一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂及其应用
阅读说明：本技术 一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂及其应用 (Fruit preservative compounded by using bacillus fermentation product and application thereof ) 是由 郝宁 史靓 郭格格 李涛 刘兆星 欧阳平凯 于 2021-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂及其应用,所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌六种芽孢杆菌。将六种芽孢杆菌分别单独发酵,再将发酵液用硫酸铵沉淀,溶于无菌水后冷冻干燥,再按照质量比(1-5):(1-5):(1-5):(1-5):(1-5):(1-5)复配制成水果保鲜剂。其为天然益生菌微生物发酵获得,用在新鲜水果上有明显的抑菌作用,安全有效地降低了腐败速率,延长了水果的贮藏期。(The invention discloses a fruit preservative compounded by using a bacillus fermentation product and application thereof, wherein bacillus is six types of bacillus including bacillus subtilis, bacillus licheniformis, bacillus amyloliquefaciens, bacillus coagulans, bacillus megaterium and bacillus pumilus. Respectively fermenting the six bacillus, precipitating the fermentation liquor by ammonium sulfate, dissolving in sterile water, freeze-drying, and compounding according to the mass ratio of (1-5) to prepare the fruit preservative. The probiotic microorganism is obtained by fermenting natural probiotic microorganisms, has obvious bacteriostatic action when being used on fresh fruits, safely and effectively reduces the putrefaction rate, and prolongs the storage period of the fruits.)
技术领域
本发明属于芽孢杆菌应用技术领域，具体涉及一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂及其应用。
背景技术
水果在采收前后由于生理衰老、微生物侵害及机械损伤等原因，容易腐烂变质，不易于储存和跨地区运输。而随着生活水平的提高和消费观念的转变，人们对水果保鲜的要求也越来越高，保持水果新鲜品质、延长水果的贮藏时间已成为当前消费者所普遍关心的问题。据调查，由于贮藏保鲜技术问题，我国果品每年损耗率在25％左右。
有关研究人员在冰温保鲜、气调贮藏、涂膜保鲜、臭氧及二氧化碳处理等保鲜技术进行深入研究，并取得了一定进展。迄今为止，有效的水果保鲜方法通常分为物理方法和化学方法两种：化学方法一般使用化学保鲜剂对水果作浸泡或涂膜等处理，对人体健康存在较严重的隐患；物理方法一般需要专门的设备，操作复杂，技术性强，运行和维修成本高。而生物保鲜物质直接来源于生物体自身组成成分或其代谢产物，具有无味、无毒、安全等特点，此外生物保鲜物质一般都可被生物降解，不会造成二次污染。因此，对生物保鲜剂的研究成为现阶段的一项重要课题。
动植物来源的生物保鲜剂受原料限制成本较高，因此产业化发展中常以微生物代谢产物为原材料制作保鲜剂，以求达到“以菌抑菌”的效果。
芽孢杆菌是一种极具代表性的生防细菌，具有生长繁殖快、易于存活、抗逆性强、营养谱广泛等优点，主要包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌等。它们可定殖于果蔬表面，与病原菌争夺营养物质，分泌多种重要代谢产物，其中不乏具有高效抑菌作用的多肽类活性物质。现在已有将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌用于食品保鲜的报道，但存在菌种单一、制成抑菌剂难以长期有效贮存、抑菌效率无法实现突破性提高的问题。
本发明将六种芽孢杆菌发酵产物进行复配并冻干制成易于储藏的干粉状态，可在安全、无毒的基础上提高防腐性能，有利于水果贮藏保鲜。另外本发明的水果保鲜剂采用喷洒或浸泡的使用方法，可减少草莓等脆弱的水果的机械损伤，保持了完整度。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂及应用，能有效抑制新鲜水果运输过程中因机械损伤和保藏过程中因微生物繁殖引起的腐烂现象，以保持水果的品质，延长贮藏时间。
