一种预防瘢痕粘连的组合物、术后防粘连材料及应用
阅读说明：本技术 一种预防瘢痕粘连的组合物、术后防粘连材料及应用 (Composition for preventing scar adhesion, postoperative anti-adhesion material and application ) 是由 苑康见 柏桓 赵艳 张春霞 张在庆 闫永丽 于 2021-08-02 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种预防瘢痕粘连的组合物、术后防粘连材料及应用。硬膜外瘢痕粘连是术后腰椎手术失败综合征的重要原因,本发明目的在于提供一种载药型的术后密封材料,在密封伤口的同时实现药物稳定释放。本发明首先提供了一种预防瘢痕粘连的丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物,所述结合物能够有效抑制瘢痕组织形成,减缓药物降解速度,将其应用于聚乙二醇类密封剂能够获得低溶胀、快速凝结的密封效果,特别适用于椎板切除术等脊椎外科手术,具有良好的临床应用价值。(The invention relates to a composition for preventing scar adhesion, a postoperative anti-adhesion material and application. The invention aims to provide a drug-loaded postoperative sealing material which realizes stable release of a drug while sealing a wound, and provides an epidural scar adhesion which is an important reason for postoperative lumbar spine surgery failure syndrome. The invention firstly provides a mitomycin C-IFN gamma-sodium hyaluronate conjugate for preventing scar adhesion, which can effectively inhibit scar tissue formation and slow down drug degradation speed, can obtain low-swelling and rapid-coagulation sealing effects when applied to a polyethylene glycol sealant, is particularly suitable for vertebral column surgical operations such as laminectomy and the like, and has good clinical application value.)
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种预防瘢痕粘连的组合物、包含所述组合物的术后防粘连材料及其在脊柱外科手术中的应用。
背景技术
公开该
背景技术
部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。肌肉或韧带的创伤需要通过瘢痕组织形成来进行修复。椎板切除或开窗术后，硬脊膜与肌肉、椎板残缘相互接触，在创伤修复过程中，会在椎板缺损区形成的致密瘢痕组织，称为椎板切除膜。瘢痕组织与硬脊膜或神经根粘连，可使硬脊膜或神经根受牵拉、卡压，造成术后症状复发。有学者认为瘢痕组织本身也可造成疼痛，硬脊膜及神经根本身的炎症反应也会参与粘连发生，这种粘连会导致神经组织营养障碍和传导功能异常，与术后疼痛症状密切相关。因此，椎板切除后硬脊膜外瘢痕粘连是术后疼痛复发的重要因素。
硬膜外形成以后，二次手术难度增加，治疗效果差。因此，预防和减少经椎管内脊柱相关术后硬膜外瘢痕粘连一直是脊柱外科的研究热点。目前本领域预防术后粘连的主要方式包括植入防粘连材料、药物预防等方式。其中，植入型的防粘连材料应当具有良好的生物相容性，且具有恰当的降解时间，目前主要采用的防粘连材料包括磷酸三钙人工椎板、聚酰胺复合人工椎板等硬体材料，聚乳酸薄膜等膜状软质材料，透明质酸钠、几丁糖等流质材料，还包括自体脂肪等生物材料。上述防粘连材料中，防粘连膜具有适度的柔韧性及组织相容性，缺陷在于，膜材料已预先制成，厚度不可改变，在某些复杂的创面部位与组织的契合度较低，而导致防粘连的效果有所下降。而几丁糖类的防粘连液降解时间短，在较长慢性炎症存在的创面部位，其防粘连的效果不理想，并且抗压能力差，受体位影响较大，不适用于神经及其周围组织，肌腱等部位的粘连防治。在药物预防方式中，通常将丝裂霉素C等药物直接施予手术部位，这种用药方式，药物在创面留存时间短，难以得到理想的治疗效果。
