阅读说明：本技术 一类四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物，制备方法及其应用 (Tetrahydrobenzofuran Mannich alkali compounds, and preparation method and application thereof ) 是由 黄年玉 金蕾 刘明国 姚辉 邓张双 郭志勇 汪鋆植 张雪晴 于 2019-11-11 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物,该类化合物的结构式为<Image he="348" wi="414" file="DDA0002268130610000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>所述的R为氢或甲基；R<Sup>2</Sup>和R<Sup>3</Sup>包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、羟乙基、C4或C5的亚甲基链、含N原子的C4或C5的亚甲基链中的任意一种。其制备方法是以碘化亚铜为催化剂,二甲亚砜作溶剂,以甲醛水溶液(优选为30％的甲醛水溶液)、仲胺和呋喃并环己酮肟醚类为原料,用“一锅法”反应制备了系列长链四氢苯并呋喃并环己酮Mannich碱,该反应产物单一,无副反应发生,具有良好的官能团耐受性,含有羟基及杂原子的仲胺对反应均无影响。本发明将所制备得到的产品应用于抗胃癌药物中,并取得了显著的效果。(The invention provides a tetrahydrobenzofuran Mannich alkali compound, which has a structural formula R is hydrogen or methyl; r 2 And R 3 Including any one of methyl, ethyl, N-propyl, isopropyl, N-butyl, hydroxyethyl, a methylene chain of C4 or C5, a methylene chain of C4 or C5 containing N atom. The preparation method takes cuprous iodide as a catalyst, dimethyl sulfoxide as a solvent, and a formaldehyde aqueous solution (preferably a 30% formaldehyde aqueous solution), secondary amine and furo-cyclohexanone oxime ether as raw materials to prepare the series of long-chain tetrahydrobenzofuran-cyclohexanone Mannich bases by a one-pot reaction, wherein the reaction product is single and has no side reactionThe method has the advantages that the method has good functional group tolerance, and secondary amine containing hydroxyl and hetero atoms has no influence on the reaction. The invention applies the prepared product to the anti-gastric cancer medicine and obtains obvious effect.)

一类四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物，制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物，并将其应用制备治疗抗胃癌的药物上的应用。

背景技术

恶性肿瘤作为全球公共卫生问题之一，已成为21世纪危害人类健康的第一杀手。世界卫生组织(WHO)2008年的统计结果表明，胃癌(Gastric Cancer)是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率在男性恶性肿瘤中占第二位，在女性恶性肿瘤中占第四位，全球每年新发胃癌100余万，死亡约80万。我国胃癌的发病率占全球上消化道肿瘤发病总数的30％以上，是胃癌发病率和死亡率较高的国家之一。因此开发高效的抗胃癌药物具有重要的社会意义和经济价值。Mannich反应亦称胺甲基化反应，是指一个含有活泼氢原子的化合物和甲醛(或其它醛)及胺的不对称缩合反应，所得产物称为Mannich碱。Mannich碱类化合物既可作为植物保护剂、涂料和化学聚合物等，也是重要的药物分子，例如Tramadol、Osnervan和吡咯并环己酮Mannich碱Modan等。陈海涛等报道环戊酮Mannich碱类化合物具有抗癌和抗炎活性，秦华等还发现这类化合物能选择性地抑制炎症部位***素的合成，而不影响胃粘膜中的***素的合成，显示了选择性COX-2抑制剂的作用特点，可能作为具有多效的抗胃癌药物进一步研发。苯并呋喃类化合物有广泛的生物活性，2010年Atta等报道了一系列含有苯并呋喃结构的化合物，发现大多数的化合物具有较好的细胞毒活性(5.56μg/mL<IC₅₀<20.8μg/mL)，与抗肿瘤药物阿霉素(IC₅₀＝2.97μg/mL)的活性相当。但鲜有文献报道四氢苯并呋喃类化合物在抗胃癌药物中的应用，本权利书将Mannich碱骨架与四氢苯并呋喃酮母核拼接，以期为抗胃癌药物的研发提供参考。

20世纪以来，Mannich反应在生物碱和医学化工制药中广泛，化学家们对曼尼希反应催化剂和选择性的关注与日俱增，一直在致力于寻求一种污染环境轻、低腐蚀性和高效的曼尼希反应催化剂及新催化法。传统Mannich反应多采用质子酸或Lewis酸催化剂，但在后处理中这些酸催化剂具有腐蚀性和挥发性，极易造成环境污染。

发明内容

本发明以碘化亚铜为催化剂，二甲亚砜作溶剂，以甲醛水溶液(优选为30％的甲醛水溶液)、仲胺和呋喃并环己酮肟醚类为原料，用“一锅法”反应制备了系列长链四氢苯并呋喃并环己酮Mannich碱，该反应产物单一，无副反应发生，具有良好的官能团耐受性，含有羟基及杂原子的仲胺对反应均无影响。本发明以乙二醇溶解和催化量冰乙酸为催化剂，高效制备了系列杂环Mannich碱，后处理简单，环境污染小，避免了大量使用有机溶剂和强酸性废液的产生。

