阅读说明：本技术 一种藤茶中提取黄酮苷的方法及其应用 (The method and its application of flavonoid glycoside are extracted in a kind of vine tea ) 是由 辛文锋 蔡群虎 刘石磊 张文生 胡会泽 袁敏惠 王芬 张芳盛 郭霞 于 2019-08-16 设计创作，主要内容包括：本发明涉及植物活性成分提取领域,具体涉及一种从藤茶中提取黄酮苷的方法及其应用,包括以下步骤：(1)将藤茶粉碎、粗提得到提取液；(2)冷藏沉淀除杂；(3)树脂柱脱糖脱酸；(4)水相萃取精制；(5)脱盐、干燥。本发明所得到的产物黄酮苷含量较高、纯度较高、杂质较少。本发明所述方法得到的黄酮苷制成饮品后口感较好,味淡回甘极强。(The present invention relates to active components of plants to extract field, and in particular to a kind of method and its application that flavonoid glycoside is extracted from vine tea, comprising the following steps: (1) crushes vine tea, slightly raises extracting solution；(2) removing impurity by means of precipitation is refrigerated；(3) resin column desugar depickling；(4) water phase extracting and refining；(5) desalination, drying.The obtained product flavonoid glycoside content of the present invention is higher, purity is higher, impurity is less.The flavonoid glycoside that the method for the invention obtains is made good in taste after drink, and lightly seasoned time sweet extremely strong.)

一种藤茶中提取黄酮苷的方法及其应用

技术领域

本发明涉及植物活性成分提取领域，具体涉及一种从藤茶中提取黄酮苷的方法及其应用。

背景技术

藤茶，又名茅岩莓茶、长寿藤，藤茶不属于茶科植物，而是显齿蛇葡萄种的多年生藤本植物，学名为显齿蛇葡萄。

藤茶不含咖啡因，对胃肠道无刺激，有茶的苦涩味和回甘味，特别回甘味较为持久香醇。传统茶叶无酸涩味，藤茶带有一点酸涩味。

藤茶也属于中药范畴，藤茶味甘淡，性凉，具有降暑生津、消炎利尿、抗心律失衡、抗心肌缺血等功效。对皮肤癣癞、黄疸性肝炎、感冒风热、咽喉肿痛、急性结膜炎、失眠等都有极好的作用，为药食两用植物。

藤茶主要含黄酮类成分，总黄酮含量约7-10％之间，主要成分为二氢杨梅素，杨梅素，槲皮素，山萘酚等。其中含量最高的双氢杨梅素具有卓著的清热排毒，利喉消肿，抗菌消炎，抗流感乙肝病毒以及辅助降"三高"防治心脑血管等疾病之作用。

藤茶回甘味极佳，比传统茶叶回甘效果更强，持久，口感甘润，胜过滇橄榄之回甘，甘而不腻，无明显的橄榄甜腻味，然而藤茶对比传统茶叶冲泡后，水液混浊，带酸涩味，使得一部分人难以接受，由于藤茶所含主要黄酮成分，二氢杨梅素，杨梅素，槲皮素等均带苦味，而且水溶性较差，造成混浊，酸涩味也导致口感微差。所以欲研制口感甘甜的藤茶，需尽可能的去除二氢杨梅素，杨梅素，槲皮素等苦味成分。

发明专利申请CN 106942436A公开了一种高黄酮苷藤茶，以新鲜藤茶嫩茎叶为原料经过摊凉、高温炒杀、摊凉回潮、揉捻、解块、高温烘制、高温炒干的工序制成。本发明还公开了高黄酮苷藤茶的加工工艺，如下：以新鲜的藤茶嫩茎叶为材料，摊凉，茎叶放入260-280℃的高温锅，采用抛炒与焖炒相结合的炒制方式；藤茶摊凉回潮，放入揉捻机中揉捻，使成条率达到50％以上；藤茶茎叶解块；得到的藤茶茎叶放入烘干机，95-110℃烘制，直至茎叶含水量为40-50％；再在90-100℃炒干机上炒至茎叶的含水量为5-6％。本发明利用高温抑制氧化酶和水解酶的活性，减少了制作过程中黄酮苷类化合物的转化和丢失，并且香气物质比鲜叶明显增加。经过此方法处理后的藤茶，黄酮苷含量仅有20-40％，二氢杨梅素含量较高，可达16-34％，口感苦涩。

