具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。

术语定义

在本申请中，术语“分离的”通常指从天然状态下经人工手段获得的或者人工合成的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。

在本申请中，术语“分离的核酸分子”通常是指任何长度的分离形式的核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或从其天然环境分离的或人工合成的类似物。

在本申请中，术语“变体”通常是指在原蛋白序列上进行氨基酸修饰(例如基团取代等)或者进行一个或多个氨基酸的插入、取代、和/或缺失，而保留原序列功能的分子。例如，所述变体可以比原序列具有更好的生物活性(或功能)。例如，所述保留不必是完全保留。例如，所述变体可以基本保留原序列功能，例如，保留原序列至少50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％的功能。例如，所述变体的氨基酸序列可以与原氨基酸序列至少具有70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％的同源性。例如，所述变体的氨基酸序列可以包括原氨基酸序列经过所属领域已知的保守突变而获得的氨基酸序列。所述如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列变体可以包括在如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列上进行氨基酸修饰(例如基团取代等)或者进行一个或多个氨基酸的插入、取代、和/或缺失，而保留原序列功能的分子。例如，可以基本保留如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列功能，例如，保留如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列至少50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％，或99％的功能。例如，可以与如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％的同一性。在本申请中，同一性，例如可以通过EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套组，Rice等，2000，Trends in Genetics 16：276-277)的Needle程序，3.0.0版或更高版本中执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48：443-453)来确定。使用的任选参数为缺口罚分(gap penalty)10，缺口延伸罚分(gap extension penalty)0.5和EBLOSUM62取代矩阵(BLOSUM62的EMBOSS版)。使用Needle标记为“最长同一性(longest identity)”(使用nobrief选项获得)的输出结果作为百分比同一性，并计算如下：(相同的残基×100)/(比对的长度-在比对中的空位总数)。

在本申请中，术语“分离的抗原结合蛋白”通常指从天然状态下经人工手段获得或者人工合成的具有抗原结合能力的蛋白。该“分离的抗原结合蛋白”可以包含结合抗原的部分和任选地，允许抗原结合部分采用促进所述抗原结合部分结合抗原的构象的支架或构架部分。抗原结合蛋白可以包含例如抗体来源的蛋白支架或具有移植的CDR或CDR衍生物的备选蛋白支架或人工支架。此类支架包括，但不限于包含被引入例如以稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变的抗体来源的支架，以及包含例如生物相容性聚合物的完全合成的支架。参见例如Korndorfer等,2003,Proteins:Structure,Function,andBioinformatics,53(1):121-129(2003)；Roque等,Biotechnol.Prog.20:639-654(2004)。此外，还可以包括肽抗体模拟物("PAMs")以及利用纤连蛋白组分基于抗体模拟物的支架可以用作支架。

在本申请中，术语“抗体”通常指免疫球蛋白或其片段或其衍生物，涵盖包括抗原结合位点的任何多肽，无论其是在体外还是体内产生的。该术语包括但不限于多克隆的、单克隆的、单特异性的、多特异性的、非特异性的、人源化的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂化的、突变的和移植的抗体。除非另外被术语“完整的”修饰，如在“完整的抗体”中，为了本发明的目的，术语“抗体”也包括抗体片段，比如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb和保持抗原结合功能(例如，特异性结合人IgE)的其它抗体片段。通常，这样的片段应当包括抗原结合结构域。例如，基本的4链抗体单元是由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。例如，IgM抗体由5个基本的异四聚体单元与另外一个称为J链的多肽组成，而IgA抗体包括2-5个可以与J链相结合聚合形成多价组合的基本4链单元。就IgG而言，4链单元一般可以为约150,000道尔顿。每个L链可以通过共价二硫键与H链连接，而两个H链可以通过一个或多个取决于H链同种型的二硫键相互连接。每个H和L链还可以具有间隔的链内二硫化桥键。每个H链在N末端可以具有可变结构域/可变区(VH)，对于α和γ链各自继之以三个恒定结构域/恒定区(CH)、对于μ和ε同种型继之以四个CH结构域。每个L链在N末端可以具有可变结构域/可变区(VL)，在其另一端可以具有恒定结构域/恒定区(CL)。在某些实施方式中，VL与VH对应，CL与重链的第一恒定结构域(CH1)相对应。特定的氨基酸残基被认为可以在轻链和重链可变结构域之间形成界面。VH和VL可以配对一起形成抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology,8thEdition,Daniel P.Sties,Abba I.Terr and Tristram G.Parsolw(eds),Appleton&Lange,Norwalk,Conn.,1994，第71页和第6章。在某些实施方式中，来自任何脊椎动物物种的L链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列被分为两种明显不同的类型中的一种，称为κ和λ。取决于其重链恒定结构域/恒定区(CH)的氨基酸序列，还可以将免疫球蛋白分为不同的类别或种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分别被命名为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能方面的相对小的差异，将γ和α类进一步分成亚类，例如，人包含有下述亚类：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。抗原结合片段。

在本申请中，术语“抗原结合片段”通常是指全长抗体的一部分(例如靶结合或可变区)或其功能片段或类似物。抗体片段的实例可以包括Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段等。“功能片段或类似物”通常是指与全长抗体具有基本一样的定性生物活性的化合物。例如，抗IgE抗体的功能片段或类似物是可以与IgE免疫球蛋白结合以便可防止IgE具有与其高亲和力受体Fc￡RI结合的能力或实质降低该能力的化合物。“Fv”片段通常是最小的抗体片段，其包含一完整的靶识别和结合位点。该区域可以由一个重链可变结构域与一个轻链可变结构域呈非共价联接的二聚体(VH—VL二聚体)组成。

在本申请中，术语“框架区”通常是指本领域所知的抗体可变区中存在于差异性更高的(即高变)CDR之间的部分。通常情况下，此类框架区典型地称为框架1至4(FR1、FR2、FR3和FR4)且提供用于在三维空间中呈现六个CDR(三个来自重链且三个来自轻链)的骨架，以形成抗原结合表面。即在VH中四个(H-FR1，H-FR2，H-FR3，和H-FR4)，和在VL中四个(L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4)。例如，本申请所述的分离的抗原结合蛋白的VL可以包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4。本申请所述的分离的抗原结合蛋白的VH可以包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3，和H-FR4。

在本申请中，术语“可变”通常指抗体可变区(例如，重链可变区，轻链可变区)的某些区段在抗体之间序列上存在差异的事实。通常情况下，可变区介导抗原结合并决定特定抗体对其特定抗原的特异性。通常情况下，可变性并非在整个可变结构域范围内均匀分布，而是集中在轻链和重链可变结构域中称为互补决定区(CDR)或高变区(HVR)的若干区段中。可变区相对保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自可以包含四个FR区，大多数采用β-折叠构型，通过三个CDR连接，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的CDR通过FR紧密靠近地保持在一起，可以与来自于另一条链的CDR一同促进抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat et al,Sequences of ImmunologicalInterest,Fifth Edition,National Institute of Health,Bethesda,Md.(1991))。通常恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但显示出各种效应子功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。

在本申请中，术语“轻链可变区”通常指抗体轻链的氨基末端结构域。轻链可变区可以称为“VL”。这些结构域通常是抗体轻链中变化最大的部分(相对于相同类型的其它抗体)，可以包括互补决定区(CDR)或高变区(HVR)和框架区(FR)。

在本申请中，术语“重链可变区”通常指抗体重链的氨基末端结构域。重链可变区可以称为“VH”。这些结构域通常是抗体重链中变化最大的部分(相对于相同类型的其它抗体)，可以包括互补决定区(CDR)或高变区(HVR)和框架区(FR)。

在本申请中，术语“受试者”和“患者”可互换使用，通常是指哺乳动物，如人患者和非人灵长类，以及实验用动物，如兔、大鼠和小鼠，以及其他动物。动物包括所有的脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物，如狗、猫、绵羊、牛、猪、兔、鸡等。例如，用于实施本沈琪的治疗方法的受试者是人。需要治疗的受试者包括已经患有与IgE相关的疾病或病症的患者以及倾向于发展此类病症的人。

在本申请中，术语“细胞”通常可以是或已经是核酸分子或载体的接受者的单个细胞、细胞系或细胞培养物。细胞可以包括本申请所述的核酸分子或本发明所述的载体。细胞可以包括单个细胞的后代。由于天然、偶然或有意的突变，后代可以不一定与原始母细胞完全相同(在总DNA互补体的形态上或在基因组上)。细胞可包括用本申请所述的载体在体外转染的细胞。细胞可以是细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、HEK293细胞、COS-1细胞、NS0细胞或骨髓瘤细胞。在某些实施方案中，细胞为哺乳动物细胞。在某些实施方案中，哺乳动物细胞为HEK293T细胞。

在本申请中，术语“药物组合物”通常指涉及适合施用于患者、例如人患者的组合物。例如，本申请所述的药物组合物，其可以包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。此外，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。例如，组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下对接受者无毒。本申请的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。

在本申请中，术语“药学上可接受的佐剂”通常指与药物给药相容的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂等。通常安全、无毒，且既不是生物学上也非其它方面不合需要的。

在本申请中，术语“抑制”通常是指能够完全或部分地阻碍或降低IgE与其受体FcεRI的结合。

本申请中，术语“预防”通常是指对健康患者预防性地施用组合，以预防本申请所述疾病和病症的爆发。此外，术语“预防”指对处于待治疗变应性疾病前期的患者预防性地施用这种组合。术语“预防”不需要100％消除事件的可能性。更准确地说，它表示在所述药物组合物或方法存在下事件发生的可能性降低了。

在本申请中，术语“治疗”通常是指将治疗剂施加或给予患者，或将治疗剂施加或给予由患者分离的组织或细胞系，该患者患有疾病、具有疾病症状或疾病倾向，其目的是治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、提高或影响该疾病、疾病症状或疾病倾向。可以包括改善病状态、消除病灶或改善的预后。

在本申请中，术语“载体”通常指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。举例来说，载体包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。

在本申请中，术语“直接或间接相连”通常是指相对的“直接相连”或“间接相连”。“直接相连”通常是指直接连接。例如，所述直接相连可以为相连的物质(例如氨基酸序列区段)之间没有间隔成分(例如氨基酸残基或其衍生物)而直接相连接的情况；例如氨基酸序列区段X与另一氨基酸序列区段Y通过氨基酸序列区段X的C端氨基酸与氨基酸序列区段Y的N端氨基酸形成的酰胺键直接连接。“间接相连”通常是指相连的物质(例如氨基酸序列区段)之间有间隔成分(例如氨基酸残基或其衍生物)而间接相连接的情况例如，在本申请所述的分离的抗原结合蛋白中，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端可以直接或间接相连。

