具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种霉菌脱氢物精品的制备方法，包括以下步骤：

S1、培养霉菌脱氢物种子，得到种子液；

S2、将所述种子液发酵得到霉菌脱氢物，示例性地，反应式为：

S3、对步骤S2中所述霉菌脱氢物进行粗提取，得到霉菌脱氢物粗品；

S4、对所述霉菌脱氢物粗品进行精制，得到所述霉菌脱氢物精品。

进一步地，关于步骤S1培养霉菌脱氢物种子，示例性地，如图1所示，具体为以下工艺流程：

1、采用葡萄糖、玉米浆、蛋白胨、酵母膏等作为种子原料，准备试剂KH₂PO₄、泡敌(聚醚)、氢氧化钠等，以6T(吨)种子罐的容积计，各种子原料规格及配比见表1。

表1种子原料及配比

2、种子液培养基的配制及灭菌，具体过程如下：

2.1准备工作，如下：打开罐盖，检查罐内是否干净及有积水，若有积水则从底部放净，并用工艺用水冲洗干净；检查各管道阀门是否完好，机械设备是否正常；检查所领物料是否完好，包装是否破损，数量是否跟配料单一致等。

2.2种子液培养基的配制，示例性地，过程如下：

2.2.1按配比称好玉米浆。

2.2.2打开工艺用水阀，按配比放入工艺用水至所需量标记处。放入工艺用水时须考虑蒸汽的冷凝水，加水时应比所需水量少10％。

2.2.3按配比将原料(种子原料)倒入罐内，将袋内发料单取出查对品种、数量符合，把发料单与领料单核对无误后方可倒入罐内。

2.2.4取少量工艺用水冲洗罐口及罐内壁上的原料粉末，冲洗完后封上罐盖，升温到40℃，用20％的氢氧化钠水溶液调节PH值，测PH8.5～9.0，加入泡敌，上紧罐盖，准备灭菌。

2.3种子液培养基的灭菌，示例性地，过程如下：

2.3.1开动搅拌，使物料搅拌均匀。

2.3.2先打开盘管(夹套)排水阀，打开盘管(夹套)进汽阀最后打开蒸汽阀，排尽盘管(夹套)内的冷凝水。待有大量蒸汽排出时，关小盘管(夹套)排水阀，保持微开，排除冷凝水，同时防止浪费蒸汽。控制盘管(夹套)压力小于0.2MPa。

2.3.3打开罐顶各路排空阀，排除罐内冷空气。

2.3.4当罐内温度升到90℃以上时，关闭盘管(夹套)进汽阀，关闭搅拌。开启蒸汽管上的排水阀，排尽冷凝水，直到白色蒸汽冒出。缓慢开启主汽阀，让压力缓慢上升，不可过快，以免损坏蒸汽过滤器。当压力升到0.3MPa时，打开取样管进汽阀，空气分布管进汽阀，底部放料管进汽，保持三路进汽灭菌。

2.3.5当温度升到100℃以上时，蒸汽大量冒出，关小各排空阀，保持有部分蒸汽通过。使罐压及温度平衡上升。

2.3.6当温度升到112～118℃，罐压0.1～0.12MPa左右时，关小各进汽阀，关小排空阀，保压20min。

2.3.7保压时，对接种管进行通蒸汽灭菌。灭菌时注意蒸汽要通过管道所有的部位，不应有蒸汽未达到的死角。

2.3.8保压结束，打开冷凝水对培养基进行降温，打开排气阀排出罐内蒸汽，当罐压降到0.05MPa时，通入无菌空气，启动搅拌，降温到30±1℃备用。

2.3.9灭菌完毕的培养基应一直保持正压，以防染菌。对取样管进行灭菌，用三角瓶对培养基进行取样，培养基标明批号，送入无菌室进行保存，待用。

3种子液培养基的接种，示例性地，具体过程如下：

3.1准备工作：取少量棉花撕成条状或纱布条用酒精浸湿，放入罐盖缝隙内；将风火圈取出，用酒精浸湿备用；准备好两套扳手；准备一盆水或用水浸湿的毛巾一条，作扑灭风火圈之用。