所述的一类四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物，该类化合物的结构式为

所述的R为氢或甲基；R²和R³包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、羟乙基、C4或C5的亚甲基链、含N原子的C4或C5的亚甲基链中的任意一种。

作为优选的化合物，其结构式包括如下：

中的任意一种。

根据上述的结构式，本发明还提供一类杂环Mannich碱类化合物，包含所述的四氢苯并呋喃母核结构的化合物，结构式为

所述的R为氢或甲基；R⁴包括邻位、间位和对位的甲基、卤原子、甲氧基、或硝基中的任意一种。

作为优选方案，该类化合物的结构式为

中的任意一种。

所述的四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物的制备方法，包括如下步骤：

将化合物3、仲胺和甲醛水溶液混合后加入DMSO溶解，加热至70-90℃(优选反应温度为80℃)，恒温搅拌均匀后，再加入催化剂CuI，搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入冷水中，乙酸乙酯萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化，得到化合物4，即为长链四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物；反应式如下：

所述的R为氢或甲基；R²和R³包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、羟乙基、C4或C5的亚甲基链、含N 原子的C4或C5的亚甲基链中的任意一种。

甲醛水溶液的质量分数为25-35％；其中化合物3、仲胺、甲醛水溶液、CuI的摩尔比为1：1.2-1.8：3-5：0.05-0.1。

所述的杂环Mannich碱类化合物的制备方法，包括如下步骤：

将化合物3、取代苯胺和甲醛水溶液放入容器中，加入乙二醇溶解和催化剂冰乙酸，加热至75-95℃下进行恒温搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入冷水中，乙酸乙酯萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化，得杂环Mannich碱5，即为杂环Mannich碱类化合物，反应式如下：

所述的R为氢或甲基； R⁴包括邻位、间位和对位的甲基、卤原子、甲氧基、或硝基中的任意一种。

本发明的又一技术方案中，将所述的四氢苯并呋喃Mannich碱类化合物在制备抗胃癌药物中的应用，并取得了显著的效果。

具体实施方式

实施例1

四氢苯并呋喃并环己酮Mannich碱的制备

以四氢苯并呋喃-4-酮肟醚为原料，在末端炔上与仲胺、甲醛反应合成长链Mannich 碱的反应路线如下：

表1实验仪器

实验试剂

表2实验试剂

所用试剂均为国产市售分析纯，柱层析硅胶(200-300目)采用青岛海洋化工产品，反应中所有试剂在使用前均参照《试剂纯化手册》进行预处理。

中间体的合成

将3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮(化合物1a，1.78g，10.0mmol)和盐酸羟胺(0.834 g，12.0mmol)用30mL无水甲醇溶解，然后向溶液中加入无水醋酸钠(0.984g，12.0mmol)。搅拌、加热回流4h，待反应液冷却，将其倒入至150mL冰水中，过滤得到白色固体，真空干燥过夜即得化合物2a，收率95％。

将化合物2(1.92g，10.0mmol)溶于乙腈(25mL)中，然后向溶液中缓慢加入NaH(0.24g，10.0mmol)，充分搅拌下滴加炔丙基溴(1.428g，12.0mmol)，室温搅拌2h。旋蒸除去溶剂后，向其中倒入50mL水，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，减压下除去溶剂后得到的残余物用柱色谱法分离(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:20)，得到化合物3a，收率87％。

以类似方法，采用3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮(化合物1b)为原料，可依次制备化合物2b(R＝Me)、3b(R＝Me)，收率分别为97％和88％。

