Ph为7且至少含pi为5.8至8.5之基础胰岛素和取代共聚(氨基酸)的可注射溶液
阅读说明：本技术 Ph为7且至少含pi为5.8至8.5之基础胰岛素和取代共聚(氨基酸)的可注射溶液 (Injectable solution of basal insulin and substituted copoly (amino acid) having pH7 and at least PI 5.8 to 8.5 ) 是由 奥利维耶·索拉 于 2013-01-09 设计创作，主要内容包括：本发明涉及PH为7且至少含PI为5.8至8.5之基础胰岛素和取代共聚(氨基酸)的可注射溶液。本发明涉及pH为6.0至8.0的可注射水溶液形式的组合物,其至少包含：a)基础胰岛素,其等电点pI为5.8至8.5；以及b)共聚(氨基酸),其具有羧酸荷载并且被疏水基团取代。在一个实施方案中,根据本发明的组合物还包含餐时胰岛素和/或胃肠激素。(The present invention relates to injectable solutions having a pH of 7 and containing at least a basal insulin and a substituted copoly (amino acid) with a PI of 5.8 to 8.5. The invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution having a pH of 6.0 to 8.0, comprising at least: a) basal insulin with isoelectric point pI of 5.8 to 8.5; and b) a copoly (amino acid) having a carboxylic acid load and substituted with a hydrophobic group. In one embodiment, the composition according to the invention further comprises prandial insulin and/or a gastrointestinal hormone.)
本申请是针对申请号为201710727572.3、发明名称为“PH为7且至少含PI为5.8至8.5之基础胰岛素和取代共聚(氨基酸)的可注射溶液”的中国专利申请的分案申请，该申请是2017年8月22日提交的分案申请。本申请所针对的申请是申请号为201380009297.1、发明名称为“PH为7并且至少包含PI为5.8至8.5之基础胰岛素和经取代共聚(氨基酸)的可注射溶液”的中国专利申请的分案申请，该母案申请是2013年1月9日提交的PCT国际申请PCT/FR2013/050043进入中国国家阶段的申请。
技术领域
本发明涉及通过注射胰岛素来治疗糖尿病的疗法。
背景技术
凭借特别是新胰岛素的开发，胰岛素疗法或通过注射胰岛素的糖尿病疗法在过去几年中取得了显著的进步，所述新胰岛素与人胰岛素相比在患者中提供了更好的血糖水平修正并且使得更接近地模拟胰腺的生理活性成为可能。
当患者诊断为II型糖尿病时，实施渐进的治疗。患者首选摄取口服抗糖尿病药(antidiabétiques oraux，OAD)例如二甲双胍。当OAD单独不再足以调节血液中的葡萄糖水平时，必须在治疗中做出改变，并且根据患者的特异性，可实施多种治疗组合。患者可例如接受基于甘精(glargine)型基础胰岛素或地特(detemir)型基础胰岛素的治疗作为OAD的补充，然后，根据疾病的进展，接受基于基础胰岛素和餐时胰岛素的治疗。
此外，目前为了确保从用OAD治疗转换到基础胰岛素/餐时胰岛素治疗(当OAD不再能控制血液中葡萄糖水平时)推荐注射GLP-1类似物。
GLP-1(胰高血糖素样肽-1)是促胰岛素肽或肠降血糖素(incrétines)，并且属于胃肠激素家族，其在血糖水平太高时(例如餐后)刺激胰岛素分泌。
胃肠激素也被称为饱感激素(hormones de satiété)。它们特别地包含GLP-1(胰高血糖素样肽-1)和GIP(葡萄糖依赖的促胰岛素肽)、胃泌酸调节素(胰高血糖素原衍生物)、肽YY、胰淀素、胆囊收缩素、胰多肽(PP)、生长素释放肽和肠抑肽，其具有肽或蛋白质结构。它们还响应于葡萄糖和脂肪酸而刺激胰岛素分泌，并且因此在这方面是潜在的用于治疗糖尿病的候选物。
这些胃肠激素中，GLP-1是目前已经在药物的开发中提供最好结果的胃肠激素。其能够使患有II型糖尿病的患者减轻体重同时更好地控制其血糖水平。
因此已经开发了GLP-1类似物或衍生物，特别是为了改进其稳定性。
此外，为了涵盖其每日胰岛素需求，糖尿病患者目前有(概略的)两种类型的具有互补作用的胰岛素：餐时胰岛素(或“速效”胰岛素)和基础胰岛素(或“慢效”胰岛素)。
餐时胰岛素允许在用餐或加餐期间迅速管理(代谢和/或贮存)摄取的葡萄糖。患者必须在每次食物摄取之前用餐时胰岛素给自己注射，即每天约2至3次注射。最广泛使用的餐时胰岛素是：重组人胰岛素、(来自NOVO NORDISK的门冬胰岛素)、(来自ELI LILLY的赖脯胰岛素(insulin lispro))和(来自SANOFI-AVENTIS的赖谷胰岛素)。
基础胰岛素在食物摄取以外的时期维持患者的血糖稳态。它们实质上发挥阻断内源性葡萄糖(肝葡萄糖)产生的作用。基础胰岛素的每日剂量一般对应于每日胰岛素总需求的40％至50％。取决于所用的基础胰岛素，这一剂量分配在1次或2次注射中，在当天的时间段内规律地分散。最广泛使用的基础胰岛素是：(来自NOVO NORDISK的地特胰岛素)和(来自SANOFI-AVENTIS的甘精胰岛素)。
应当注意，出于完整的目的，NPH(NPH胰岛素代表中性鱼精蛋白锌胰岛素(NeutralProtamine Hagedorn)；Humuline)是最古老的基础胰岛素。这一制剂是使用阳离子蛋白质(鱼精蛋白)沉淀人胰岛素(在中性pH为阴离子)的结果。所产生的微晶分散在水混悬液中并且在皮下注射后缓慢溶解。这种缓慢的溶解提供了胰岛素的延长释放。然而这种释放不提供胰岛素随时间的持续浓度。释放谱为钟形并且仅持续12至16小时。因此，它每天注射两次。这种NPH基础胰岛素比现代基础胰岛素和低效得多。NPH是一种中效基础胰岛素。
NPH的原理已经随速效胰岛素类似物的出现演变，产生称为“预混物(Premix)”的产品，其提供速效和中效二者。NovoLog(NOVO NORDISK)和Humalog(ELI LILLY)是包含速效胰岛素类似物(和)的与鱼精蛋白部分复合的制剂。因此，这些制剂含有胰岛素类似物微晶(其作用称为中效)和仍保留可溶的胰岛素组分(其作用为速效)。这些制剂明显地提供了速效胰岛素的益处，但他们也具有NPH的缺陷，即受限的12至16小时的作用持续时间和“钟形”的胰岛素释放谱。然而，这些产品允许患者对自己施用，在一次注射中注射中效基础胰岛素以及速效餐时胰岛素。可是，有许多患者渴望减少他们注射的次数。
目前市售的和目前在临床开发中的基础胰岛素可以根据技术方案分类，所述技术方案使得获得延长的作用成为可能，并且目前为止使用了两种途径。
第一种途径(其是地特胰岛素的途径)为体内与白蛋白结合。地特胰岛素是类似物，其在pH 7是可溶的，并且其包含在B29位连接的脂肪酸(十四烷酰基)侧链，其(体内)使得这种胰岛素与白蛋白结合。其延长的作用主要归因于皮下注射后对白蛋白的这种亲和力。
然而，其药代动力学谱不可能覆盖一天，这意味着最经常使用的方法为每天两次注射。
其他在pH 7可溶的胰岛素(例如)目前尚在开发中。也包含与胰岛素相连接的脂肪酸侧链(十六烷二酰基-γ-L-Glu)。
第二种途径(其是甘精胰岛素的途径)是在生理pH沉淀。甘精胰岛素是通过用两个精氨酸残基延长人胰岛素B链的C端部分并通过用甘氨酸残基替换天冬酰胺残基A21获得的人胰岛素类似物(US 5,656,722)。考虑添加两个精氨酸残基以将甘精胰岛素的pI(等电点)调节至生理pH，因此致使这种人胰岛素类似物在生理介质中不可溶。
另外，考虑A21的替换以使甘精胰岛素在酸性pH下稳定，因此能够在酸性pH以可注射溶液的形式配制它。皮下注射期间，甘精胰岛素从酸性pH(pH4～4.5)到生理pH(中性pH)的经过导致其在皮肤下沉积。甘精胰岛素微颗粒的缓慢再溶解提供了缓慢且延长的作用。