3.2接种

3.2.1点燃罐盖棉花，让其燃烧1分钟以消毒罐盖。

3.2.2用扳手迅速拆开罐盖螺钉，当罐盖打开时同时关闭排空阀，让空气从罐口排出，避免染菌。

3.2.3在罐盖拆卸将完时点燃风火圈，揭开罐盖时风火圈放于罐口。

3.2.4将已并好的菌种迅速通过风火圈倒入罐内；

3.2.5将罐盖在风火圈上灼烧20秒左右，撤开风火圈，放入水中或用湿毛巾扑灭。迅速上紧罐盖，打开排空阀，调节空气流量到规定流量。

3.2.6记录时间，开始种子培养，得到种子液，种子罐接种量为120～150个克氏瓶，霉菌脱氢物种子培养所用种子罐培养工艺控制参工艺条件见表2。

以上各工艺步骤对应的工艺参数见表3。

表2种子罐培养工艺控制参数(1吨种子罐)

表3培养霉菌脱氢物种子各步骤对应的工艺参数

上述培养霉菌脱氢物种子工艺方法能够建立霉菌脱氢物种子培养标准操作规程，提高霉菌脱氢物生产过程中的规范性。

进一步地，关于步骤S2将所述种子液发酵得到霉菌脱氢物，经上述培养霉菌脱氢物种子各步骤后，种子罐在第8小时进行第一次取样，镜检不染菌时，发酵罐可以投料灭菌以备用。PH值7.0～7.2时，可以移种。移种时间可适当延长，但一级种子培养时间最长不能超过15小时，如仍然达不到时，不染菌也可以移种至发酵罐，进行二级发酵。示例性地，具体为：

1移种

1.1移种前发酵罐(30吨)的培养基已按灭菌操作法进行灭菌，降温待用。

1.2移种管路在移种前也已灭菌，待用。

1.3种子罐发酵液经检测合格后，按移种操作法将种子液移至发酵罐中，进行发酵培养。

1.4种子移种后，种子罐及管路需用水冲洗干净，并空消30分钟。

上述工艺能够建立霉菌脱氢物发酵标准操作规程，提高霉菌脱氢物生产过程中的规范性。

进一步地，关于步骤S3对步骤S2中所述霉菌脱氢物进行粗提取，示例性地，参见图2，具体为：

1.霉菌脱氢物、甲醇等原料规格及配比，见表4。

2.霉菌脱氢物粗品提取的工艺操作如下：

2.1检查提取罐及其附属设备和管道是否完好、正常。

2.2检查生产环境、清场合格证、提取罐及其附属设施和管道清洁清场状况。

2.3检查投料的物料名称、物料批号和数量准确、无误。

2.4正确穿戴好劳保用品。

2.5将20±2kg霉菌脱氢物粗品投入提取罐中，关闭罐盖。

2.6开启真空，将计量好的甲醇抽入提取罐中。

2.7关闭真空及罐上未关闭的阀门。开启冷凝器进出盐水，打开排气管阀门，开启蒸汽管排气阀。缓慢开启蒸汽阀，升温溶解到回流出现，注意控制汽量，防止冲料，温度60±2℃，保温回流1小时。

2.8回流完毕，停搅拌，关闭排气阀，准备好过滤系统进行压滤。

2.9检查浓缩罐是否干净、无杂物，罐底阀是否关闭。

2.10开启真空泵，打开浓缩罐下贮罐真空，开启浓缩罐旁冷却器进回盐水阀。开启提取罐上压缩空气，调节罐压在0.06～0.10MPa。打开过滤器两边的连接阀门，开始压滤，将滤液压入浓缩罐。

