫原子被氧代的情况，例如碳原子被C(O)、S(O)、S(O)₂替代。杂芳基包括单杂芳基和稠杂芳基，可以是5-12元杂芳基、5-10元杂芳基、5-8元杂芳基、5-6元杂芳基，单杂芳基的代表性实例包括但不仅限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、恶唑基、异恶唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、***基和三嗪基。稠杂芳基是指两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子(即共用一个键)连接起来形成的至少含有一个杂原子的、具有芳香性的稠环结构。稠杂芳基可以为8-12元杂芳基、8-10元杂芳基、9-10元杂芳基，代表性例子包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、噌啉基、5,6-二氢喹啉-2-基、5,6-二氢异喹啉-1-基、吲唑基、吲哚基、异喹啉基、萘啶基、嘌呤基、喹啉基、5,6,7,8-四氢喹啉-2-基、5,6,7,8-四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢喹啉-4-基、5,6,7,8-四氢异喹啉-1-基、4,5,6,7-四氢并[c][1,2,5]恶二唑和6,7-二氢并[c][1,2,5]恶二唑-4(5H)酮基。

本发明所述的5-12元杂芳基、5-10元杂芳基、5-8元杂芳基，在不特别指明的情况下，包括所能够形成的单环和稠环结构。

本发明通式(III)中的

是指单键或者双键。

本发明所述的“治疗有效量”是指当给药到患者时至少能够减轻患者病症的症状的前述化合物、药物制剂、药物组合物的量。包含“治疗有效量”的实际量会根据多种情况而变化，多种情况包括但不限于所治疗的特定病症、病症的严重程度、患者的体格和健康状况以及给药途径。熟练的医疗从业者可容易地使用医疗领域中已知的方法确定合适的量。

本发明提供的通式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)所示的化合物、其药学上可接受的盐、酯或其立体异构体，其能够有效抑制ASK1的氨基酸磷酸化，抑制ASK1的激活；因此能够治疗和/或预防ASK1介导的疾病及相关疾病。

本发明化合物具有以下优点：

(1)本发明式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)化合物、其药学上可接受的盐、其酯及其立体异构体具有优异的ASK1抑制活性，能被安全的用于治疗和/或预防ASK1介导的酒精性/非酒精性脂肪肝、自身免疫病症、糖尿病及其并发症、及恶性肿瘤等相关疾病；

(2)本发明式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)化合物、其药学上可接受的盐、其酯及其立体异构体显示出良好的生物稳定性，作用更持久，生物利用度高；

(3)本发明式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)化合物、其药学上可接受的盐、其酯及其立体异构体显示出较低的毒性，耐药性好，安全性高。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实验中各缩写所代表的定义如下：

NIS:N-碘代丁二酰亚胺；Pd(PPh₃)₂Cl₂:双(三苯基膦)氯化钯。

实施例1：N-(6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺的制备

1.3-(6-氯吡啶-2-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶制备

将[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(400mg,3.4mmol)，2,6-二氯吡啶(600mg,4.0mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入二氯二三苯基膦钯(240mg,0.34mmol)，碳酸铯(2.2g,6.8mmol)，加热至110℃，16小时，过滤，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得化合物(300mg,产率:38.2％)。

2.6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-胺的制备

将3-(6-氯吡啶-2-基)-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(300mg,1.3mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(3mL)中，加入氨水(3mL)，微波加热至130℃，6小时，直接中压制备分离，甲醇:水＝3:2，得化合物110mg，产率:40.1％。

3.N-(6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺的制备

将6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-胺(110mg,0.52mmol)和5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(134mg,0.52mmol)溶于吡啶(13mL)中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(200mg,1.04mmol)，25℃，16小时，浓缩，柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得化合物(60mg,产率:25.4％)。

分子式:C₂₅H₂₀FN₇O 分子量:453.5 LC-MS(M/e):454.2(M+H⁺)

¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ:11.23(s,1H),9.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.15-8.19(m,2H),8.06(t,J＝8.0Hz,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.69(s,1H),7.65(d,J＝6.4Hz,1H),7.47-7.51(m,2H),7.17(s,1H),7.11(t,J＝6.8Hz,1H),2.24(s,3H),1.81-1.85(m,1H),0.75-0.80(m,2H),0.67-0.69(m,2H).