本发明提供了一种由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌六种芽孢杆菌发酵产物真空冷冻干燥后按照质量比(1-5):(1-5):(1-5):(1-5):(1-5):(1-5)复配的水果保鲜剂，并将其应用在草莓、葡萄、冬枣等水果的保鲜中。
本发明人首次发现联合使用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌发酵产物，对水果的抑菌保鲜效果远超过单一使用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂，是由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌六种芽孢杆菌发酵产物真空冷冻干燥后复配得到。
所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌六种芽孢杆菌发酵产物真空冷冻干燥后，按照质量比(1-5)：(1-5):(1-5):(1-5)：(1-5):(1-5)复配；优选按照质量比2:1:2:1:1:1。
所述的枯草芽孢杆菌为保藏号CGMCC No.13932的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，地衣芽孢杆菌保藏号CGMCC No.9688的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)，解淀粉芽孢杆菌为保藏号CGMCC No.15732的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，凝结芽孢杆菌为保藏号CGMCC No.19487的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)，巨大芽孢杆菌为保藏号CGMCC No.1.10466的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)，短小芽孢杆菌为保藏号CGMCC No.1.8167的短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)。
所述的保鲜剂在果蔬保鲜上的应用。
所述的一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂，通过如下步骤获得：
(1)取-80℃保存的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌分别涂布于新鲜的LB固体培养基中，27-45℃恒温过夜活化培养。
(2)分别从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的活化平板上挑取一环接种于种子液培养基中，27-45℃，200±20rpm单独培养8-12h，获得种子液。
(3)将步骤(2)所得种子液按3-7％接种量分别接种于发酵液培养基中，27-45℃、100±20rpm单独培养10h后，转速提高至200±20rpm继续培养10-18h，获得菌悬液。
(4)将步骤(3)所得菌悬液于4℃，8000r/min条件下离心10min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，即为无菌体的发酵滤液。
(5)用6mol/L的HCl溶液将步骤(4)所得滤液调至中性，边搅拌边加入固体硫酸铵，饱和度达到80％时，4℃冰箱放置过夜。
(6)常温下4000r/min离心20min收集沉淀，溶于无菌水中，真空冷冻干燥后，按照质量比(1-5):(1-5):(1-5):(1-5):(1-5):(1-5)复配，即得复合保鲜剂。
所述的LB固体培养基为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉20g/L。
所述的种子液培养基为：牛肉膏2-10g/L，氯化钠5g/L，蛋白胨5-15g/L，pH＝7.0-7.2。
所述的发酵液培养基为：糖蜜20-40g/L，豆粉5-20g/L，玉米浆粉2-10g/L，酵母提取物10-30g/L，尿素1-5g/L，氯化钠1-10g/L，七水合硫酸镁0.1-1g/L，一水合硫酸锰0.02g/L，硫酸锌1-3g/L，磷酸二氢钾0.5-1.5g/L，pH＝6.8-7.5。
所述的真空冷冻干燥条件为温度-40℃、真空度100Pa、干燥时间35-40h。
本发明保鲜剂的使用方法：将保鲜剂用无菌水配成0.1～10mg/ml的溶液，向水果喷雾或浸泡10～30min即可；优选配成1mg/ml的溶液，向水果喷雾或浸泡20min。
使用前用无菌水将保鲜剂配成0.1～10mg/ml的溶液，用喷洒或浸泡的方式处理新鲜水果，针对草莓等柔软脆弱的水果也不会产生伤害，与已有同类水果保鲜剂相比有效贮存时间更长且保鲜效果更佳，既保证了贮藏和远距离运输过程中的水果品质，减少了由于腐败带来的巨大浪费，在现代农业领域具有重要意义。
有益效果：
本发明将六种芽孢杆菌发酵液进行复配，配比合理、使用方法简单、效果均匀，抑菌效果比起单一使用有显著提升，更利于延长水果在常温条件下的保鲜期，减少因腐败造成的浪费。利用糖蜜、豆粉等工业生产副产品作为发酵碳源，实现废弃资源的再利用，减少环境污染的同时又大大降低了生产成本，经济可行，具有广阔的市场应用价值。
具体实施方式