水凝胶作为一种生物相容性材料，在医学上主要用于手术后防粘连、止血剂、填补缺损组织、防止组织液渗漏、缓释药物等。水凝胶密封黏合剂在形成凝胶之前以无固定形状的液体前体形式存在，通过简单的注射或涂敷直接作用于作用位点。这就决定水凝胶密封剂与手术创面具有良好适应性，并且递送方式简单快捷并且易于操作，而其独特的无定形液体前体的特性也赋予其可以更好接触作用位点、黏附更加牢固的能力。
发明内容
针对上述研究背景，发明人认为，凝胶可以很好的附着在作用点表面，本身具有预防瘢痕粘连的作用。并且，凝胶的降解时间可调控，将其作为药物载体有望实现药物的缓释直至创面愈合。因此，本发明提供了一种载药型凝胶，所述凝胶可牢固的黏附于伤口组织，实现药物的稳定释放效果，可作为一种术后防粘连密封材料。
基于上述技术目的，本发明提供以下技术方案：
本发明第一方面，提供一种预防瘢痕粘连的组合物，包括丝裂霉素C、干扰素及多糖；所述多糖选自葡聚糖、甲壳质、壳聚糖、透明质酸、纤维素、胶原、明胶、脱氧半乳聚糖或黏多糖。
本领域公知，干扰素(IFN)是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制，同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质(主要是糖蛋白)，是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性，是目前最主要的抗病毒感染和抗肿瘤生物制品。
本发明研究表明，丝裂霉素C与干扰素复合能够抑制瘢痕组织的形成。其中干扰素优选Ⅰ型干扰素，效果更好的方案中，采用IFN-β。本发明针对该组合物的研究发现，采用透明质酸与丝裂霉素C及干扰素复合具有更好的抑制瘢痕形成效果。现有技术中将丝裂霉素C或透明质酸用作术后防粘连材料的主要缺陷在于降解速度太快，药物在伤口表面的留存时间太短。本发明联想到提供一种上述药物的结合物形式，将上述活性成分通过共价键结合，有效的减缓了活性成分的降解时间，并且其抑制瘢痕组织生成的能力也显著优于未结合的混合组分。
本发明第二方面，提供第一方面所述组合物在制备术后防粘连材料中的应用。
基于第一方面所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠的结合物良好的亲和性和药物缓释效果，对于硬膜外或脑膜外等神经分布较为密集的手术部分具有更好的应用意义。但是上述结合物的降解时间仍然不足以支撑到伤口愈合，本发明联想到将其应用于高分子术后密封材料中，以进一步增加缓释效果。本发明选择聚乙二醇类亲水性密封材料设计了一种术后防粘连复合材料，在该复合材料的研究过程中，发明人发现，采用复合交联剂能够有效的降低溶胀效果和成胶速度，进一步的，发明人采用不同的溶剂体系溶解交联剂，经验证，三赖氨酸及聚乙烯亚胺复合效果良好，并且聚乙烯亚胺溶于多糖溶液中能够实现更好的混合效果。
上述水凝胶制剂凝结速度快，并且溶胀率低，应用于脊椎或脑等神经分布较为密集的部位，能够有效的减少对周围组织、神经的压迫作用。针对硬膜外科手术，特别是椎板切除术后常见的粘连及瘢痕并发症具有良好的防治效果。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明体外降解实验照片；
图2为实施例1中所述水凝胶皮下植入实验照片。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，为了解决如上的技术问题，本发明提出了一种预防瘢痕粘连的组合物，及所述组合物在制备术后防粘连材料中的应用。
本发明第一方面，提供一种预防瘢痕粘连的组合物，包括丝裂霉素C、干扰素及多糖；所述多糖选自葡聚糖、甲壳质、壳聚糖、透明质酸、纤维素、胶原、明胶、脱氧半乳聚糖或黏多糖。
第一方面所述组合物效果较好的方案中，所述多糖选自几丁糖、纤维素、葡聚糖、壳聚糖或透明质酸钠。
优选的方案中，所述多糖为壳聚糖、葡聚糖或透明质酸钠。
其中，透明质酸钠本身具有良好的抑制瘢痕组织的效果，并且具有理想的生物亲和性。进一步优选的方案中，所述多糖为透明质酸钠。
优选的，所述干扰素IFNγ为Ⅰ型干扰素，进一步的，为IFN-β。
上述优选技术方案的一种实施方式中，所述组合物是一种丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠的结合物，丝裂霉素C、IFNγ及透明质酸钠之间通过共价键结合，所述共价结合的构建方式包括通过交联剂进行交联，所述交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。
