阅读说明：本技术 一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法 (Method for preparing stomach-invigorating marine health-care product by fermentation and enzymolysis method ) 是由 王晓梦 宋能维 周毅 于 2019-11-01 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法,属于海洋生物技术领域。本申请通过发酵和酶解技术的耦合,提升鲍鱼、海参等海洋珍品的健胃保健功效,实现增强免疫力和益脾健胃功效的统一。本申请以鲍鱼、海参为原料,辅以海洋寡糖,集成现代生物分离技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、海洋生物资源营养调配技术,研制开发出高免疫增强能力及益脾健胃功效的健胃海洋保健品,其中原料配伍比例为鲍鱼100份、海洋寡糖2～5份、海参50～80份；混菌好氧发酵菌种主要包括冷解糖芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌；本申请所得健胃海洋保健品富含功能多肽、糖胺聚糖、黄酮、皂甙等多种功能活性物质,不但具有较强的免疫增强功效,而且具有显著的益脾健胃功效,是一种新型的海洋保健生物制品,具有广阔的市场应用前景。(The invention discloses a method for preparing a stomach-invigorating marine health product by a fermentation enzymolysis method, and belongs to the technical field of marine organisms. According to the application, the stomach invigorating and health care effects of seafood such as abalone and sea cucumber are improved through the coupling of fermentation and enzymolysis technologies, and the unification of the immunity enhancing and spleen and stomach invigorating effects is realized. The application takes abalone and sea cucumber as raw materials, is supplemented with marine oligosaccharide, integrates a modern bioseparation technology, a biological enzymolysis technology, a mixed bacteria microbial fermentation technology and a marine biological resource nutrition allocation technology, and develops the stomach-invigorating marine health care product with high immunity enhancement capability and spleen-tonifying and stomach-invigorating effects, wherein the raw materials comprise 100 parts of abalone, 2-5 parts of marine oligosaccharide and 50-80 parts of sea cucumber in a compatibility proportion; the mixed aerobic fermentation strain mainly comprises bacillus psychrosaccharolyticus, bacillus subtilis and bacillus cereus; the stomach-invigorating marine health product is rich in functional active substances such as functional polypeptide, glycosaminoglycan, flavone, saponin and the like, has a strong immunity enhancing effect, has a remarkable spleen and stomach invigorating effect, is a novel marine health biological product, and has a wide market application prospect.)

一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法

技术领域

本发明涉及一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，尤其是一种利用微生物协同发酵制备高免疫和益脾健胃保健功效的健胃海洋保健品，属于海洋生物技术领域。

背景技术

鲍鱼，古称鳆，又名镜面鱼、九孔螺、明目鱼、将军帽，是一种海生软体动物，属于腹足纲鲍科的单壳海生贝类，亦是中国传统的名贵食材，古称鳆鱼，山珍海味中的一种，素有“一口鲍鱼一口金”的说法。《食疗本草》记载，鲍鱼入肝通瘀，入肠涤垢，不伤元气。壮阳，生百脉，主治肝热上逆，头晕目眩，骨蒸劳热，青肓内障，高血压，眼底出血等症；现代研究结果表明，鲍鱼的营养价值极为丰富，含有二十多种氨基酸，每百克鲜鲍鱼肉含丰富蛋白质23.4克，脂肪3.4克，无机盐钙32毫克，3.0毫克铁，还有相当量的碘、锌、磷和维生素A、B1等，经常食用鲍鱼能养阴、平肝、固肾，可调整肾上腺分泌，调节血压，润燥利肠，治***，大便秘结等疾患。目前鲍鱼作为海珍品深受广大消费者青睐，食用方式主要以即食和干制品为主，存在着一定的弊端，一是食用方式单一，缺乏海参功能性强的活性提取物及其应用；二是烹制过或提取程中大量营养成分流失，影响功效；三是食用不便。因此，鲍鱼营养保健品的开发既能充分发挥鲍鱼的食效、药效功能，又便于消费者食用，顺应市场需求，具有较好的市场前景，这就对鲍鱼工功能活性物质的提取提出了更高的要求。