甘精胰岛素的降血糖作用实际上持续超过24小时的时间，其使得绝大多数患者能够将其自身限制为每天单次注射。
甘精胰岛素被认为是目前市场上最好的基础胰岛素。
然而，甘精胰岛素类型的基础胰岛素制剂(其等电点为5.8至8.5)的必要酸性pH可以是实际的缺点，因为甘精胰岛素制剂的这种酸性pH有时在患者的注射部位引起疼痛并且尤其是防止具有其他蛋白质(特别是餐时胰岛素)的任何制剂，因为后者在酸性pH不稳定。在酸性pH配制餐时胰岛素是不可能，原因是餐时胰岛素在这些条件下发生由在A21位的脱酰胺组成的副反应，这使得不可能满足美国药典的要求，即在30℃四周后少于5％的副产物。
因此，目前没有人试图在中性pH下增溶这样的甘精胰岛素类型之基础胰岛素(其等电点为5.8至8.5)，而同时独立于pH地维持溶解度在体外介质(容器)与体内介质(皮肤下)之间的差异。
从文献和专利中描述之组合物的分析中，看来甘精胰岛素类型的基础胰岛素在pH7下的不溶性是具有缓慢作用的必要条件。
实际上，甘精胰岛素类型的基础胰岛素(其等电点为5.8至8.5)如何作用的原理是它们在酸性pH下可溶而在生理pH下沉淀。这使本领域技术人员从其中甘精胰岛素类型之胰岛素会在pH 6-8溶解同时保持其在皮下介质中沉淀之本质特性的任何溶液转移开。
此外，甘精胰岛素类型的基础胰岛素制剂(其等电点为5.8至8.5)的这种酸性pH甚至阻止与餐时胰岛素在中性pH的临时组合。
实际上，在第69期Scientific Sessions of the American DiabetesAssociation，New Orleans，Louisiana，June 5-9，2009上呈现的最近的临床研究，使得可证实使用甘氨精胰岛素的这种限制。在临注射前混合一个剂量的甘精胰岛素和一个剂量的餐时胰岛素(在所讨论的情况下为赖脯胰岛素)(E.Cengiz et al.，2010；Diabetes care-33(5)：1009-12)。这个实验使得可证明餐时胰岛素的药代动力学和药效学特征的显著延迟，所述延迟可引起餐后高血糖和夜间低血糖。这个研究清楚地确认甘精胰岛素与目前市场上的速效胰岛素不相容。
此外，(来自SANOFI-AVENTIS公司的基于甘精胰岛素的市售产品)的说明书活页明确告知使用者不要与餐时胰岛素的溶液混合，无论怎样，这可能归因于混合在一起改变甘精胰岛素和/或餐时胰岛素之药代动力学和药效学的严重风险。
然而，从治疗的观点，已经证明(如下文举例说明的)，将甘精胰岛素与餐时胰岛素组合或者将甘精胰岛素与GLP-1类似物组合的治疗确实令人感兴趣。
关于甘精胰岛素与餐时胰岛素的组合，2010年美国糖尿病协会(ADA)的第70次年度科学会议期间公开的临床研究的摘要2163-PO和摘要号0001-LB(特别是由公司SANOFI-AVENTIS实施的那些)示出将甘精胰岛素和餐时胰岛素组合的治疗比基于“预混物”型的产品(Novolog或Humalog)的治疗有效得多。
关于甘精胰岛素和GLP-1类似物的组合，FDA(食品和药品管理局)在2011年10月批准艾塞那肽的注射剂(Amylin Pharmaceuticals，Inc.和Eli Lilly and Company)作为甘精胰岛素的补充治疗用于单独使用基础胰岛素类似物不能实现其血糖水平控制的患有II型糖尿病的患者。
恰巧，由于实际上(以上所示的)基础胰岛素(其等电点为5.8至8.5)的真实原理是它们在酸性pH下可溶而在生理pH下沉淀，提出的将它们与其他产品(例如餐时胰岛素或者GLP-1类似物或衍生物)组合的所有解决方案基于餐时胰岛素或者GLP-1类似物或衍生物在酸性pH的溶解测试，参见例如WO2007/121256、WO2009/021955、WO2011/144673、WO2011/147980或者WO2009/063072。
例如，关于甘精胰岛素和速效胰岛素的组合，BIODEL公司已经(特别是在专利申请US 7,718,609中)描述了在螯合剂和多酸的存在下在3.0至4.2的pH下包含基础胰岛素和餐时胰岛素的组合物。该专利教导了如何在甘精胰岛素的存在下在酸性pH下制造相容的餐时胰岛素。它没有教导如何在中性pH下制备甘精胰岛素类型之胰岛素和餐时胰岛素的组合。
同样地，通过实例，关于甘精胰岛素在中性pH的溶解和与GLP-1类似物的组合，要提及以SANOFI-AVENTIS的名义在2011年11月24日公开的专利申请WO2011/144676，其描述了具有环糊精SVE4-β-CYD的pH 9.5的甘精胰岛素制剂，其中甘精胰岛素的溶解度从0.75mM提高至1.25mM。该申请还提及了另外包含GLP-1的组合物，尽管未对其进行举例说明。提及了在磷酸盐缓冲液中在pH 7.4下的溶解作用。在pH 7.4溶解的这些结果描述于题为“Effect of sulfobutyl ether-β-cyclodextrin on bioavailability of glargine andblood glucose level after subcutaneous injection to rats”(InternationalJournal of Pharmaceutics，419(2011)，71-76)的出版物的图3A中。磺丁基醚-β-环糊精将甘精胰岛素在pH 7.4的溶解度从5μM提高至8μM，或者没有治疗意义，因为市售的甘精胰岛素浓度为600μM(100IU/ml)。因此，通过该专利申请中描述的发明还没有满意地解决问题。
就我们所知，在生理pH下稳定的、包含基础胰岛素(其等电点在5.8至8.5)的、单独或与餐时胰岛素和/或胃肠激素组合的、其中胰岛素的溶解度足以用于治疗性处理的制剂因此还未被描述。
发明内容
本发明通过解决在6.6至7.8之pH的溶解度的难题，使得以下成为可能：
-提出旨在用于治疗糖尿病的可注射组合物，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素，在6.6至7.8的pH下为均匀溶液的形式，同时保持其生物活性及其作用谱；
-提出在6.6至7.8的pH下均匀溶液形式的可注射组合物，其还包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素与未改进在pH 6-8可溶且在酸性pH下不稳定的餐时胰岛素之活性谱的餐时胰岛素组合，同时保持基础胰岛素特异性的慢效谱；
-提出在6.6至7.8的pH下均匀溶液形式的可注射组合物，其还包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素组合与胃肠激素衍生物或类似物(例如GLP-1或胰高血糖素样肽-1)的组合，
-在治疗糖尿病的情况下降低注射的次数，
-所述组合物符合美国和欧洲药典的要求。
出人意料地，根据本发明的组合物使得在6.6至7.8的pH下溶解等电点为5.8至8.5的基础胰岛素成为可能。
出人意料地，根据本发明的组合物使得维持等电点为5.8至8.5之基础胰岛素的降血糖活性的持续时间成为可能，尽管其在注射前在6.6至7.8的pH下溶解。这种显著的性质来源于在本发明的组合物中甘精胰岛素类型的胰岛素在6.6至7.8的pH下溶解，通过介质组成中的改变在皮下介质中沉淀的事实。触发甘精胰岛素类型之胰岛素沉淀的要素不再是pH改变，而是当药物组合物经过容器到生理介质时，组合物之环境的改变。出人意料地，在甘精胰岛素类型之胰岛素与餐时胰岛素的组合(其是本发明的主题)中，虽然甘精胰岛素类型之胰岛素在皮下介质中沉淀，但是保留了餐时胰岛素的快速作用。
根据本发明的溶液使得等电点为5.8至8.5的基础胰岛素在6.6至7.8的pH下溶解并且保持其生物活性成为可能。
在甘精胰岛素类型的胰岛素与餐时胰岛素的组合(这是本发明的主题)中，虽然甘精胰岛素类型之胰岛素在皮下介质中沉淀，但是保留了餐时胰岛素的快速作用。此外，餐时胰岛素的存在不改变基础胰岛素在6.6至7.8之pH下的溶解度并且同样不改变基础胰岛素的沉淀性质。
本发明涉及可注射水溶液形式的组合物，其pH为6.6至7.8，至少包含：
a)基础胰岛素，其等电点pI为5.8至8.5；
b)共聚氨基酸，其具有羧酸荷载并且被疏水基团取代，选自式I的共聚氨基酸：
其中：