长链四氢苯并呋喃Mannich碱4的制备

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二乙胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mLDMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol)，搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4a。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(diethylamino)but-2-yn-1-yl)oxime (4a):Yellow oil,yields 89％；R_f 0.25(ethyl acetate/petroleumether＝1:20,v/v)；¹H NMR(CDCl₃, 400MHz)δ(ppm):1.06(t,J＝7.2Hz,6H),1.89-1.95(m,2H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H),2.52- 2.57(m,4H),2.65-2.68(m,4H),3.46(t,J＝2.0Hz,2H),4.70(t,J＝1.6Hz,2H),7.03(d,J＝ 0.4Hz,1H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):157.4,153.7,138.2,118.5,115.2,81.1,80.6, 61.6,47.1,40.9,23.1,22.9,21.7,12.5,10.3；IR(KBr)ν(cm^-1):3433,2968,2934,2864,2816, 1630,1563,1457,1434,1384,1356,1319,1271,1199,1106,1095,1033,1014,1005,915,873, 842,747,607；ESI-MS m/z:288.916[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、N-甲基哌嗪(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mLDMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol)，搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4b。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)but-2-yn-1-yl) oxime(4b):Yellow oil,yields 83％,R_f 0.51(ethyl acetate/petroleum ether＝1:20,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):1.90-1.95(m,2H),2.14(d,J＝1.2Hz,3H),2.29(s,3H),2.37(d, J＝5.2Hz,6H),2.45-2.54(m,6H),3.34(t,J＝2.0Hz,2H),4.70(t,J＝2.0Hz,2H),7.03(s, 1H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):157.42,153.65,138.25,118.57,115.18,81.55,80.90, 61.64,54.93,51.93,47.18,45.94,23.08,22.90,21.71,10.32；IR(KBr)ν(cm^-1):3419,3136,2934, 2844,2791,2760,2687,1633,1563,1459,1398,1356,1347,1280,1165,1140,1039,913,876, 842,812,747,613,517,ESI-MS m/z:315.947[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、哌啶(1.5mmol) 和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至 80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4c。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(piperidin-1-yl)but-2-yn-1-yl)oxime (4c):Yellow oil,yields 75％；R_f 0.32(ethyl acetate/petroleum ether＝1:20,v/v)；¹H NMR(CDCl₃, 400MHz)δ(ppm):1.40(s,2H),1.57-1.62(m,4H),1.89-1.95(m,2H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H), 2.50(s,4H),2.64-2.68(m,4H),3.30(t,J＝2.0Hz,2H),4.71(t,J＝2.0Hz,2H),7.03(d,J＝0.4 Hz)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):157.4,153.7,138.2,118.5,115.2,81.3,81.2,61.7, 53.2,47.9,25.8,23.8,23.1,22.9,21.7,10.3；IR(KBr)ν(cm^-1):2928,2853,2797,2749,1636, 1563,1440,1353,1114,1016,1000,873；ESI-MS m/z:300.906[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二正丙胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4d。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dipropylamino)but-2-yn-1-yl)oxime (4d):Yellow oil,yields 56％；R_f 0.51(ethyl acetate/petroleumether＝1:20,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):0.87(t,J＝7.2Hz,6H),1.41-1.50(m,4H),1.89-1.95(m,2H), 1.15(d,J＝1.2Hz,3H),2.40-2.43(m,4H),2.64-2.69(m,4H),3.43-3.44(t,J＝1.2Hz,2H), 4.71(t,J＝2.0Hz,2H),7.03(d,J＝0.4Hz,1H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):157.4, 153.6,138.2,118.6,115.2,81.0,80.9,61.7,55.6,42.2,23.1,22.9,21.7,20.6,11.8,10.3；IR(KBr) ν(cm^-1):2957,2934,2872,2816,1636,1566,1457,1356,1325,1095,1014,1000,913,876,842；ESI-MS m/z:316.979[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二正丁胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4e。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dibutylamino)but-2-yn-1-yl)oxime (4e):Yellow oil,yields 75％；R_f 0.65(ethyl acetate/petroleumether＝1:20,v/v)；¹H NMR(CDCl₃, 400MHz)δ(ppm):0.90(t,J＝7.2Hz,6H),1.25-1.34(m,4H),1.38-1.46(m,4H),1.89-1.95 (m,2H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H),2.45(t,J＝8.0Hz,4H),2.64-2.68(m,4H),3.44(s,2H),4.71 (s,2H),7.03(s,1H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):157.4,153.7,138.3,118.6,115.3, 81.1,81.0,61.7,53.5,42.3,29.7,23.1,22.9,21.8,20.6,14.0,10.4；IR(KBr)ν(cm^-1):3436,2954, 2928,2864,1636,1566,1457,1358,1092,1016,1002,873；ESI-MS m/z:345.051[M+H]⁺8.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二环己胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4f。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dicyclohexylamino)but-2-yn-1-yl) oxime(4f):Yellow oil,yields 45％；R_f 0.57(ethyl acetate/petroleum ether＝1:20,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):1.13-1.34(m,10H),1.57(d,J＝12.4Hz,2H),1.71-1.95(m,10H), 2.12-2.16(m,3H),2.64-2.77(m,6H),3.52(s,2H),4.86(s,2H),7.03(s,1H)；¹³C NMR(CDCl₃, 100MHz)δ(ppm):157.3,153.5,138.2,118.6,115.2,85.5,79.4,61.9,57.3,35.1,31.1,26.2,26.1, 23.1,22.9,21.7,10.4；IR(KBr)ν(cm^-1):2926,2850,1630,1451,1356,1092,1016,1002,876； ESI-MS m/z:397.159[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、哌嗪(1.5mmol) 和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至 80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4g。

