具体实施方式

现在将详细参考本发明的某些实施方式，其实施例在附图中示出。虽然本发明将结合示出的实施方式进行描述，但应理解，它们并不意图将本发明限制于那些实施方式。相反，本发明旨在覆盖可以包含在由所附权利要求书限定的本发明内的所有替代方案、修改和等同物。

在详细描述本教示内容之前，应理解本公开不限于具体的组合物或工艺步骤，因为这些可以变化。应注意，除非上下文另有明确指示，否则如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包含多个提及物。因此，举例来说，提及“结合物”包含多个结合物并且提及“细胞”包含多个细胞等。

数值范围包含界定所述范围的数值。考虑到有效数字和与测量相关的误差，已测量值和可测量值应被理解为近似值。此外，“包括(comprise/comprises/comprising)”、“含有(contain/contains/containing)”和“包含(include/includes/including)”的使用并不打算是限制性的。应理解，前面的一般性描述和详细描述都仅是示例性和解释性的，并不是对本教示内容的限制。

除非在以上说明书中具体指出，否则在说明书中叙述“包括”各种组分的实施方式也被设想为“由所叙述组分组成”或“基本上由所叙述组分组成”；在说明书中叙述“由各种组分组成”的实施方式也被设想为“包括”所叙述组分或“基本上由所叙述组分组成”；并且在说明书中叙述“基本上由各种组分组成”的实施方式也被设想为“由所叙述组分组成”或“包括”所叙述组分(此互换性不适用于这些术语在权利要求书中的使用)。

本文所使用的章节标题仅用于组织目的，并且不应解释为以任何方式限制所希望的主题。在通过引用并入的任何文献与本说明书中所定义的任何术语相矛盾的情况下，以本说明书为准。虽然结合各种实施方式来描述本教示内容，但是并不打算将本教示内容限制于此类实施方式。相反，如本领域的技术人员应了解，本教示内容涵盖各种替代方案、修改和等同物。

A.定义

“骨关节炎疼痛”(或“OA疼痛”)是指在哺乳动物关节中由骨关节炎(OA)引起的疼痛。疼痛被哺乳动物感知，从患病关节和关节周围的组织发散。

“患病关节”是指患有骨关节炎的哺乳动物(人类或非人类哺乳动物)中的骨关节，并且可以包含存在软骨的身体中的任何骨关节。患病关节的非限制性实例包含肩关节、脊关节、手部关节、足部(包含踝)关节和大的承重关节(如膝或髋或脊关节)。

如本文所使用，“大关节”是指人类(例如青少年人类，如10岁或以上的人类，或成年人类，如18岁或以上的人类)的膝、踝、肩、髋或肘关节和其它哺乳动物(例如称重为25kg或以上的哺乳动物)中的等同关节。

如本文所使用的“关节内注射”(或“IA注射”或“关节内施用”)为将呈水溶液形式的化合物注射到患病关节(如大关节，例如膝或肘关节)中。举例来说，对于人类成人膝部关节内施用的体积可以为3至10ml体积和5至50μg的RTX。小儿人类或家畜受试者(如犬或猫)的膝部较低并且其体积与每个物种的膝部的相对大小成比例。

如本文所使用，“定期施用(Periodical administration/periodicallyadministered)”是指在多个时间点施用，包含初始施用组合物，之后经过预定时间段，且接着一或多次进一步施用组合物，其中的每次施用还可间隔约相同的预定时间段。预定时间段可为例如约4小时至约24小时。

如本文中所使用的术语“或其组合”和“或其组合”是指在所述术语之前所列出的术语的任何和所有排列以及组合。例如，“A、B、C或其组合”旨在包含以下中的至少一个：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，并且如果在特定上下文中顺序是重要的，则还包含BA、CA、CB、ACB、CBA、BCA、BAC或CAB。继续这个实例，明确地包含含有一个或多个项目或术语的重复的组合，如BB、AAA、AAB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等。熟练的业内人士将了解，除非另外从上下文来看是显而易见的，否则通常不存在对任何组合中的项目或术语的数量的限制。