在本申请中，术语“互补决定区”或术语“CDR”通常是指共同界定了抗原结合蛋白(例如，天然免疫球蛋白，嵌合抗体或人源化抗体)结合位点的可变区域的结合亲和力和特异性的氨基酸序列(参见例如，**Chothia等，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；Kabat等，美国健康和人类服务部NIH出版物(U.S.Deptof Health and Human Services NIHPublication)No.913242(1991)**)。通常，抗体包括六个CDR；VH中三个(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，和在VL中三个(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。仅由重链组成的天然存在的骆驼抗体在缺乏轻链的情况下也能够保持功能正常且稳定。参见，例如,Hamers-Casterman et al.,Nature363:446-448(1993)；Sheriff et al,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。

在本申请中，术语“FcεRIα”通常是指是免疫球蛋白E(IgE)的Fc区的高亲和受体(FcεRI，也称作Fc epsilon RI，)的α链。FcεRI是能够结合IgE的ε重链的Fc区的四聚体受体复合物，其由一个α链(即FcεRIα)，一个β链(FcεRIβ)和两个γ链(FcεRIγ)组成。通常情况下，α链可以作为抗体(例如，IgE)的结合位点，γ链能够作为下游信号起始的位点，β链能够起到放大下游信号的作用。FcεRI在表皮朗格汉斯细胞，嗜酸性粒细胞，肥大细胞和嗜碱性粒细胞上均有表达。由于其细胞分布，该受体在过敏反应中起主要作用。FcεRI也可在抗原呈递细胞上表达，并参与促进炎症的重要免疫介质(例如，细胞因子，白介素，白三烯和前列腺素等)的产生。

在本申请中，术语“IgE”或“IgE免疫球蛋白”或“免疫球蛋白E”通常是指一类在哺乳动物中发现的由浆细胞产生的抗体(或免疫球蛋白(Ig))。IgE的单体由两条重链(ε链)和两条轻链组成，其中ε链包含4个Ig样恒定区(Cε1-Cε4)。已知IgE的主要功能包括对寄生虫(例如蠕虫，例如曼氏血吸虫，恶性疟原虫，旋毛虫或肝片吸虫等)的免疫。IgE也可能参与防御毒液防御(例如，蜂、蛇类叮咬等)。IgE在I型超敏反应中也具有重要作用，例如过敏性哮喘，大多数类型的鼻窦炎，过敏性鼻炎，食物过敏以及特定类型的慢性荨麻疹和特应性皮炎。IgE在对变应原的反应中也起着关键作用，例如：对药物的过敏反应。在人类中，IgE属于基本上由公知免疫球蛋白epsilon基因编码的抗体类别的多肽。IgE可以包括膜锚定的(mIgE)，或非膜锚定的，也称为循环IgE。

在本申请中，术语“IgE相关的疾病或病症”是指由IgE介导的或与IgE相关的任何疾患或病症。通常包括免疫球蛋白IgE超量产生和/或对IgE具有超敏性。例如过敏性疾病。

在本申请中，术语“KD”，也称作“K_D”、“K_D”、“亲和常数”或“平衡解离常数”，通常是指在滴定测量中在平衡时、或者通过将解离速率常数(k_d)除以结合速率常数(k_a)所获得的值。使用结合速率常数(k_a)、解离速率常数(k_d)和平衡解离常数(K_D)表示结合蛋白(例如本申请所述的分离的抗原结合蛋白)对抗原(例如人IgE)的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的方法为本领域熟知。使用基于荧光的技术提供了高灵敏度以及在生理缓冲液中在平衡时检查样品的能力。例如，可以通过Octet测定所述K_D值，也可以使用其他实验途径和仪器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)测定。另外，电化学发光分析-溶液平衡滴定法(MSD-SET)测定所述KD值。测量方法如Estep P.等人,MAbs,2013.5(2):p.270-8所述。

在本申请中，术语“包含”或“包括”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。

在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。

发明详述

一方面，本申请提供一种分离的抗原结合蛋白，其可以包含重链可变区中的至少一个CDR，所述重链可变区可以包含如SEQ ID NO:72-73中任一项所示的氨基酸序列或其变体；且其可以包含轻链可变区中的至少一个CDR，所述轻链可变区可以包含如SEQ ID NO:74-75中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

抗原结合蛋白

本申请提供了抗原结合蛋白，例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的至少一个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:72所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的一个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:72所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的两个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:72所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的三个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:72所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的至少一个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:73所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的一个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:73所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的两个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:73所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含重链可变区中的三个CDR，所述重链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:73所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述重链可变区中的CDR可以称为HCDRn，n表示CDR的编号，通常可以为1，2或3等。

例如，所述重链可变区中的CDR可以包括HCDR1、HCDR2和HCDR3。

例如，所述变体可以包含与符合如SEQ ID NO:72-73中任一项所示通式的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:33-36中任一项所示的重链可变区或其变体中的HCDR1。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:33-36中任一项所示的重链可变区或其变体中的HCDR2。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:33-36中任一项所示的重链可变区或其变体中的HCDR3。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:33-36中任一项所示的重链可变区或其变体中的HCDR1和HCDR2。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:33-36中任一项所示的重链可变区或其变体中的HCDR2和HCDR3。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:33-36中任一项所示的重链可变区或其变体中的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:33-36中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的至少一个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:74所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的一个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:74所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的两个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:74所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的三个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:74所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的至少一个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:75所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的一个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:75所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的两个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:75所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含轻链可变区中的三个CDR，所述轻链可变区可以包含符合如SEQ ID NO:75所示通式的任意氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与符合如SEQ ID NO:74-75中任一项所示通式的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述轻链可变区中的CDR可以称为LCDRn，n表示CDR的编号，通常可以为1，2或3等。

例如，所述轻链可变区中的CDR可以包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区或其变体中的LCDR1。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区或其变体中的LCDR2。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区或其变体中的LCDR3。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区或其变体中的LCDR1和LCDR2。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区或其变体中的LCDR2和LCDR3。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含氨基酸序列如SEQ ID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区或其变体中的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:37-40中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，可以用于界定所述CDR的示例性惯例可以包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。通常情况下，所述Kabat定义是基于序列可变性，Chothia定义是基于结构环区域的位置，而AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折中。参见，例如，Kabat，“SequencesofProteins of Immunological Interest”，National Institutes of Health，Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；和Martin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。所属领域已知的公开数据库也可以用于鉴定抗体内的CDR序列。

互补决定区(CDR)

在本申请中，所述CDR可以是所述分离的抗原结合蛋白的所述重链可变区和/或轻链可变区的一段氨基酸序列，其能够介导所述抗原结合蛋白与相应抗原的特异性结合。

例如，所述CDR可以是如SEQ ID NO:72-73和33-36中的任一项所示的重链可变区中的氨基酸序列片段，所述氨基酸序列片段可以是通过所述Kabat定义、所述Chothia定义和/或所述AbM定义界定的。

例如，所述CDR可以是如SEQ ID NO:74-75和37-40中的任一项所示的轻链可变区中的氨基酸序列片段，所述氨基酸序列片段可以是通过所述Kabat定义、所述Chothia定义和/或所述AbM定义界定的。

例如，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:1-4和66中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:5-9和67-68中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR2，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR2，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR3，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR2，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR2，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR3，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR3，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1和HCDR2，所述HCDR1可以包含SEQID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1和HCDR2，所述HCDR1可以包含SEQID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR2和HCDR3，所述HCDR2可以包含SEQID NO:66所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR2和HCDR3，所述HCDR2可以包含SEQID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1和HCDR3，所述HCDR1可以包含SEQID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1和LCDR2，所述LCDR1可以包含SEQID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1和LCDR2，所述LCDR1可以包含SEQID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1和LCDR3，所述LCDR1可以包含SEQID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1和LCDR3，所述LCDR1可以包含SEQID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR2和LCDR3，所述LCDR2可以包含SEQID NO:67所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR2和LCDR3，所述LCDR2可以包含SEQID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ IDNO:68所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述HCDR1可以包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或其变体，所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR1可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列或其变体，所述LCDR3可以包含SEQ IDNO:7和9中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

框架区(FR)

在本申请中，所述轻链可变区包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3，和/或L-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2和L-FR3。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2和L-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区L-FR2，L-FR3和L-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR3和L-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4。

例如，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，例如，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接相连，例如，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端间接相连，例如，所述间接相连可以包括所述L-FR1的C末端氨基酸残基与所述LCDR1的N末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述L-FR1包含SEQ ID NO:10，14和69中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:10，14和69中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述L-FR1包含SEQ ID NO:23-24中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:23-24中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述L-FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间。

例如，所述L-FR2的N末端与所述LCDR1的C末端直接或间接相连，并且所述L-FR2的C末端与所述LCDR2的N末端直接或间接相连。

例如，所述间接相连可以包括相连的两个部分(例如，所述L-FR2与所述LCDR1，或者所述L-FR2与所述LCDR2)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述L-FR2包含SEQ ID NO:11，15和25中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:11，15和25中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述L-FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间。

例如，所述L-FR3的N末端与所述LCDR2的C末端直接或间接相连，并且所述L-FR3的C末端与所述LCDR3的N末端直接或间接相连。

例如，所述间接相连可以包括相连的两个部分(例如，所述L-FR3与所述LCDR2，或者所述L-FR3与所述LCDR3)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述L-FR3包含SEQ ID NO:12，16和70中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:12，16和70中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述L-FR3包含SEQ ID NO:26-27中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:26-27中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述L-FR4的N末端与所述LCDR3的C末端直接或间接相连。

例如，所述间接相连可以包括所述L-FR4的N末端氨基酸残基与所述LCDR3的C末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述L-FR4包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:13所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

在本申请中，所述重链可变区包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3，和/或H-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2和H-FR3。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2和H-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区H-FR2，H-FR3和H-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR3和H-FR4。

例如，所述轻链可变区可以包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。

例如，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连。例如，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接相连，例如，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端间接相连，例如，所述间接相连可以包括所述H-FR1的C末端氨基酸残基与所述HCDR1的N末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述H-FR1包含SEQ ID NO:18和28中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:18和28中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间。

例如，所述H-FR2的N末端与所述HCDR1的C末端直接或间接相连，并且所述H-FR2的C末端与所述HCDR2的N末端直接或间接相连。

例如，所述间接相连可以包括相连的两个部分(例如，所述H-FR2与所述HCDR1，或者所述H-FR2与所述HCDR2)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述H-FR2包含SEQ ID NO:19，22和71中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:19，22和71中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述H-FR2包含SEQ ID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:29-30中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间。

例如，所述H-FR3的N末端与所述HCDR2的C末端直接或间接相连，并且所述H-FR3的C末端与所述HCDR3的N末端直接或间接相连。

例如，所述间接相连可以包括相连的两个部分(例如，所述H-FR3与所述HCDR2，或者所述H-FR3与所述HCDR3)之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述H-FR3包含SEQ ID NO:20和31中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:20和31中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端直接或间接相连。

