甲磺酸帕拉德福韦b晶型及其应用
阅读说明：本技术 甲磺酸帕拉德福韦b晶型及其应用 (Paradofovir mesylate B crystal form and application thereof ) 是由 郭维博 张登科 金伟丽 何凯敏 高中强 田丹 于 2020-05-07 设计创作，主要内容包括：甲磺酸帕拉德福韦B晶型及其应用。本发明公开了(+)-顺-9-{2-[4-[(S)-(3-氯苯基)-2-氧-1,3,2–二氧磷杂六环-2-亚甲基]-1-乙基}腺嘌呤甲磺酸盐(甲磺酸帕拉德福韦)的B晶型。本发明还提供了包括该晶型的药物组合物以其在制备药物中的应用。(A sulfonic acid peradfovir B crystal form and application thereof. The invention discloses a B crystal form of (+) -cis-9- {2- [4- [ (S) - (3-chlorphenyl) -2-oxo-1, 3, 2-dioxaphosphorinane-2-methylene ] -1-ethyl } adenine methanesulfonate (peradfovir methanesulfonate). The invention also provides a pharmaceutical composition comprising the crystal form and application thereof in preparing medicaments.)
本申请是中国专利申请第202010376833.3号(申请日：2020年5月7日)的分案申请，其全文纳入本申请参考。
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体而言，本发明涉及甲磺酸帕拉德福韦的晶型及其应用等。
背景技术
甲磺酸帕拉德福韦，英文名称为Pradefovir Mesylate，化学名称为(+)-顺-9-{2-[4-[(S)-(3-氯苯基)-2-氧-1,3,2–二氧磷杂六环-2-亚甲基]-1-乙基}腺嘌呤甲磺酸盐，其结构如式(I)所示：
该化合物是中国专利CN1964967A号公开的PMEA肝靶向前药，在肝脏CYP3A4酶的催化下转化为有药物活性的PMEA，适用于治疗乙型肝炎病毒活动复制，并伴有血清氨基酸转移酶持续升高或肝组织学活动性病变的肝功能代偿的成年慢性乙型肝炎患者。可以显著抑制乙型肝炎病毒的复制，疗效显著。对拉米夫定耐药的变异株也有明显的抑制作用，解决了抗乙肝病毒药物的耐药性问题；与阿德福韦酯相比，其肝靶向性避免了药物代谢造成的肾毒性。
中国专利CN102827206A报道了两种晶型，晶型Ⅰ和晶型Ⅱ；晶型Ⅰ是在含水的乙腈中结晶所得；晶型Ⅱ是在含水的甲醇中所得。此后没有新的甲磺酸帕拉德福韦晶型被报道。
在甲磺酸帕拉德福韦是否进一步存在新的(单)晶型尚无法预期的情况下，可用于结晶的现有溶剂及混合溶剂更是天文数字般多，然而，本发明人没有畏缩，进行了长期艰苦的研究，发现对甲磺酸帕拉德福韦进行结晶，晶体分布比较复杂，常结晶出多晶，不容易获得单晶，但是本发明人最终令人预料不到地有效结晶获得了一系列晶体，并从中优选出5种不同的单晶，在稳定性方面带来了优势，从而便于生产、储运和/或提高肝靶向治疗的安全性。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供甲磺酸帕拉德福韦的的新晶型。另外，本发明还提供了该晶型的制备方法、包含该晶型的药物以及治疗方面的应用和检测方法等。
具体而言，在第一方面，本发明提供了甲磺酸帕拉德福韦的晶体，其选自A晶型、B晶型、C晶型、D晶型和E晶型之一。
在本文中，如无相反的指示，术语“晶体”和“晶型”可以互换使用，指的是内部质点在三维空间呈周期性重复排列的固体；术语“(某)晶型”、“晶型(某)”和“(某)型晶体”可以互换使用，指的是具体所指代的某种晶体。优选本发明第一方面的晶体是单晶。
在本发明第一方面的晶体中，A型晶体具有基本上如图1所示的X-射线粉末衍射图谱。在本发明的
具体实施方式
中，A晶型的X-射线粉末衍射图谱在2θ(°,±0.2)：11.0°，12.0°，13.0°，16.5°，17.6°，19.7°，20.5°，22.0°，24.2°，26.4°，27.5°，27.9°，28.4°，33.6°，41.5°，45.6°处有衍射峰；另外，A型晶体的差热分析曲线在196.9℃有一尖吸热峰；