2.11收集菌丝体，当收集到20kg左右时，集中再提取1～2次，操作同第一次提取。

2.12提取液压入浓缩罐后，开启搅拌，开启蒸汽，进行减压浓缩结晶。注意控制汽量，防止冲料。

2.13当浓缩到溶液量60～100升时，关闭蒸汽，开启夹层冷却，冷水降温至40℃以下。静置2小时以上，待出料。

2.14检查离心机是否干净、完好。铺好离心机滤布。

2.15将物料放入离心机内甩干，同时收集母液，湿品称重，得到霉菌脱氢物粗品。

2.16回收甲醇送回收车间。

2.17母液集中数批后再次浓缩结晶离心，经含量检测，单独进行精制到含量90％以上再作为粗品套入浓缩结晶操作中。

以上步骤的工艺参数见表5所示。需要注意的是：

提取时回流时间必须在1小时以上，以便产品充分溶解在溶剂中；压滤时注意控制罐体压力不要超过0.1MPa，防止将滤纸压烂，同时也防止发生安全事故；浓缩时蒸汽量不要太大，防止冲料；浓缩溶液留量控制在60～100升范围内，以便控制产品质量和收率；甲醇为有毒物质，操作时注意穿戴好劳保用品。

霉菌脱氢物进行粗提取的收率范围：70％～95％；标准收率80％。批产量范围：14kg～19kg；标准产量16kg。

表4霉菌脱氢物进行粗提取的原料规格及配比

表5各步骤的工艺参数

采用本实施例中的技术方案，能够建立标准操作规程，规范霉菌脱氢物粗品提取岗位的操作。

进一步地，步骤S4对所述霉菌脱氢物粗品进行精制，示例性地，参见图3，具体为：

1.采用霉菌脱氢物粗品、甲醇和氯仿等原料，原料的规格及配比见表6。

2.工艺操作首先第一次溶料，具体如下：

2.1检查精制罐及其附属设备和管道是否完好、正常。

2.2检查生产环境、清场合格证、精制罐及其附属设施和管道清洁清场状况。

2.3检查投料的物料名称、物料批号和数量准确、无误。

2.4正确穿戴好劳保用品。

2.5将12±3kg霉菌脱氢物粗品投入精制罐中，闭罐。

2.6开启真空，按配比抽入甲醇及氯仿，关闭真空。

2.7开启精制罐旁冷却器进回盐水阀门及排空阀。开启搅拌，缓慢开启蒸汽升温回流60分钟。

2.8回流完毕，关闭排气阀，开启真空泵，打开浓缩罐下贮罐真空，开启浓缩罐旁冷却器进回盐水阀。开启精制压缩空气，调节罐压在0.06～0.10MPa。打开过滤器两边的连接阀门，开始压滤，将滤液压入浓缩罐。

2.9开启浓缩罐搅拌，开启蒸汽，进行浓缩。常压浓缩溶液到一定量停止浓缩，放置待二次溶料后一起浓缩。

第二次溶料，操作重复步骤2.1～2.8

2.10将两次溶料初浓后的料液压入同一浓缩罐，开启浓缩罐搅拌，开启蒸汽，进行浓缩，得到浓缩液B。常压将浓缩液B浓缩到溶液50升左右时，停止浓缩，先用冷水降温到40℃以下，静置1小时。

2.11检查离心机是否干净、完好。铺好离心机滤布。

2.12静置完毕，将浓缩液B放入离心机内离心干燥，分别得到母液和固体产物，固体产物经取样化验合格后，在90±5℃干燥4～6小时，称重交库，得霉菌脱氢物精品。含量不合格进行第二次精制，方法同第一次。

2.13精制母液浓缩到30升左右冷却结晶甩干，检测霉菌氧化物和霉菌脱氢物含量≥95％返回发酵车间，霉菌脱氢物含量≥90％套入浓缩结晶步骤中。

以上操作需要注意的是：回流时注意观察物料全溶再浓缩；压滤时注意控制罐体压力不要超过0.1MPa，防止将滤纸压烂，同时也防止发生安全事故；浓缩时蒸汽量不要太大，防止冲料；浓缩溶液留量控制在50升左右，以便控制产品质量和收率；甲醇和氯仿为有毒物质，操作时注意穿戴好劳保用品。

所得霉菌脱氢物精品批产量范围为20±5kg，质量标准见表7。

表6精制原料规格及配比

表7霉菌脱氢物精品质量标准

上述霉菌脱氢物精品的工艺流程能够建立标准操作规程，规范霉菌脱氢物精制岗位的操作。

尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。