·A独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
·R1选自以下的基团：H、直链C2至C10酰基基团、支链C3至C10酰基基团、苄基、末端“氨基酸”单元和焦谷氨酸(pyroglutamate)，
·R2是-NR’R”基团，R’和R”(其可相同或不同)选自H、直链或支链或环状C2至C30烷基和苄基，并且所述R’和R”烷基是可一起形成一个或更多个基于碳和/或可包含选自O、N和S的杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的烷基，
·R’3是选自式-OR3、式II或式II’之基团的基团：
其中＊指示共聚氨基酸的连接位点，
-R3和R”3(其可相同或不同)代表H或选自包含金属阳离子之组的阳离子实体，
·-R是选自以下的基团：可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团；或可形成基于碳或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合(ortho-condensed)或迫位缩合(peri-condensed)；或者如下所定义的式III或式III’的基团：
其中＊指示与共聚氨基酸相连接的位点，并且
-R4和R’4(其可相同或不同)代表H、选自包含金属阳离子之组的阳离子实体、R”4基团或R”’4基团，并且R4和R’4中的至少一个等于R”4，
οR”4代表可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳或者包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
οR”’4代表可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C1至C7基团，或者可形成基于碳或者包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C1至C7基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，并且
-B独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
-R5是选自以下的基团：H、直链或支链的C1至C4烷基或苄基基团，
·n/(n+m)定义为单体单元被疏水性基团的摩尔接枝度，并且为1mol％至50mol％，
·n+m代表共聚氨基酸的聚合度，即每个共聚氨基酸链的单体单元的平均数目，并且5≤n+m≤1000。
所述共聚氨基酸是随机的共聚氨基酸。
R’3、R3、R”3、R、R4、R’4、R”4、R”’4、R’、R”和R5基团与基团A和B在单体单元之间各自独立地相同或不同。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于式I的共聚氨基酸可包含式VI和/或VI’的单体单元：
在一个实施方案中，具有羧酸荷载并且被疏水基团取代的共聚氨基酸选自式IV的共聚氨基酸：
其中：
-基团A、R1、R2、R和R3如式I中定义的。
共聚氨基酸是随机的共聚氨基酸。
R’3、R3、R”3、R、R4、R’4、R”4、R”’4、R’、R”和R5基团与基团A和B在单体单元之间各自独立地相同或不同。
在一个实施方案中，具有羧酸荷载并且被疏水基团取代的共聚氨基酸选自式IV的共聚氨基酸：
其中：
·A独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
·R1选自：H、直链C2至C10酰基基团、支链C3至C10酰基基团、苄基、末端“氨基酸”单元和焦谷氨酸，
·R2是-NR’R”基团，R’和R”(其可相同或不同)选自H、直链或支链或环状C2至C10烷基和苄基，并且所述R’和R”烷基是可一起形成基于碳和/或可包含选自O、N和S的杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的烷基，
·R3基团(其可相同或不同)选自：H或选自包含金属阳离子之组的阳离子实体，
·R基团彼此独立地各自代表选自通式V或通式V’之基团的基团：
其中＊指示与共聚氨基酸相连接的位点，并且
-R4代表可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
-B独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
-R5独立地代表H、直链或支链的C1至C4烷基或苄基基团，或者
·R是可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳的或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
·n/(n+m)定义为单体单元被疏水性基团的摩尔接枝度，并且为1mol％至50mol％，
·n+m代表共聚氨基酸的聚合度，即每个共聚氨基酸链的单体单元的平均数目，并且5≤n+m≤1000。
共聚氨基酸是随机的共聚氨基酸。
R’3、R3、R”3、R、R4、R’4、R”4、R”’4、R’、R”和R5基团与基团A和B在单体单元之间各自独立地相同或不同。
在一个实施方案中，具有羧酸荷载并且被疏水基团取代的共聚氨基酸选自式IV的共聚氨基酸：
其中：
·A独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
·R1选自：H、直链C2至C10酰基基团、支链C3至C10酰基基团、苄基、末端“氨基酸”单元和焦谷氨酸，
·R2选自：
-第二氨基基团-NR’R”，R’和R”(其可相同或不同)选自直链或支链或环状C2至C10烷基和苄基，并且所述R’和R”烷基是可一起形成基于碳和/或可包含选自O、N和S的杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的烷基，
-R3基团(其可相同或不同)选自：H或选自包含金属阳离子之组的阳离子实体，
·R基团彼此独立地各自代表选自通式V或通式V’之基团的基团：
其中＊指示与共聚氨基酸相连接的位点，并且
-R4代表可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
-B独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
-R5独立地代表H、直链或支链的C1至C4烷基或苄基基团，或者
·R是可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳的或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
·n/(n+m)定义为单体单元被疏水性基团的摩尔接枝度，并且为1mol％至50mol％，
·n+m代表共聚氨基酸的聚合度，即每个共聚氨基酸链的单体单元的平均数目，并且5≤n+m≤1000。
R’3、R3、R”3、R、R4、R’4、R”4、R”’4、R’、R”和R5基团与基团A和B在单体单元之间各自独立地相同或不同。
在一个实施方案中，具有羧酸荷载并且被疏水基团取代的共聚氨基酸选自式IV的共聚氨基酸：
其中：
·A独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
·R1选自：H、直链C2至C10酰基基团、支链C3至C10酰基基团、苄基、末端“氨基酸”单元和焦谷氨酸，
·R2代表-NHR11基团，其中R11选自：H、直链C2至C10或支链C3至C10烷基、或苄基或直链或支链的并且可包含选自N、O和S的杂原子的C2至C30酰基，
·R3基团(其可相同或不同)选自：H或选自包含金属阳离子之组的阳离子实体，
·R基团彼此独立地各自代表选自通式IV或通式IV’之基团的基团：
其中＊指示与共聚氨基酸相结合的位点，并且
-R4代表可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
-B独立地代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)，
