阅读说明：本技术 一种用解淀粉芽孢杆菌m73发酵产物保鲜血橙的方法 (Method for preserving blood orange by using bacillus amyloliquefaciens M73 fermentation product ) 是由 孙群 郭晓梅 刘卓翀 乔孟婷 罗可 杨轶凡 刘健 于 2021-04-28 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种用解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物保鲜血橙的方法,属于果蔬保鲜领域。以血橙为试材,用解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物涂抹果皮,以不作处理作为对照,通过测定果实品质及采后生理生化指标考察其对冷藏条件下(4℃)血橙的保鲜效果。结果表明,解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物可降血橙腐烂率,减缓贮藏期间血橙可溶性固形物、可滴定酸、VC含量的损失,促进花色苷的积累,有效改善血橙的贮藏品质,是一种高效、低廉、具有实际应用前景的新方法。(The invention relates to a method for preserving blood orange by using a fermentation product of bacillus amyloliquefaciens M73, belonging to the field of fruit and vegetable preservation. The fresh-keeping effect of the blood orange under the refrigeration condition (4 ℃) is examined by measuring the fruit quality and post-harvest physiological and biochemical indexes by taking the blood orange as a test material, coating the fruit peel with a fermentation product of bacillus amyloliquefaciens M73 and taking no treatment as a control. The result shows that the fermentation product of bacillus amyloliquefaciens M73 can reduce the rotting rate of the blood oranges, slow down the loss of soluble solid matters, titratable acid and VC content of the blood oranges in the storage period, promote the accumulation of anthocyanin, effectively improve the storage quality of the blood oranges, and is a novel method which is efficient and low in cost and has practical application prospect.)

一种用解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物保鲜血橙的方法

技术领域

本发明涉及果蔬保鲜领域，具体涉及一种用解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物保鲜血橙的方法。

背景技术

血橙富含多酚、类黄酮、抗坏血酸等抗氧化活性物质，营养价值丰富，深受消费者喜爱。血橙是典型的因花色苷着色的品种，花色苷的含量决定血橙果肉颜色，是血橙商业价值的重要评价指标。花色苷是一类广泛的存在于植物中的色素，属于类黄酮化合物。花色苷不仅赋予植物鲜艳的颜色以利于授粉和种子传播、抵抗植物虫害以及预防植物的紫外线照射损伤，而且对于人类具有许多生理保健功能，如清除体内自由基、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、保护肝脏、预防糖尿病、减肥、保护视力等。血橙着色需要较大的昼夜温差，热带和亚热带气候地区生长的血橙着色普遍不深，且颜色分布不均匀，严重影响其商业价值。采取有效的处理措施保持水果采后良好品质极为重要。

我国柑橘以鲜销为主，在旺季时需大量贮藏，而采摘后的柑橘果实在贮藏过程中易腐烂变质，造成巨大的经济损失。柑橘采后病害分为侵染性病害和非侵染性病害，非侵染性病害是指由恶劣的物理、化学等非生物环境因素直接或间接引起的植物病害,又称生理性病害，包括水肿病，褐斑病，枯水病，油斑病等等。侵染性病害是由微生物（大多为致病性真菌）侵染而引起的病害，主要包括有意大利青霉和指状青霉引起的青绿霉病；由白地霉引起的酸腐病，由黑色地腐病菌引起的黑色蒂腐病，由柑橘囊孢壳菌引起的褐色蒂腐病，由柑橘球座菌引起的黑斑病，由寄生疫霉引起的褐腐病，由柑橘链格孢引起的黑腐病以及由胶孢炭疽菌炭疽病等。在柑橘采后各种病害中，以青绿霉病尤为严重，该病害在贮藏期间造成的损失一般为10%左右，高的超过30%，给生产和经营者带来很大损失。

商业上血橙常采用冷藏保鲜，但青霉菌在低温条件下仍可生长，因此找到一种可以抑制低温条件下血橙霉变的保鲜方法极其重要。解淀粉芽孢杆菌可作为一种生物保鲜方法用于水果的采后保鲜，已有研究表明，解淀粉芽孢杆菌可以有效延缓香蕉的成熟和变质；延长荔枝、龙眼的保质期并增强其抗病性。本实验室经诱变选育得到高效生防解淀粉芽孢杆菌M73，对多种植物病原真菌（如赤霉菌、灰霉菌）抑菌效果更强，该菌株在实验室中抑制灰霉菌基本达到化学农药腐霉利水平。已鉴定出其主要抑菌物质为脂肽类。

我们的前期研究发现解淀粉芽孢杆菌M73可防治龙眼青霉霉变。因此针对青霉菌的微生物保鲜剂——解淀粉芽孢杆菌M73可以用于冷藏条件下血橙保鲜。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够在冷藏条件下降低血橙腐烂率、保持果实外观品质并延长血橙保鲜期、操作简单、绿色安全、低廉的用解淀粉芽胞杆菌M73发酵产物保鲜血橙的方法。

本发明的用解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物保鲜血橙的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)选择晴天采收，外观着色一致，大小均一，无病虫害、无机械损伤的血橙果实。