发明专利申请CN 104644816A公开了一种简单、实用，可以在实验室进行合成的黄酮苷制备方法。本发明的黄酮苷制备方法，其特征在于：准确称量枳壳药材粉5-30g，以60-80％乙醇200mL超声提取2-5次，每次30min。将乙醇提取液过滤，合并滤液。减压回流挥去乙醇，蒸至无醇味。准确称取100g大孔树脂填装20-40mm内径玻璃柱，将回收的药物水溶液部分上样于树脂柱，吸附过夜，以3倍柱体积超纯水清洗柱体，再以3倍柱体积60-80％乙醇溶液洗脱柱体，收集洗脱液。洗脱液60℃减压回流挥去液体，固态部分以20mL 50％乙腈-水溶液溶解，用0.22μm滤膜过滤后，得黄酮苷溶液。但是经过此方法处理后的黄酮苷溶液，成分包括了黄酮、二氢杨梅甙等苦味杂质成分，总黄酮含量虽高，但口感苦涩。

目前，还没有一种在藤茶中提取口感好、味甘的黄酮苷的方法，要得到口感较好的藤茶提取物，必须去除藤茶中苦味黄酮成分，只保留甘甜味成分。按本专利制备方法所得提取物得到的黄酮苷纯度较高、含量高、不含苦味黄酮杂质成分。

发明内容

为了解决现有技术中得到的黄酮苷含量低、杂质含量高等问题，本发明提供一种藤茶中提取黄酮苷的方法，包括以下步骤：

(1)将藤茶粉碎、粗提得到提取液；

(2)冷藏沉淀除杂：将提取液静置，离心过滤，得到滤液；

(3)树脂柱脱糖脱酸：将滤液经过树脂柱后，弃掉流出液，然后进行溶剂洗脱，收集洗脱液，低温旋干得到水溶性藤茶黄酮苷粗产物；

(4)水相萃取精制：将粗产物用水溶解，再加入聚乙二醇，超声静置，保留下层产物；

(5)脱盐、干燥：将得到的下层产物低温旋干，乙醇溶解，静置后过滤，将滤液冷冻干燥得到藤茶黄酮苷。

进一步地，所述步骤(1)，将藤茶粉碎至60-80目。

进一步地，所述步骤(1)，粗提过程为，粉碎后的生药中加质量15-20倍的纯水，回流提取，过滤得提取液，药渣再加入生药质量5倍量的纯水回流提取，过滤得二次提取液，合并提取液，真空浓缩到5倍生药量水提取液。

更进一步地，粉碎后的生药中加质量15-20倍的纯水，回流提取1.5-4h；药渣再加入生药质量5倍量的纯水回流提取1-1.5h；真空浓缩温度为50-60℃。

经过步骤(1)后得到的粗提液口感酸涩微苦，回甘。

进一步地，所述步骤(2)，将提取液2-5℃条件下静置12-16h。

步骤(2)是为了除掉杨梅素，二氢杨梅素，槲皮素等苦味杂质。将步骤1所得提取液，放于低温2-5℃的冰柜静置过夜，出现黄色结晶沉淀，离心过滤，沉淀为低温黄色结晶产物，味苦，产物主要为杨梅素，二氢杨梅素，槲皮素等，在生药中占4-5％。沉淀单独放置，取离心滤过液备用，该液体回甘，微酸涩，不苦，回甘成分为藤茶水溶性黄酮苷，为藤茶主要回甘类成分，酸涩成分主要是藤茶鞣酸，肉质果胶类杂质。