(4E,4'E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(4-(4-(((E)-(3-methyl-6,7-dihydro benzofuran-4(5H)-ylidene)amino)oxy)but-2-yn-1-yl)piperazin-1-yl)but-2-yn-1-yl)oxime(4g): Yellow oil,yields 34％；R_f 0.17(ethylacetate/petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400 MHz)δ(ppm):1.89-1.95(m,2H),2.14(d,J＝6.4Hz,3H),2.66(t,J＝6.4Hz,8H),3.34(t,J＝ 1.6Hz,2H),4.71(t,J＝2.0Hz,2H),7.03(d,J＝0.8Hz,1H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ (ppm):157.5,153.7,138.3,118.6,115.2,81.6,80.9,61.7,51.8,47.2,23.1,22.9,21.7,10.4；IR (KBr)ν(cm^-1):3430,3085,2942,2917,2889,2839,2822,2808,2743,1633,1569,1437,1428, 1330,1314,1257,1145,1109,1089,1019,1000,899,873,798；ESI-MS m/z:517.177[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二甲胺(1.5mmol) 和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至 80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4h。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dimethylamino)but-2-yn-1-yl)oxime (4h):Yellow oil,yields 73％,；R_f 0.19(ethyl acetate/petroleumether＝1:1,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):1.89-1.95(m,2H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H),2.29(s,6H),2.64-2.68 (m,4H),3.30(s,2H),4.72(t,J＝2.0Hz,2H),7.03(s,1H)；¹³CNMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm): 157.4,153.7,138.4,118.6,115.2,81.5,80.9,61.6,48.1,44.1,23.1,22.9,21.7,10.3；IR(KBr)ν (cm^-1):3419,2940,2861,2819,2771,1633,1563,1457,1440,1420,1356,1325,1271,1092, 1036,1014,997,913,873,740；ESI-MS m/z:260.811[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二异丙胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4i。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(diisopropylamino)but-2-yn-1-yl)

oxime(4i):Yellow oil,yields 78％；R_f 0.47(ethyl acetate/petroleumether＝1:2,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.03(s,1H),4.68(t,J＝2.0Hz,2H),3.46(t,J＝2.0Hz,2H),3.16- 3.23(m,2H),2.62(t,J＝6.4Hz,4H),2.14(d,J＝1.2Hz,3H),1.89-1.95(m,2H),1.08(d,J＝6.4Hz,12H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):157.4,153.7,138.3,118.6,115.2,85.1,79.7, 61.9,48.4,34.4,23.1,22.9,21.8,20.5,10.3；IR(KBr)ν(cm^-1):2962,2928,2867,1628,1566, 1468,1440,1423,1356,1176,1095,1039,1016,1002,915,873；ESI-MS m/z:316.958[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、吡咯烷(1.5mmol) 和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至 80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4j。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(pyrrolidin-1-yl)but-2-yn-1-yl)oxime (4j):Yellow oil,yields 41％；R_f 0.27(ethyl acetate/petroleum ether＝1:1,v/v)；¹H NMR(CDCl₃, 400MHz)δ(ppm):7.03(d,J＝0.4Hz,1H),4.71(t,J＝2.0Hz,2H),3.47(t,J＝1.6Hz,2H),2.61 -2.68(m,8H),1.15(d,J＝1.2Hz,3H),1.89-1.95(m,2H),1.76-1.82(m,4H)；¹³C NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):157.4,153.7,138.2,118.5,115.1,81.5,80.7,61.6,52.4,43.2,23.7, 23.0,22.9,21.7,10.3；IR(KBr)ν(cm^-1):3440,3130,1634,1400,1138,1121,1066,1017,1002, 951,872,537,514；ESI-MS m/z:286.880[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、二乙醇胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mLDMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4k。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(bis(2-hydroxyethyl)amino)but-2-yn-1 -yl)oxime(4k):Yellow oil,yields 6％；R_f0.28(ethyl acetate petroleum ether＝1:1,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.03(s,1H),4.69(s,2H),3.64(t,J＝5.2Hz,4H),3.53(s,2H), 2.76(t,J＝5.2Hz,4H),2.66(t,J＝6.0Hz,4H),2.43(brs,2H),2.14(d,J＝1.2Hz,3H),1.89- 1.96(m,2H)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):157.6,153.9,138.4,118.5,115.1,81.8,80.4, 61.5,59.3,55.2,42.7,23.1,22.9,21.7,10.3；IR(KBr)ν(cm^-1):3397,2931,2867,1636,1566, 1457,1440,1356,1333,1260,1089,1036,1016,1002,915,876；ESI-MS m/z:320.953[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、N-甲基乙醇胺 (1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mLDMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4l。

(E)-3-Methyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-((2-hydroxyethyl)(methyl)amino)but-2 -yn-1-yl)oxime(4l):Yellow oil,yields 40％；R_f 0.43(ethylacetate petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.03(t,J＝0.4Hz),4.71(t,J＝2.0Hz,2H),3.59(t,J＝2.0 Hz,2H),3.43(t,J＝2.0Hz,2H),2.68(d,J＝2.0Hz,4H),2.60-2.66(m,2H),2.46(s,1H),2.34 (s,3H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H),1.89-1.95(m,2H)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm): 157.5,153.8,138.3,118.5,115.1,81.8,80.4,61.5,58.5,56.9,46.0,41.2,23.1,22.9,21.7,10.3；IR (KBr)ν(cm^-1):3411,2945,2864,2794,1633,1563,1440,1417,1357,1328,1091,1056,1036, 1016,1002,913,874,840；ESI-MS m/z:290.917[M+H]⁺.