一种具体的实施方式中，所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物的制备方法如下：将透明质酸钠溶于pH6.5的PBS缓冲液中，加入EDC后低速搅拌25～35min以活化透明质酸钠；将丝裂霉素C及IFNγ加入活化后的透明质酸钠缓冲液中，室温下搅拌6～10h得到所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物；反应完成后，可采用透析或洗脱等方式对产物进行纯化。
本发明第二方面，提供第一方面所述组合物在制备术后防粘连材料中的应用。
优选的，所述术后防粘连材料为包括但不限于膜制剂、液体制剂、凝胶制剂中的一种。
进一步的，所述术后防粘连材料为一种水凝胶，所述水凝胶为聚乙二醇活化酯的交联产物。
上述实施方式中，所述水凝胶制剂的原料包括聚乙二醇类活化酯、丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物、交联剂及缓冲溶液。
所述聚乙二醇类活化酯选自四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯(4-arm-PEG-SS)、四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯(4-arm-PEG-SG)、四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺癸二酸酯(4-arm-PEG-SSeb)、六臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯(6-arm-PEG-SS)、六臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯(6-arm-PEG-SG)、六臂聚乙二醇琥珀酰亚胺癸二酸酯(6-arm-PEG-SSeb)、八臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯(8-rm-PEG-SS)、八臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯(8-arm-PEG-SG)或八臂聚乙二醇琥珀酰亚胺癸二酸酯(8-arm-PEG-SSeb)。分子量为3000～20000道尔顿。
所述交联剂选自多聚赖氨酸或聚乙烯亚胺中的一种或其组合。
效果较好的实施方式中，所述交联剂为多聚赖氨酸与聚乙烯亚胺的组合。
进一步的，所述多聚赖氨酸为三聚赖氨酸、四聚赖氨酸或五聚赖氨酸。
优选的，所述缓冲液包括酸性缓冲液及碱性缓冲液，其中，酸性缓冲液pH值为3～5，进一步为邻苯二甲酸缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液或醋酸缓冲液中一种或多种；所述碱性缓冲液pH值为9～11，进一步的，所述碱性缓冲液为磷酸缓冲液、巴比妥钠缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、碳酸缓冲液中的一种或多种。
上述优选技术方案一种效果较好的实施方式中，所述多聚赖氨酸为三赖氨酸，并且三赖氨酸与聚乙烯亚胺分别置于不同的溶解体系中：所述多聚赖氨酸置于缓冲液中，而聚乙烯亚胺溶于多糖溶液中。
其他具体的实施方式中，所述水凝胶制剂中还包括抗氧化剂、染色剂或其他药物等。
本发明第四方面，提供一种应用于外科手术的密封剂试剂盒，所述试剂盒中包括第一方面所述预防瘢痕粘连的组合物。
优选的，所述试剂盒中还包括聚乙二醇活化酯、交联剂或缓冲溶液。
优选的，所述试剂盒中还包括注射器及混合装置。
临床治疗过程中，在术后快速制得上述凝胶制剂对减少创面感染概率具有重要意义。本领域技术人员有动机采用水凝胶混合及喷涂装置，如采用注射器及喷头等实现上述原料的快速混均及涂抹效果。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本发明的技术方案。
实施例1
本实施例中，提供一种丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物，其中，透明质酸钠的分子量为5kDa，所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物的制备方法如下：
取透明质酸钠溶于pH6.5的PBS缓冲液中，加入适量EDC后在室温条件下进行低速搅拌30min以活化透明质酸钠的羧基。将丝裂霉素C及IFNγ溶于PBS缓冲液中，在搅拌条件下缓慢加入活化后的透明质酸钠中，滴加完成后，室温条件下搅拌8h，采用对PBS透析的方式对上述结合物进行纯化，纯化后的产品冻干后待用。
实施例2