实施例2：N-(6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶-2-基)-5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺的制备

1.5-氟吡啶甲酸甲酯制备

将5-氟吡啶甲酸(8.0g,56.7mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入二氯亚砜(13.5g,113.4mmol)，加热至70℃，16小时，浓缩，剩余物直接用于下一步。(8.0g，产率:90.9％)

2.5-氟-2-(甲氧基羰基)吡啶1-氧化物的制备

将5-氟吡啶甲酸甲酯(8.0g,51.6mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(21g,121.7mmol)，加热至40℃，16小时，过滤，滤液中加入硫代硫酸钠溶液搅拌2小时，过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品直接用于下一步。

3.6-氯-5-氟吡啶甲酸甲酯的制备

将5-氟-2-(甲氧基羰基)吡啶1-氧化物(上步粗品,51.6mmol)溶于三氯氧磷(30mL)中，加热至70℃，16小时，倒入冰水中，3×200mL二氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得化合物(4.0g,产率:40.8％)。

4.6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酸甲酯的制备

将6-氯-5-氟吡啶甲酸甲酯(3.2g,16.7mmol)，[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(1.8g,15.1mmol)溶于1,4-二氧六环(40mL)中，加入二氯二三苯基膦钯(1.06g,1.5mmol)，碳酸铯(9.6g,29.5mmol)，微波加热至120℃，3小时，过滤，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得化合物(500mg,产率:12.2％)。

5.6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酸的制备

将6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酸甲酯(440mg,1.62mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，加入氢氧化锂(136mg,5.68mmol)，25℃，反应4小时，用1N盐酸调pH＝3-4，浓缩，反相制备(甲醇:水＝80:20)，得化合物350mg，产率：83.3％。

6.(6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶甲酸(0.35g,1.4mmol)溶于叔丁醇(35mL)中，加入三乙胺(0.14g,1.4mmol)，加热至70℃，16小时，过滤，浓缩，柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)得化合物(200mg,产率:43.4％)。

7.6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶-2-胺的制备

将(6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.61mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，25℃，3小时，浓缩，剩余物直接用于下一步。

8.5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰氯的制备

将5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(80mg,0.31mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入草酰氯(78mg,0.61mmol)，25℃，4小时，浓缩，剩余物直接用于下一步。

9.N-(6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶-2-基)-5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺的制备

将6-([1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)-5-氟吡啶-2-胺(70mg,0.30mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，加入三乙胺(160mg,1.6mmol)和5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰氯(上步粗品,0.31mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液，25℃，反应16小时，旋干，制备TLC板分离(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得化合物12mg，产率:8.3％。

分子式:C₂₅H₁₉F₂N₇O 分子量:471.5 LC-MS(M/e):471.9(M+H⁺)

¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ:9.68(d,J＝6.8Hz,1H),8.38(dd,J＝9.2Hz,3.2Hz,1H),7.94(t,J＝9.2Hz,1H),7.88(d,J＝9.2Hz,1H),7.74(d,J＝6.8Hz,1H),7.68(s,1H),7.58-7.62(m,1H),7.35(d,J＝11.2Hz,1H),7.14(t,J＝6.8Hz,1H),7.04(s,1H),2.27(s,3H),1.87-1.92(m,1H),0.86-0.89(m,2H),0.72-0.76(m,2H).