例如，所述间接相连可以包括所述L-FR4的N末端氨基酸残基与所述LCDR3的C末端氨基酸残基之间相隔1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸，这些这些氨基酸可以是天然存在的或经修饰的任意氨基酸。

例如，所述H-FR4包含SEQ ID NO:21和32中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:21和32中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

可变区，恒定区，重链和轻链

在本申请中，所述的分离的抗原结合蛋白可包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。例如，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:72-73中任一项所示的氨基酸序列或其变体。例如，所述轻链可变区可包含SEQ ID NO:74-75中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与符合如SEQ ID NO:72-75中任一项所示通式的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述重链可变区包含SEQ ID NO:33-36中任一项所示的氨基酸序列或其变体。例如，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:37-40中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:33-40中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区可以源自人IgG重链恒定区。例如，所述分离的抗原结合蛋白可以包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区可以源自人IgG1重链恒定区。例如，所述抗体重链恒定区可以包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以包括抗体轻链恒定区，且所述抗体轻链恒定区可以包括人Igκ(Kappa)恒定区。例如，所述抗体轻链恒定区可以包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体重链(HC)，且所述抗体重链可以包含SEQ ID NO:45-46中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:45-46中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链(LC)，且所述抗体轻链可以包含SEQ ID NO:43-44中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

例如，所述变体可以包含与SEQ ID NO:43-44中任一项所示的任意氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的氨基酸序列。

例如，所述的分离的抗原结合蛋白可以包含所述抗体重链和所述抗体轻链。

例如，所述抗体重链可包含SEQ ID NO:45-46中任一项所示的氨基酸序列，抗体轻链可包含SEQ ID NO:43-44中任一项所示的氨基酸序列。所述重链可包含重链可变区和重链恒定区。所述重链可变区可包含如SEQ ID NO:72-73中任一项所示的氨基酸序列。所述重链恒定区可包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。所述重链可变区可包含重链互补决定区(HCDR)和重链框架区(H-FR)。所述重链互补决定区(HCDR)可包含HCDR1，HCDR2和HCDR3。所述HCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2可包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，所述HCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。所述重链框架区(H-FR)可包含H-FR1，H-FR2，H-FR3，H-FR4。所述H-FR1可包含SEQ ID NO:18和28中任一项所示的氨基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO:19，22和71中任一项所示的氨基酸序列，H-FR3可包含SEQID NO:20和31中任一项所示的氨基酸序列，H-FR4可包含SEQ ID NO:21和32中任一项所示的氨基酸序列。

所述轻链可包含轻链可变区和轻链恒定区。所述轻链可变区可包含如SEQ ID NO:74-75中任一项所示的氨基酸序列。所述轻链恒定区可包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列。所述轻链可变区可包含轻链互补决定区(LCDR)和轻链框架区(L-FR)。所述轻链互补决定区(LCDR)可包含LCDR1，LCDR2和LCDR3。所述LCDR1可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2可包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，所述LCDR3可包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列。所述轻链框架区(L-FR)可包含L-FR1，L-FR2，L-FR3，L-FR4。所述L-FR1可包含SEQ ID NO:10，14和69中任一项所示的氨基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO:11，15和25中任一项所示的氨基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO:12，16和70中任一项所示的氨基酸序列，L-FR4可包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。

例如，所述分离的抗原结合蛋白可以本申请实施例中的SE2抗体、SE5抗体、SE2嵌合抗体、SE5嵌合抗体、人源化SE2抗体、人源化SE5抗体。

]此外，本申请所述分离的抗原结合蛋白可以包含与SE2抗体、SE5抗体、SE2嵌合抗体、SE5嵌合抗体、人源化SE2抗体或人源化SE5抗体存在一个或多个保守序列修饰的重链和/或轻链序列。所谓“保守序列修饰”是指不会显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸替换、添加和删除。可以通过领域内已知的标准技术，例如点突变和PCR介导的突变，将修饰引入本申请所述分离的抗原结合蛋白中。保守氨基酸替换可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。具有相似侧链的氨基酸残基组在领域内是已知的。这些氨基酸残基组包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。在某些实施方式中，本申请所述分离的抗原结合蛋白的CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以用同侧链组的其他氨基酸残基替换。本领域内的技术人员知道，一些保守序列修改不会使抗原结合性消失，具体可以参见，例如，Brummell et al.,(1993)Biochem 32:1180-8；de Wildt et al.,(1997)Prot.Eng.10:835-41；Komissarov et al.,(1997)J.Biol.Chem.272:26864-26870；Hallet al.,(1992)J.Immunol.149:1605-12；Kelley and O'Connell(1993)Biochem.32:6862-35；Adib-Conquy et al.,(1998)Int.Immunol.10:341-6and Beers et al.,(2000)Clin.Can.Res.6:2835-43。

分离的抗原结合蛋白的性质和类型

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白具有下述性质中的一种或以上：

1)能够以2.4×10^-9M或更低的KD与IgE相结合，其中所述KD值通过MSD-SET测定；

2)能够抑制IgE与其受体FcεRIa的结合。

例如，所述IgE为人IgE。例如，通过MSD-SET测定，所述的分离的抗原结合蛋白结合源自人的IgE抗原的KD值可以为≤2×10^-9M、≤1.5×10^-9M、≤1×10^-9M M、≤8×10^-10M、≤7×10^-10M、≤6×10^-10M、≤5×10^-10M、≤4.5×10^-10M、≤4×10^-10M、≤3.5×10^-10M、≤3×10^{- 10}M、≤2.5×10^-10M、≤2×10^-10M、≤1.8×10^-10M、≤1.5×10^-10M、≤1×10^-10M、≤9×10^-11M、≤8×10^-11M、≤7×10^-11M、≤6×10^-11M、≤5×10^-11M、≤4×10^-11M、≤3×10^-11M、≤2×10^-11M、≤1×10^-11M、≤9×10^-12M。

例如，通过ELISA方法检测，所述分离的抗原结合蛋白抑制IgE与其受体FcεRIa的结合的IC50值可以为≤2000ng/mL、≤1800ng/mL、≤1500ng/mL、≤1300ng/mL、≤1000ng/mL、≤950ng/mL、≤900ng/mL、≤850ng/mL、≤800ng/mL、≤750ng/mL、≤700ng/mL、≤650ng/mL、≤600ng/mL、≤550ng/mL、≤500ng/mL、≤450ng/mL、≤430ng/mL、≤400ng/mL。SE5和

例如，通过ELISA方法检测，所述分离的抗原结合蛋白抑制IgE与其受体FcεRIa的结合的IC50值可以为≤4.9×10^-9M、≤4.5×10^-9M、≤4.0×10^-9M、≤3.5×10^-9M、≤3.0×10^-9M、≤2.5×10^-9M、≤2.0×10^-9M、≤1.5×10^-9M、≤1.0×10^-9M、≤9.0×10^-10M、≤8.0×10^{- 10}M、≤7.0×10^-10M、≤6.0×10^-10M、≤5.0×10^-10M、≤4.0×10^-10M、≤3.0×10^-10M、≤2.5×10^-10M。

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以包括抗体或其抗原结合片段。例如，本申请所述的分离的抗原结合蛋白可以包括但不限于重组抗体、单克隆抗体、人抗体、鼠源抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、单链抗体、双抗体、三抗体、四抗体、Fv片段、scFv片段、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段和骆驼化单结构域抗体。

例如，所述抗体可以为人源化抗体。例如，本申请所述的分离的抗原结合蛋白，其可以为免疫特异性结合至相关抗原(例如人IgE抗原且包含基本上具有人类抗体的氨基酸序列的框架区(FR)及基本上具有非人类抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变异体、衍生物、类似物或片段。此处的“基本上”在CDR的情况下可以是指CDR的氨基酸序列与非人类抗体CDR的氨基酸序列至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％同一。所述人源化抗体基本上可以包含所有至少一个且通常两个可变域(Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人类免疫球蛋白(即抗体)的CDR区且所有或基本上所有框架区为具有人类免疫球蛋白共有序列的框架区。例如，人源化抗体还可包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(例如，Fc)，通常为人类免疫球蛋白的恒定区。在一些实施例中，人源化抗体至少含有轻链或及重链的可变域。抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3及CH4区。例如，人源化抗体可以仅含人源化轻链。例如，人源化抗体可以仅含人源化重链。例如，人源化抗体可以仅含轻链和/或人源化重链的人源化可变域。

例如，所述抗原结合片段可以包括Fab，Fab’，F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。

免疫偶联物

在本申请中，所述分离的抗原结合蛋白可以与其他化合物(例如治疗剂)交联，形成所述免疫偶联物。例如抗体-药物偶联物(ADC)。合适的治疗剂包括细胞毒素、烷化剂、DNA小沟结合分子、DNA嵌入剂、DNA交联剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、核输出抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶I或II的抑制剂、热激蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素和抗有丝分裂剂，例如SN-38。在ADC中，抗体和治疗剂可以通过接头交联，该接头可切割，例如肽类接头、二硫类接头或腙类接头。例如，接头可以是肽类接头，例如Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Pro-Val-Gly-Val-Val、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Ala-Ala-Asn、Cit-Cit、Val-Lys、Lys、Cit、Ser或Glu。ADC可以如美国专利7,087,600；6,989,452；和7,129,261；PCT公开WO 02/096910；WO 07/038,658；WO 07/051,081；WO 07/059,404；WO 08/083,312；和WO08/103,693；美国专利公开20060024317；20060004081；和20060247295中描述般进行制备。

核酸分子、载体、细胞、制备方法、药物组合物及用途

另一方面，本申请还提供了分离的核酸分子，其可以编码本申请所述的分离的抗原结合蛋白。本申请所述的分离的核酸分子可以为任何长度的分离形式的核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或从其天然环境分离的或人工合成的类似物，其可以编码本申请所述的分离的抗原结合蛋白。

例如，所述的核酸分子可以包括SEQ ID NO.50-61中任一项所示的核苷酸序列。

例如，所述的核酸分子可以包括与SEQ ID NO.50-61中任一项所示的核苷酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，98.5％，99％，99.2％，99.4％，99.6％，99.8％或99.9％同一性的核苷酸序列。

另一方面，本申请还提供了载体，其可以包含本申请所述的核酸分子。所述载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。例如，载体可以包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。又例如，所述载体可以含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，所述载体还可以含有复制起始位点。此外，所述载体还可以包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。

另一方面，本申请还提供了细胞，其可以包含本申请所述的核酸分子或本申请所述的载体。所述细胞可以包括单个细胞的后代。由于天然、偶然或有意的突变，后代可以不一定与原始母细胞完全相同(在总DNA互补体的形态上或在基因组上)。

例如，所述细胞可以包括原核细胞、酵母菌细胞或高等真核细胞。适用于此目的的原核生物包括格兰氏阴性菌和格兰氏阳性菌，例如，肠细菌，例如大肠杆菌、肠杆菌、欧文氏菌(Erwinia)、克雷臼氏杆菌(Klebsiella)、变形菌(Proteus)、沙门氏菌(Salmonella)、粘质沙雷氏菌(Serratia)、和志贺氏杆菌(Shigella),以及杆菌、假单胞菌和链霉菌。