通过下述实施例，可以更好地理解本发明。然后，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书说所详细描述的本发明。
以下实施例中所涉及的菌株为：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏号CGMCC No.13932，；地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，保藏号CGMCC No.9688；解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏号CGMCC No.15732；凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)，保藏号CGMCC No.19487；巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，保藏号CGMCC No.1.10466；短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，保藏号CGMCC No.1.8167。
实施例1
本实施例以草莓为作用对象对不同菌种的保鲜剂的保鲜效果进行了考察。
一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂，通过如下步骤获得：
(1)配制培养基：
LB固体培养基为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉20g/L。
种子液培养基为：牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，蛋白胨10g/L，pH＝7.0-7.2。
发酵液培养基为：糖蜜40g/L，豆粉10g/L，玉米浆粉4g/L，酵母提取物20g/L，尿素2.5g/L，氯化钠5g/L，七水合硫酸镁0.4g/L，一水合硫酸锰0.02g/L，硫酸锌2g/L，磷酸二氢钾1g/L，pH＝7。
高压蒸汽灭菌条件为121℃，20min。
(2)取-80℃保存的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌涂布于新鲜的LB固体培养基中，分别于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃恒温过夜活化培养。
(3)从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的活化平板上各挑取一环接种于种子液培养基中，于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃，200rpm单独培养8h，获得种子液。
(4)将步骤(3)所得种子液按5％接种量分别接种于发酵液培养基中，分别在各自培养温度下、100rpm单独培养10h后，转速提高至200rpm继续培养14h，获得菌悬液。
(5)将步骤(4)所得菌悬液于4℃，8000r/min条件下离心10min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，即为无菌体的发酵滤液。
(6)用6mol/L的HCl溶液将步骤(5)所得滤液调至中性，边搅拌边加入固体硫酸铵，饱和度达到80％时，4℃冰箱放置过夜。
(7)常温下4000r/min离心20min收集沉淀，溶于无菌水中，真空冷冻干燥后，按照质量比1:1:1:1:1:1复配，即得复合保鲜剂。
将无病害、无伤口、成熟度和大小均一的市售新鲜草莓分成A、B、C、D、E、F、G、H八组：A组用本实施例制备的复合保鲜剂处理，具体为将复合保鲜剂用无菌水配成1mg/ml的溶液向新鲜草莓喷雾，喷洒量为新鲜草莓质量的千分之一；B组喷洒枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌发酵液按照质量比1:1:1:1混合，处理方法和喷洒量与A组保持一致；C、D、E、F、G组分别单独喷洒地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌发酵液，处理方法和喷洒量与A组保持一致；H组不喷洒保鲜剂。每组草莓均分成两份，其中一份的八组草莓保藏在相同的4℃、相对湿度85％-90％的环境中4天，结果如表1；另一份的八组草莓保藏在相同的4℃、相对湿度85％-90％的环境中，以生出白毛为腐烂的标志计算平均腐烂的时间，结果如表2。
表1 不同菌种成分的保鲜剂对草莓保鲜效果的影响
表2 不同菌种成分的保鲜剂对草莓保鲜期的延长作用
腐烂时间(h)
保鲜期延长时间(h)
保鲜期延长率(％)
A组
127.9
78.8
160.49％
B组
92.7
43.6
88.80％
C组
78.2
29.1
59.27％
D组
71.7
22.6
46.03％
E组
76.5
27.4
55.80％
F组
68.3
19.2
39.10％
G组
64.4
15.3
31.16％
H组
49.1
0
0.00％
由表1、2可知，比起不加保鲜剂的对照组，加入保鲜剂的草莓保鲜期均得到有效延长。其中本发明的六种芽孢杆菌发酵液的复配保鲜剂保鲜效果优于每种芽孢杆菌发酵液单独使用或其中几种混合使用。
实施例2
本实施例对不同配比的保鲜剂的保鲜效果进行了考察。
一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂，通过如下步骤获得：