实施例3：5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基-N-(6-(5-甲基-[1,2,4]***[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺的制备

1.2-肼基-6-甲基吡啶的合成

将化合物2-溴-6-甲基吡啶(8.0g，46.5mmol)和水合肼(50mL)于110℃反应15小时。待反应结束，反应液用二氯甲烷萃取三次(100mL×3)，有机相合并、干燥、浓缩得产物粗品，直接用于下一步反应。

2.5-甲基-[1,2,4]***[4,3-a]吡啶的合成

将上步所得化合物2-肼基-6-甲基吡啶粗品溶于20mL原甲酸三甲酯中，110℃反应4小时。待反应结束，反应液浓缩，加入20mL甲基叔丁基醚，继续搅拌0.5小时，抽滤，滤饼干燥得产品4.4g，两步产率71.0％。

3.3-(6-氯吡啶-2-基)-5-甲基-[1,2,4]***[4,3-a]吡啶的合成

将化合物5-甲基-[1,2,4]***[4,3-a]吡啶(1.0g，7.5mmol)，2,6-二氯吡啶(1.1g，7.5mmol)双三苯基膦二氯化钯(526mg，0.75mmol)和碳酸铯(4.88g，15.0mmol)溶于30mL 1,4二氧六环中，氮气保护，110℃下反应16小时。待反应结束，浓缩，加入100mL水，二氯甲烷萃取三次(100mL×3)，有机相合并、干燥、浓缩，残留物经反相柱层析(0-30％甲醇，1‰三氟乙酸)得产品320mg，产率17.5％。

4.5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺的合成

将化合物5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(2.0g，7.7mmol)溶于50mL二氯甲烷中，滴加2滴DMF，0℃下将草酰氯(3.3mL)缓慢滴加到上述溶液，滴加完毕恢复至25℃继续反应1.5小时。待反应结束，反应液浓缩，加入20mL干燥的四氢呋喃，将此溶液缓慢滴加到50mL氨水中，25℃反应3小时。加入50mL二氯甲烷分液萃取，有机相干燥浓缩，残留物经硅胶柱层析(甲醇：二氯甲烷＝1:30)得产品1.8g，产率90.2％。

5.5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基-N-(6-(5-甲基-[1,2,4]***[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺的合成

将化合物5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰胺(82mg，0.316mmol)，3-(6-氯吡啶-2-基)-5-甲基-[1,2,4]***[4,3-a]吡啶(70mg，0.287mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(28mg，40％)，醋酸钯(12mg，20％)和碳酸铯(187mg，0.574mmol)溶于10mL 1,4-二氧六环中，氮气鼓泡1分钟，于微波下100℃反应4h。反应液浓缩，加入20mL水，二氯甲烷萃取三次(20mL×3)，有机相合并、干燥、浓缩，残留物依次经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)和高压制备反向柱层析(0-20％乙腈)得产品10mg，产率7.4％。

分子式：C₂₆H₂₂FN₇O 分子量：467.5 LC-MS(M/e):468.2(M+H⁺)

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.07(d,J＝14.4Hz,1H),8.3(d,J＝8.2Hz,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,1H),7.95(d,J＝7.8Hz,1H),7.76(d,J＝9.1Hz,1H),7.72(d,J＝7.1Hz,1H),7.44(d,J＝1.0Hz,1H),7.24(s,1H),7.17(d,J＝12.3Hz,1H),6.80(d,J＝1.0Hz,1H),6.64(d,J＝6.8Hz,1H),2.42(s,3H),2.27(s,3H),1.87-1.95(m,1H),0.87-0.93(m,2H),0.81-0.86(m,2H).

实施例4：5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基-N-(6-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺的制备

1、4-环丙基-1H-咪唑的制备

将2-溴-1-环丙基乙酮(4.9g,0.03mol)，醋酸甲脒(6.3g,0.06mmol)溶于叔丁醇(40mL)中，90℃反应10小时。反应结束后，冷却，浓缩，加入水，乙酸乙酯萃取，水相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，然后再加入乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，得到2.9g目标产物，收率89.1％。

2、2-氟-5-碘-4-甲基苯甲酸的制备

将2-氟-4-甲基苯甲酸(3.1g,20.0mmol)，NIS(4.5g,20.0mmol)加到三氟乙酸(20mL)中,25℃搅拌18小时，析出固体，抽滤，得到目标产物4.5g，收率81％。