例如，丝状真菌或酵母菌等真核微生物也可以作为本申请所示载体的适宜克隆或表达宿主。在低等真核宿主微生物中最常使用的是酿酒酵母。多种其他属、种和菌株也是通常可得到并可用于本申请中，例如，稷酒裂殖酵母菌(Schizosaccharomycespombe)，克鲁维酵母属，念珠菌属，木霉属，粗糙链抱霉(Neurospora crassa)，及丝状真菌，例如，脉抱菌(Neurospora)、青霉菌(Penicillium)、弯颈霉(To1 ypocladium)和曲霉(aspergi 11us)宿主细胞，例如，构巢曲菌(A.nidulans)和黑曲霉菌(A.niger)。

例如，脊椎动物细胞及在培养物(组织培养物)中增殖的脊椎动物细胞本申请所示载体的适宜克隆或表达宿主。

例如，所述细胞可以包括哺乳动物宿主细胞系。例如，猴肾脏细胞，人类胚胎肾脏细胞系，幼小仓鼠肾脏细胞，中国仓鼠卵巢细胞小鼠塞尔托利(sertoli)细胞，人类子宫颈癌细胞(HELA)，犬肾脏细胞，人类肺细胞，人类肝脏细胞，小鼠乳腺癌细胞或NSO细胞。

例如，所述细胞还可以包括用本发明所述的载体在体外转染的细胞。例如，所述细胞可以是细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、CHO-K1细胞、LNCAP细胞、HeLa细胞、HEK293细胞、COS-1细胞、NS0细胞或骨髓瘤细胞。在某些实施方案中，所述细胞可以为哺乳动物细胞。例如，所述哺乳动物细胞可以为HEK293细胞。

另一方面，本申请还提供了制备本申请所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法可以包括在使得本申请所述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养本申请所述的细胞。

另一方面，本申请还提供了所述分离的抗原结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体、所述的细胞和/或所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗IgE相关的疾病或病症。

另一方面，本申请还提供了预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症的方法，所述方法可以包括向有需要的受试者施用本申请所述分离的抗原结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体、所述的细胞和/或所述的药物组合物。

另一方面，本申请还提供了所述分离的抗原结合蛋白、所述的核酸分子、所述的载体、所述的细胞和/或所述的药物组合物，其可以用于预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症。

例如，IgE相关的疾病或病症可以包括Omalizumab(商品名Xolair)在世界范围(例如，美国、中国、欧洲等)内获得批准的可适用于治疗的疾病或病症。例如，所述疾病或病症可以包括过敏性疾病。

例如，所述受试者可以包括人类和非人类动物。例如，所述受试者可以包括但不限于猫、狗、马、猪、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。

另一方面，本申请还提供了药物组合物，其包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白、本申请所述的核酸分子、本申请所述的载体和/或本申请所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。

例如，药物组合物可以另外地含有适合治疗或预防IgE相关的疾病或病症的一种或多种其它治疗剂。

例如，所述药学上可接受的佐剂增强或稳定组合物，或促进组合物的制备。例如，所述药学上可接受的佐剂可以包括生理上相容的溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。

例如，所述施用可以通过不同的方式进行，例如静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部或真皮内施用。

例如，所述药物组合物可以通过本领域已知的多种方法施用，取决于期望结果、施用途径和/或施用模式改变。例如，施用可以为静脉内、肌内、腹膜内或皮下、或邻近靶位点施用。例如，配制所述的药物组合物使得可将它们玻璃体内施用入眼。例如，取决于施用途径，可以将所述分离的抗原结合蛋白(例如，抗体、双特异性和多特异性分子)用材料包覆以保护化合物免于酸或其它天然条件的作用，所述作用可以使化合物失活。

例如，所述药物组合物可以为无菌的且为流体。例如，通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)、或在分散液的情况下通过保持所要求的颗粒大小、以及通过使用表面活性剂可以保持适当的流动性。

例如，在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇，诸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。例如，可注射的所述药物组合物的长期吸收可以通过在所述药物组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)来实现。

例如，所述分离的抗原结合蛋白、所述核酸分子、所述载体和/或所述细胞与任选的药学可接受载体、赋形剂或稳定剂混合而制备以贮存。例如，所述药物组合物的形式可以为冻干制剂或水溶液。

例如，所述药学上可接受的佐剂可以包括药学可接受载体、赋形剂或稳定剂。

例如，所述可接受的载体、赋形剂或稳定剂以采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，并且包括缓冲剂例如磷酸盐柠檬酸盐、乙酸盐和其他有机酸。

例如，包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白的药物组合物可以是水溶性形式。

例如，用于体内施用的药物组合物可以是无菌的。这可以通过无菌过滤膜过滤或其他方法而容易地实现。例如，以无菌水溶液形式施用包含本申请所述的分离的抗原结合蛋白的药物组合物可以多种方式进行，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、耳内、透皮、局部(例如，凝胶、油膏、洗剂、乳霜等)、腹膜内、肌肉内、肺内、胃肠外、直肠或眼内。在一些情况下，例如治疗伤口、炎症等，所述的分离的抗原结合蛋白可以作为溶液或喷雾剂直接应用。

例如，所述药物组合物可以根据本领域熟知且常规实践的方法制备。例如，所述药物组合物可以在GMP条件下制备。通常，在本申请的药物组合物中使用IgE结合蛋白的治疗有效剂量或有效剂量。例如，通过本领域技术人员已知的常规方法可将IgE结合蛋白配制成药学上可接受的剂量形式。调节剂量方案以提供最佳的期望响应(例如，治疗响应)。本申请的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可发生改变以便获得有效实现特定患者所期望的治疗响应、组合物和施用模式而对患者不具有毒性的活性成分的量。选择的剂量水平取决于多种药代动力学因素，例如，本申请使用的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，正使用的特定化合物的排泄速率，治疗的持续时间，与使用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质，治疗的受试者的年龄、性别、体重、状态、一般健康和先前病史以及其它因素。

例如，皮下施用可以用于其中患者可以自己施用药物组合物的情况。许多蛋白治疗剂不足够有效以允许配制皮下施用最大可接受体积的治疗有效剂量。本申请公开的抗原结合蛋白可适用于皮下施用，例如，可以增加的效价、提高的血浆半衰期和提高的溶解度。

本领域已知，蛋白治疗剂可以通过IV输注或快速浓注来递送。本申请公开的抗原结合蛋白也可以使用此类方法递送。

另一方面本申请还提供了检测样品中IgE的方法，所述方法包括施用本申请中所述的分离的抗原结合蛋白。

例如，将获取自受试者的样品接触本申请所述的分离的抗原结合蛋白(例如，IgE结合蛋白)。例如，其中用可检测标记或报告分子标记IgE结合蛋白或将抗IgE结合蛋白用作捕获配体以选择性地从患者样品分离IgE。或者，未标记的抗IgE结合蛋白可以结合第二抗体用于检测应用中，所述第二抗体自身是具有可检测标记的。可检测标记或报告分子可以是放射性同位素，例如如³H、¹⁴C、³²P、³⁵S或¹²⁵I；还可以是荧光或化学发光部分，例如异硫氰酸荧光素、若丹明；或酶，例如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或荧光素酶；可以用于检测或测量样品中的IgE的特定示例性分析包括酶联免疫吸附分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)和荧光激活的细胞分选(FACS)。

可以用于本申请的IgE检测中的样品可以包括获取自正常或病理状况下的受试者的任何组织或流体样品，其含有可检测含量的IgE蛋白或其片段。例如，可以将测量获自健康受试者(例如，未患IgE相关疾病的受试者)的特定样品的IgE蛋白的水平，以最初建立IgE的基线或标准水平。随后将这个IgE的基线水平相对于获取自疑似患有IgE相关疾病或病症或与该病症相关症状的个体的样品中测量的IgE水平进行比较。

IgE结合蛋白可以不含另外的标记，也可以含有N-末端或C-末端标记。例如，所述标记是生物素。在结合分析中，标记(如果存在的话)的位置可以确定肽相对于其上结合肽的表面的方向。例如，如果表面包被了抗生物素蛋白，则含有N-末端生物素的肽将使得肽的C-末端部分远离表面。

本申请还包含以下的实施方式：

1.分离的抗原结合蛋白，其包含重链可变区中的至少一个CDR，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:72-73中任一项所示的氨基酸序列或其变体；且其包含轻链可变区中的至少一个CDR，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:74-75中任一项所示的氨基酸序列或其变体。

2.实施方式1所述的分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或以上：

1)能够以2.4×10^-9M或更低的KD与IgE相结合，其中所述KD值通过MSD-SET测定；

2)能够抑制IgE与其受体FcεRIa的结合。

3.实施方式1-2中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如SEQID NO:33-36中任一项所示的重链可变区中的HCDR1。

4.实施方式1-3中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如SEQID NO:33-36中任一项所示的重链可变区中的HCDR2。

5.实施方式1-4中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如SEQID NO:33-36中任一项所示的重链可变区中的HCDR3。

6.实施方式3所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

7.实施方式4所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR2包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列。

8.实施方式7所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR2包含SEQ ID NO:2和4中任一项所示的氨基酸序列。

9.实施方式5所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述HCDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

10.实施方式1-9中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如SEQID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区中的LCDR1。

11.实施方式1-10中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如SEQID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区中的LCDR2。

12.实施方式1-11中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含氨基酸序列如SEQID NO:37-40中任一项所示的轻链可变区中的LCDR3。

13.实施方式10所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

14.实施方式11所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR2包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列。

15.实施方式14所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR2包含SEQ ID NO:6和8中任一项所示的氨基酸序列。

16.实施方式12所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR3包含SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列。

17.实施方式16所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述LCDR3包含SEQ ID NO:7和9中任一项所示的氨基酸序列。

18.实施方式1-17中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段。

19.实施方式18所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，F(ab)₂、Fv片段、F(ab’)₂，scFv，di-scFv和/或dAb。

20.实施方式1-19中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4。

21.实施方式20所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述L-FR1包含SEQ ID NO:10，14和69中任一项所示的氨基酸序列。

22.实施方式21中所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR1包含SEQ ID NO:23-24中任一项所示的氨基酸序列。

23.实施方式20-22中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L-FR2包含SEQ ID NO:11，15和25中任一项所示的氨基酸序列。

24.实施方式20-23中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L-FR3包含SEQ ID NO:12，16和70中任一项所示的氨基酸序列。

25.实施方式20-24中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR3包含SEQID NO:26-27中任一项所示的氨基酸序列。

26.实施方式20-25中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述L-FR4的N末端与所述LCDR3的C末端相连，且所述L-FR4包含SEQ ID NO:13和17中任一项所示的氨基酸序列。