(1)配制培养基：
LB固体培养基为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉20g/L。
种子液培养基为：牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，蛋白胨10g/L，pH＝7.0-7.2。
发酵液培养基为：糖蜜40g/L，豆粉10g/L，玉米浆粉4g/L，酵母提取物20g/L，尿素2.5g/L，氯化钠5g/L，七水合硫酸镁0.4g/L，一水合硫酸锰0.02g/L，硫酸锌2g/L，磷酸二氢钾1g/L，pH＝7。
高压蒸汽灭菌条件为121℃，20min。
(2)取-80℃保存的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌涂布于新鲜的LB固体培养基中，分别于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃恒温过夜活化培养。
(3)从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的活化平板上各挑取一环接种于种子液培养基中，于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃，200rpm单独培养8h，获得种子液。
(4)将步骤(3)所得种子液按5％接种量分别接种于发酵液培养基中，分别在各自培养温度下、100rpm单独培养10h后，转速提高至200rpm继续培养14h，获得菌悬液。
(5)将步骤(4)所得菌悬液于4℃，8000r/min条件下离心10min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，即为无菌体的发酵滤液。
(6)用6mol/L的HCl溶液将步骤(5)所得滤液调至中性，边搅拌边加入固体硫酸铵，饱和度达到80％时，4℃冰箱放置过夜。
(7)常温下4000r/min离心20min收集沉淀，溶于无菌水中，真空冷冻干燥后，按照质量比1:1:1:1:1:1、2:1:1:1:1:1、1:2:1:1:1:1、1:1:2:1:1:1、1:1:1:2:1:1、1:1:1:1:2:1、1:1:1:1:1:2、2:1:2:1:1:1复配，即得8组复合保鲜剂。
在18cm无菌平板内放置9个7mm的无菌牛津杯，向60mL预冷至45℃的LB固体培养基中添加80μL腐烂草莓汁液，混匀后倒平板，冷却后取出牛津杯，标记1～9号孔。1～8号孔分别加入100μL的按照质量比1:1:1:1:1:1、2:1:1:1:1:1、1:2:1:1:1:1、1:1:2:1:1:1、1:1:1:2:1:1、1:1:1:1:2:1、1:1:1:1:1:2、2:1:2:1:1:1复配的无菌保鲜剂，9号孔加入100μL的无菌水。4℃扩散1h后37℃培养24h，用游标卡尺测抑菌圈直径，结果如表3。
表3 不同配比的保鲜剂抑菌效果
由表3优化枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌六种菌的发酵液冻干粉复配比例为2:1:2:1:1:1。
实施例3
本实施例以葡萄为作用对象对本发明不同培养基成分对保鲜剂的保鲜效果进行了考察。
一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂，通过如下步骤获得：
(1)配制培养基：
LB固体培养基为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉20g/L。
种子液培养基为：牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，蛋白胨10g/L，pH＝7.0。
发酵液培养基为：糖蜜40g/L，豆粉10g/L，玉米浆粉4g/L，酵母提取物20g/L，尿素2.5g/L，氯化钠5g/L，七水合硫酸镁0.4g/L，一水合硫酸锰0.02g/L，硫酸锌2g/L，磷酸二氢钾1g/L，pH＝7。
对照组发酵液培养基为：糖蜜40g/L，酵母提取物20g/L，尿素2.5g/L，氯化钠5g/L。
高压蒸汽灭菌条件为121℃，20min。
(2)取-80℃保存的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌涂布于新鲜的LB固体培养基中，分别于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃恒温过夜活化培养。
(3)从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的活化平板上各挑取一环接种于种子液培养基中，于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃，200rpm单独培养8h，获得种子液，将六种芽孢杆菌的种子液均分成1、2两组。
(4)将步骤(3)所得1、2两组种子液按5％接种量分别接种于发酵液培养基和对照组发酵液培养基中，分别在各自培养温度下、100rpm单独培养10h后，转速提高至200rpm继续培养14h，获得1、2两组菌悬液。
(5)将步骤(4)所得两组菌悬液分别于4℃，8000r/min条件下离心10min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，即得1、2两组无菌体的发酵滤液。