B型晶体具有基本上如图3所示的X-射线粉末衍射图谱。在本发明的具体实施方式中，B晶型的X-射线粉末衍射图谱在2θ(°,±0.2)：11.8°，12.8°，16.3°，17.4°，19.7°，20.2°，21.9°，24.0°，25.3°，26.1°，26.9°，27.2°，27.7°，28.1°处有衍射峰；另外，B型晶体的差热分析曲线在191.8℃有一尖吸热峰；
C型晶体具有基本上如图5所示的X-射线粉末衍射图谱。在本发明的具体实施方式中，C晶型的X-射线粉末衍射图谱在2θ(°,±0.2)：13.0°，16.6°，17.6°，19.7°，22.2°，24.2°，26.4°，28.3°处有衍射峰；另外，C型晶体的差热分析曲线在193.4℃有一尖吸热峰；
D型晶体具有基本上如图7所示的X-射线粉末衍射图谱。在本发明的具体实施方式中，D晶型的X-射线粉末衍射图谱在2θ(°,±0.2)：15.5°，17.2°，17.6°，21.9°，26.1°处有衍射峰；另外，D型晶体的差热分析曲线在192.6℃有一尖吸热峰；
E型晶体具有基本上如图9所示的X-射线粉末衍射图谱。在本发明的具体实施方式中，D晶型的X-射线粉末衍射图谱在2θ(°,±0.2)：12.9°，16.4°，17.4°，19.5°，22.0°，26.2°，28.2°处有衍射峰；另外，D型晶体的差热分析曲线在193.2℃有一尖吸热峰。
现有技术中能用于结晶的溶剂种类繁多，而不同种类和比例的溶剂组成的混合溶剂更是无法计数，而结晶实践基本上还留于经验，一般无法根据结晶条件预测出结晶出的晶型。而本发明人通过对甲磺酸帕拉德福韦长期而艰苦的研究，并且凭借了一些运气，终于发现了能用于结晶甲磺酸帕拉德福韦的溶剂及其制备方法。因此在第二方面，本发明提供了本发明第一方面的晶体的制备方法。
对于A晶型，其制备方法包括：将甲磺酸帕拉德福韦溶解于水或甲醇，搅拌下滴加丙酮、甲基叔丁基醚或乙酸乙酯，然后于10～30℃搅拌，再降温至0～10℃搅拌，收集晶体并干燥。其中，甲磺酸帕拉德福韦可以是无定型的，也可以是CN102827206A报道的晶型I或晶型II，还可以是B晶型、C晶型、D晶型或E晶型。
对于B晶型，其制备方法包括：将甲磺酸帕拉德福韦溶解于1,4-二氧六环，于10～30℃搅拌，收集晶体并干燥。其中，甲磺酸帕拉德福韦可以是无定型的，也可以是CN102827206A报道的晶型I或晶型II，还可以是A晶型、C晶型、D晶型或E晶型。
对于C晶型，其制备方法包括：将甲磺酸帕拉德福韦溶解于DMF，搅拌下滴加MTBE，然后于10～30℃搅拌，收集晶体并干燥。其中，甲磺酸帕拉德福韦可以是无定型的，也可以是CN102827206A报道的晶型I或晶型II，还可以是A晶型、B晶型、D晶型或E晶型。
对于D晶型，其制备方法包括：将甲磺酸帕拉德福韦加热溶解于含有水的THF溶液，降温至10～30℃搅拌，收集晶体并干燥。其中，甲磺酸帕拉德福韦可以是无定型的，也可以是CN102827206A报道的晶型I或晶型II，还可以是A晶型、B晶型、D晶型或E晶型。
对于E晶型，其制备方法包括：将甲磺酸帕拉德福韦与乙腈混合，加热回流溶解，降温至10～30℃搅拌，收集晶体并干燥。其中，甲磺酸帕拉德福韦可以是无定型的，也可以是CN102827206A报道的晶型I或晶型II，还可以是A晶型、B晶型、D晶型或E晶型。
在第三方面，本发明提供了用于治疗或预防肝脏疾病或代谢性疾病的药物，其包括本发明第一方面的晶体和药学上可接受的辅料，优选其由本发明第一方面的晶体和药学上可接受的辅料组成。在本文中，药学上可接受的辅料指无毒的填充剂、稳定剂、稀释剂、佐剂或其他制剂辅料。例如，稀释剂、赋形剂，如水、生理盐水、微晶纤维素等；填充剂，如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如淀粉、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体，如高岭土和/或皂粘土；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙/镁、聚乙二醇等。另外，本发明的药物组合物还可以进一步含有其它辅料，如香味剂、甜味剂等。本发明第三方面的药物还可以进一步包括其他用于治疗或预防肝脏疾病或代谢性疾病的活性成分。