3、5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸的制备

将2-氟-5-碘-4-甲基苯甲酸(1.4g,5.0mmol),4-环丙基-1H-咪唑(540mg,5.0mmol)，氧化亚铜(71mg,0.5mmol)，8-羟基喹啉(15mg,0.1mmol)，碳酸铯(3.3g,10.0mmol)加到DMSO(20mL)中，N₂保护下于100℃下反应10小时，冷却，倒入水中，乙酸乙酯萃取，水相用稀盐酸调节pH＝4，析出固体，抽滤，得到目标产物302mg，收率23.1％。

4、3-(6-氯吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶的制备

2,6-二氯吡啶(2.22g,0.015mol)，5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(1.58g,0.01mol)，Pd(PPh₃)₂Cl₂(491mg,0.7mmol)，碘化亚铜(95mg,0.5mmol)，碳酸铯(6.5g,0.02mol)依次加入到1,4-二氧六环中(20mL)，N₂气氛下，110℃反应14小时，反应结束后，冷却至30℃，浓缩，残余物经硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得目标产物1.6g，收率68.2％。

5、6-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-胺的制备

将3-(6-氯吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶(468mg,2.0mmol)，碘化亚铜(38mg,0.2mmol)，醋酸铵(154mg,2.0mmol)，氨水(10mL)加到1,4-二氧六环中(10mL)，150℃微波反应10小时，反应结束后，冷却，浓缩，经硅胶柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)，得到目标产物200mg，收率46.4％。

6、5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基-N-(6-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺的制备

将5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酸(130mg,0.5mmol)加到10mLDCM中，向反应液中缓慢滴加草酰氯(95mg,0.75mmol)，然后向其中加入DMF(0.5mL)中，25℃反应2小时，浓缩得到5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰氯备用。

将6-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-3-基)吡啶-2-胺(108mg，0.5mmol)，三乙胺(152mg，1.5mmol)，溶于DCM(10mL)中，25℃下向其中缓慢滴加上述制备的5-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯甲酰氯的DCM溶液(5mL)，滴加完成后继续搅拌2小时，浓缩，硅胶柱层析分离(二氯甲烷:甲醇＝12:1)得到目标产物30mg，收率13.1％。

分子式:C₂₅H₂₄FN₇O 分子量:457.2 LC-MS(M/e):458.1(M+H⁺)

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.92(s,1H),8.19(d,J＝7.6Hz,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(t,J＝8.0Hz,1H),7.86(d,J＝7.6Hz,1H),7.77(s,1H),7.62(d,J＝6.4Hz,1H),7.46(d,J＝10.4Hz,1H),4.45(t,J＝5.6Hz,2H),2.89(t,J＝6.4Hz,2H),2.23(s,3H),2.00-1.75(m,5H),0.85-0.75(m,2H),0.75-0.65(m,2H).

生物学实验例

以下通过生物学实验进一步阐述本发明化合物有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。

实验例1：本发明化合物的体外酶学活性

供试品：本发明实施例合成的化合物，其化学名称、结构式见表1。

实验材料：

试剂配制：

1.kinase detection buffer

a.解冻kinase detection buffer至室温，并观察沉淀是否存在；

b.如果沉淀存在，则在37℃孵育kinase detection buffer，并涡旋15min，溶解沉淀，或从kinase detection buffer中移除沉淀。

2.kinase detection reagent

a.平衡kinase detection buffer和kinase detection substrate至室温；

b.转移所有体积kinase detection buffer至kinase detection substrate，形成kinase detection reagent；

c.涡旋，混匀，形成均一溶液，kinase detection substrate进入溶液中至少1min。

实验方法：

1、化合物稀释

1)使用DMSO稀释Staurosporine至1mM，本发明化合物至1mM。

2)将上述Staurosporine及本发明化合物1000倍稀释至1μM。

然后使用TECAN EVO2000系统，3倍梯度稀释Staurosporine至11个浓度，最高浓度为1μM，3倍梯度稀释本发明化合物至11个浓度，最高浓度为1μM。

