一种适用于Cas12蛋白的缓冲系统及其应用
阅读说明:本技术 一种适用于Cas12蛋白的缓冲系统及其应用 (Buffer system suitable for Cas12 protein and application thereof ) 是由 段志强 陈莹 于 2021-07-16 设计创作,主要内容包括:本发明提供了一种适用于Cas12蛋白的缓冲系统,所述缓冲系统包括pH缓冲液;二价阳离子;还原剂和稳定剂。其特征在于,所述pH缓冲液是将pH值维持在7.0-9.0的pH缓冲液;所述二价阳离子为镁离子;所述还原剂选自DTT、β-巯基乙醇和TCEP中的一种或任意几种;所述稳定剂选自BSA、甘油和PEG中的一种或任意几种。(The invention provides a buffer system suitable for a Cas12 protein, the buffer system comprising a pH buffer; a divalent cation; reducing agents and stabilizers. Wherein the pH buffer is a pH buffer that maintains the pH at 7.0 to 9.0; the divalent cations are magnesium ions; the reducing agent is selected from one or any of DTT, beta-mercaptoethanol and TCEP; the stabilizer is selected from one or more of BSA, glycerol and PEG.)
技术领域
本发明涉及一种缓冲系统,尤其涉及一种适用于Cas蛋白的缓冲系统及其应用。
背景技术
CRISPR/Cas系统全名为成簇的规则间隔的短回文重复及关联蛋白系统(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associatedProteins)。是细菌体内的获得性免疫系统,用于对抗侵入细菌的外源DNA、质粒和噬菌体等。基于这一机制,科学家们开发出了CRISPR/Cas技术来利用RNA引导Cas核酸酶对多种物种基因组的特定位点进行修饰编辑。目前已发现的CRISPR/Cas系统大体可分为两类,Class1(包含了type I,III,and IV),和Class 2(包含了type II,type V和type VI)。其中TypeV中的Cas12蛋白在人工设计的gRNA引导下特异的识别目标单链/双链DNA序列,便会激活trans活性,无差别的切割反应体系内的ssDNA/ssRNA(reporter,核酸检测器)。
申请人在研究Cas蛋白的体外活性时,发现不同配比的缓冲系统对于Cas蛋白的活性影响很大,为了提高Cas蛋白的应用效率,本发明提供了一种优化的缓冲系统。
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