除非上下文另有要求，否则“或”以包含性含义使用，即等同于“和/或”。

B.方法和用途的组合物

本文提供用于治疗骨关节炎(OA)疼痛的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的树脂毒素(RTX)。还提供包含树脂毒素(RTX)的组合物，其用于治疗OA疼痛的方法中，所述方法包括向需要治疗OA疼痛的受试者施用治疗有效量的RTX。

不希望受任何特定理论所束缚，通过如本文所公开的关节内注射剂来施用RTX以治疗骨关节炎疼痛可提供益处，如允许安全且有效的长期疼痛缓解，其超过类固醇注射剂和口服镇痛剂，如NSAID和含阿片类药物的药剂，其分别具有关于相关副作用的缺点，包含各种NSAID副作用(例如胃疼痛、胃溃疡、出血增加/凝血减弱等)和阿片类药物依赖性的风险。

1.受试者

本文所描述的组合物和方法适用于对RTX有效，例如能够结合和激活TrpV1或其同源物，并且需要治疗骨关节炎疼痛的任何受试者。在一些实施方式中，受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，哺乳动物是人类。在一些实施方式中，哺乳动物是猫。在一些实施方式中，哺乳动物是犬。在一些实施方式中，哺乳动物是反刍动物。在一些实施方式中，哺乳动物是马、牛、猪、绵羊或山羊。

在一些实施方式中，受试者罹患骨关节炎疼痛。举例来说，骨关节炎疼痛可在存在软骨的身体中的任何骨关节处发生。患病关节的非限制性实例包含肩关节、脊关节、手部关节、足部(包含踝)关节和大的承重关节(如膝或髋或脊关节)。

在一些实施方式中，受试者在治疗之前具有骨关节炎的一种或多种症状，并且该治疗减少或消除一种或多种症状。举例来说，骨关节炎症状包含僵硬、关节肿胀、运动范围减小以及当背部患病时臂和腿的虛弱或麻痹。

2.施用部位

在一些实施方式中，RTX通过关节内注射施用。可以例如使用大小适合于剂量体积的注射器来进行注射，所述注射器可为1cc注射器。

RTX可以通过关节内注射至一个或多于一个部位来施用，这取决于造成骨关节炎疼痛的关节。在一些实施方式中，RTX通过关节内注射至单一部位来施用。在一些实施方式中，RTX通过关节内注射至多个部位来施用。

在一些实施方式中，RTX经施用至膝关节。在一些实施方式中，RTX经施用至髋关节。在一些实施方式中，RTX经施用至手关节。在一些实施方式中，RTX经施用至肩关节。在一些实施方式中，RTX经施用至踝关节。在一些实施方式中，RTX经施用至足关节。在一些实施方式中，RTX经施用至肘关节。在一些实施方式中，RTX经施用至腕关节。在一些实施方式中，RTX经施用至骶髂关节。在一些实施方式中，RTX经施用至脊关节。

3.剂量

在一些实施方式中，RTX以0.1-100μg的剂量施用。在一些实施方式中，RTX的剂量在0.1-0.5μg、0.5-1μg、1-2μg、2-5μg、5-10μg、10-20μg、20-30μg、30-40μg、40-50μg、50-60μg、60-70μg、70-80μg、80-90μg或90-100μg范围内。

可以根据施用部位与患病关节的接近度和关节的大小来调节剂量和体积。值得注意的是，RTX对TRPV1受体具有特定性并且因此不影响非目标神经，如不具有足够对RTX敏感的TRPV1受体的运动神经元。