3)使用Echo550分别转移20nLStaurosporine、本发明化合物至384孔板。

2、酶反应实验

1)按表2配制1.3×酶反应体系，该体系中包含激酶，底物以及反应所需因子。

2)向反应孔中加入15μL 1.3×酶反应体系后于室温孵育30分钟。

表2.1.3×酶反应体系

3)向每孔中加入5μL 4×ATP溶液(见表3)启动酶反应。

表3.4×ATP溶液

4)将反应体系置于25℃反应90分钟后，加入20μL ADP-Glo^TM Reagent孵育40分钟。

5)加入40μL Kinase Detection Regent孵育35分钟，EnSpire^TM酶标仪读荧光值。

数据分析：

1)使用如下公式计算剩余酶活(％Remaining Activity)：

Remaining Activity(％)＝100％×(Lum_cpd-LumLC)/(Lum_HC-LumLC)

其中，Lum_HC：High control，即反应体系含有和化合物检测相同浓度的DMSO的发光信号强度；Lum_LC：Low control，即1uM Staurosporine的发光信号强度；Lum_cpd表示：表示供试品化合物的发光信号强度。

采用XLFIT软件进行曲线拟合，得出IC₅₀值。

实验结果：

从上述实验结果可以看出，本发明制备的化合物，其能够有效抑制ASK1的氨基酸磷酸化，抑制ASK1的激活；是有效的ASK1抑制剂；化合物2及化合物3同样具有理想的抑制ASK1活性。

实验例2：本发明化合物的体外细胞学抑制活性

待测化合物：

(1)供试品：本发明实施例合成的化合物，其化学名称、结构式见表1。

(2)对照药：GS-4997，自制，其结构式如背景技术所述。

实验材料：

其中：细胞培养基组成：DMEM+10％FBS+1×PS

实验方法：

1、转染

1)取25μL转染试剂Lipofectamine2000与0.7mL Opti-MEM培养基混合，取0.7mLOpti-MEM培养基稀释质粒DNA(pGL4.44(luc2P-AP1-RE-Hygro,AP1 for short)、pcDNA3.1/pcDNA3.1-hASK1)，然后，室温孵育5min。

2)孵育5min后，将质粒DNA混合物加入到转染试剂Lipo2000混合物中，充分混合，并室温孵育20min。

3)将混合后的溶液加入到含HEK-293T细胞的培养皿中进行转染，并放入37℃、5％CO₂培养箱中孵育16h。

2、待测化合物稀释及细胞铺板

1)使用DMSO稀释待测化合物至10mM储备液，使用TECAN EVO2000系统，3倍梯度稀释储备液至10个浓度；

2)使用Echo550转移30nL各浓度待测化合物至384孔细胞培养板中；

3)收集转染细胞，进行细胞计数，根据细胞计数的结果，将细胞用培养基稀释至所需密度，然后，取30μL细胞悬液(约10000个细胞)加入到有待测化合物的384孔细胞培养板中，将细胞培养板放入37℃、5％CO₂培养箱中孵育24h。

3、检测

1)将步骤2.3的384孔细胞培养板从培养箱中取出，并在室温下平衡15min；

2)实验前，解冻

Luciferase reagent，并平衡至室温；

3)加入30μLLuciferase reagent至384孔板，室温孵育10min后进行酶标仪读板。

4、数据分析

1)使用如下公式计算剩余活性(％Remaining Activity)：

Remaining Activity(％)＝100％×(Lum_sample-Lum_NC)/(Lum_PC-Lum_NC)

其中，Lum_PC：ASK1和AP1共转染的多孔发光信号值的平均值；

Lum_NC：AP1转染的多孔发光信号值的平均值；

Lum_sample：表示待测化合物的发光信号值的平均值；

2)采用XLFIT软件进行曲线拟合，得出IC₅₀值。

实验结果：

从上述实验结果可以看出，本发明化合物在体外细胞实验中，对ASK1激酶有较好的抑制作用，化合物2-4同样具有与化合物1类似的理想的体外细胞实验效果。

实验例3：本发明化合物的C57BL/6小鼠体内药代动力学实验

供试品：本发明部分化合物，自制，其化学名称和制备方法见各化合物的制备实施例。

对照药：GS-4997，自制，其结构式如背景技术所述。

受试动物：雄性小鼠(C57BL/6)，对照药：9只/给药途径，体重21-25g/只；化合物：9只/给药途径，体重23-26g/只。

供试品溶液制备：

溶解方案：

对照药IV给药：5％DMSO+10％PEG400+85％(28％HP-β-CD)