27.实施方式1-26中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:37-40中任一项所示的氨基酸序列。

28.实施方式1-27中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体轻链恒定区，且所述抗体轻链恒定区包括人Kappa轻链恒定区。

29.实施方式28所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包含SEQID NO:41所示的氨基酸序列。

30.实施方式1-29中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链，且所述抗体轻链包含SEQ ID NO:43-44中任一项所示的氨基酸序列。

31.实施方式1-30中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述重链可变区包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3，和H-FR4。

32.实施方式31所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H-FR1包含SEQ ID NO:18和28中任一项所示的氨基酸序列。

33.实施方式31-32中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQ ID NO:19，22和71中任一项所示的氨基酸序列。

34.实施方式31-33中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR2包含SEQID NO:29-30中任一项所示的氨基酸序列。

35.实施方式31-34中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQ ID NO:20和31中任一项所示的氨基酸序列。

36.实施方式31-35中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端相连，且所述H-FR4包含SEQ ID NO:21和32中任一项所示的氨基酸序列。

37.实施方式1-36中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:33-36中任一项所示的氨基酸序列。

38.实施方式1-37中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区源自人IgG重链恒定区。

39.实施方式1-38中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区，且所述抗体重链恒定区源自人IgG1重链恒定区。

40.实施方式1-39中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列。

41.实施方式1-40中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，且所述抗体重链包含SEQ ID NO:45-46中任一项所示的氨基酸序列。

42.实施方式1-41中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，所述抗原为IgE。

43.实施方式42所述的分离的抗原结合蛋白，所述IgE为人IgE。

44.分离的核酸分子，其编码实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。

45.载体，其包含实施方式44所述的核酸分子。

46.细胞，其包含实施方式44所述的核酸分子或实施方式45所述的载体。

47.制备实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白表达的条件下，培养实施方式46所述的细胞。

48..免疫偶联物，其包含实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。

49.药物组合物，其包含实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式44所述的核酸分子、实施方式45所述的载体、实施方式46所述的细胞和/或实施方式48所述的免疫偶联物，以及任选地药学上可接受的佐剂。

50.实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式44所述的核酸分子、实施方式45所述的载体、实施方式46所述的细胞、实施方式48所述的免疫偶联物和/或实施方式49所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗IgE相关的疾病或病症。

51.预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式48所述的免疫偶联物和/或实施方式49所述的药物组合物。

52.实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方式44所述的核酸分子、实施方式45所述的载体、实施方式46所述的细胞、实施方式48所述的免疫偶联物和/或实施方式49所述的药物组合物，其用于预防、缓解或治疗IgE相关的疾病或病症。

53.检测样品中IgE的方法，所述方法包括施用实施方式1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。

不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。

实施例

实施例1抗人IgE鼠源单克隆抗体制备

(1)小鼠免疫

以重组表达的人IgE的Fc区域(CH2-4)蛋白(IgE-Fc)20μg在弗氏完全佐剂中给四周龄的BALB/c小鼠皮下注射。每三至四星期注射一次，一共五次。最后在腹膜内单次注射20μg重组人IgE-Fc蛋白。

(2)ELISA法测定小鼠血清与人IgE-Fc抗原的结合

以重组人IgE-Fc蛋白包被酶标板(Costar)，室温过夜。弃去包被溶液，用溶解在磷酸盐缓冲盐水(PBS)的2.5％的脱脂奶封闭各孔0.5小时，用含有0.05％吐温(Tween)-20的PBS洗孔。然后分别加入稀释血清和作为阴性对照的非相关抗体(Irrevalent mAb)，室温孵育1小时，用含有0.05％吐温(Tween)-20的PBS洗孔，然后每孔加入50μl的HRP标记的羊抗鼠IgG多克隆抗体(Jackson Laboratory)作为检测抗体。经血清测试后，鉴定出含有高水平抗重组人IgE-Fc蛋白抗体血清的小鼠。

(3)细胞融合、筛选和鼠源单克隆抗体制备

经血清测试鉴定出含有高水平抗人IgE-Fc抗体血清的小鼠后，取出该小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞株相融合。混合5x 10⁸的Sp2/0细胞与5x 10⁸的脾细胞在50％聚乙二醇(PEG，分子量为1450)和5％二甲基亚枫(DMSO)溶液中融合。用Iscove培养基(含有10％胎牛血清，100单位/mL青霉素，100μg/mL链霉素，10mM次黄嘌呤，0.4μM氨基蝶呤和1.6mM胸苷)来调整脾脏细胞数至7.5x 10⁵/mL，以0.2ml加入96孔培养板的孔内。置于37℃，5％CO2的培养箱内。10天后，取出各孔内的培养基测试其中鼠源抗体对人IgE-Fc的结合能力，以此筛选出与人IgE-Fc结合的阳性孔。再将上述含有能与人IgE-Fc结合抗体的孔内融合细胞进行亚克隆，同样以ELISA方法筛选得到表达高亲和力鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

制备纯化的鼠单克隆抗体，以获得待测试的抗体样品。在补充10％FCS的RPMI1640培养基中培养产生特异性抗体的细胞克隆。当细胞密度达到大约5x 10⁵个细胞/ml时，用无血清培养基替换该培养基。2至4天后，将培养过的培养基离心，以收集培养物上清液。使用蛋白G柱用于纯化抗体。用150mM的NaCl透析单克隆抗体洗脱液。通过0.2μm滤器将透析的溶液过滤除菌，以获得待测试的抗体样品。制备得到单克隆抗体SE3(11/5)、SE5(4/23)、SE2、SE5。

实施例2鼠源单克隆抗体阻断活性检测

使用ELISA方法检测纯化的鼠源单克隆抗体阻断人IgE-Fc与其受体FcεRIa结合的阻断活性。具体方法为，将重组表达的人FcεRIa-Fc蛋白(如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列)使用PBS稀释到终浓度2.5μg/mL，100μL/孔包被酶标板(购自Corning，货号：42592)，4℃温过夜。第二天弃去包被液，用溶解在PBS中的2.5％的脱脂奶封闭1小时，用含有0.05％吐温(Tween)20的PBS洗孔。加入预先混合10分钟、含有1μg/mL的生物素标记的人IgE-Fc(如SEQID NO:49所示氨基酸序列)和梯度稀释的鼠源或对照抗体的预混液，由实施例1制备所得的鼠源抗体或对照抗体奥马珠(购自Novartis，货号：Xolair)从5μg/mL做2倍梯度稀释(即5μg/mL，2.5μg/mL，1.25μg/mL，0.625μg/mL直到0.002441μg/mL，)，室温孵育1小时。弃去上清后用含有0.05％吐温(Tween)20的PBS洗孔，使用HRP标记的链霉亲和素(购自生工生物，货号：D111054-0001)1:1000稀释后检测。检测结果如图1所示，纯化得到的各鼠源单克隆抗体均能够不同程度的阻断人IgE-Fc与其受体FcεRIa结合的能力，SE2、SE5均较对照抗体奥马珠有着更强的阻断活性。

实施例3抗人IgE嵌合抗体制备

1)鼠源抗体的重链可变区的克隆

为获得鼠源抗体的重链和轻链可变区编码DNA序列，用mRNA纯化试剂盒(NEB)从小鼠杂交瘤细胞分离出mRNA，以此制备cDNA(SMARTer RACE试剂盒，Clontech)。通过聚合酶链式反应(PCR)从cDNA中克隆重链可变区DNA片段。PCR的5'-引物使用混合液:0.4μM的引物1(5'-ctaatacgactcactatagggcAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3'，如SEQ ID NO:62所示)和2μM的引物2(5'-ctaatacgactcactatagggc-3'，如SEQ ID NO:63所示)。PCR的3'-引物为引物3(5'-catcccagggtcaccatggagtta-1，如SEQ ID NO:64所示)。引物3与小鼠IgG1重链恒定区同源反义。将胶纯化后得到的重链可变区DNA片段克隆入TOPO-TA载体(Invitrogen)并测序，得到编码SE2小鼠杂交瘤重链的可变区核酸序列(如SEQ ID NO:50所示)和氨基酸序列(如SEQ ID NO:33所示)，通过Kabat定义方式确定其互补决定区的氨基酸序列CDR-H1(如SEQ ID NO:1所示),CDR-H2(如SEQ ID NO:2所示)和CDR-H3(如SEQ ID NO:3所示)，和编码SE5小鼠杂交瘤重链的可变区核酸序列(如SEQ ID NO:51所示)和氨基酸序列(如SEQ IDNO:34所示)，及其互补决定区的氨基酸序列CDR-H1(如SEQ ID NO:1所示),CDR-H2(如SEQID NO:4所示)和CDR-H3(如SEQ ID NO:3所示)。互补决定区的定义参见Kabat E.等人的Sequences of Proteins of Immunological Interest第5版U.S.Department of Healthand Human Services,NIH Publication No.91-3242。

2)鼠源抗体的轻链可变区的克隆

以与步骤1)相似的方法，使用上述5'-引物混合液(引物1和引物2)和另一个与小鼠免疫球蛋白轻链恒定区同源反义的3'-引物(引物4，5’-gactgaggcacctccagatgttaa-3’，如SEQ ID NO:65所示)，从cDNA中克隆轻链可变区DNA片段。将这些得到的DNA片段克隆入TOPO-TA载体并测序，得到编码SE2小鼠杂交瘤轻链的可变区核酸序列(如SEQ ID NO:54所示)和氨基酸序列(如SEQ ID NO:38所示)，及其互补决定区的氨基酸序列CDR-L1(如SEQ IDNO:5所示),CDR-L2(如SEQ ID NO:6所示)和CDR-L3(如SEQ ID NO:7所示)，和编码SE5小鼠杂交瘤轻链的可变区核酸序列(如SEQ ID NO:55所示)和氨基酸序列(如SEQ ID NO:39所示)，及其互补决定区的氨基酸序列CDR-L1(如SEQ ID NO:5所示),CDR-L2(如SEQ ID NO:8所示)和CDR-L3(如SEQ ID NO:9所示)。

3)嵌合型抗体制备

将步骤2)克隆得到的鼠源单克隆抗体的重链和轻链可变区序列分别使用无缝克隆的方法插入到含有信号肽(如SEQ ID NO:47所示)和人IgG1重链恒定区(如SEQ ID NO:42所示)，或者含有信号肽(如SEQ ID NO:47所示)和人Kappa轻链恒定区(如SEQ ID NO:41所示)的pCDNA3.1(购自淼灵生物)真核表达载体中，经DNA测序确认正确后，在DH5α菌株中扩增后，使用NucleoBond Xtra Midi Plus(MACHEREY-NAGEL)质粒中抽试剂盒制备质粒。将制备好的嵌合型单克隆抗体重链和轻链质粒使用PEI(PolyScience)共转Expi293细胞(购自Thermo fisher)，瞬时表达单克隆抗体。使用蛋白A柱纯化瞬时表达的抗体，用PBS透析单克隆抗体洗脱液。通过0.2μm滤器将透析的溶液过滤除菌，以获得待测试的抗体样品。

