本发明公开了一种NgAgo-EGFP融合蛋白以及一种基于格氏嗜盐碱杆菌Argonaute(NgAgo)的标记和追踪细胞内DNA与RNA的方法。所述NgAgo-EGFP融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示。使用转染试剂将所述NgAgo-EGFP和向导DNA转染入细胞,可标记和追踪细胞内的DNA与RNA。

本发明实施例涉及一种β冠状病毒抗原、其制备方法和应用。β冠状病毒抗原的氨基酸序列包括：按照(A-B)-(A-B)样式排列的氨基酸序列或(A-B)-C-(A-B)样式排列的氨基酸序列或(A-B)-(A-B’)样式排列的氨基酸序列或(A-B)-C-(A-B’)样式排列的氨基酸序列,所述β冠状病毒抗原为单链二聚体结构。本发明实施例所表达的单链二聚体含量稳定,作为β冠状病毒抗原具有好的免疫原性,该单链二聚体作为β冠状病毒抗原制备成的疫苗能够激发小鼠产生很高滴度的中和抗体。

本发明提供一种CD59基因编辑小鼠模型,它是定点敲入CD59-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达序列片段的小鼠。本发明还提供构建CD59-EGFP基因编辑小鼠模型的方法,是利用CRISPR-Cas9基因编辑技术在小鼠基因ROSA26位点定点敲入CD59-EGFP基因序列的方法,包括：设计并获得向导RNA,制备向导RNA与Cas9蛋白混合物；构建CD59-EGFP打靶载体；显微共注射与F0代小鼠获得,F1代小鼠获得；CD59-EGFP打靶载体中,CD59的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,EGFP的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的基因编辑小鼠模型对致突变化学物有应答,分离其肝细胞、生殖细胞,在荧光显微镜下通过绿色荧光可以显示CD59胞膜定位,可用于化学物的多器官细胞致突变性检测。

描述了对CD3-半-BiTE、CXCL9和CTLA-4scFv进行编码的表达盒。所描述的表达盒可以用于治疗受试者的癌症。还描述了通过直接肿瘤内注射和电穿孔将所述表达盒递送到肿瘤的方法。

本发明涉及一种单碱基突变方法及采用的系统,针对欲突变基因的点突变位点设计sgRNA并构建CRISPR/Cpf1质粒；截取欲突变成基因的突变点附近的碱基序列,并在碱基序列中引入无义突变合成donor1；将CRISPR/Cpf1质粒和donor1共转染含有欲突变基因的细胞得到含有无义突变的细胞；针对含有无义突变的细胞中的含有无义突变的序列的点突变位点设计Re-sgRNA并构建Re-CRISPR/Cpf1质粒；截取欲突变成基因的突变点附近的碱基序列合成donor2；将Re-CRISPR/Cpf1质粒和donor2共转染含有无义突变的细胞得到含有欲突变成基因的细胞。本发明能够达到无痕修复的目的。

本发明属于基因编辑技术领域,公开了一种基于TALE组装的线粒体DNA编辑系统。该编辑系统,包括RVD文库、线粒体定位骨架载体、细胞核定位骨架载体,RVD文库包含至少192个RVD模块,包括：160个双RVD模块、16个单RVD模块及16个半RVD模块。该编辑系统可显著提高TALE模块组装效率,显著降低TALE模块组装成本和时间；该发明使用的组装方法操作简单,适合推广应用；通过该方法可快速高效实现线粒体DNA编辑,并用于制作各种动物模型,以模拟人类线粒体DNA突变导致的疾病；可潜在应用于线粒体DNA突变疾病基因治疗。

本发明涉及一种指示心肌细胞自噬或自噬流的转基因斑马鱼模型的构建方法和应用,通过构建可用于活体检测心肌细胞自噬以及自噬流的转基因斑马鱼模型,并建立相关药物处理后对心肌细胞自噬水平以及自噬流变化的检测方法。该方法不仅可以快速检测各类药物对调节心肌细胞自噬的作用,还可用于心肌细胞自噬相关药物的筛选、自噬在心脏各类疾病中的作用以及不同分子通路在心肌细胞自噬调节中的机制研究等。

本发明提供了一种C端带有表位标签M的表达载体及其构建方法与应用,首先构建C端带有表位标签M的真核表达载体；将所述C端融合有所述表位标签的真核表达载体与编码目标蛋白的核苷酸序列进行重组,获得重组表达载体；将所述重组表达载体在所述真核生物中进行表达；以M作为标签进行蛋白免疫印迹实验、或/和免疫沉淀实验或/和、免疫荧光实验或/和流式细胞术实验；本发明构建的表达载体pQFC-M,pQFC-M-3,通过蛋白免疫印迹检测发现,M标签序列能够被特异性识别来表征融合蛋白的表达。构建的带有M标签的表达载体为哺乳动物蛋白表达领域提供了一种新型的通用融合标签载体资源,丰富了国内的表位标签资源。

本文所述的组合物包含可在给予后在对象中引发免疫应答的肽的表位。所述组合物可包含核酸。所述组合物可包含肽。本文所述的方法包括向有此需要的对象给予包含肽的表位的组合物。

本发明涉及基因编辑领域,具体涉及一种载体系统、制备猪成纤维细胞和基因编辑猪的方法。所述载体系统包括CD163基因敲除载体和MSTN基因敲除载体,所述CD163基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO：1；所述MSTN基因敲除载体包括载体骨架以及连接到该载体骨架上的核苷酸序列SEQ ID NO：2。本发明载体系统和方法具有降低基因操作难度、提高敲除效率,在短时间内快速将CD163基因和MSTN基因敲除的优点。本发明方案无需药物筛选,不带有外源筛选标记,具有较为简便的细胞筛选流程。可以一次性获得双基因缺失的细胞系,大大缩短了双/多基因编辑动物的制备流程。