-R5独立地代表H、直链或支链的C1至C4烷基或苄基基团，或者
·R是可包含杂原子的饱和或不饱和的、直链或支链的C8至C30基团，或可形成基于碳或者可包含杂原子的饱和、不饱和和/或芳香环的C8至C30基团，所述环可邻位缩合或迫位缩合，
·n/(n+m)定义为单体单元被疏水性基团的摩尔接枝度，并且为1mol％至50mol％，
·n+m代表共聚氨基酸的聚合度，即每个共聚氨基酸链的单体单元的平均数目，并且5≤n+m≤1000。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或式IV的共聚氨基酸，其中基团A是-CH2-基团(天冬氨酸单元)。
当共聚氨基酸由天冬氨酸单元组成时，它们可进行结构重排。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于式I或IV的共聚氨基酸还可包含式VI”和/或VI’的单体单元：
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中基团A是-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R选自来自于疏水醇的基团。
来自疏水醇的R基团通过疏水醇的醇官能团与共聚氨基酸的羧酸官能团的反应获得。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于包含8至18个碳的由不饱和或饱和烷基链组成之醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自：来自于肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇或油醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是来自于胆固醇衍生物的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于生育酚醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于具有芳基基团之醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于苄醇或苯乙醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自式I的共聚氨基酸，其中R是来自于月桂醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是来自于生育酚的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是来自于胆固醇的基团。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中基团R是-L-R”’型的基团，R”’基团来自于疏水酸并且L基团是来自于二醇、来自于二胺或氨基醇的包含2至10个碳的接头臂，其是直链或支链的或者其可包含选自N、O和S的杂原子。
来自于疏水酸的基团得自疏水酸的酸官能团与二胺的、二醇的或氨基醇的醇或胺官能团的反应。
基团L，一方面得自疏水酸的酸官能团与二胺的、二醇的或氨基醇的醇或胺官能团的反应，另一方面，得自共聚氨基酸的羧酸官能团与二胺的、二醇的或氨基醇的醇或胺官能团之间的反应。
在一个实施方案中，疏水酸选自脂肪酸。
在一个实施方案中，脂肪酸选自直链脂肪酸。
在一个实施方案中，直链脂肪酸选自己酸、庚酸、辛酸、癸酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、二十三烷酸，二十四烷酸、二十七烷酸和二十八烷酸等。
在一个实施方案中，脂肪酸选自不饱和脂肪酸。
在一个实施方案中，不饱和脂肪酸选自肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、油酸、反油酸、亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。
在一个实施方案中，脂肪酸选自胆汁酸及其衍生物。
在一个实施方案中，胆汁酸及其衍生物选自胆酸、脱氢胆酸、脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸。
在一个实施方案中，二胺选自乙二胺和赖氨酸及其衍生物。
在一个实施方案中，二胺选自二乙二醇二胺和三乙二醇二胺。
在一个实施方案中，二醇选自甘油、二甘油和三甘油。
在一个实施方案中，二醇选自二乙二醇和三乙二醇。
在一个实施方案中，氨基醇选自乙醇胺、2-氨基丙醇、异丙醇胺、3-氨基-1，2-丙二醇、二乙醇胺、二异丙醇胺、缓血酸胺(Tris)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇。
在一个实施方案中，醇胺选自还原的氨基酸。
在一个实施方案中，还原的氨基酸选自丙氨醇、缬氨醇、亮氨醇、异亮氨醇、脯氨醇、苯丙氨醇、丝氨醇和苏氨醇。
在一个实施方案中，醇胺选自带电的氨基酸。
在一个实施方案中，带电的氨基酸选自丝氨酸或苏氨酸。
在一个实施方案中，L是三价基团。
在一个实施方案中，L是选自三胺、二醇胺、二胺醇和二胺酸的三价基团。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R2是-N-吗啡酚基(-N-morpholyl)。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I的共聚氨基酸，其中R2基团是来自氨基酸的基团并且是选自式VII的基团：
其中：
·R6是-OH、-OR9或-NHR10并且
·R7、R’7、R”7、R8、R’8、R”8、R9和R10(其可相同或不同)独立地代表H、直链C2至C10烷基、支链C3至C10烷基或苄基，其中0≤p≤3、0≤q≤3、0≤r≤3并且≤1p+q+r≤10。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R4、R’4和/或R”4(其可相同或不同)选自来自疏水醇的基团。
来自疏水醇的基团如上定义，并且通过式III、III’、V或V’的基团之前体具有的酸官能团与疏水醇的醇官能团反应获得。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于由包含8至18个碳的不饱和或饱和烷基链组成之醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇或油醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是来自于胆固醇衍生物的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于生育酚的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自来自于具有芳基基团之醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是选自来自于苄醇或苯乙醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R是来自于月桂醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是来自于胆固醇的基团。