海参是一种重要的海洋无脊椎动物，肉质细嫩、营养丰富，是典型的高蛋白、低脂肪的食物，具有极高的营养价值和药用价值， 对于高血压、冠心病、肝炎等患者以及老年人而言是食疗佳品，它既可以增强机体的免疫力和造血功能，又可抑制多种霉菌及人类癌细胞的生长和转移等。早在一千多年前，我国就有食用海参的习惯，并将海参视为一种珍贵的滋补品，列为“海八珍”之首。《本草从新》中记载海参具有“甘、咸、温、补肾益精、壮阳疗痿”的功效，清朝《本草纲目拾遗》中记载“海参性温补，足敌人参故名海参； 味甘咸、补肾经、益精髓、消痰延、摄小便、壮阳疗痿、杀疮虫”。

本发明以鲍鱼、海参为原料，辅以海洋寡糖，利用复合微生物菌剂与海洋寡糖进行复合型发酵，制备一种全新的具有鲍鱼、海洋寡糖、海参等海洋生物资源多重健康作用的健胃海洋保健品，拓展了鲍鱼、海参等海洋生物资源的应用途径，既保重复发挥其营养保健功效，克服目前鲍鱼、海参多直接食用造成营养消化率低影响消化道系统健康等技术弊端。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，实现鲍鱼、海参等海洋生物资源的功能活性物质高效提取及抗氧化能力和益脾健胃保健功效显著提升，本申请提供一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，集成现代生物分离技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术、海洋生物资源营养调配技术，研制开发出高免疫增强能力和益脾健胃功效的健胃海洋保健品，满足保健、医疗、食品等领域对海洋生物功能活性成分的应用需求，该工艺技术发酵工艺简单高效、所得产品免疫增强能力强，并具有显著的益脾健胃功效，生产成本低，易于工业化规模生产。

本发明通过下述技术方案实现上述技术效果：

一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，其特征在于健胃海洋保健品制备过程中添加海洋寡糖和海参，其配伍比例为：鲍鱼100份、海洋寡糖2～5份、海参50～80份。

优选的，上述原料的配伍比例为；鲍鱼100份、海洋寡糖4份、海参80份。

优选的，上述海洋寡糖是壳寡糖和褐藻寡糖中的一种或两种的混合物。

最优的，所述海洋海洋是壳寡糖和褐藻寡糖的混合物，两者的质量比为1:3。

所述鲍鱼预处理步骤如下：将新鲜鲍鱼用自来水清洗干净，再用天然矿泉水或纯化水洗净沥干待用；匀浆：将上述鲍鱼加入高速匀浆机，加入天然矿泉水或纯化水，进行高速匀浆，直至全部能够通过2mm孔径圆筛；将匀浆后的鲍鱼通过高压蒸锅灭菌，冷却后待用。

所述海参预处理工艺如下：将新鲜海参用自来水清洗干净，再用天然矿泉水或纯化水洗净沥干待用；匀浆：将上述海参加入高速匀浆机，加入天然矿泉水或纯化水，进行高速匀浆，直至全部能够通过2mm孔径圆筛；将匀浆后的海参通过高压蒸锅灭菌，冷却后待用。

本申请提供一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，其特征在于所述健胃海洋保健品通过发酵酶解法制备，具体工艺包括：

（1）发酵液制备：将预处理后的鲍鱼和海参混合，并加入海洋寡糖，然后加入10倍的纯净水，然后加入发酵液质量比0.15～0.20% (NH₄)₂SO₄、0.10～0.15% KH₂PO₄、0.1%MgSO₄；

（2）灭菌：在121℃条件下灭菌15min；

（3）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比2～3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵6～12h；

（4）酶解：好氧发酵结束后加入1～2%的蛋白酶，在30～40℃条件下酶解2～4h；

（5）过滤：酶解后进行粗过滤除去发酵菌体；

（6）离心：以3000r/min速率离心分离，分离上清液；

（7）膜过滤：用孔径为0.15μm的微孔膜过滤制得复合发酵型健胃海洋保健品。

上述步骤（3）中的复合微生物菌剂为冷解糖芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的混合菌，其接种量比为1:2:1。

上述复合微生物菌剂种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，分别制得液体冷解糖芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥10⁹cfu/mL；然后将三种芽孢杆菌的种子液按比例混合。

上述蛋白酶为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶中的一种，优选的是木瓜蛋白酶。

进一步的，上述健胃海洋保健品可以浓缩后用于制备任何剂型的保健品，如保健胶囊、保健口服液等。

本发明提供一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，所得健胃海洋保健品富含功能多肽、糖胺聚糖、黄酮、皂甙等多种功能活性物质，不但具有显著的免疫增强功效，而且具有显著的益脾健胃功效。