根据本领域的公知技术，可以根据治疗目的、给药途径的需要将药物组合物制成各种剂型，优选该组合物为单位给药剂量形式，如冻干剂、片剂、胶囊、粉剂、乳液剂、水针剂或喷雾剂，更优选该药物组合物为注射剂型(如，冻干粉针剂)或口服剂型，更优选是口服剂型(如，片剂或胶囊)。药物可以通过常规途径施用，特别是肠内，例如口服，例如以片剂或胶囊剂形式，进行施用；或非肠道施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂形式，进行施用；或鼻部使用。
在第四方面，本发明提供了本发明第一方面的晶体在制备用于治疗或预防肝脏疾病或代谢性疾病的药物中的应用。本发明的药物以有效剂量施用，其中有效剂量通常是以本发明第一方面的晶体的量计的。有效剂量可以是单位给药剂量形式(如，一片、一针、一丸或一剂)的药物中的含量，也可以是所需治疗/预防的患者的单位剂量(如，单位体重剂量)。药物制造商能够很容易地通过所需治疗/预防的患者群体的平均体重将所需治疗/预防的患者的单位体重剂量换算成单位给药剂量形式的药物中的含量，例如，成人患者的平均体重可以是60kg，因此通过平均体重乘以成人的单位体重剂量，即可得到用于成人的单位给药剂量形式的药物中的含量。
优选本发明第四方面的应用是在制备用于治疗或预防乙型肝炎的药物中的应用。也优选本发明第四方面的应用是在制备用于降低患者中乙型肝炎病毒水平的药物中的应用。
在第五方面，本发明提供了检测本发明第一方面的晶体的方法，其特征在于，对疑似晶体进行X-射线粉末衍射检测，将所得到的X-射线粉末衍射图谱与如图1或3或5或7或9所示的X-射线粉末衍射图谱进行比对。根据图谱的谱线位置(通常Bragg’s2θ角的度数表示)、谱线高度、相对丰度和/或晶面间距离d(通常以表示)等参数，本领域技术人员能够比对出疑似晶体是否就是本发明第一方面的晶体。
本发明的有益效果在于，获得了甲磺酸帕拉德福韦的性质优异的晶体，其具有良好的温度和湿度稳定性，且纯度高，更加方便了制剂工艺过程的适应性，也便于长期储存。
为了便于理解，本发明引用了公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本发明，其全文内容均纳入本文进行参考，就好像它们全文在本文中完整记载过一遍了。
以下将通过具体的实施例和附图对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见了。
附图说明
图1：A晶型甲磺酸帕拉德福韦的X-射线粉末衍射图谱。
图2：A晶型甲磺酸帕拉德福韦的DSC图谱。
图3：B晶型甲磺酸帕拉德福韦的X-射线粉末衍射图谱。
图4：B晶型甲磺酸帕拉德福韦的DSC图谱。
图5：C晶型甲磺酸帕拉德福韦的X-射线粉末衍射图谱。
图6：C晶型甲磺酸帕拉德福韦的DSC图谱。
图7：D晶型甲磺酸帕拉德福韦的X-射线粉末衍射图谱。
图8：D晶型甲磺酸帕拉德福韦的DSC图谱。
图9：E晶型甲磺酸帕拉德福韦的X-射线粉末衍射图谱。
图10：E晶型甲磺酸帕拉德福韦的DSC图谱。
具体实施方式
以下将结合实例详细的解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明技术方案，但是本发明的保护范围并非限定于此。
实验所用的测试仪器
1、X-射线粉末衍射图谱
仪器：PHI-5400型X-射线光电子分析仪(可购自美国PE公司)
测试参数为：电压：46kv，电流：40mA，铜kα辐射，λ：
2、热差分析图谱(DSC)
仪器：SII Nano，EXSTAR，DSC6220
升温速度：10℃/min
温度范围：50～250℃
载气：高纯氮气
物料来源：甲磺酸帕拉德福韦晶型I，其为按照中国专利CN102827206A实施例1制备得到的晶型I。
以下实施例将示例性地展示本发明的甲磺酸帕拉德福韦的各种晶体的制备和鉴定。
实施例1：甲磺酸帕拉德福韦A型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦晶型I10g加入纯化水8ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入丙酮92ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。降温至0～10℃搅拌2h。过滤，13ml丙酮洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到7.9g白色固体。经检测属于A晶型(如图1和2所示)。