实施例4嵌合抗体阻断活性检测

为进一步验证克隆得到并重组表达的嵌合单克隆抗体的活性，使用与实施例2相似的ELISA方法检测纯化的嵌合抗体阻断人IgE-Fc与其受体FcεRIa结合的阻断活性。具体方法为，将重组表达的人FcεRIa-Fc蛋白(如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列)使用PBS稀释到终浓度1μg/mL，100μL/孔包被酶标板(购自Corning，货号：42592)，4℃温过夜。第二天弃去包被液，用溶解在PBS的2.5％脱脂奶封闭1小时，用含有0.05％吐温(Tween)20的PBS洗孔。加入预先混合10分钟、含有100ng/mL的生物素标记的人IgE-Fc(如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列)和梯度稀释的嵌合抗体或鼠源抗体的预混液，嵌合抗体或鼠源抗体从2μg/mL开始做3倍梯度稀释(即2μg/mL，666.67ng/mL，222.22ng/mL，74.07ng/mL……直到2.74ng/mL，最后为0ng/mL)，室温孵育1小时。弃去上清后用含有0.05％吐温(Tween)20的PBS洗孔，使用HRP标记的链霉亲和素(购自生工生物，货号：D111054-0001)1:1000稀释后检测。根据如下公式：抗体浓度X的抑制率(％)＝(抗体浓度为0的OD450读值-抗体浓度为X的OD450读值)/抗体浓度为0的OD450读值x 100，计算不同抗体、不同浓度下的抑制率。检测结果如图2所示，由克隆得到鼠源单克隆可变区序列构建的嵌合重组单克隆抗体，与其杂交瘤纯化的鼠源母抗体有相近的阻断活性。

实施例5抗人IgE人源化抗体制备

1)抗人IgE鼠源单克隆抗体人源化

以同源建模的抗体可变区结构为基础，确定可能影响抗原-抗体相互作用的关键氨基酸位点，并对关键氨基酸位点进行回复突变，使用CDR移植的方法获得SE2和SE5抗体可变区的人源化氨基酸序列，人源化SE2重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示，人源化SE2轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示，人源化SE5重链可变区氨基酸序列如SEQID NO:36所示，人源化SE5轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示。对氨基酸序列进行逆翻译后得到的DNA序列并进行合成，SE2重链人源化核苷酸序列如SEQ ID NO:52所示，SE2轻链人源化核苷酸序列如SEQ ID NO:56所示，SE5重链人源化核苷酸序列如SEQ ID NO:53所示，SE5轻链人源化核苷酸序列如SEQ ID NO:57所示，所得到的DNA用于重组抗体表达载体构建。

2)抗人IgE人源化抗体制备

将步骤1)得到的人源化单克隆抗体的重链和轻链可变区分别使用无缝克隆的方法插入到含有信号肽(如SEQ ID NO:47所示)和人IgG1重链恒定区(如SEQ ID NO:42所示)，或者含有信号肽(如SEQ ID NO:47所示)和人Kappa轻链恒定区(如SEQ ID NO:41所示)的pCDNA3.1(购自淼灵生物)真核表达载体中，经DNA测序确认正确后，使用NucleoBond XtraMidi Plus(MACHEREY-NAGEL)质粒中抽试剂盒制备质粒。将制备好的人源化单克隆抗体重链和轻链质粒使用PEI(PolyScience)共转Expi293细胞(购自Thermo fisher)，瞬时表达单克隆抗体。使用蛋白A柱纯化瞬时表达的抗体，用PBS透析单克隆抗体洗脱液。通过0.2μm滤器将透析的溶液过滤除菌，以获得待测试的抗体样品。

实施例6抗人IgE人源化抗体阻断活性检测

1)使用与实施例2近似的ELISA方法检测纯化的鼠源抗体、嵌合抗体以及人源化抗体阻断人IgE-Fc与其受体FcεRIa结合的阻断活性。具体方法为，将重组表达的人FcεRIa-Fc蛋白(如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列)使用PBS稀释到终浓度1μg/mL，100μL/孔包被酶标板(购自Corning，货号：42592)，4℃温过夜。第二天弃去包被液，用溶解在PBS的2.5％的脱脂奶封闭1小时，用含有0.05％吐温(Tween)20的PBS洗孔。加入预先混合10分钟、含有100ng/mL的生物素标记的人IgE-Fc(如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列)和梯度稀释的各个抗体的预混液，各抗体均从1μg/mL做3倍梯度稀释(即1μg/mL，333.33ng/mL，111.11ng/mL，37.04ng/mL……直到1.37ng/mL，最后点为0ng/mL)，室温孵育1小时。弃去上清后用含有0.05％吐温(Tween)20的PBS洗孔，使用HRP标记的链霉亲和素(购自生工生物，货号：D111054-0001)检测。检测结果如图3至图5所示，重组表达的人源化单克隆SE2和SE5，分别与其相应的嵌合抗体及鼠源母抗体有相近的阻断活性(图3)。

2)按照本实施例步骤1)的方法检测SE2人源化抗体、SE5人源化抗体和奥马珠单抗阻断人IgE-Fc与其受体FcεRIa结合的阻断活性。在SE2人源化抗体和奥马珠单抗的比较实验中，抗体浓度从3μg/mL做3倍梯度稀释(即3μg/mL，1μg/mL，333.33ng/mL，111.11ng/mL，37.04ng/mL……直到4.12ng/mL，最后为0ng/mL)；在SE5人源化抗体和奥马珠单抗的比较实验中，抗体浓度从10nM做3倍梯度稀释(即10nM，3.33nM，1.11nM，370.37pM……直到13.72pM，最后为0pM)。SE5比较实验中包括对照抗体(即图5中Control，其为为同型her2抗体pertuzumab，序列来源于IMGT抗体库)。

根据如下公式：抗体浓度X的抑制率(％)＝(抗体浓度为0的OD450读值-抗体浓度为X的OD450读值)/抗体浓度为0的OD450读值x 100，计算不同抗体、不同浓度下的抑制率。结果如图4-5所示，SE2人源化抗体和SE5人源化抗体较对照抗体奥马珠单抗均有着更强的阻断活性，其中SE2和奥马珠单抗的阻断IC50值分别约为416.7ng/mL和2110ng/mL，SE5和奥马珠单抗的阻断IC50值分别约为266.2pM和4996pM。

实施例7抗人IgE人源化抗体亲和力检测

使用超敏因子电化学发光分析-溶液平衡滴定法(MSD-SET)检测人源化抗体和人IgE的平衡亲和力，测量方法如Estep P.等人,MAbs,2013.5(2):p.270-8所述。溶液平衡滴定(SET)在PBS+0.1％不含IgG的BSA缓冲液(PBSF)中进行，其中抗原人IgE(购自：abcam，货号：ab65866)保持恒定在10-100pM，且与从0.1-100nM起始的人源化抗体3倍连续稀释液一起孵育。具体地，针对SE2和SE5测定时，抗原人IgE保持恒定在13.33pM，人源化抗体SE2和SE5从166.67pM连续三倍稀释至0.0085pM；针对奥马珠单抗测定时，抗原人IgE保持恒定在133.3pM，奥马珠单抗从66.67nM开始3倍连续稀释至1.13pM。将稀释于PBS中的20nM的抗体包被至标准结合MSD-ECL板(购自MSD，货号：L15XA-3)上在4℃下过夜。用1％的Casein将MSD-ECL板封闭30分钟，同时以700rpm振荡。然后将MSD-ECL板用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween 20)洗涤3次。将抗原人IgE与人源化抗体2倍连续稀释液孵育的样品加入MSD-ECL板，700rpm振荡下孵育150s，之后洗涤一次。向MSD-ECL板加入含有250ng/mL磺基标签标记的链霉亲和素的PBSF，5分钟之后，将MSD-ECL板用洗涤缓冲液洗涤(PBS+0.05％Tween 20)洗涤3次。加入1x阅读缓冲液T(购自MSD，货号：R92TC-1)在MSD Sector Imager仪器(型号：MESOQuickPlex SQ 120)上读数。在Prism-GraphPad6软件中，将游离抗原百分比绘制为滴定的抗体的函数，并拟合至二次方程式以提取KD。测量结果见下表1。

表1MSD-SET法检测人源化抗体和对照抗体与人IgE的平衡亲和力

由表1中所示结果可知，人源化重组单克隆抗体SE2和SE5与人IgE结合的平衡亲和力分别约为10.880pM和9.995pM，对照抗体奥马珠单抗约为2489pM，亲和力有显著提高。

序列表

<110> 龙行生物药业（杭州）有限公司

<120> 分离的抗原结合蛋白及其用途

<130> 0125-PA-006

<160> 75

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链HCDR1

<400> 1

Ser Asp Tyr Ala Trp

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链HCDR2

<400> 2

Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链HCDR3

<400> 3

Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr

1 5

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链HCDR2

<400> 4

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Thr Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 5

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5轻链LCDR1

<400> 5

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp Val Ala

1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链LCDR2

<400> 6

Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Ala

1 5

<210> 7

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链LCDR3

<400> 7

Gln Gln His Tyr Ser Leu Phe Thr

1 5

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链LCDR2

<400> 8

Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala

1 5

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链LCDR3

<400> 9

Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

1 5

<210> 10

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链L-FR1

<400> 10

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Ile Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

20

<210> 11

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链L-FR2

<400> 11

Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 12

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链L-FR3

<400> 12

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 13

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2轻链人源化/SE2轻链L-FR4

<400> 13

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 14

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链L-FR1

<400> 14

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

20

<210> 15

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链L-FR2

<400> 15

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 16

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链L-FR3

<400> 16

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 17

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链L-FR4

<400> 17

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Gln

1 5 10

<210> 18

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链H-FR1

<400> 18

Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr

20 25 30

<210> 19

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链H-FR2

<400> 19

Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10 15

<210> 20

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链H-FR3

<400> 20

Arg Ile Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln

1 5 10 15

Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Val Tyr

20 25 30

<210> 21

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链H-FR4

<400> 21

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 22

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链H-FR2

<400> 22

Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Leu Gly

1 5 10 15

<210> 23

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链人源化L-FR1

<400> 23

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys

20

<210> 24

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链人源化L-FR1

<400> 24

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys

20

<210> 25

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2轻链人源化L-FR2

<400> 25

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 26

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链人源化L-FR3

<400> 26

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 27

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链人源化L-FR3

<400> 27

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 28

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2重链人源化H-FR1

<400> 28

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr

20 25 30

<210> 29

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链人源化H-FR2

<400> 29

Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Leu Gly

1 5 10 15

<210> 30

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链人源化H-FR2

<400> 30

Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10 15

<210> 31

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2重链人源化H-FR3

<400> 31

Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys

1 5 10 15

Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Val Tyr

20 25 30

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2重链人源化H-FR4

<400> 32

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 33

<211> 136

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链可变区氨基酸序列

<400> 33

Met Arg Val Leu Ile Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Phe

1 5 10 15

Leu Ser Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro

20 25 30

Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr

35 40 45

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro

65 70 75 80

Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln

85 90 95

Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr

100 105 110

Phe Cys Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 34

<211> 136

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链可变区氨基酸序列

<400> 34

Met Arg Val Leu Ile Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Phe

1 5 10 15

Leu Ser Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro

20 25 30

Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr

35 40 45

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu

50 55 60

Glu Trp Leu Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Thr Thr Arg Tyr Asn Pro