在一个实施方案中，来自疏水醇的基团是来自于生育酚的基团。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R5基团是异丁基基团。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R5基团是H。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中R5基团选自甲基、异丙基、仲丁基和苄基基团。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为5至500。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为5至250。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为5至100。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为5至50。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为5至25。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为10至500。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n+m为15至250。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n/(n+m)为1mol％至30mol％。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n/(n+m)为1mol％至20mol％。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n/(n+m)为1mol％至10mol％。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸选自式I或IV的共聚氨基酸，其中n/(n+m)为1mol％至5mol％。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸来自于通过谷氨酸N-羧基酐衍生物或天冬氨酸N-羧基酐衍生物的开环聚合得到的聚氨基酸。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸来自于通过谷氨酸N-羧基酐衍生物或天冬氨酸N-羧基酐衍生物的聚合得到的聚氨基酸，如Adv.Polym.Sci.2006，202，1-18(Deming，T.J.)的综述文章所描述的。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸来自于使用过渡金属的有机金属络合物作为引发剂通过谷氨酸N-羧基酐衍生物或天冬氨酸N-羧基酐衍生物的聚合得到的聚氨基酸，如出版物Nature 1997，390，386-389(Deming，T.J.)中描述的。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸来自于使用氨或伯胺作为引发剂通过谷氨酸N-羧基酐衍生物或天冬氨酸N-羧基酐衍生物的聚合得到的聚氨基酸，如专利FR 2,801,226(Touraud，F.等)和本专利中所引用的参考文献中所描述的。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸来自于通过谷氨酸N-羧基酐衍生物或天冬氨酸N-羧基酐衍生物的聚合得到的聚氨基酸，使用如出版物J.Am.Chem.Soc.2007，129，14114-14115(Lu H.等)描述的六甲基二硅氮烷或者如出版物J.Am.Chem.Soc.2008，130.12562-12563(Lu H.等)描述的甲硅烷化胺作为引发剂。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸是在支持物上使用肽合成器通过肽合成获得的。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸是通过液相肽合成获得的。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸是通过使用本领域技术人员公知的用于形成酰胺键的方法将疏水基团接枝到聚-L-谷氨酸或聚-L-天冬氨酸上获得的。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物的特征在于共聚氨基酸是通过将疏水基团接枝到聚-L-谷氨酸或聚-L-天冬氨酸上获得的，如专利FR 2,840,614(Ping，C.U等)描述的。
表述“等电点为5.8至8.5的基础胰岛素”旨在意指在pH 7不溶并且在标准糖尿病模型中作用持续时间为8至24小时或更长时间的胰岛素。
这些等电点为5.8至8.5的基础胰岛素是重组胰岛素，其一级结构已经主要通过引入碱性氨基酸(例如精氨酸或赖氨酸)修饰。例如，它们在以下专利、专利申请或出版物中描述：WO 2003/053339、WO 2004/096854、US 5,656,722和US 6,100,376，其内容通过引用并入。
在一个实施方案中，等电点为5.8至8.5的基础胰岛素是甘精胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含40至500IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含100IU/ml(即约3.6mg/ml)的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含200IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含300IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含400IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
在一个实施方案中，等电点为5.8至8.5的基础胰岛素与经取代共聚氨基酸之间的重量比(即经取代共聚氨基酸/基础胰岛素)为0.2至30。
在一个实施方案中，重量比为0.2至15。
在一个实施方案中，重量比为0.2至10。
在一个实施方案中，重量比为0.2至4。
在一个实施方案中，重量比为0.2至3。
在一个实施方案中，重量比为0.2至2。
在一个实施方案中，重量比为0.2至1。
在一个实施方案中，重量比等于1。
在一个实施方案中，经取代共聚氨基酸的浓度为至多100mg/ml。
在一个实施方案中，经取代共聚氨基酸的浓度为至多80mg/ml。
在一个实施方案中，经取代共聚氨基酸的浓度为至多60mg/ml。
在一个实施方案中，经取代共聚氨基酸的浓度为至多40mg/ml。
在一个实施方案中，经取代共聚氨基酸的浓度为至多20mg/ml。
在一个实施方案中，经取代共聚氨基酸的浓度为至多10mg/ml。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含餐时胰岛素。所述餐时胰岛素在pH 7是可溶的。
术语“餐时胰岛素”旨在意指被称作速效或“正规”的胰岛素。
被称作速效的餐时胰岛素是这样的胰岛素，其必须响应在用餐期间摄取蛋白质和碳水化合物引起的需求，它们必须在少于30分钟内发挥作用。
在一个实施方案中，称作“正规”的餐时胰岛素是人胰岛素。
在一个实施方案中，胰岛素是如在欧洲药典和美国药典中描述的重组人胰岛素。
例如，人胰岛素以品牌(Eli Lilly)和(Novo Nordisk)销售。
被称为速效的餐时胰岛素是这样的胰岛素，其通过重组获得并且其一级结构已经被修饰以缩短其作用时间。
在一个实施方案中，被称作速效的餐时胰岛素选自：赖脯胰岛素赖谷胰岛素和门冬胰岛素
在一个实施方案中，餐时胰岛素是赖脯胰岛素。
在一个实施方案中，餐时胰岛素是赖谷胰岛素。