实施例2：甲磺酸帕拉德福韦A型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦B晶型10g加入纯化水20ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入丙酮300ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。降温至0～10℃搅拌2h。过滤，20ml丙酮洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到7.2g白色固体。经检测属于A晶型。
实施例3：甲磺酸帕拉德福韦A型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦C晶型10g加入纯化水30ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入丙酮400ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。降温至0～10℃搅拌2h。过滤，13ml丙酮洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到7.0g白色固体。经检测属于A晶型。
实施例4：甲磺酸帕拉德福韦A型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦D晶型10g加入甲醇170ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入甲基叔丁基醚250ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。降温至0～10℃搅拌2h。过滤，20ml甲基叔丁基醚洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到6.5g白色固体。经检测属于A晶型。
实施例5：甲磺酸帕拉德福韦A型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦E晶型10g加入甲醇200ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入乙酸乙酯300ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。降温至0～10℃搅拌2h。过滤，20ml乙酸乙酯洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到7.1g白色固体。经检测属于A晶型。
实施例6：甲磺酸帕拉德福韦B型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦晶型I 5g加入1.4-二氧六环350ml，搅拌溶解，10～30℃搅拌2h。过滤、洗涤，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到2.5g白色固体。经检测属于B晶型(如图3和4所示)。
实施例7：甲磺酸帕拉德福韦B型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦A晶型5g加入1.4-二氧六环500ml，搅拌溶解，10～30℃搅拌2h。过滤、洗涤，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到2.3g白色固体。经检测属于B晶型。
实施例8：甲磺酸帕拉德福韦C型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦晶型I10g加入DMF50ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入MTBE50ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。过滤，10mlMTBE洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到8.4g白色固体。经检测属于C晶型(如图5和6所示)。