(b)将血橙果实置于保鲜液中浸泡5 s后取出，晾干果实表面的保鲜液，经包装后进行贮藏；所述的保鲜液为发酵48 h后的解淀粉芽胞杆菌M73发酵产物。

所述的包装是将晾干后的果实用0.01-0.03 mm的聚乙烯薄膜袋套袋包装(主要是防止失水)。

所述的贮藏为冷库（4℃）贮藏。

按照本发明的方法对冷藏条件下血橙进行保鲜，保鲜后的血橙在贮藏过程中不易腐烂，经保鲜后的血橙可降低腐烂率，减缓贮藏过程中VC、可滴定酸、可溶性固形物的损失，同时促进了血橙花色苷的积累，延长血橙保鲜期。因此，本发明可大大提高血橙的经济价值。本发明的方法还可以用于龙眼的保鲜。

附图说明

图1为实施例1的解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物对血橙果实腐烂率的影响；

图2为实施例1的解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物对血橙果实VC含量的影响；

图3为实施例1的解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物对血橙果实可溶性固形物含量的影响；

图4为实施例1的解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物对血橙果实可滴定酸含量的影响；

图5为实施例1的解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物对血橙果汁总花色苷含量的影响。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1.材料

血橙(Citrus sinensis L. Osbeck)采自四川省资中县，品种为“2号”。

保鲜液为解淀粉芽孢杆菌M73发酵产物，其制备方法包括以下步骤：

步骤一：将培养好的种子液按体积比1%的比例接种到发酵培养基中，200 r/min摇床，30℃培养48 h得到。

步骤二：将步骤一的发酵液于5000 r/min离心5 min。

其中：步骤一中，所述种子液通过下述方法获得：先将解淀粉芽孢杆菌菌株M73划线转接到PDA平板中，置于培养箱28-37℃恒温培养24-48小时；再将获得的解淀粉芽孢杆菌菌株M73 的菌苔接种到PDA 液体培养基中，28-37℃摇床振荡培养24-48小时得到种子液；

步骤一中，所述发酵培养基包含以下组分：L-谷氨酸钠5 g，MgSO₄.7H₂O 0.5 g，葡萄糖 20 g，FeSO₄ 0.15 mg，氯化钾 0.5 g，K₂HPO₄ 1.0 g，MnSO₄•H₂O 5.0 mg，CuSO₄•5H₂00.16 mg，蒸馏水1000 ml，pH 7.2，115℃下高压灭菌15 min。

2.处理方式

晴天新鲜采收血橙，挑选外观着色一致，大小均一，无病虫害、无机械损伤的血橙为实验材料。先用清水将果实表面洗净后，取出晾干，然后分别用保鲜液（解淀粉芽胞杆菌M73发酵产物）和对照液（清水）浸泡5 s后取出，晾干，再分别用0.015 mm厚的聚乙烯薄膜袋包装，4个果/袋，4℃贮藏。

3.腐烂率

果实腐烂率：以果面出现直径 ≥ 0.50 cm的病班或腐烂的果实记为腐烂果。入贮后，按间隔日数定期统计腐烂果个数，腐烂率为腐烂果个数占总果数的百分数，计算公式为：果实腐烂率（%）=腐烂果个数/贮藏总果数×100%。

4.可溶性固形物

从每个处理中随机抽取4个果实，将果实榨汁，通过纱布过滤称取果汁进行可溶性固形物、可滴定酸、Vc含量及总花色苷含量的测定。

采用阿贝折光仪测定。

5.可滴定酸、VC

使用雷根生物试剂盒测定。

6.总花色苷

血橙榨汁后，10000 r/min离心10 min，取 2 mL 上清液，分别加入 pH1.0

氯化钾/盐酸缓冲液和 pH 4.5 乙酸钠/盐酸缓冲液稀释，充分混匀，于510 nm处测定吸光度。计算公式如下。

C(mg·L^-1)=(A_{pH 1.0}- A_{pH 4.5}) × 484.82 × DF × 1000/24 825

式中，484.82 为矢车菊素-3-葡萄糖苷的分子量，24 825 为摩尔吸光系数，

DF是稀释度。

7.实验结果及分析

实验结果如图1、图2、图3、图4、图5所示，从图1所示，解淀粉芽

胞杆菌M73发酵产物对降低冷藏条件下血橙腐烂率有显著效果，在贮藏后90天时处理组腐烂率为对照组的一半，延长保鲜期约30%。如图2、图3、图4所示，解淀粉芽胞杆菌M73发酵产物可降低贮藏期内血橙可溶性固形物、可滴定酸、VC含量的损失，在贮藏后30天，其可溶性固形物、可滴定酸、VC含量与第0天相比无显著性差异，保鲜效果很好。如图5所示，解淀粉芽胞杆菌M73发酵产物可促进贮藏期内血橙花色苷的积累，在贮后第30 d时，花色苷含量是同天对照组的2.49倍，在较短时间内增加了血橙的花色苷含量，有效改善血橙的贮藏品质。