在一个实施方案中，餐时胰岛素是门冬胰岛素。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计40至800IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计40至500IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计800IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计700IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计600IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计500IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计400IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计300IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计200IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计100IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含总计40IU/ml的胰岛素，所述胰岛素为餐时胰岛素与等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的组合。
等电点为5.8至8.5的基础胰岛素与餐时胰岛素之间的比例为例如(按百分比)25/75、30/70、40/60、50/50、60/40、70/30、80/20或90/10用于以上所述包含40至800IU/ml的制剂。然而，可以制备任意其他比例。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含胃肠激素。
术语“胃肠激素”旨在意指选自以下的激素：GLP-1(胰高血糖素样肽-1)和GIP(葡萄糖依赖性促胰岛素肽)、胃泌酸调节素(胰高血糖素原衍生物)、肽YY、胰淀素、胆囊收缩素、胰多肽(PP)、生长素释放肽和肠抑肽，其类似物或衍生物和/或其可药用盐。
在一个实施方案中，胃肠激素为选自以下的GLP-1类似物或衍生物：由ELI LILLY&CO和AMYLIN PHARMACEUTICALS研发的艾塞那肽或由NOVO NORDISK研发的利拉鲁肽(liraglutide)或或者由SANOFI-AVENTIS研发的利西拉来(lixisenatide)或其类似物或衍生物及其可药用盐。
在一个实施方案中，胃肠激素为艾塞那肽或其类似物或衍生物及其可药用盐。
在一个实施方案中，胃肠激素为利拉鲁肽或其类似物或衍生物及其可药用盐。
在一个实施方案中，胃肠激素为利西拉来或其类似物或衍生物及其可药用盐。
术语“类似物”，当其用于肽或蛋白质时旨在意指这样的肽或蛋白质，其中一个或更多个组成氨基酸已经被其他氨基酸残基替换和/或其中一个或更多个组成氨基酸残基已经被缺失和/或其中已经添加一个或更多个组成氨基酸残基。用于本定义之类似物的可接受的百分比同源性为50％。
术语“衍生物”，当其用于肽或蛋白质时旨在意指肽或蛋白质或者类似物已经被不存在于参考肽或蛋白质或类似物的取代基化学修饰，即肽或蛋白质已经通过建立共价键修饰以引入取代基。
在一个实施方案中，取代基选自脂肪链。
在一个实施方案中，胃肠激素的浓度包括在0.01mg/ml至10mg/ml的范围内。
在一个实施方案中，艾塞那肽、其类似物或衍生物以及其可药用盐的浓度包括在0.05mg/ml至0.5mg/ml的范围内。
在一个实施方案中，利拉鲁肽、其类似物或衍生物以及其可药用盐的浓度包括在1mg/ml至10mg/ml的范围内。
在一个实施方案中，利西拉来、其类似物或衍生物以及其可药用盐的浓度包括在0.01mg/ml至1mg/ml的范围内。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物通过将市售的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素溶液与市售的GLP-1或者GLP-1类似物或衍生物之溶液以包括在10/90至90/10范围内的体积比混合制备。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含基础胰岛素的每日剂量和胃肠激素的每日剂量。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml至40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml至40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml至40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含500IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含400IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含400IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含400IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含300IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含300IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含300IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含200IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含200IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含200IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含100IU/ml(即，约3.6mg/ml)的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含100IU/ml(即，约3.6mg/ml)的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含100IU/ml(即，约3.6mg/ml)的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.05mg/ml至0.5mg/ml的艾塞那肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和1mg/ml至10mg/ml的利拉鲁肽。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含40IU/ml的等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和0.01mg/ml至1mg/ml的利西拉来。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为0μM至5000μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为0μM至4000μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为0μM至3000μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为0μM至2000μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为0μM至1000μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为50μM至600μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为100μM至500μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含浓度为200μM至500μM的锌盐。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含缓冲剂。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含浓度为0mM至100mM的缓冲剂。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含浓度为15mM至50mM的缓冲剂。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含选自以下的缓冲剂：磷酸盐缓冲液、Tris(三羟甲基氨基甲烷)或柠檬酸钠。