可以根据患病关节的大小调节剂量和体积。对于成年人类的大关节，可使用较高剂量和体积。

根据个体受试者的关节和大小，前述剂量以2.5-15ml的体积关节内施用。在一些实施方式中，以呈2.5-15ml的5μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈2.5-15ml的12.5μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈2.5-15ml的20μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈2.5ml的12.5μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈5ml的12.5μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈10ml的12.5μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈15ml的12.5μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈2.5ml的20μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈5ml的20μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈10ml的20μg施用RTX。在一些实施方式中，以呈15ml的20μg施用RTX。

根据RTX的剂量和待注射的体积来调节RTX的关节内注射浓度，以达成所选的待施用的RTX剂量。在一些实施方式中，RTX的剂量为约1μg/ml至约100μg/ml。在一些实施方式中，RTX的剂量为约5μg/ml至约40μg/ml。在一些实施方式中，RTX的剂量为约20μg/ml。

在一些实施方式中，可以单次单一剂量形式施用RTX。在一些实施方式中，定期施用RTX。在一些实施方式中，向需要治疗骨关节炎疼痛的受试者定期施用RTX，按需要通过关节内注射至患病关节以降低疼痛严重程度和/或缓解疼痛。在一些实施方式中，RTX一天(例如约每24小时)施用一次。在一些实施方式中，RTX每年施用1-12次、每月施用1-3次或每周施用1-2次。定期施用时间的指定持续时间预期与缓解或基本上缓解疼痛和/或缓解和维持疼痛缓解所需要的时间一样长。在一些实施方式中，定期施用的持续时间为约1周至约12个月或更久、1周至约6个月、约1个月至4个月、约1个月至2个月、约2至3个月或约3至4个月(例如，约2个月或约3个月)。在一些实施方式中，定期施用的持续时间为至少2周、至少一个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月或至少6个月。

4.制剂

RTX制剂的多个实例在文献中可获得。参见例如Ueda等人(2008)《心血管药理学杂志(J.of Cardiovasc.Pharmacol.)》51:513-520和US 2015/0190509 A1。可使用用于肠胃外施用(例如注射)的RTX的任何合适制剂。

在一些实施方式中，将可以在上文所论述的剂量下的RTX与药学上可接受的载体一起施用。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括水。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括聚山梨醇酯80。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括聚乙二醇。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括糖或糖醇。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括甘露醇。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括右旋糖。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括药学上可接受的缓冲剂。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括磷酸盐缓冲剂。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括药学上可接受的盐。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括NaCl。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括有机溶剂，如乙醇或DMSO，例如作为少量或残余组分用作助剂帮助溶解RTX，随后稀释于主要的水性组合物中。在其它实施方式中，RTX以包含两种或更多种药学上可接受的载体的组合的制剂形式制备，所述药学上可接受的载体可以包含前述药学上可接受的载体中的任一种。

制剂中RTX的浓度可以是用于递送预期剂量的任何合适的值。在一些实施方式中，药物制剂中RTX的浓度在0.1至300μg/ml范围内。在一些实施方式中，药物制剂中RTX的浓度在0.1-1μg/ml、1-5μg/ml、5-10μg/ml、10-20μg/ml、10-30μg/ml、20-30μg/ml、20-50μg/ml、50-100μg/ml、100-150μg/ml、150-200μg/ml、200-250μg/ml或250-300μg/ml范围内。在一些实施方式中，药物制剂中RTX的浓度在150至250μg/ml范围内，或为200μg/ml。

制剂可具有适用于关节内施用的任何pH值。在一些实施方式中，包括RTX和药学上可接受的载体的药物制剂的pH值在6至7.6范围内。在一些实施方式中，包括RTX和药学上可接受的载体的药物制剂的pH值在6至6.4、6.3至6.7、6.4至6.8、6.8至7.2、7至7.4或7.2至7.6范围内。在一些实施方式中，包括RTX和药学上可接受的载体的药物制剂的pH值为6.5或7.2。