65 70 75 80

Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln

85 90 95

Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr

100 105 110

Phe Cys Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 35

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链可变区人源化氨基酸序列

<400> 35

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 36

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链可变区人源化氨基酸序列

<400> 36

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Leu Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Thr Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 37

<211> 135

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链可变区氨基酸序列

<400> 37

Met His His Thr Ser Met Gly Ile Lys Met Glu Ser Gln Ile Gln Val

1 5 10 15

Phe Val Phe Val Phe Leu Trp Leu Ser Gly Val Asp Gly Asp Ile Leu

20 25 30

Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Ile Gly Asp Arg Val

35 40 45

Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp Val Ala Trp

50 55 60

Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala

65 70 75 80

Ser Phe Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser

85 90 95

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Leu Phe Thr Phe Gly Ser

115 120 125

Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

130 135

<210> 38

<211> 138

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链可变区氨基酸序列

<400> 38

Met Gly Glu Met His His Thr Ser Met Gly Ile Lys Met Glu Ser Gln

1 5 10 15

Ile Gln Val Phe Val Phe Val Phe Leu Trp Leu Ser Gly Val Asp Gly

20 25 30

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

35 40 45

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

50 55 60

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

85 90 95

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

100 105 110

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

115 120 125

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Gln

130 135

<210> 39

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链可变区人源化氨基酸序列

<400> 39

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 40

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链可变区人源化氨基酸序列

<400> 40

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人源化SE2/SE5轻链恒定区

<400> 41

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 42

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人源化SE5/SE2重链恒定区

<400> 42

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 43

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人源化SE2轻链全长序列

<400> 43

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 44

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人源化SE5轻链全长序列

<400> 44

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Trp Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asn Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 45

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人源化SE2重链全长序列

<400> 45

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 46

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人源化SE5重链全长序列

<400> 46

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Leu Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Thr Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 47

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 载体中的信号肽氨基酸序列

<400> 47

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser

<210> 48

<211> 405

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> FcεRIa-Fc蛋白氨基酸序列

<400> 48

Val Pro Gln Lys Pro Lys Val Ser Leu Asn Pro Pro Trp Asn Arg Ile

1 5 10 15

Phe Lys Gly Glu Asn Val Thr Leu Thr Cys Asn Gly Asn Asn Phe Phe

20 25 30

Glu Val Ser Ser Thr Lys Trp Phe His Asn Gly Ser Leu Ser Glu Glu

35 40 45

Thr Asn Ser Ser Leu Asn Ile Val Asn Ala Lys Phe Glu Asp Ser Gly

50 55 60

Glu Tyr Lys Cys Gln His Gln Gln Val Asn Glu Ser Glu Pro Val Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Val Phe Ser Asp Trp Leu Leu Leu Gln Ala Ser Ala Glu Val

85 90 95

Val Met Glu Gly Gln Pro Leu Phe Leu Arg Cys His Gly Trp Arg Asn

100 105 110

Trp Asp Val Tyr Lys Val Ile Tyr Tyr Lys Asp Gly Glu Ala Leu Lys

115 120 125

Tyr Trp Tyr Glu Asn His Asn Ile Ser Ile Thr Asn Ala Thr Val Glu

130 135 140

Asp Ser Gly Thr Tyr Tyr Cys Thr Gly Lys Val Trp Gln Leu Asp Tyr

145 150 155 160

Glu Ser Glu Pro Leu Asn Ile Thr Val Ile Lys Ala Pro Glu Pro Lys

165 170 175

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

180 185 190

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

195 200 205

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

210 215 220

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

225 230 235 240

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

245 250 255

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

260 265 270

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

275 280 285

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

290 295 300

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

305 310 315 320

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

325 330 335

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

340 345 350

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

355 360 365

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

370 375 380

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

385 390 395 400

Leu Ser Pro Gly Lys

405

<210> 49

<211> 350

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> IgE-Fc氨基酸序列

<400> 49

Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser

1 5 10 15

Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu

20 25 30

Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp

35 40 45

Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu

50 55 60

Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His

65 70 75 80

Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His

85 90 95

Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly

100 105 110

Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg

115 120 125

Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys

130 135 140

Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn

145 150 155 160

His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val

165 170 175

Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr

180 185 190

Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg

195 200 205

Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala

210 215 220

Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala

225 230 235 240

Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu

245 250 255

His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro

260 265 270

Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val

275 280 285

Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val

290 295 300

His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val

305 310 315 320

Asn Pro Gly Lys Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu

325 330 335

Trp His Glu Gly His His His His His His His His His His

340 345 350

<210> 50

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链可变区核酸序列

<400> 50

atgagagtgc tgattctttt gtggctgttc acagcctttc ctggtttcct gtctgatgtg 60

cagcttctgg agtcgggacc tggcctggtg aaaccttctc agtctctgtc cctcacctgc 120

actgtcactg gctactcaat caccagtgat tatgcctgga actggatccg gcagtttcca 180

ggaaacaaac tggagtggat gggctacata agctacagtg gtagtactag gtacaatcca 240

tctctcaaaa gtcgaatttc tatcagtcga gacacatcca agaaccagtt cttcctgcag 300

ttgaattctg tgacttctga ggacacagcc acatatttct gtgtttacgg aagtagccag 360

agattctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 408

<210> 51

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链可变区核酸序列

<400> 51

atgagagtgc tgattctttt gtggctgttc acagcctttc ctggtttcct gtctgatgtg 60

cagcttctgg agtcgggacc tggcctggtg aaaccttctc agtctctgtc cctcacctgc 120

actgtcactg gctactcaat caccagtgat tatgcctgga actggatccg gcagtttcca 180

ggaaacaaat tggagtggct gggctacata aactacagtg gtaccactcg ctacaatcca 240

tctctcaaaa gtcgaatttc tatcagtcgc gacacatcca agaaccagtt cttcctgcag 300

ttgaattctg tgacttctga ggacacagcc acatatttct gtgtttacgg aagtagccag 360

agattctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 408

<210> 52

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链可变区人源化核苷酸序列

<400> 52

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cagcatcacc agcgactacg cctggaactg gatcagacag 120

cctcctggca atggactgga atggatgggc tacatcagct acagcggcag caccagatac 180

aaccccagcc tgaagtcccg gatcaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gcagcgtgac agccgccgat accgccgtgt acttttgtgt gtacggcagc 300

agccagcggt tcttcgatta ttggggccag ggcaccctgg tcaccgtttc ttct 354

<210> 53

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链可变区人源化核苷酸序列

<400> 53

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cagcatcacc agcgactacg cctggaactg gatcagacag 120

cctcctggca atggactgga atggctgggc tacatcaact acagcggcac caccagatac 180

aaccccagcc tgaagtcccg gatcaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gcagcgtgac agccgccgat accgccgtgt acttttgtgt gtacggcagc 300

agccagcggt tcttcgatta ttggggccag ggcaccctgg tcaccgtttc ttct 354

<210> 54

<211> 405

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链可变区核酸序列

<400> 54

atgcatcaca ccagcatggg catcaaaatg gagtcacaga ttcaggtctt tgtattcgtg 60

tttctctggt tgtctggtgt tgacggagac attctgatga cccagtctca caaattcatg 120

tccacatcaa ttggagacag ggtcagcatc acctgcaagg ccagccagga tgtgagtatt 180

gatgtagcct ggtatcacca gaaaccagga caatctccta aattactgat ttactcggct 240

tcgtttcggt acgctggagt ccctgatcgc ttcactggca gtggatctgg gacggatttc 300

actctcacca tcagcagtgt gcaggctgaa gacctggcag tttattactg tcagcaacat 360

tatagtttat tcacgttcgg ctcggggaca aagttggaaa ttaaa 405

<210> 55

<211> 414

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链可变区核酸序列

<400> 55

atgggggaaa tgcatcacac cagcatgggc atcaaaatgg agtcacagat tcaggtcttt 60

gtattcgtgt ttctctggtt gtctggtgtt gacggagaca ttgtgatgac ccagtctcac 120

aaattcatgt ccacatcagt aggagacagg gtcagcatca cctgcaaggc cagtcaggat 180

gtgagtattg atgtagcctg gtatcaacag aaaccaggac aatctcctaa actactgatt 240

tactcggctt cgtggcggta cgctggagtc cctgatcgct tcactggcag tcgatctggg 300

acggattata ctctcaccat cagcagtgtg caggctgaag acctggcagt ttattactgt 360

cagcaacatt ataatttatt cacgttcggc tcggggacaa agttggaaat acaa 414

<210> 56

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链可变区人源化核苷酸序列

<400> 56

gacatcctga tgacacagag ccctgatagc ctggccgtgt ctctgggaga gagagccacc 60

atcaattgca aggccagcca ggacgtgtcc atcgacgtgg catggtatca gcagaagcct 120

ggccagcctc ctaagctgct gatctacagc gccagcttca gatatgccgg cgtgcccgat 180

agattttccg gctctggcag cggcaccgac ttcaccctta caatcagttc cctgcaggcc 240

gaggacgtgg ccgtgtacta ttgtcagcag cactacagcc tgttcacctt cggctccggc 300

accaagctgg aaatcaag 318

<210> 57

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链可变区人源化核苷酸序列

<400> 57

gacatcgtga tgacacagag ccctgatagc ctggccgtgt ctctgggaga gagagccacc 60

atcaattgca aggccagcca ggacgtgtcc atcgacgtgg catggtatca gcagaagcct 120

ggccagcctc ctaagctgct gatctacagc gccagctgga gatatgccgg cgtgcccgat 180

agattttccg gctctagaag cggcaccgac tataccctta caatcagttc cctgcaggcc 240

gaggacgtgg ccgtgtacta ttgtcagcag cactacaacc tgttcacctt cggctccggc 300

accaagctgg aaatcaag 318

<210> 58

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2轻链人源化核苷酸序列

<400> 58

gacatcctga tgacacagag ccctgatagc ctggccgtgt ctctgggaga gagagccacc 60

atcaattgca aggccagcca ggacgtgtcc atcgacgtgg catggtatca gcagaagcct 120

ggccagcctc ctaagctgct gatctacagc gccagcttca gatatgccgg cgtgcccgat 180

agattttccg gctctggcag cggcaccgac ttcaccctta caatcagttc cctgcaggcc 240

gaggacgtgg ccgtgtacta ttgtcagcag cactacagcc tgttcacctt cggctccggc 300

accaagctgg aaatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctacccc 420

agagaagcca aagtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggaaa cagccaggaa 480

agcgtgacag agcaggattc caaggattcc acatacagcc tgagcagcac actgacactg 540

tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tcctcccctg tgacaaagag cttcaacaga ggagaatgc 639