将(Z)-3-甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3a,1.0mmol)、***啉(1.5mmol) 和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至 80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4m。

(E)-3-Methyl-2-(morpholinomethyl)-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-morpholinobut- 2-yn-1-yl)oxime(4m):Yellow oil,yields 41％；R_f 0.38(ethylacetate/petroleum ether＝1:3,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):4.71(s,2H),3.72(t,J＝4.4Hz,8H),3.45(s,2H),3.33(s, 2H),2.64-2.68(m,4H),2.57(t,J＝4.4Hz,4H),2.47(s,4H),2.15(s,3H),1.88-1.94(m,2H)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):156.4,153.7,145.5,116.9,115.4,81.8,80.5,66.8,66.7, 61.6,53.2,52.8,52.2,47.5,23.1,22.1,21.6,10.4；IR(KBr)ν(cm^-1):3489,2954,2923,2858, 2814,2766,2687,1639,1605,1451,1423,1361,1330,1308,1291,1114,1067,1047,1000,913, 887,862,795；ESI-MS m/z:402.043[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二甲胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4n。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dimethylamino)but-2-yn-1-yl) oxime(4n):Yellow oil,yields 12％；R_f 0.23(ethylacetate/petroleum ether＝1:1,v/v)；¹H NMR： (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(s,1H),4.72(t,J＝2.0Hz,2H),3.29(s,2H),3.15(d,J＝1.2Hz, 3H),2.51(d,J＝6.0Hz,4H),2.29(s,6H),1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm): 156.7,152.9,138.5,118.4,114.2,81.5,80.9,61.6,48.0,44.0,37.1,36.7,32.8,28.6,10.2；ESI-MS m/z:288.881[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、N-甲基哌啶(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4o。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)but-2-y n-1-yl)oxime(4o):Yellow oil,yields 12％；R_f 0.15(ethyl acetate/petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(t,J＝0.4Hz,1H),4.70(t,J＝1.6Hz,2H),3.34(t,J＝ 2.0Hz,2H),2.50(t,J＝2.8Hz,10H),2.29(s,3H),2.14(d,J＝1.2Hz,3H),1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):155.7,151.9,137.5,117.4,113.2,80.5,79.9,60.7,53.9,50.9, 46.2,44.9,36.1,35.7,31.8,27.6,9.2；ESI-MS m/z:343.970[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二异丙胺 (1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4p。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(diisopropylamino)but-2-yn-1-y l)oxime(4p):Yellow oil,yields 75％；R_f 0.32(ethyl acetate/petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(s,1H)4.68(t,J＝2.0Hz,2H),3.46(t,J＝2.0Hz,2H),3.16- 2.23(m,2H),2.50(d,J＝1.6Hz,4H),2.15(d,J＝0.8Hz,3H),1.07(t,J＝6.4Hz,18H),；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):156.6,152.8,138.5,118.4,114.3,85.0,79.7,61.9,48.3,37.1, 36.7,34.3,32.8,28.6,20.5,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):3456,2965,2926,2870,2839,1636,1563, 1468,1361,1112,1028,1005,899,865；ESI-MS m/z:345.038[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、吡咯烷(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4q。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(pyrrolidin-1-yl)but-2-yn-1-yl) oxime(4q):Yellow oil,yields 67％；R_f 0.234(ethyl acetate/petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):1.06(s,6H),7.04(d,J＝0.4Hz,1H),3.46(t,J＝2.0Hz,2H),2.60- 2.63(m,4H),2.50(d,J＝4.8Hz,4H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H),1.76-1.80(m,4H)；¹³C NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):156.7,152.9,138.6,118.4,114.2,81.7,80.6,61.7,52.4,43.2,37.1, 36.8,32.8,28.6,23.7,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):3419,2959,2923,2870,2805,2729,1630,1566, 1462,1440,1370,1350,1322,1300,1159,1126,1089,1028,1005,963,907,865；ESI-MS m/z: 314.958[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、哌啶(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4r。