本发明提供一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，与现有技术相比，具有以下显著优势：

（1）本申请科学配伍鲍鱼、海洋寡糖和海参，既可以充分利用微生物发酵和酶解作用将海参和鲍鱼等海珍品的功能活性物质最大程度的提取；又通过鲍鱼、海洋寡糖、海参间的活性物质在提取过程中的耦合显著提升健胃海洋保健品的免疫增强和益脾健胃功效，实验结果表明上述原料间的协同作用是复合微生物发酵取得预料不到功效的主要原因；

（2）本申请利用好氧菌（冷解糖芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌）共同发酵海洋生物资源制备功能性制品，充分利用微生物间的协同作用，提升健胃海洋保健品的提取率和体外抗氧化能力；多菌种混合发酵不仅提高了功能性制品的营养特性，尤其是蜡状芽孢杆菌显著提升了产品的益脾健胃保健功效；

（3）本发明采用复合发酵酶解法制备海洋保健品，显著提升了活性成分的提取率和产品营养保健功效，实验结果表明在此工艺条件制备的海洋功能性生物制品较先酶解后发酵的常规工艺显著提升，尤其是对益脾健胃保健效果影响显著。

具体实施方式

以下实施例中复合微生物菌剂活化方法均采用以下工艺制备：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，分别制得液体冷解糖芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥10⁹cfu/mL；然后将三种芽孢杆菌的种子液按1：2:1的比例混合。

以下实施例中鲍鱼预处理步骤如下：将新鲜鲍鱼用自来水清洗干净，再用天然矿泉水或纯化水洗净沥干待用；匀浆：将上述鲍鱼加入高速匀浆机，加入天然矿泉水或纯化水，进行高速匀浆，直至全部能够通过2mm孔径圆筛；将匀浆后的鲍鱼通过高压蒸锅灭菌，冷却后待用。

以下实施例中海参预处理工艺如下：将新鲜海参用自来水清洗干净，再用天然矿泉水或纯化水洗净沥干待用；匀浆：将上述海参加入高速匀浆机，加入天然矿泉水或纯化水，进行高速匀浆，直至全部能够通过2mm孔径圆筛；将匀浆后的海参通过高压蒸锅灭菌，冷却后待用。

实施例1

一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，具体制备工艺步骤包括：

（1）配料：按鲍鱼100份、海洋寡糖4份、海参80份比例准确配料；其中海洋寡糖是壳寡糖和褐藻寡糖的混合物，其质量比为1:3；

（2）发酵液制备：将预处理后的鲍鱼和海参混合，并加入海洋寡糖，然后加入10倍的纯净水然后加入发酵液质量比0.20% (NH₄)₂SO₄、0.15% KH₂PO₄、0.1%MgSO₄；

（3）灭菌：在121℃条件下灭菌15min；

（4）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵12h；

（5）酶解：好氧发酵结束后加入2%的蛋白酶，在30～40℃条件下酶解3h；

（6）过滤：酶解后进行粗过滤除去发酵菌体；

（7）离心：以3000r/min速率离心分离，分离上清液；

（8）膜过滤：用孔径为0.15μm的微孔膜过滤制得复合发酵型健胃海洋保健品。

实施例2

一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，具体制备工艺步骤包括：

（1）配料：按鲍鱼100份、壳寡糖4份、海参80份比例准确配料；

（2）发酵液制备：将预处理后的鲍鱼和海参混合，并加入海洋寡糖，然后加入10倍的纯净水然后加入发酵液质量比0.20% (NH₄)₂SO₄、0.15% KH₂PO₄、0.1%MgSO₄；

（3）灭菌：在121℃条件下灭菌15min；

（4）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵12h；

（5）酶解：好氧发酵结束后加入2%的蛋白酶，在30～40℃条件下酶解3h；

（6）过滤：酶解后进行粗过滤除去发酵菌体；

（7）离心：以3000r/min速率离心分离，分离上清液；

（8）膜过滤：用孔径为0.15μm的微孔膜过滤制得复合发酵型健胃海洋保健品。

实施例3

一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，具体制备工艺步骤包括：

（1）配料：按鲍鱼100份、褐藻寡糖4份、海参80份比例准确配料；

（2）发酵液制备：将预处理后的鲍鱼和海参混合，并加入海洋寡糖，然后加入10倍的纯净水然后加入发酵液质量比0.20% (NH₄)₂SO₄、0.15% KH₂PO₄、0.1%MgSO₄；