<210> 59

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2重链人源化核苷酸序列

<400> 59

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cagcatcacc agcgactacg cctggaactg gatcagacag 120

cctcctggca atggactgga atggatgggc tacatcagct acagcggcag caccagatac 180

aaccccagcc tgaagtcccg gatcaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gcagcgtgac agccgccgat accgccgtgt acttttgtgt gtacggcagc 300

agccagcggt tcttcgatta ttggggccag ggcaccctgg tcaccgtttc ttctgcgtcg 360

accaaaggcc cctccgtgtt tcctctggcc ccctcctcca agtctacctc cggcggtacc 420

gccgccctcg gttgtttggt caaagactac ttccccgagc ccgtgaccgt ctcctggaac 480

tccggcgccc tgacctccgg cgtgcacaca ttccccgccg tcctgcagtc ctccggcctg 540

tactctctgt cttccgtggt gaccgtgccc tccagctctt taggcacaca gacctacatc 600

tgcaacgtga accacaagcc ctccaatacc aaggtggaca agaaggtgga gcccaagtct 660

tgtgacaaga cacacacttg tcctccttgt cccgctcccg aactgctggg aggccctagc 720

gtgtttttat tcccccctaa acctaaggac accctcatga tcagccgtac ccccgaagtg 780

acttgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gaccccgaag tcaagttcaa ctggtacgtg 840

gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagacc aagccccggg aggagcagta taatagcacc 900

tatagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaagatt ggctgaacgg caaggagtac 960

aagtgtaagg tgtccaacaa ggctttaccc gctcccatcg agaagaccat ctccaaggct 1020

aagggacagc ctcgtgagcc tcaagtttat actttacccc cttctcgtga cgagctgacc 1080

aagaaccaag tttctttaac atgtttagtg aagggcttct acccctccga catcgccgtg 1140

gagtgggaga gcaatggaca gcccgagaac aactacaaga ccacaccccc cgttttagac 1200

agcgacggct ccttcttttt atactccaag ctcaccgtgg ataagtcccg gtggcagcaa 1260

ggtaacgtct tctcttgttc cgtgatgcac gaagctttac acaaccatta cacccagaag 1320

tctttatctt taagccccgg caag 1344

<210> 60

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5轻链人源化核苷酸序列

<400> 60

gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60

atcacctgca aggccagtca ggatgtgagt attgatgtag cctggtatca acagaaacca 120

ggacaatctc ctaaactact gatttactcg gcttcgtggc ggtacgctgg agtccctgat 180

cgcttcactg gcagtcgatc tgggacggat tatactctca ccatcagcag tgtgcaggct 240

gaagacctgg cagtttatta ctgtcagcaa cattataatt tattcacgtt cggctcgggg 300

acaaagttgg aaataaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctacccc 420

agagaagcca aagtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggaaa cagccaggaa 480

agcgtgacag agcaggattc caaggattcc acatacagcc tgagcagcac actgacactg 540

tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tcctcccctg tgacaaagag cttcaacaga ggagaatgc 639

<210> 61

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5重链人源化核苷酸序列

<400> 61

caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc ctagccaaac actgagcctg 60

acctgtaccg tgtccggcta cagcatcacc agcgactacg cctggaactg gatcagacag 120

cctcctggca atggactgga atggctgggc tacatcaact acagcggcac caccagatac 180

aaccccagcc tgaagtcccg gatcaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gcagcgtgac agccgccgat accgccgtgt acttttgtgt gtacggcagc 300

agccagcggt tcttcgatta ttggggccag ggcaccctgg tcaccgtttc ttctgcgtcg 360

accaaaggcc cctccgtgtt tcctctggcc ccctcctcca agtctacctc cggcggtacc 420

gccgccctcg gttgtttggt caaagactac ttccccgagc ccgtgaccgt ctcctggaac 480

tccggcgccc tgacctccgg cgtgcacaca ttccccgccg tcctgcagtc ctccggcctg 540

tactctctgt cttccgtggt gaccgtgccc tccagctctt taggcacaca gacctacatc 600

tgcaacgtga accacaagcc ctccaatacc aaggtggaca agaaggtgga gcccaagtct 660

tgtgacaaga cacacacttg tcctccttgt cccgctcccg aactgctggg aggccctagc 720

gtgtttttat tcccccctaa acctaaggac accctcatga tcagccgtac ccccgaagtg 780

acttgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gaccccgaag tcaagttcaa ctggtacgtg 840

gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagacc aagccccggg aggagcagta taatagcacc 900

tatagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaagatt ggctgaacgg caaggagtac 960

aagtgtaagg tgtccaacaa ggctttaccc gctcccatcg agaagaccat ctccaaggct 1020

aagggacagc ctcgtgagcc tcaagtttat actttacccc cttctcgtga cgagctgacc 1080

aagaaccaag tttctttaac atgtttagtg aagggcttct acccctccga catcgccgtg 1140

gagtgggaga gcaatggaca gcccgagaac aactacaaga ccacaccccc cgttttagac 1200

agcgacggct ccttcttttt atactccaag ctcaccgtgg ataagtcccg gtggcagcaa 1260

ggtaacgtct tctcttgttc cgtgatgcac gaagctttac acaaccatta cacccagaag 1320

tctttatctt taagccccgg caag 1344

<210> 62

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链/轻链可变区5’端引物1

<400> 62

ctaatacgac tcactatagg gcaagcagtg gtatcaacgc agagt 45

<210> 63

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链/轻链可变区5’端引物2

<400> 63

ctaatacgac tcactatagg gc 22

<210> 64

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 重链可变区3’端引物

<400> 64

catcccaggg tcaccatgga gtta 24

<210> 65

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 轻链可变区3’端引物

<400> 65

gactgaggca cctccagatg ttaa 24

<210> 66

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链HCDR2通式

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Xaa = Asn或Ser

<220>

<221> Xaa

<222> (7)..(7)

<223> Xaa = Ser或Thr

<400> 66

Tyr Ile Xaa Tyr Ser Gly Xaa Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5轻链LCDR2通式

<220>

<221> Xaa

<222> (4)..(4)

<223> Xaa = Phe或Trp

<400> 67

Ser Ala Ser Xaa Arg Tyr Ala

1 5

<210> 68

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5轻链LCDR3通式

<220>

<221> Xaa

<222> (5)..(5)

<223> Xaa = Asn或Ser

<400> 68

Gln Gln His Tyr Xaa Leu Phe Thr

1 5

<210> 69

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2轻链人源化L-FR1通式

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Xaa = Leu或Val

<400> 69

Asp Ile Xaa Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys

20

<210> 70

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2轻链人源化L-FR3通式

<220>

<221> Xaa

<222> (10)..(10)

<223> Xaa = Gly或Arg

<220>

<221> Xaa

<222> (15)..(15)

<223> Xaa = Phe或Tyr

<400> 70

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Xaa Ser Gly Thr Asp Xaa Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 71

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE5/SE2重链人源化H-FR2通式

<220>

<221> Xaa

<222> (14)..(14)

<223> Xaa = Leu或Met

<400> 71

Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp Xaa Gly

1 5 10 15

<210> 72

<211> 136

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链可变区氨基酸序列通式

<220>

<221> Xaa

<222> (67)..(67)

<223> Xaa = Leu或Met

<220>

<221> Xaa

<222> (71)..(71)

<223> Xaa = Asn或Ser

<220>

<221> Xaa

<222> (75)..(75)

<223> Xaa = Ser或Thr

<400> 72

Met Arg Val Leu Ile Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Phe

1 5 10 15

Leu Ser Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro

20 25 30

Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr

35 40 45

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu

50 55 60

Glu Trp Xaa Gly Tyr Ile Xaa Tyr Ser Gly Xaa Thr Arg Tyr Asn Pro

65 70 75 80

Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln

85 90 95

Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr

100 105 110

Phe Cys Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 73

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5重链可变区人源化氨基酸序列通式

<220>

<221> Xaa

<222> (49)..(49)

<223> Xaa = Leu或Met

<220>

<221> Xaa

<222> (53)..(53)

<223> Xaa = Asn或Ser

<220>

<221> Xaa

<222> (57)..(57)

<223> Xaa = Ser或Thr

<400> 73

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Asn Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Xaa Gly Tyr Ile Xaa Tyr Ser Gly Xaa Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Tyr Gly Ser Ser Gln Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 74

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5轻链可变区人源化氨基酸序列通式

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Xaa = Leu或Val

<220>

<221> Xaa

<222> (53)..(53)

<223> Xaa = Phe或Trp

<220>

<221> Xaa

<222> (66)..(66)

<223> Xaa = Gly或Arg

<220>

<221> Xaa

<222> (71)..(71)

<223> Xaa = Phe或Tyr

<220>

<221> Xaa

<222> (93)..(93)

<223> Xaa = Asn或Ser

<400> 74

Asp Ile Xaa Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Xaa Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Xaa Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Xaa Leu Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 138

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SE2/SE5轻链可变区氨基酸序列通式

<220>

<221> Xaa

<222> (1)..(1)

<223> Xaa = 空白或Met

<220>

<221> Xaa

<222> (2)..(2)

<223> Xaa = A空白或Gly

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Xaa = 空白或Glu

<220>

<221> Xaa

<222> (35)..(35)

<223> Xaa = Leu或Val

<220>

<221> Xaa

<222> (47)..(47)

<223> Xaa = Ile或Val

<220>

<221> Xaa

<222> (69)..(69)

<223> Xaa = His或Gln

<220>

<221> Xaa

<222> (85)..(85)

<223> Xaa = Phe或Trp

<220>

<221> Xaa

<222> (98)..(98)

<223> Xaa = Gly或Arg

<220>

<221> Xaa

<222> (103)..(103)

<223> Xaa = Phe或Tyr

<220>

<221> Xaa

<222> (125)..(125)

<223> Xaa = Asn或Ser

<220>

<221> Xaa

<222> (138)..(138)

<223> Xaa = Lys或Gln

<400> 75

Xaa Xaa Xaa Met His His Thr Ser Met Gly Ile Lys Met Glu Ser Gln

1 5 10 15

Ile Gln Val Phe Val Phe Val Phe Leu Trp Leu Ser Gly Val Asp Gly

20 25 30

Asp Ile Xaa Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Xaa Gly

35 40 45

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Asp

50 55 60

Val Ala Trp Tyr Xaa Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

65 70 75 80

Tyr Ser Ala Ser Xaa Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

85 90 95

Ser Xaa Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

100 105 110

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Xaa Leu Phe Thr

115 120 125

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Xaa

130 135