实施例9：甲磺酸帕拉德福韦C型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦A晶型10g加入DMF60ml，搅拌溶解，搅拌下滴加入MTBE100ml。滴加完毕，10～30℃搅拌2h。过滤，10mlMTBE洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到8.6g白色固体。经检测属于C晶型。
实施例10：甲磺酸帕拉德福韦D型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦晶型I10g加入含有2.5％水的THF溶液40ml，加热至55℃搅拌溶解。10～30℃搅拌2h。过滤，5mlTHF洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到7.1g白色固体。经检测属于D晶型(如图7和8所示)。
实施例11：甲磺酸帕拉德福韦D型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦A晶型10g加入含有2％水的THF溶液60ml，加热至55℃搅拌溶解。10～30℃搅拌2h。过滤，5mlTHF洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到6.8g白色固体。经检测属于D晶型。
实施例12：甲磺酸帕拉德福韦E型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦晶型I 2g加入乙腈200ml，加热回流搅拌溶解，10～30℃搅拌2h。过滤，10ml乙腈洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到1.5g白色固体。经检测属于E晶型(如图9和10所示)。
实施例13：甲磺酸帕拉德福韦E型晶体
取甲磺酸帕拉德福韦A晶型5g加入乙腈600ml，加热回流搅拌溶解，10～30℃搅拌2h。过滤，10ml乙腈洗涤滤饼，55～65℃鼓风烘干18h以上，得到4.3g白色固体。经检测属于E晶型。
实施例14：甲磺酸帕拉德福韦A晶型的稳定性研究实验
甲磺酸帕拉德福韦A晶型的稳定性实验数据。
在高温、高湿、光照稳定性测试，结果如下表(表1)所示，这表明本发明的晶体具有长期高温、高湿、光照稳定性。
表1高温、高湿、光照下进行稳定性测试
在长期高湿稳定性测试，结果如下表(表2)所示，各杂质随时间未见明显增大，这表明本发明的晶体具有长期高湿稳定性。
表2甲磺酸帕拉德福韦A型晶体长期稳定性测试
实施例15：甲磺酸帕拉德福韦B晶型的稳定性研究实验
甲磺酸帕拉德福韦B晶型的稳定性实验数据。
在高温、高湿、光照稳定性测试，结果如下表(表3)所示，这表明本发明的晶体具有长期高温、高湿、光照稳定性。
表3高温、高湿、光照下进行稳定性测试
在长期高湿稳定性测试，结果如下表(表4)所示，各杂质随时间未见明显增大，这表明本发明的晶体具有长期高湿稳定性。
表4甲磺酸帕拉德福韦B型晶体长期稳定性测试
实施例16：甲磺酸帕拉德福韦C晶型的稳定性研究实验
甲磺酸帕拉德福韦C晶型的稳定性实验数据。
在高温、高湿、光照稳定性测试，结果如下表(表5)所示，这表明本发明的晶体具有长期高温、高湿、光照稳定性。
表5高温、高湿、光照下进行稳定性测试
在长期高湿稳定性测试，结果如下表(表6)所示，各杂质随时间未见明显增大，这表明本发明的晶体具有长期高湿稳定性。
表6甲磺酸帕拉德福韦C型晶体长期稳定性测试
实施例17：甲磺酸帕拉德福韦D晶型的稳定性研究实验
甲磺酸帕拉德福韦D晶型的稳定性实验数据。
在高温、高湿、光照稳定性测试，结果如下表(表7)所示，这表明本发明的晶体具有长期高温、高湿、光照稳定性。
表7高温、高湿、光照下进行稳定性测试
在长期高湿稳定性测试，结果如下表(表8)所示，各杂质随时间未见明显增大，这表明本发明的晶体具有长期高湿稳定性。
表8甲磺酸帕拉德福韦D型晶体长期稳定性测试
实施例18：甲磺酸帕拉德福韦E晶型的稳定性研究实验
甲磺酸帕拉德福韦E晶型的稳定性实验数据。
在高温、高湿、光照稳定性测试，结果如下表(表9)所示，这表明本发明的晶体具有长期高温、高湿、光照稳定性。
表9高温、高湿、光照下进行稳定性测试
在长期高湿稳定性测试，结果如下表(表10)所示，各杂质随时间未见明显增大，这表明本发明的晶体具有长期高湿稳定性。
表10甲磺酸帕拉德福韦E型晶体长期稳定性测试
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