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(piperidin-1-yl)but-2-yn-1-yl) oxime(4r):Yellow oil,yields 39％；R_f 0.48(ethyl acetate/petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(d,J＝0.4Hz,1H),4.71(t,J＝2.0Hz,2H),3.30(t,J＝2.0Hz, 2H),2.50(d,J＝6.0Hz,8H),2.15(d,J＝1.2Hz,3H),1.56-1.62(m,4H),1.40(d,J＝4.8Hz, 2H),1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):156.7,152.9,138.6,118.4,114.2,81.4, 81.2,61.7,53.2,47.9,37.1,36.8,32.8,28.6,25.8,23.8,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):3428,2931,2850, 2794,2752,1630,1566,1471,1440,1342,1294,1162,1112,1030,1008,963,901,862；ESI-MS m/z:328.952[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二乙胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4s。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(diethylamino)but-2-yn-1-yl) oxime(4s):Yellow oil,yields 95％；R_f 0.47(ethylacetate/petroleum ether＝1:1,v/v)；¹H NMR (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(d,J＝0.4Hz,1H),4.70(t,J＝2.0Hz,2H),3.46(t,J＝2.0Hz, 2H),3.15(d,J＝1.2Hz,3H),2.50-2.57(m,8H),1.05(m,12H),；¹³C NMR(CDCl₃,400MHz)δ (ppm):156.6,152.8,138.5,118.4,114.2,81.1,80.6,61.7,47.1,40.9,37.1,36.7,32.8,28.6,12.5, 10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):2965,2923,2869,2825,1633,1566,1468,1356,1092,1030,999,966, 904,862；ESI-MS m/z:317.000[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二正丙胺 (1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4t。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dipropylamino)but-2-yn-1-yl) oxime(4t):Yellow oil,yields 78％；R_f 0.56(ethylacetate/petroleum ether＝1:2,v/v)；¹H NMR: (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(t,J＝0.4Hz,1H),3.43(t,J＝2.0Hz,2H),2.51(d,J＝6.0Hz, 4H),2.41-2.43(m,4H),2.16(d,J＝1.2Hz,3H),1.41-1.50(m,4H),1.06(s,6H),0.87(t,J＝ 7.2Hz,6H)；¹³C NMR:(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):156.6,152.8,138.6,118.4,114.3,81.0,61.7, 55.6,42.2,37.1,36.8,32.8,28.6,20.6,11.8,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):2956,2931,2869,2833, 1630,1465,1356,1092,1030,1002,868；ESI-MS m/z:345.1[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二丁胺(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4u。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dibutylamino)but-2-yn-1-yl) oxime(4u):Yellow oil,yields 80％,；R_f 0.18(thylacetate/petroleum ether＝1:20v/v)；¹H NMR: (CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(d,J＝0.8Hz,1H),4.71(t,J＝2.0Hz,2H),3.43(t,J＝2.0Hz, 2H),2.50(d,J＝2.0Hz,4H),2.42-2.46(m,4H),2.15(t,J＝1.2Hz,3H),1.38-1.45(m,4H), 1.24-1.34(m,4H),1.06(s,6H),0.90(t,J＝7.2Hz,6H)；¹³C NMR:(CDCl₃,100MHz)δ(ppm): 156.6,152.8,138.6,118.4,114.3,81.1,81.0,61.7,53.4,42.2,37.1,36.7,32.8,29.6,28.6,20.6, 14.0,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):2954,2928,2867,2830,1633,1563,1465,1437,1353,1322,1297, 1089,1030,1002,966,904,859,742；ESI-MS m/z:373.072[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二乙醇胺 (1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4v。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(bis(2-hydroxyethyl)amino)but- 2-yn-1-yl)oxime(4v):Yellow oil,yields 44％；R_f 0.24(ethyl cetate/petroleum ether＝1:4,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(s,1H),4.69(t,J＝1.6Hz,2H),1.06(s,6H),2.74(t,J＝ 5.2Hz,6H),2.50(s,4H),2.14(d,J＝1.2Hz,3H)；IR(KBr)ν(cm^-1):3380,2954,2920,2861, 2825,1633,1563,1440,1389,1356,1325,1297,1257,1109,1086,1036,1002,963,901,859； ESI-MS m/z:348.960[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、N-甲基乙醇胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4w。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-((2-hydroxyethyl)(methyl)amin o)but-2-yn-1-yl)oxime(4w):Yellow oil,yields 35％；R_f0.32(ethyl acetate/petroleum ether＝1:2 v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.04(s,1H),4.71(d,J＝1.2Hz,2H),3.59(t,J＝5.6 Hz,2H),3.42(s,2H),2.62(t,J＝5.2Hz,2H),2.51(d,J＝3.2Hz,4H),2.33(s,3H),2.15(d,J＝ 0.8Hz,3H),1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):156.7,153.0,138.6,118.4,114.2, 81.8,80.4,61.6,58.5,56.9,46.0,41.2,37.1,36.8,32.8,28.6,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):3400,2957, 2926,2867,2794,1633,1563,1468,1440,1350,1297,1159,1109,1086,1028,1002,963,901, 859；ESI-MS m/z:318.947[M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、二环己胺 (1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4x。