进一步地，所述步骤(3)，树脂柱为非极性大孔树脂XAD-1600、XAD-7、D101-C中的一种。

进一步地，所述步骤(3)，树脂重量：生药＝1-2:3。

进一步地，所述步骤(3)，洗脱溶剂为70％-100％甲醇或70％-100％乙醇。

步骤(3)中，取非极性大孔树脂，将步骤2得到的滤液过大孔树脂，流出液为藤茶多糖，氨基酸，鞣质，果胶等杂质(该部分流出液取少量冷冻干燥，后口尝无明显甜味或回甘，表明藤茶甜味回甘成分非多糖类)，流出液丢弃，纯水洗柱到无色后用70％乙醇洗脱藤茶黄酮类成分，三氯化铁反应鉴别到无黄酮类成分停止洗脱，收集洗脱液低温旋干得水溶性藤茶黄酮，黄酮苷，藤茶酚类成分，味淡回甘，无酸涩，苦等异味。

进一步地，所述步骤(4)，聚乙二醇为聚乙二醇-1000或聚乙二醇2000,，按重量计，粗产物：水＝1:10-15，聚乙二醇：水＝0.07-0.11:1。

进一步地，所述步骤(4)，超声时，加入磷酸二氢钾，按重量份计，水：磷酸二氢钾＝1:0.07-0.09。

步骤(4)后，所弃掉的上层为极性稍大的水溶性黄酮和酚类，占干燥产物20-30％，下层为黄酮苷(下层产物用三氟乙酸水解，薄层鉴别，表明下层为黄酮苷)，所得黄酮苷为淡黄色，对比步骤(3)所得产物味淡回甘极强。

进一步地，所述步骤(5)，在-10--15℃条件下静置2-4h。

将步骤5所得下层溶液低温旋干，无水乙醇溶解，放置于冰箱-10-15℃冷藏3小时，过滤掉乙醇液，不溶物为磷酸二氢钾，回收乙醇冷冻干燥得藤茶黄酮苷类，为藤茶主要回甘味有效成分。

本发明还提供一种藤茶中提取黄酮苷的方法，包括以下步骤：

(1)将藤茶粉碎、粗提得到提取液；

(2)冷藏沉淀除杂：将提取液静置，离心过滤，得到滤液；

(3)树脂柱脱糖脱酸：将滤液经过树脂柱后，弃掉流出液，然后进行溶剂洗脱，收集洗脱液，低温旋干得到水溶性藤茶黄酮苷粗产物；

(4)精制：将粗产物用水溶解，过大颗粒聚酰胺树脂柱，洗脱剂洗脱，浓缩干燥得到藤茶黄酮苷。

进一步地，所述步骤(1)，将藤茶粉碎至60-80目。

进一步地，所述步骤(1)，粗提过程为，粉碎后的生药中加质量15-20倍的纯水，回流提取，过滤得提取液，药渣再加入生药质量5倍量的纯水回流提取，过滤得二次提取液，合并提取液，真空浓缩到5倍生药量水提取液。

更进一步地，粉碎后的生药中加质量15-20倍的纯水，回流提取1.5-4h；药渣再加入生药质量5倍量的纯水回流提取1-1.5h；真空浓缩温度为50-60℃。

经过步骤(1)后得到的粗提液口感酸涩微苦，回甘。

进一步地，所述步骤(2)，将提取液2-5℃条件下静置12-16h。

步骤(2)是为了除掉杨梅素，二氢杨梅素，槲皮素等苦味杂质。将步骤1所得提取液，放于低温2-5℃的冰柜静置过夜，出现黄色结晶沉淀，离心过滤，沉淀为低温黄色结晶产物，味苦，产物主要为杨梅素，二氢杨梅素，槲皮素等，在生药中占4-5％。沉淀单独放置，取离心滤过液备用，该液体回甘，微酸涩，不苦，回甘成分为藤茶水溶性黄酮苷，为藤茶主要回甘类成分，酸涩成分主要是藤茶鞣酸，肉质果胶类杂质。