在一些实施方式中，制剂包括聚山梨醇酯80和右旋糖。在一些实施方式中，聚山梨醇酯80的浓度为2-4％w/v，和/或右旋糖的浓度为4-6％w/v。在一些实施方式中，聚山梨醇酯80的浓度为3％w/v，和/或右旋糖的浓度为5％w/v。在一些实施方式中，在任何前述制剂中，RTX的浓度可为10-30μg/ml，如10μg/ml或25μg/ml。在一些实施方式中，制剂还包括磷酸盐缓冲剂，例如在表1中关于磷酸盐缓冲剂所示的浓度和pH值下的磷酸盐缓冲剂。在一些实施方式中，制剂还包括NaCl，例如在表1中关于NaCl所示的浓度下的NaCl。当两者都存在时，磷酸盐缓冲剂和NaCl可以(但不一定)以单个制剂所示的浓度和磷酸盐缓冲剂pH值的组合存在。

RTX的示例性制剂示于下表中。

在一些实施方式中，将表1中所示的制剂中RTX的浓度调节至本文所公开的RTX浓度或浓度范围中的任一个。举例来说，在一些实施方式中，将表1中所示的制剂中RTX的浓度调节至10-50μg/ml范围内的值。作为另一实例，在一些实施方式中，将表1中所示的制剂中RTX的浓度调节至10-30μg/ml范围内的值。作为另一实例，在一些实施方式中，将表1中所示的制剂中RTX的浓度调节至20-30μg/ml范围内的值。作为另一实例，在一些实施方式中，将表1中所示的制剂中RTX的浓度调节至25μg/ml。

虽然表1中的制剂可以根据以下为制剂3和5而提供的示例性方法制备，但是本领域的技术人员可使所述方法适用于其它制剂。制剂3可通过制备30mM、pH 7.2磷酸盐缓冲剂来制得。接着将1.43％w/v聚山梨醇酯80和0.86％w/v NaCl混合以形成水性组分。将20mgRTX添加到容量瓶中的100mL水性组分中。接着添加30mL PEG 300并且对溶液进行超声处理以溶解固体。添加水性组分达到约80％体积，且接着将其进行超声处理以混合。应注意，RTX虽有时最初会在水溶液与PEG的界面处沉淀，但会在超声处理时回流至溶液中。将烧瓶中的全部混合物用水性组分稀释至体积，且将此通过倒置法加以混合。将全部制剂通过0.2μm聚四氟乙烯(PTFE)过滤器过滤。

制剂5可通过制备30mM、pH 7.2磷酸盐缓冲剂来制得。接着，将3.0％w/v聚山梨醇酯80、0.8％w/v右旋糖和0.54％w/v NaCl混合在一起以形成水性组分。将20mg RTX添加到容量瓶中的100mL水性组分中。添加水性组分以达到约80％体积，且接着将其进行超声处理以溶解所有固体。(或者，可将RTX最初溶解于小体积的乙醇或DMSO中，且可接着将此溶液添加到水性组分中。)将烧瓶中的全部混合物用水性组分稀释至体积，且将此通过倒置法加以混合。将全部制剂通过0.2μm PTFE过滤器过滤。

根据制剂11的制剂是使用200μg RTX、20mg聚山梨醇酯80(使用市售的聚山梨醇酯80)；5.4mg氯化钠、50mg右旋糖和30mM水性磷酸盐缓冲剂、水(WFI)(以达到1mL)制备的。

在一些实施方式中，药物制剂呈单位剂型。以此类形式，将制剂再分为含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是经包装的制剂，所述包装含有如在小瓶、安瓿或预装载注射器中的离散量的制剂。此外，单位剂型可以是例如溶液或用于复原的冻干组合物。

关于配制和施用技术的其它细节于Gennaro,A.编,《雷明顿氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》,第18版.(1990)(马克出版公司(MackPublishing Co.),宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.))中可见。