(6)用6mol/L的HCl溶液将步骤(5)所得两组滤液调至中性，边搅拌边加入固体硫酸铵，饱和度达到80％时，4℃冰箱放置过夜。
(7)常温下分别4000r/min离心20min收集沉淀，溶于无菌水中，得到1、2两组液态无菌保鲜剂，真空冷冻干燥后，按照质量比2:1:2:1:1:1复配，即得1号、2号两组复合保鲜剂。
在无菌平板内放置三个7mm的无菌牛津杯，向15mL预冷至45℃的LB固体培养基中添加20μL腐烂青提汁液，混匀后倒平板，冷却后取出牛津杯，标记1、2、3号孔。1号孔加入100μL的1号液态无菌保鲜剂，2号孔加入100μL的2号液态无菌保鲜剂，3号孔加入100μL的无菌水。4℃扩散1h后37℃培养24h，用游标卡尺测抑菌圈直径，结果如表4。
表4 不同培养基成分的保鲜剂抑菌效果
直径(mm)
直径增长率(％)
1号孔
27.3
77.27％
2号孔
21.8
41.56％
3号孔
15.4
0
从表4可以看出，1、2两孔添加了等量保鲜剂，但1号孔抑菌圈直径增长率比2号孔高近一倍。由此可知，本发明的发酵培养基明显促进了芽孢杆菌产抑菌物质。
将无病害、无伤口、成熟度和大小均一的市售新鲜青提葡萄分成A、B、C三组：A组用1号保鲜剂处理，具体为将保鲜剂用无菌水配成1mg/ml的溶液，新鲜葡萄整串浸泡在其中20min后捞出；B组用2号保鲜剂处理，实施方法与A组保持一致；C组不用保鲜剂浸泡。三组葡萄保藏在相同的15℃、相对湿度85％-90％的的环境中10天，结果如表5。
表5 不同培养基成分的保鲜剂对葡萄保鲜效果的影响
实施例4
本实施例以冬枣为作用对象对本发明的冻干保鲜剂的保鲜效果进行了考察。
一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂，通过如下步骤获得：
(1)配制培养基：
LB固体培养基为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉20g/L。
种子液培养基为：牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，蛋白胨10g/L，pH＝7.0。
发酵液培养基为：糖蜜40g/L，豆粉10g/L，玉米浆粉4g/L，酵母提取物20g/L，尿素2.5g/L，氯化钠5g/L，七水合硫酸镁0.4g/L，一水合硫酸锰0.02g/L，硫酸锌2g/L，磷酸二氢钾1g/L，pH＝7。
高压蒸汽灭菌条件为121℃，20min。
(2)取-80℃保存的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌涂布于新鲜的LB固体培养基中，分别于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃恒温过夜活化培养。
(3)从枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌的活化平板上各挑取一环接种于种子液培养基中，于37℃、35℃、27℃、40℃、37℃、30℃，200rpm单独培养8h，获得种子液。
(4)将步骤(3)所得种子液按5％接种量分别接种于发酵液培养基中，分别在各自培养温度下、100rpm单独培养10h后，转速提高至200rpm继续培养14h，获得菌悬液。
(5)将步骤(4)所得菌悬液于4℃，8000r/min条件下离心10min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，即为无菌体的发酵滤液。
(6)用6mol/L的HCl溶液将步骤(5)所得滤液调至中性，边搅拌边加入固体硫酸铵，饱和度达到80％时，4℃冰箱放置过夜。
(7)常温下4000r/min离心20min收集沉淀，溶于无菌水中，得到液态复合保鲜剂。将液态复合保鲜剂真空冷冻干燥后，按照质量比2:1:2:1:1:1复配，即得冻干粉复合保鲜剂。将两种复合保鲜剂于15℃室温下保存0天、5天、10天、15天、20天、25天、30天待用。
在无菌平板内放置三个7mm的无菌牛津杯，向15mL预冷至45℃的LB固体培养基中添加20μL腐烂冬枣汁液，混匀后倒平板，冷却后取出牛津杯，标记1、2、3号孔。将冻干粉无菌保鲜剂用无菌水配成1mg/ml的溶液，向1号孔中加入100μL；2号孔加入100μL的液态无菌保鲜剂；3号孔加入100μL的无菌水。4℃扩散1h后37℃培养24h，用游标卡尺测抑菌圈直径，结果如表6。
表6 不同形态的复合保鲜剂
将无病害、无伤口、成熟度和大小均一的市售新鲜冬枣分成A、B、C三组：A组用冻干粉复合保鲜剂处理，具体为将15℃室温下保存15天的复合保鲜剂用无菌水配成1mg/ml的溶液向新鲜冬枣喷雾，喷洒量为冬枣质量的千分之一；B组喷洒15℃室温下保存15天的液态复合保鲜剂，喷洒量与A组保持一致；C组不喷洒保鲜剂。三组冬枣保藏在相同20℃、相对湿度85％-90％的的环境中10天，结果如表7。
表7 不同形态的复合保鲜剂对冬枣保鲜效果的影响
由表6、7可知，新鲜的保鲜剂制成冻干粉形式不会影响其保鲜效果，且与液态相比冻干粉能明显延长保鲜剂的有效期：在30天抑菌试验中液态保鲜剂的保鲜效果逐渐趋于零，而冻干粉保鲜剂的抑菌效果几乎不减弱。因此可以证明，制成冻干粉更有利于保鲜剂在常温条件下储藏时抑菌效果的保持。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种风味酸奶生产设备