化合物IV给药：2％DMSO+10％PEG400+88％(28％HP-β-CD)

对照药/化合物PO给药：2％HPC+0.1％Tween80

空白溶媒1的配制：

28％ HP-β-CD溶液配制方法：称取HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)(28g)，加入灭菌注射用水(72mL)，得28％HP-β-CD的溶液。

空白溶媒2的配制：

2％HPC+0.1％吐温80的配制：称取HPC(羟丙基纤维素)(30g)，缓慢加入搅拌着的纯化水(1470mL)中，再加入吐温80(1.5mL)，搅拌至澄清。

具体配制方法：

对照药：

①称取对照药(1.68mg)，加入DMSO(二甲基亚砜)(135μL)，超声，溶解，加入PEG40099(聚乙二醇400)(270μL)，涡旋混匀，再加入空白溶媒1(2.292mL)，涡旋混匀，置于50℃恒温水浴锅中保温20min，配制成浓度为0.6mg/mL的透明溶液，此溶液作为对照药C57BL/6小鼠IV给药药液1；

②称取对照药(1.51mg)，加入空白溶媒2(4.874mL)，研磨，混悬均匀，配制成浓度为0.3mg/mL的混悬溶液，此溶液作为对照药C57BL/6小鼠PO给药药液2。

化合物：

①称取化合物(1.73mg)，加入DMSO(二甲基亚砜)(53.2μL)，超声，溶解，加入PEG400(聚乙二醇400)(266μL)，涡旋混匀，再加入空白溶媒1(2.342mL)，涡旋混匀，置于50℃恒温水浴锅中保温20min，配制成浓度为0.6mg/mL的透明溶液，此溶液作为化合物C57BL/6小鼠IV给药药液1；

②称取化合物(1.50mg)，加入空白溶媒2(4.615mL)，研磨，混悬均匀，配制成浓度为0.3mg/mL的混悬溶液，此溶液作为化合物C57BL/6小鼠PO给药药液2。

实验方法：

给药：

将供试品药液按照下表方法给药：

采血：

采集时间点：给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h。

每个时间点通过眼内眦采集100μL左右的血液，血液采集后放置到含有EDTA-K₂抗凝剂的抗凝管中，血液样品在4℃条件下8000转/分钟离心6min得到血浆样品，血浆于-80℃冰箱冻存。

血浆样品分析

对照药与化合物的血浆样品分析均采用蛋白沉淀法：取血浆20μL，加入内标(含甲苯磺丁脲50ng/mL的乙腈溶液)200μL，涡旋10min后，然后4000转/分钟离心20min，取上清液100μL，再加入100μL水，涡旋混匀3min后，LC-MS/MS分析。

表1：C57BL/6小鼠PK评价结果(IV)

表2：C57BL/6小鼠PK评价结果(PO)

AUC_last代表药时曲线下面积0→t

AUC_inf代表药时曲线下面积0→∞

CL代表清除率

V_ss表示稳态表观分布容积

T_max代表血药浓度达峰时间

C_max代表血药浓度达峰浓度

T_1/2代表半衰期

F％代表绝对生物利用度

由表1和表2的实验结果可知，与同等剂量的对照药相比，本发明化合物的药代动力学性质良好，尤其是暴露量明显高于对照药，生物利用度约为100％，明显优于对照药。

综上，本发明提供的通式(I)、(II)或(III)所示的化合物能够预防和/或治疗上述的ASK1介导的疾病及相关疾病，是高效、低毒、且稳定性较好的ASK1抑制剂。

以上对本发明所提供的ASK1抑制剂及其应用进行了详细介绍。本文中应用了具体实施例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。