实施例

实施例1-方法

进行描述为以下的研究，“1b期双盲研究评估关节内施用树脂毒素对比施用安慰剂，以治疗由于膝部的中度到重度骨关节炎所致的疼痛的安全性和初步功效”。

患有基于ACR诊断标准和x射线成像所诊断的中度到重度骨关节炎的受试者入选1b期双盲研究，以评估关节内施用树脂毒素或安慰剂以治疗由于膝部的骨关节炎所致的中度到重度疼痛的安全性、耐受性和初步功效。患者满足以下标准：(1)在入选之前的四周期间，膝部指数中的基线疼痛分数(WOMAC疼痛子量表问题A1)≥5但≤9；(2)在入选之前的10天内中的8天期间，平均NPRS分数≥5但≤9；以及(3)在入选之前，疼痛持续至少6个月。

截至2019年8月，所有规划的剂量水平群组的编入已完成。40名患者被编入这些剂量递增群组，30名接受RTX并且10名接受安慰剂(多中心、随机化、双盲、安慰剂对照)。在每个群组中，六名患者接受关节内RTX并且两名接受生理食盐水对照(安慰剂组(arm))。患者的人口统计学信息示于表2中。69％为女性，且31％为男性。中值年龄为62(范围44-83)，且基线NPRS A1分数为平均值6.5(标准差(S.D.)1.5)。

在剂量递增群组中，使患者在递增剂量水平群组为呈5或10mL的5μg、12.5μg、20μg和30μg下用单次关节内剂量的树脂毒素(RTX)或生理食盐水安慰剂治疗。对于每一8名患者的群组，第一名患者被视为前哨患者(sentinel patient)且接受开放标签药物。在确认在前哨患者中的安全性之后，以不知情方式编入群组中的剩余7名患者，2名患者接受安慰剂并且5名患者接受RTX。在确认每个剂量水平下的安全性之后，下一个更高剂量水平开放编入。在12周时间段内针对安全性和功效追踪患者。患者具有提供额外的直至52周的随访的选择方案。使用患者报告的WOMAC疼痛分数和NPRS疼痛分数评估功效。

如符合方案，治疗指配可在第12周时被知情。

实施例2

此实施例提供如实施例1中所描述的具有RTX的剂量递增的进行中临床试验的结果。

研究的初始结果发现为(1)在所测试的最低剂量下疼痛缓解的快速开始(注射后一天)和持续临床益处(在84天时确定)；(2)行走时的疼痛(10点WOMAC(西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数)量表)在第84天相对于对照减少了4.7点；和(3)对于任何剂量组，未注意到剂量限制性毒性(DLT)，也未注意到所关注的不良事件。

结果概述于表3中：

迄今为止在任何剂量组下未观察到剂量限制毒性(参见表3)，并且用活性药物治疗的大部分患者不断报告疼痛减少的积极临床益处。

最低剂量群组中的受试者用单次注射至膝关节(以5μg RTX)来治疗，并且在如符合方案认可的十二周观察之后，所述群组为知情的。经RTX治疗的患者在第84天具有的平均疼痛分数低于对照4.7点(按10点WOMAC疼痛量表计)(参见图1)。疼痛减少的开始早在药物施用之后的一天发生，且随时间推移持续。所有剂量组中的患者也呈现快速和可持续的改善。因此，这些数据能够确定RTX的安全且有效的剂量。

进一步分析剂量递增群组(N＝40)的结果。

未报告剂量限制性毒性，并且未鉴别出最大耐受剂量(即，所施用的最高剂量30μg为耐受的)。最频繁报告的治疗期间出现的不良事件为手术相关性疼痛(手术后疼痛和注射部位疼痛)，其报告于62％安慰剂患者(合并)和100％RTX患者中。这种手术相关性疼痛在所有安慰剂患者中报告的严重程度呈轻度，而在经RTX治疗的患者中，55％报告疼痛呈轻度并且45％报告疼痛呈中度。所述手术相关性疼痛在RTX注射之后，在经RTX治疗的患者中通常持续2-3小时，并且用芬太尼(fentanyl)和其它镇痛剂处理。其它较不频繁报告的不良事件(在至少2名受试者中报告)为恶心、呕吐、高血压、关节痛和头痛。所有患者可以在注射当天解散回家。不良事件与剂量之间不存在明显的关联。一件腓骨和胫骨骨折的SAE被视为不相关的。