进一步地，所述步骤(3)，树脂柱为非极性大孔树脂XAD-1600、XAD-7、D101-C中的一种。

进一步地，所述步骤(3)，树脂重量：生药＝1-2:3。

进一步地，所述步骤(3)，洗脱溶剂为70％-100％甲醇或70％-100％乙醇

进一步地，所述步骤(4)，按重量计，粗产物：水＝1:10-15。

进一步地，所述步骤(4)，按重量计，聚酰胺树脂：粗产物＝20-25:1。

进一步地，所述步骤(4)，洗脱剂洗脱的方法为先用40％乙醇洗脱3个柱体积，洗脱杂质，再用70％乙醇洗脱5个柱体积，回收洗脱液。

本发明还提供上述方法得到的黄酮苷在制备含黄酮苷饮品中的应用。

本专利通过前期基础研究，对藤茶回甘味成分进行植物化学分析，发现藤茶多糖无明显甜味，不具有明显回甘性，对藤茶总黄酮类成分进行提取分离分析，发现总黄酮成分苦涩带回甘，经结晶法，硅胶柱层析法分离，发现总黄酮中，几个含量较高的黄酮例如二氢杨梅素，杨梅素，槲皮素等4、5个成分均具有苦涩味，无明显回甘，再对大极性黄酮成分分离分析时发现，其回甘味成分为黄酮苷类，其黄酮苷类味淡，微弱甜味，回甘极其强烈持久。通过实验工艺研究得到一种藤茶黄酮回甘成分制备工艺方法，口感较佳，可为饮品上品，去除了藤茶存在的酸涩，苦等异味，提取物入水即溶，澄清，回甘。

与现有技术对比，本发明的有益效果是：

1.本发明所得到的产物黄酮苷含量较高、纯度较高、杂质较少。

2.本发明所述方法得到的黄酮苷制成饮品后口感较好，味淡回甘极强。

3.本发明方法简单，不含有毒溶剂，绿色环保、安全，有益于工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚，但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1

(1)将1kg藤茶粉碎过60目筛、往粉碎后的生药中加入20kg水，回流提取，过滤得到提取液，药渣加入5kg水继续回流提取，过滤合并提取液，50℃真空浓缩至提取液5kg；

(2)将提取液于2℃冰柜中静置12h，离心过滤，得到滤液；

(3)树脂柱脱糖脱酸：将滤液经过XAD-1600型树脂柱后，弃掉流出液，然后进行70％乙醇洗脱，收集洗脱液，低温旋干得到55g水溶性藤茶黄酮苷粗产物，树脂的重量为0.3kg；

(4)水相萃取精制：将粗产物用550g水溶解，再加入聚乙二醇2000，加入39g磷酸二氢钾，超声静置，保留下层产物；

(5)脱盐、干燥：将得到的下层产物低温旋干，乙醇溶解，在-10℃条件下静置2h后过滤，将滤液冷冻干燥得到藤茶黄酮苷29g。

实施例2

(1)将1kg藤茶粉碎过80目筛、往粉碎后的生药中加入15kg水，回流提取，过滤得到提取液，药渣加入5kg水继续回流提取，过滤合并提取液，60℃真空浓缩至提取液5kg；

(2)将提取液于5℃冰柜中静置16h，离心过滤，得到滤液；

(3)树脂柱脱糖脱酸：将滤液经过XAD-7型树脂柱后，弃掉流出液，然后进行甲醇洗脱，收集洗脱液，低温旋干得到60g水溶性藤茶黄酮苷粗产物，树脂的重量为0.6kg；

(4)水相萃取精制：将粗产物用900g水溶解，再加入聚乙二醇1000，加入81g磷酸二氢钾，超声静置，保留下层产物；

(5)脱盐、干燥：将得到的下层产物低温旋干，乙醇溶解，在-15℃条件下静置4h后过滤，将滤液冷冻干燥得到藤茶黄酮苷31g。

实施例3

(1)将1kg藤茶粉碎过70目筛、往粉碎后的生药中加入15kg水，回流提取，过滤得到提取液，药渣加入5kg水继续回流提取，过滤合并提取液，50℃真空浓缩至提取液5kg；