在一个实施方案中，缓冲剂是磷酸钠。
在一个实施方案中，缓冲剂是Tris(三羟甲基氨基甲烷)。
在一个实施方案中，缓冲剂是柠檬酸钠。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含防腐剂。
在一个实施方案中，防腐剂选自单独或作为混合物的间甲酚和苯酚。
在一个实施方案中，防腐剂的浓度为10mM至50mM。
在一个实施方案中，防腐剂的浓度为10mM至40mM。
在一个实施方案中，根据本发明的组合物还包含表面活性剂。
在一个实施方案中，表面活性剂选自丙二醇或聚山梨酯。
根据本发明的组合物还可包含添加剂，例如张力剂(agents de tonicité)。
在一个实施方案中，张力剂选自甘油、氯化钠、甘露醇和甘氨酸。
根据本发明的组合物还可包含根据药典并且可与以使用浓度所用的胰岛素相容的所有的赋形剂。
本发明还涉及根据本发明的药物制剂，其通过干燥和/或冻干获得。
在局部或全身释放的情况下，考虑的施用模型为静脉内、皮下、皮内或肌内。
还考虑经皮、经口、经鼻、经阴道、经眼、口腔和肺施用途径。
本发明还涉及pH为6.6至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
本发明还涉及pH为6.6至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和餐时胰岛素。
本发明还涉及pH为6.6至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和如前所定义的胃肠激素。
本发明还涉及pH为6.6至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素、餐时胰岛素以及如前所定义的胃肠激素。
本发明还涉及pH为7至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素。
本发明还涉及pH为7至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和餐时胰岛素。
本发明还涉及pH为7至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素和如前所定义的胃肠激素。
本发明还涉及pH为7至7.8的单剂量制剂，其包含等电点为5.8至8.5的基础胰岛素、餐时胰岛素以及如前所定义的胃肠激素。
在一个实施方案中，单剂量制剂还包含如前所定义的经取代共聚氨基酸。
在一个实施方案中，制剂是以可注射溶液的形式。
在一个实施方案中，等电点为5.8至8.5的基础胰岛素为甘精胰岛素。
在一个实施方案中，餐时胰岛素为人胰岛素。
在一个实施方案中，胰岛素是如欧洲药典和美国药典中所描述的重组人胰岛素。
在一个实施方案中，餐时胰岛素选自：赖脯胰岛素赖谷胰岛素和门冬胰岛素
在一个实施方案中，餐时胰岛素是赖脯胰岛素。
在一个实施方案中，餐时胰岛素是赖谷胰岛素。
在一个实施方案中，餐时胰岛素是门冬胰岛素。
在一个实施方案中，GLP-1或者GLP-1类似物或衍生物选自包含以下的组：艾塞那肽利拉鲁肽利西拉来或其衍生物之一。
在一个实施方案中，胃肠激素为艾塞那肽。
在一个实施方案中，胃肠激素为利拉鲁肽。
在一个实施方案中，胃肠激素为利西拉来。
可以用裸眼通过溶液外观的改变简单地观察并控制等电点为5.8至8.5的基础胰岛素在pH 6.6至7.8的溶解(通过式I或IV之经取代共聚氨基酸)。
可以用裸眼通过溶液外观的改变简单地观察并控制等电点为5.8至8.5的基础胰岛素在pH 7至7.8的溶解(通过式I或IV之经取代共聚氨基酸)。
此外，同样重要地，申请人能够证实，在式I或IV之经取代共聚氨基酸的存在下，等电点为5.8至8.5的基础胰岛素在pH 6.6至7.8的溶解不损失其缓慢胰岛素作用，无论单独或者与餐时胰岛素或胃肠激素组合。
申请人还能够证实在式I或IV之共聚氨基酸和等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的存在下，在pH 6.6至7.8混合的餐时胰岛素不损失其快速胰岛素作用。
根据本发明的组合物的制备具有这样的优势：能够简单地通过将等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的水溶液与水溶液或冻干形式的式I或IV之经取代共聚氨基酸混合来实施。如果必要，将制剂的pH调节为pH 7。
根据本发明的组合物的制备具有这样的优势：能够简单地通过将等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的水溶液、餐时胰岛素的溶液和水溶液或冻干形式的式I或IV之经取代共聚氨基酸混合来实施。如果必要，将制剂的pH调节为pH 7。
根据本发明的组合物的制备具有这样的优势：能够简单地通过将等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的水溶液、GLP-1或者GLP-1类似物或衍生物的溶液和水溶液或冻干形式的式I或IV之经取代共聚氨基酸混合来实施。如果必要，将制剂的pH调节为pH 7。
根据本发明的组合物的制备具有这样的优势：能够简单地通过将等电点为5.8至8.5的基础胰岛素的水溶液、餐时胰岛素的溶液、GLP-1或者GLP-1类似物或衍生物的溶液和水溶液或冻干形式的式I或IV之经取代共聚氨基酸混合来实施。如果必要，将制剂的pH调节为pH 7。
在一个实施方案中，通过超滤浓缩基础胰岛素与经取代共聚氨基酸的混合物，之后与水溶液或冻干形式的餐时胰岛素混合。
如果必要，混合物的组成通过向混合物添加这些赋形剂的浓溶液根据赋形剂(例如甘油、间甲酚、氯化锌和聚山梨醇酯)来调节。如果必要，将制剂的pH调节为7。
附图说明
图1示出与相同胰岛素的连续施用相比用根据本发明的组合物获得药代动力学研究的结果。
图1呈现了与施用根据本发明的共聚氨基酸5/甘精胰岛素(300IU/ml)/赖脯胰岛素(100IU/ml)(三角形)相比，连续施用(100IU/ml)和(100IU/ml)(实心正方形)的平均曲线和平均值的标准偏差。
具体实施方式
实施例
A部分共聚氨基酸的合成
表1：所合成的共聚氨基酸的列表
实施例1：用双月桂基天冬氨酸修饰的共聚谷氨酸钠
共聚氨基酸1
根据出版物J.Am.Chem.Soc.2008，130，12562-12563(Lu H.等)中描述的方法，使用N-三甲基甲硅烷基吗啉作为引发剂，从谷氨酸γ-苄基N-羧基酐合成聚合度为约40的聚-γ-苄基-L-谷氨酸的聚合物。通过1H NMR通过比较源自引发剂的链末端信号与源自重复单元的信号的整合评估聚合度。平均的聚合度为40。
为水解苄酯，在1N氢氧化钠的存在下在THF/MeOH混合物中回流10g聚合物16小时。回到室温后，通过过滤分离白色固体并且通过1H NMR分析。将获得的固体溶解在水中，在阴离子Purolite树脂上酸化，然后冻干以产生对应的聚-L-谷氨酸。根据专利US 4,826,818(Kenji M.等)中描述的方法制备天冬氨酸双月桂酯对甲苯磺酸盐。
将2g聚-L-谷氨酸(15.5mmol的单体)溶解在DMF中，然后冷却至0℃。将0.5g(0.8mmol)的天冬氨酸双月桂酯对甲苯磺酸盐混悬在DMF中。然后将0.08g(0.8mmol)的三乙胺添加至该混悬液。一旦聚合物的溶液为0℃，添加1.73g(17.1mmol)的NMM和1.85g(17.1mmol)的EtOCOCI。反应10分钟后，添加天冬氨酸双月桂酯溶液，然后将介质在10℃保持45分钟。然后逐渐将介质加热到50℃。在30℃，添加100g/l的咪唑水溶液40ml和25ml水。搅拌1小时30分后，将获得的溶液在5kD PES膜上针对0.9％NaCl、0.01N氢氧化钠和水的溶液进行超滤。将溶液冻干并且在氘化的三氟乙酸中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成天冬氨酸双月桂酯之酰胺的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被天冬氨酸双月桂酯的摩尔接枝度为9％。