就基于可用知情数据的功效来说，在所有剂量水平下都观察到了患者报告的WOMAC A1和NPRS疼痛分数降低。在第12周时，在此分析时知情的所合并安慰剂患者与经RTX治疗的患者(9名接受安慰剂，28名接受RTX)之间对于WOMAC问题A1(在平坦表面上行走时的疼痛)的平均疼痛分数差异，表示为相对于安慰剂的相对于基线变化的最小平方平均差，在-0.38至-2.70点范围内，这取决于剂量水平群组。当分析每周平均NPRS疼痛分数相对于基线直至第12周的变化时，所合并的安慰剂患者与经RTX治疗的患者之间的差异在-0.34至-2.29范围内，这取决于剂量水平群组。与基线疼痛相比，基于WOMAC A1分数，在54％所合并的经RTX治疗的患者中实现>70％的疼痛减少，且基于NPRS分数，在41％患者中实现>70％的疼痛减少。通过混合模型重复测量(MMRM)分析，在12.5μg剂量下观察到最大疼痛减少(在12周时对比安慰剂的最小平方平均差按NPRS分数计为-2.29(p＝0.051，N＝6)；按WOMAC A1分数计为-2.70(p＝0.029，N＝6)；以及按WOMAC A-C疼痛指数计为-14.20(p＝0.016，N＝6))。

因此，当树脂毒素作为高达30μg的计划最高剂量的单次关节内注射剂给与时，所述树脂毒素展现安全性和初步功效。

进一步分析来自所有群组的结果。除剂量递增群组以外，还包含1个在不同体积下的群组和额外4个剂量扩增群组(测试两次施用镇痛剂以控制手术疼痛)。

未报告剂量限制性毒性，并且未鉴别出最大耐受剂量。最频繁报告的治疗期间出现的不良事件为手术相关性疼痛(手术后疼痛和注射部位疼痛)，其报告于70％安慰剂患者(合并)和91％RTX患者中。这种手术相关性疼痛，在所有安慰剂患者中报告的严重程度呈轻度，而在经RTX治疗的患者中，65％报告疼痛呈轻度并且26％报告疼痛呈中度。所述手术相关性疼痛在RTX注射之后在经RTX治疗的患者中通常持续2-3小时，并且用芬太尼和其它镇痛剂处理。其它较不频繁报告的不良事件(在至少2名受试者中报告)为如表4中详述的恶心、呕吐、高血压、关节痛、感觉迟钝、反射消失、EOG QTc延长和头痛。所有患者可以在注射当天解散回家。不良事件与剂量之间不存在明显的关联。腓骨和胫骨骨折的一个SAE被视为不相关的。

表4显示经RTX治疗的受试者中治疗期间出现的不良事件的频率。

就功效来说，在所有剂量水平下都观察到了患者报告的WOMAC A1和NPRS疼痛分数降低。

如图2中所示，当分析每周平均NPRS疼痛分数相对于基线直至第12周的变化时，与所合并的安慰剂患者中的平均变化(标准差)-2.14(1.92)相比，在12.5μg/5ml的剂量/体积下的第4群组中的经RTX治疗的患者中的平均变化(标准差)为-5.30(1.94)。如图3中所示，当分析每周平均WOMAC问题A1(在平坦表面上行走时的疼痛)相对于基线直至第12周的变化时，与所合并安慰剂患者中的平均变化(标准差)-2.33(2.88)相比，第4群组中的经RTX治疗的患者中的平均变化(标准差)为-5.67(1.51)。

如下表5中所概述，药物动力学数据指示在大多数患者中未检出RTX。

(BQL＝低于可定量限值)。