(2)将提取液于4℃冰柜中静置13h，离心过滤，得到滤液；

(3)树脂柱脱糖脱酸：将滤液经过D101-C型树脂柱后，弃掉流出液，然后进行无水乙醇洗脱，收集洗脱液，低温旋干得到53g水溶性藤茶黄酮苷粗产物，树脂的重量为0.3kg；

(4)将53克干燥产物用0.53kg纯水溶解，过1kg大颗粒聚酰胺树脂柱，溶液上样后，梯度洗脱，先用40％乙醇洗脱3个柱体积，洗脱杂质，然后再用70％乙醇溶液洗脱5个柱体积，洗脱回甘味黄酮苷类成分。回收70％乙醇洗脱液，浓缩干燥得黄色粉末40g。

与实施例1-2相比，通过此种方法得到的产率较高，但纯度略低，色泽更深，口感相对较苦涩。

实施例4

(1)将1kg藤茶粉碎过80目筛、往粉碎后的生药中加入15kg水，回流提取，过滤得到提取液，药渣加入5kg水继续回流提取，过滤合并提取液，60℃真空浓缩至提取液5kg；

(2)将提取液于5℃冰柜中静置16h，离心过滤，得到滤液；

(3)树脂柱脱糖脱酸：将滤液经过XAD-7型树脂柱后，弃掉流出液，然后进行甲醇洗脱，收集洗脱液，低温旋干得到60g水溶性藤茶黄酮苷粗产物，树脂的重量为0.6kg；

(4)将60克干燥产物用0.6kg纯水溶解，过1.2kg大颗粒聚酰胺树脂柱，溶液上样后，梯度洗脱，先用40％乙醇洗脱3个柱体积，洗脱杂质，然后再用70％乙醇溶液洗脱5个柱体积，洗脱回甘味黄酮苷类成分。回收70％乙醇洗脱液，浓缩干燥得黄色粉末39g。

与实施例1-2相比，通过此种方法得到的产率较高，但纯度略低，色泽更深，口感相对较苦涩。

对比例1

与实施例1相比，不包含步骤(2)低温静置过程。最终得到产品25g。

对比例2

与实施例1相比，步骤(3)中，将树脂类型换为DS-401。最终得到产品23g。

对比例3

与实施例3相比，梯度洗脱方法不同，方法为：用甲醇洗脱3个柱体积，然后再用甲醇洗脱5个柱体积。最终得到产品27g。

对比例4

与实施例3相比，步骤(1)的提取方法不同，步骤(1)具体为：(1)将1kg藤茶粉碎过70目筛、往粉碎后的生药中加入15kg 50％乙醇溶液，回流提取，过滤得到提取液，药渣加入5kg50％乙醇溶液继续回流提取，过滤合并提取液，50℃真空浓缩至提取液5kg。最终得到30g产品。

效果例1

选取30名年龄为25-40岁的志愿者，将所得的10g产品溶于100g水中，志愿者品尝后进行评分，评分标准如下：

1分-味苦涩；2分-味较苦，微酸涩；3分-味微苦，回甘，微酸涩；4分-味甘，微苦，无酸涩；5分-味甘，无苦无酸涩。

经过评分，结果如下：

组别	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	对比例1	对比例2	对比例3	对比例4
									平均分	4.8	4.6	4.2	4.3	3.8	3.4	3.2	3.0

综合测试结果可知，本申请具备以下优点：

1.本发明所得到的产物甘味黄酮苷含量较高、纯度较高、杂质较少。

2.本发明所述方法得到的黄酮苷制成饮品后口感较好，味淡回甘极强。

3.本发明方法简单，不含有毒溶剂，绿色环保、安全，有益于工业化生产。

本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和修饰，这些也将视为本发明的保护范围。