本实施例中，提供一种丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物，其中，透明质酸钠的分子量为10kDa，所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物的制备方法如下：
取透明质酸钠溶于pH6.0的PBS缓冲液中，加入适量EDC后在室温条件下进行低速搅拌35min以活化透明质酸钠的羧基。将丝裂霉素C及IFNγ溶于PBS缓冲液中，在搅拌条件下缓慢加入活化后的透明质酸钠中，滴加完成后，室温条件下搅拌10h，采用柱色谱洗脱获得所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物，纯化后的产品冻干后待用。
实施例3
本实施例中，提供一种丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物，其中，透明质酸钠的分子量为10kDa，所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物的制备方法如下：
取透明质酸钠溶于pH6.0的PBS缓冲液中，加入适量EDC后在室温条件下进行低速搅拌25in以活化透明质酸钠的羧基。将丝裂霉素C及IFNγ溶于PBS缓冲液中，在搅拌条件下缓慢加入活化后的透明质酸钠中，滴加完成后，室温条件下搅拌10h，采用柱色谱洗脱获得所述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物，纯化后的产品冻干后待用。
实施例4
本实施例中，提供一种术后防粘连材料，所述防粘连材料为一种聚乙二醇类水凝胶制剂，所述水凝胶制剂中各成分及比例如下：
(a)四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯0.4g，丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物0.25g；
(b)三赖氨酸(10g/L)-硼酸盐缓冲液(65mM)2.5mL，pH＝9.8；
(c)聚乙烯亚胺(分子量2000)质量分数8％-透明质酸钠7％-水溶液0.1mL；
(d)磷酸盐缓冲液(1.5mM)2.4mL，pH＝4.0。
所述水凝胶的制备方法如下：将上述(a)和(d)混合得到溶液A，将(b)与(c)混合得到溶液B后，将溶液A和B混合得到凝胶制剂。
实施例5
本实施例中，提供一种术后防粘连材料，所述防粘连材料为一种聚乙二醇类水凝胶制剂，所述水凝胶制剂中各成分及比例如下：
(a)六臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯0.4g，丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物0.25g；
(b)三赖氨酸(10g/L)-硼酸盐缓冲液(65mM)2.5mL，pH＝9.8；
(c)聚乙烯亚胺(分子量2000)质量分数8％-透明质酸钠7％-水溶液0.1mL；
(d)磷酸盐缓冲液(1.5mM)2.4mL，pH＝4.0。
所述水凝胶的制备方法如下：将上述(a)和(d)混合得到溶液A，将(b)与(c)混合得到溶液B后，将溶液A和B混合得到凝胶制剂。
实施例6
本实施例中，提供一种载药外科密封胶，所述外科密封胶中所述水凝胶的中各成分及比例如下：
(a)六臂聚乙二醇琥珀酰亚胺癸二酸酯0.45g，丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物0.2g；
(b)三赖氨酸(15g/L)-硼酸盐缓冲液(65mM)2.5mL，pH＝9.8；
(c)聚乙烯亚胺(分子量1800)质量分数10％-壳聚糖5％-水溶液0.1mL；
(d)磷酸盐缓冲液(1.5mM)2.4mL，pH＝4.0。
所述水凝胶的制备方法如下：将上述(a)和(d)混合得到溶液A，将(b)与(c)混合得到溶液B后，将溶液A和B混合得到凝胶制剂。
对比例1
该对比例中，提供一种丝裂霉素C、IFNγ及透明质酸钠的混合溶剂，将实施例1中同等剂量的丝裂霉素C、IFNγ及透明质酸钠加入PBS溶液中搅拌30min使其混合均匀。
对比例2
该对比例中，提供一种丝裂霉素C、IFNγ及壳聚糖的混合溶剂，将实施例1中同等剂量的丝裂霉素C、IFNγ及壳聚糖加入PBS溶液中搅拌30min使其混合均匀。
对比例3
该对比例中，提供一种丝裂霉素C、IFNγ及壳聚糖的结合物，将实施例1中同等剂量的透明质酸钠替换为同等分子量的壳聚糖制备得到一种丝裂霉素C-IFNγ-壳聚糖结合物。
对比例4
本实施例中，提供一种术后防粘连材料，所述防粘连材料为一种聚乙二醇类水凝胶制剂，所述水凝胶制剂中各成分及比例如下：
(a)四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯0.4g，丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物0.25g；