(E)-3,6,6-Trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-(dicyclohexylamino)but-2-yn-1- yl)oxime(4x):Yellow oil,yields 85％；R_f 0.32(ethyl acetate/petroleum ether＝1:20,v/v)；¹H NMR:(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.03(s,1H),4.68(t,J＝2.0Hz,2H),3.51(t,J＝2.0Hz,2H), 2.70-2.77(m,2H),2.50(d,J＝6.0Hz,4H),2.16(d,J＝1.2Hz,3H),1.82(d,J＝12.0Hz,4H), 1.73(d,J＝12.8Hz,4H),1.57(d,J＝12.4Hz,2H),1.12-1.34(m,10H),1.11(s,6H)；¹³C NMR: (CDCl₃,100MHz)δ(ppm):156.5,152.7,138.5,118.4,114.3,85.6,79.2,61.9,57.3,37.1,36.7, 35.1,32.7,31.1,28.6,26.2,26.1,10.2；IR(KBr)ν(cm^-1):3400,2928,2853,1636,1563,1445, 1347,1294,1255,1159,1092,1053,1030,1005,966,904,862,744；ESI-MS m/z:425.197 [M+H]⁺.

将(Z)-3,6,6-三甲基-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮肟基炔丙醚(3b,1.0mmol)、***啉(1.5 mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL DMSO溶解，加热至80℃，恒温搅拌5min,再催化剂CuI(10％mmol),搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得到化合物4y。

(E)-3,6,6-Trimethyl-2-(morpholinomethyl)-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one-O-(4-morpholi nobut-2-yn-1-yl)oxime(4y):Yellow oil,yields 16.8％；R_f 0.22(ethyl acetate/petroleum ether＝ 1:20,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):4.71(t,J＝1.6Hz,2H),3.72(t,J＝4.4Hz,8H), 3.45(s,2H),3.33(t,J＝2.0Hz,2H),2.56(m,J＝4.8Hz,4H),2.47-2.51(m,8H),2.15(s,3H), 1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):155.7,152.9,145.8,116.8,114.5,81.8,80.5, 66.8,66.7,61.6,53.2,52.9,52.2,47.5,37.1,36.7,32.7,28.6,10.3；IR(KBr)ν(cm^-1):3444,2957, 2926,2853,2808,2685,1639,1602,1451,1347,1308,1288,1114,1030,1005,904,862,798； ESI-MS m/z:430.045[M+H]⁺.

实施例2

杂环Mannich碱5的制备

将中间体3b(1.0mmol)、对氯苯胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL 圆底烧瓶中，加入10mL乙二醇溶解和催化量冰乙酸，加热至80℃，恒温搅拌一定时间,搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得杂环 Mannich碱5a。

(E)-2-(((4-Chlorophenyl)amino)methyl)-3,6,6-trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one O-prop-2-yn-1-yl oxime(5a):Yellow oil,yields61％；R_f 0.45(ethyl acetate/petroleum ether＝1: 30,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.14-7.11(m,2H),6.61-6.57(m,2H),4.68(d,J ＝2.4Hz,2H),4.16(s,2H),3.93(brs,1H),2.49(d,J＝7.6Hz,4H),2.44(d,J＝2.4Hz,1H),2.19 (s,3H),1.06(s,6H)；¹³CNMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):155.6,153.1,146.6,146.2,129.0, 122.5,115.4,114.7,114.2,80.1,73.8,61.3,39.3,37.0,36.7,32.7,28.6,10.2.

将中间体3b(1.0mmol)、间硝基苯胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL乙二醇溶解和催化量冰乙酸，加热至80℃，恒温搅拌一定时间,搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10: 1)，得杂环Mannich碱5b。

(E)-3,6,6-Trimethyl-2-(((3-nitrophenyl)amino)methyl)-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one O-prop-2-yn-1-yl oxime(5b):Yellow oil,yields57％；R_f 0.39(ethyl acetate/petroleum ether＝1: 30,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.56-7.54(m,1H),7.49(t,J＝2.0Hz,1H),7.30- 7.26(m,1H),6.93-6.91(m,1H),6.69(d,J＝2.4Hz,2H),4.27(s,3H),2.50(d,J＝2.4Hz,1H), 1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):155.8,153.0,149.3,148.3,145.8,129.6, 119.0,115.9,114.8,112.4,106.5,80.1,73.9,61.3,38.9,37.0,36.7,32.7,28.6,10.3.

将中间体3b(1.0mmol)、对甲苯胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL乙二醇溶解和催化量冰乙酸，加热至80℃，恒温搅拌一定时间,搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得杂环Mannich碱5c。

(E)-3,6,6-Trimethyl-2-((p-tolylamino)methyl)-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one O-prop-2-yn-1-yl oxime(5c):Yellow oil,yields 48％；R_f 0.37(ethylacetate/petroleum ether＝1: 30,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.01(d,J＝8.4Hz,2H),6.61-6.59(m,2H),4.68 (d,J＝2.4Hz,2H),4.17(s,2H),3.75(brs,1H),2.50(d,J＝5.6Hz,4H),2.44(t,J＝2.4Hz,1H), 2.25(d,J＝7.2Hz,3H),2.18(d,J＝8.4Hz,3H),1.06(s,6H).

将中间体3b(1.0mmol)、对硝基苯胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL乙二醇溶解和催化量冰乙酸，加热至80℃，恒温搅拌一定时间,搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10: 1)，得杂环Mannich碱5d。

(E)-3,6,6-Trimethyl-2-(((4-nitrophenyl)amino)methyl)-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one O-prop-2-yn-1-yl oxime(5d):Yellow oil,yields55％；R_f 0.42(ethyl acetate/petroleum ether＝1: 30,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):8.10(d,J＝9.2Hz,2H),6.61(d,J＝9.2Hz,2H), 4.74(s,1H),4.69(d,J＝2.4Hz,2H),4.30(d,J＝5.2Hz,2H),2.50(d,J＝8.4Hz,4H),2.45(t, J＝2.0Hz,1H),2.20(s,3H),1.06(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ(ppm):155.9,152.9, 152.6,145.2,138.4,126.3,116.1,114.8,111.2,80.0,73.9,61.3,38.5,36.9,36.7,32.7,28.6,10.3.