（3）灭菌：在121℃条件下灭菌15min；

（4）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵12h；

（5）酶解：好氧发酵结束后加入2%的蛋白酶，在30～40℃条件下酶解3h；

（6）过滤：酶解后进行粗过滤除去发酵菌体；

（7）离心：以3000r/min速率离心分离，分离上清液；

（8）膜过滤：用孔径为0.15μm的微孔膜过滤制得复合发酵型健胃海洋保健品。

对比实施例：

一种发酵酶解法制备健胃海洋保健品的方法，具体制备工艺步骤包括：

（1）配料：按鲍鱼100份、海参80份比例准确配料；

（2）发酵液制备：将预处理后的鲍鱼和海参混合，并加入海洋寡糖，然后加入10倍的纯净水然后加入发酵液质量比0.20% (NH₄)₂SO₄、0.15% KH₂PO₄、0.1%MgSO₄；

（3）灭菌：在121℃条件下灭菌15min；

（4）好氧发酵：向发酵液中加入发酵液质量比3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵12h；

（5）酶解：好氧发酵结束后加入2%的蛋白酶，在30～40℃条件下酶解3h；

（6）过滤：酶解后进行粗过滤除去发酵菌体；

（7）离心：以3000r/min速率离心分离，分离上清液；

（8）膜过滤：用孔径为0.15μm的微孔膜过滤制得复合发酵型健胃海洋保健品。

实施例4 不同工艺条件对健胃海洋保健品抗氧化能力的影响

测定实施例和对比实施例中健胃海洋保健品的抗氧化能力，其中·OH自由基清除率的测定参照邵秀芝等《食品化学试验》中所述方法；ABTS自由基清除率和DPPH自由基清除率的测定参照林恋竹等《反应时间对DPPH法、ABTS法评价抗氧化性结果的影响》中所述方法；测定结果如下：

试验结果表明本申请健胃海洋保健品具有显著的抗氧化能力，海洋寡糖能够较好的提高保健品的抗氧化能力，单海洋寡糖的组成对产品抗氧化能力影响不显著。

实施例5 不同工艺条件对健胃海洋保健品健胃功效的影响

1、对大鼠胃消化功能的影响试验

试验方法为：选健康大鼠40只,按性别、体重分层随机分5组,每组10只,雌雄各半。以上各组药物的剂量均配成12mL,按大鼠体重1.2mL/100g灌胃(ig),每日一次,连续3d。末次ig后,大鼠禁食(不禁水)24h。大鼠用***麻醉,剪开腹腔,结扎幽门,再由十二指肠ig1次,缝合切口。3h后折线取出胃,沿大弯剪开,倒出胃内容物收集在刻度离心管,1500r/min,离心15min记录胃液量。用滴定法测定胃总酸,用Mett法测定胃蛋白酶；

组别	胃液（mL）	胃总酸（mmol/h）	胃蛋白酶（U/h）
				对照组	4.62	184.84	199.19
实施例1试验组	7.15	345.26	378.65
				实施例2试验组	5.91	301.43	305.67.
实施例3试验组组	6.22	295.24	328.91
				对比实施例试验组	5.57	276.55	302.76

2、对小鼠肠运动功能的影响

试验方法为：选体重18～22g健康小鼠40只,按性别随机分5组,每组10只,雌雄各半；以上各药均配成等体积40mL,各组小鼠按体重0.2mL/10g ig2次(间隔4h)。末次ig后1h,按体重ig炭末液(5g炭末、1.5g梭甲基纤维素/100mL);ig后30min,小鼠脱颈椎处死,剪开腹腔取出小肠,测量炭末推进距离和小肠全长,计算炭末推进百分率,试验结果如下表所示：

组别	炭末推进率（%）
		对照组	62.78
实施例1试验组	82.84
		实施例2试验组	72.48
实施例3试验组组	71.99
		对比实施例试验组	70.58

上述实验结果表明本发明产品具有较好的益脾健胃保健效果，海洋寡糖的添加显著提升了产品的益脾健胃保健功效，尤其是壳寡糖和褐藻寡糖间的协同作用更是取得了“1+1>2”的技术效果。

以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对被发明进行了详细的说明，但对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而对这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。