(b)三赖氨酸(10g/L)-硼酸盐缓冲液(65mM)2.5mL，pH＝9.8；
(c)聚乙烯亚胺(分子量2000)质量分数8％-水溶液0.1mL；
(d)磷酸盐缓冲液(1.5mM)2.4mL，pH＝4.0。
所述水凝胶的制备方法如下：将上述(a)和(d)混合得到溶液A，将(b)与(c)混合得到溶液B后，将溶液A和B混合得到凝胶制剂。
对比例5
本实施例中，提供一种术后防粘连材料，所述防粘连材料为一种聚乙二醇类水凝胶制剂，所述水凝胶制剂中各成分及比例如下：
(a)四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯0.4g，丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物0.25g；
(b)三赖氨酸(10g/L)-硼酸盐缓冲液(65mM)2.5mL，pH＝9.8；
(c)磷酸盐缓冲液(1.5mM)2.4mL，pH＝4.0。
所述水凝胶的制备方法如下：将上述(a)和(c)混合后注入(b)中，混合后将其注入待密封的创面。
本发明针对上述丝裂霉素C-IFNγ-透明质酸钠结合物的瘢痕抑制效果进行了考察，考察方法包括测定大鼠硬膜外瘢痕组织中胶原纤维的含量，测定方式如下：选取健康成熟Wistar大鼠，麻醉后按照腰椎板切除术实施标准手术，大鼠麻醉后采取俯卧位放置，手术切口位于背侧正中，分离皮肤、筋膜与肌肉后去除棘突和椎板，手术后关闭窗口。分别将实施例1-3及对比例1-3中所述组合物置于创面处。术后三天连续灌服抗生素治疗，手术后14天处死大鼠，取硬膜外粘连瘢痕组织，烘干后通过紫外吸光度检测瘢痕组织中羟脯氨酸的含量从而对胶原纤维的含量进行检测，检测结果如下表1所示：
表1
组别
Hyp含量μg/mg样品
体外降解时间(d)
实施例1
1.19±0.11
3.4
实施例2
1.27±0.24
4.1
实施例3
1.08±0.41
4.2
对比例1
1.53±0.14
1.2
对比例2
1.88±0.31
0.8
对比例3
1.69±0.34
1.5
从上表结果可以看出，本发明提供的结合物形式能够有效的延长药物在伤口停留的时间，有效的延长了药物的作用时间。通过测定羟脯氨酸含量可以看出，结合物形式可以有效的抑制瘢痕组织中胶原纤维的形成，而采用混合物形态或其他多糖制备的结合物均无法达到上述效果。本发明研究过程中，还针对葡聚糖、明胶等多种多糖进行了测试，均无法实现透明质酸结合的效果。
本发明还针对实施例4-6中所述水凝胶的以下各实施例中对其水凝胶体外降解时间、溶胀率和成胶速度进行了检测，具体检测方法如下：
体外降解时间：将水凝胶喷入锥形瓶中，称重，按照0.1g/mL加入生理盐水，盖上瓶塞，封口膜密封后放入37±1℃震荡培养箱内，观察凝胶消失时间。
溶胀率的检测：将上述制得的水凝胶称重并移至磨口三角瓶中，加入已预热至37±1℃的pH为7.4磷酸缓冲液中(磷酸缓冲液配方为：称取磷酸二氢钾1.36g，加0.1mol/mL的氢氧化钠溶液79mL，用水稀释至200mL，即得pH为7.4的磷酸缓冲液)，将磨口三角瓶放入37±1℃培养箱内，每隔几小时取出样品用滤纸吸去表面水分，称量，至重量不再增加为止，结束称量。按下式计算凝胶溶胀率。
溶胀率＝(溶胀后样品质量-取样量)×100％/取样量。
成胶时间的检测：将(a)第一注射器和(c)粉剂瓶进行连接，将液体注入粉剂瓶溶解聚乙二醇衍生物，溶解完成后将液体抽回第一注射器，将0.5mL的液体注入试管，放入磁子，将试管放在磁力搅拌器上使磁子转动，然后快速将0.5mL(b)第二注射器中的液体注入试管，并开始计时，观察磁子停止转动或速度明显改变时停止计时，此时间即为成胶时间。检测结果如下表2：
表2
组别
成胶时间/s
溶胀率/％
体外降解时间/d
实施例4
0.67
0.85
7.8
实施例5
0.75
0.97
8.1
实施例6
0.88
0.78
7.9
对比例4
1.23
2.15
6.4
对比例5
1.58
3.14
5.4
为了验证本发明所述水凝胶产品的安全性能，本发明将实施例4-6中制备的水凝胶植入新西兰大白兔皮下，对本发明水凝胶产品的生物相容性机体内降解时间进行考察。实验家兔采用氯胺酮8mg+戊巴比妥钠(0.2mg/kg)腹腔注射进行麻醉，并将水凝胶注射于家兔背部皮下，每个位点注射1mL。术后每2周观察家兔变化，处死家兔后取注射点皮肤观察包膜状况。如图2所示，2周时切开家兔皮肤后可观察到注射点具有薄层透亮的包膜，包膜柔软，少量毛细血管增生，表明本发明中提供的水凝胶产品具有良好的生物相容性。实施例4-6中所述水凝胶的体内降解时间为8-12周。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。