将中间体3b(1.0mmol)、间氯苯胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL乙二醇溶解和催化量冰乙酸，加热至80℃，恒温搅拌一定时间,搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得杂环Mannich碱5e。

(E)-2-(((3-Chlorophenyl)amino)methyl)-3,6,6-trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one O-prop-2-yn-1-yl oxime(5e):Yellow oil,yields72％；R_f 0.38(ethyl acetate/petroleum ether＝1: 30,v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.07(t,J＝8.0Hz,1H),6.70-6.68(m,1H),6.64 (t,J＝1.6Hz,1H),6.53-6.51(m,1H),4.69(d,J＝2.4Hz,2H),4.17(s,2H),3.98(brs,1H), 2.50(d,J＝6.8Hz,4H),2.44(t,J＝2.4Hz,1H),2.20(s,3H),1.06(d,J＝6.0Hz,6H)；¹³C NMR (CDCl₃,100MHz)δ(ppm):155.6,153.1,148.7,146.4,134.9,130.1,117.7,115.4,114.7,112.6, 111.3,80.1,73.8,61.3,39.0,36.9,36.7,32.7,28.6,10.2.

将中间体3b(1.0mmol)、邻溴苯胺(1.5mmol)和30％甲醛水溶液(4.0mmol)放入50mL圆底烧瓶中，加入10mL乙二醇溶解和催化量冰乙酸，加热至80℃，恒温搅拌一定时间,搅拌，TLC监测至反应完全，将反应液倒入30mL水中，乙酸乙酯(3×20mL)萃取，干燥，有机相减压蒸馏除去溶剂，所得粗产物用柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得杂环Mannich碱5f。

(E)-2-(((2-Bromophenyl)amino)methyl)-3,6,6-trimethyl-6,7-dihydrobenzofuran-4(5H)-one O-prop-2-yn-1-yl oxime(5f):Yellow oil,yields75％；R_f 0.44(ethyl acetate/petroleum ether＝1:30, v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm):7.43-7.41(m,1H),7.21-7.17(m,1H),6.75-6.72 (m,1H),6.62-6.58(m,1H),4.68(d,J＝2.8Hz,2H),4.54(s,1H),4.25(d,J＝2.8Hz,2H),2.51 (d,J＝2.4Hz,4H),2.45(t,J＝2.4Hz,1H),2.21(s,3H),1.07(s,6H)；¹³C NMR(CDCl₃,100 MHz)δ(ppm):155.7,153.2,146.3,144.5,132.4,128.4,118.2,115.5,114.7,111.5,109.9,80.1, 73.8,61.3,39.2,37.0,36.7,32.7,28.7,10.2.

四氢苯并呋喃并环己酮Mannich碱的抗胃癌活性评价

利用MTT(噻唑蓝)蛋白染色法方法评价化合物对胃癌细胞HGC-27的增殖抑制作用：人胃癌细胞HGC-27和人正常胃粘膜上皮细胞GES-1由中科院上海细胞库提供，采用含100U/ml青链霉素和10％新生胎牛血清的RPMI1640作为细胞培养液，细胞置于 37℃、5％CO₂的细胞培养箱培养。细胞传代时,调整细胞密度为5×10⁴～1×10⁵细胞/孔接种到96孔板，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养。24h后加入不同浓度的药物，另设空白对照组(培养液)、正常对照组(细胞+培养液)和阳性对照组，处理48h。实验终止后加 MTT(5mg/ml)20μL/孔37℃继续孵育4h,吸出上清液，每孔加入150μL的DMSO，摇匀，测定492nm波长时吸光度(OD)。MTT被活细胞摄取后经线粒体代谢生成甲瓒，线粒体活力越旺盛甲瓒生成越多，吸光度也越高，反映细胞存活情况。计算细胞抑制率，以细胞抑制率(细胞的抑制率T/C＝1-加药细胞OD/对照细胞OD)判断药物是否对细胞的增殖有抑制作用。半数抑制浓度(IC₅₀)，常作为反映药物效果的定量指标，在各种药物筛选中广泛应用，因此利用统计软件SPSS 13.0分别计算并比较药物作用于不同细胞的IC₅₀，反映药物作用效果。

表3目标化合物的抗增殖活性评价结果

MTT实验结果表明，大部分长链四氢苯并呋喃Mannich碱(系列4)表现出中等的抗胃癌活性(IC₅₀值为7.4～48.7μM)，其中化合物4s表现出较好的HGC-27的抑制活性，IC₅₀值为7.4μM；大部分杂环Mannich碱(系列5)表现出较好的抗胃癌活性，IC₅₀值在3.4～8.4μM 之间；所评价的所有化合物对人正常胃粘膜上皮细胞GES-1具有较低的毒性(IC₅₀值均大于500μM)。