实施例2：用α-生育酚修饰的共聚谷氨酸钠
共聚氨基酸2
通过类似于实施例1中描述的方法合成2g聚合度为约200的聚-L-谷氨酸(15.5mmol的单体)。
根据专利FR 2,840,614(Ping，C.U.等)中描述的方法用α-生育酚(SIGMA)修饰聚-L-谷氨酸。
冻干所获得的用α-生育酚修饰之聚-L-谷氨酸钠的溶液并且在氘化的三氟乙酸中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成α-生育酚酯的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被α-生育酚的摩尔接枝度为10％。
实施例3：用天冬氨酸双月桂酯修饰的共聚天冬氨酸钠
共聚氨基酸3
根据专利US 4,826,818(Kenji M.等)中描述的方法制备天冬氨酸双月桂酯对甲苯磺酸盐。
通过类似于实施例1中描述的方法合成聚合度为约20的聚-L-天冬氨酸(15.5mmol的单体)2g。
根据实施例1中描述的方法用天冬氨酸双月桂酯修饰聚-L-天冬氨酸。
将获得的用天冬氨酸双月桂酯修饰之聚天冬氨酸钠的溶液冻干，在氘化的水中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成天冬氨酸双月桂酯之酰胺的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被天冬氨酸双月桂酯的摩尔接枝度为4％。实施例4：用亮氨酸胆固醇酯修饰的共聚天冬氨酸钠
共聚氨基酸4
根据专利US 4,826,818(Kenji M.等)中描述的方法制备亮氨酸胆固醇酯对甲苯磺酸盐。
通过类似于实施例1中描述的方法合成2g聚合度为约20的聚-L-天冬氨酸(15.5mmol的单体)。
通过类似于实施例1中描述的方法用亮氨酸胆固醇酯修饰聚-L-天冬氨酸。
将获得的用亮氨酸胆固醇酯修饰之聚-L-天冬氨酸钠的溶液冻干，在氘化的水中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成亮氨酸胆固醇酯之酰胺的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被亮氨酸胆固醇酯的摩尔接枝度为3％。实施例5：用α-生育酚修饰的共聚谷氨酸钠
共聚氨基酸5
通过类似于实施例1中描述的方法合成2g聚合度为约20的聚-L-谷氨酸(15.5mmol的单体)。
根据专利FR 2,840,614(Ping，C.U.等)中描述的方法用α-生育酚(SIGMA)修饰聚-L-谷氨酸。
将获得的用α-生育酚修饰之聚-L-谷氨酸钠的溶液冻干，在氘化的三氟乙酸中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成α-生育酚酯的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被α-生育酚的摩尔接枝度为5％。
实施例6：用亮氨酸胆固醇酯修饰的共聚谷氨酸钠
共聚氨基酸6
根据专利US 4,826,818(Kenji M.等)中描述的方法制备亮氨酸胆固醇酯对甲苯磺酸盐。
通过类似于实施例1中描述的方法合成2g聚合度为约20的聚-L-谷氨酸(15.5mmol的单体)。
根据专利FR 2,840,614(Ping，C.U等)中描述的方法用预先用三乙胺中和的亮氨酸胆固醇酯修饰聚-L-谷氨酸。
将获得的用亮氨酸胆固醇酯修饰之聚-L-谷氨酸钠的溶液冻干，在氘化的三氟乙酸中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成α-生育酚酯的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被亮氨酸胆固醇酯的摩尔接枝度为1.5％。
实施例7：用α-生育酚修饰的共聚谷氨酸钠
共聚氨基酸7
通过类似于实施例1中描述的方法合成2g聚合度为约200的聚-L-谷氨酸(15.5mmol的单体)。
根据专利FR 2,840,614(Ping，C.U等)中描述的方法用α-生育酚(SIGMA)修饰聚-L-谷氨酸。
将获得的用α-生育酚修饰之聚-L-谷氨酸钠的溶液冻干，在氘化的三氟乙酸中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成α-生育酚酯的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被α-生育酚的摩尔接枝度为5％。
实施例8：用α-生育酚修饰的共聚谷氨酸钠
共聚谷氨酸8
根据专利FR 2,801,226(Thouraud，F.等)中描述的方法，使用己胺作为引发剂，从谷氨酸γ-苄基N-羧基酐合成聚合度为约200的聚-L-谷氨酸聚合物。
根据专利FR 2,840,614(Ping，C.U等)中描述的方法获得用α-生育酚(SIGMA)修饰聚-L-谷氨酸钠。
将获得的用α-生育酚修饰之聚-L-谷氨酸钠的溶液冻干，在氘化的三氟乙酸中进行1H NMR分析以确定酸官能团转变成α-生育酚酯的程度。
根据1H NMR：每个单体酸被α-生育酚的摩尔接枝度为5％。
B部分证明根据本发明之组合物的性质
实施例B1：100IU/ml的速效胰岛素类似物溶液
本溶液是由Novo Nordisk公司以的名称在美国和以的名称在欧洲销售的商业门冬胰岛素溶液。该产品是速效胰岛素类似物。
实施例B2：100IU/ml的速效胰岛素类似物溶液
该溶液是由Eli Lilly公司以的名称销售的商业赖脯胰岛素溶液。该产品是速效胰岛素类似物。
实施例B3：100IU/ml的速效胰岛素类似物溶液
该溶液是由Sanofi-Aventis公司以的名称销售的商业赖谷胰岛素溶液。该产品是速效胰岛素类似物。
实施例B4：100IU/ml的慢效胰岛素类似物溶液
该溶液是由Sanofi-Aventis公司以的名称销售的商业甘精胰岛素溶液。该产品是慢效胰岛素类似物。
实施例B5：100IU/ml的人胰岛素溶液
该溶液是由Novo Nordisk以的名称销售的商业人胰岛素溶液。该产品是人胰岛素。
实施例B6：使用浓度为10mg/ml的经取代共聚氨基酸以100IU/ml并且在pH 7下溶解甘精胰岛素
精确地称出20mg表1中描述的那些选择的经取代共聚氨基酸。将该冻干物用2ml的实施例B4之甘精胰岛素溶液吸收以获得其中经取代共聚氨基酸的浓度等于表2中所述的10mg/ml的溶液。在室温在搅拌器上机械搅拌后，溶液变得澄清。该溶液的pH为6.3。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节为7。澄清溶液通过膜(0.22μM)过滤然后放置在+4℃。
根据以上流程使用共聚氨基酸1、2、3、4、5、6、7和8进行溶解测试。这些溶液参考表2。
表2：具有共聚氨基酸1、2、3、4、5、6、7和8并且浓度为10mg/ml的根据实施例B6的溶液
溶液实施例B6
经取代共聚氨基酸
经取代共聚氨基酸的浓度
B6(a)
1
10mg/mL
B6(b)
2
10mg/mL
B6(c)
3
10mg/mL
B6(d)
4
10mg/mL
B6(e)
5
10mg/mL
B6(f)
6
10mg/mL
B6(g)
7
10mg/mL
B6(h)
8
10mg/mL
普适化：根据与实施例B6之描述相同的方案还获得经取代共聚氨基酸浓度为20、40或60mg/ml的100IU/ml且pH 7的甘精胰岛素澄清溶液。因此，精确称出表1中描述的那些中冻干的经取代共聚氨基酸的重量。将该冻干物用实施例B4中的甘精胰岛素溶液吸收以获得表3中所述的经取代共聚氨基酸浓度为20、40或60mg/ml的溶液。在室温在搅拌器上机械搅拌后，溶液变得澄清。该溶液的pH低于7。然后用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到7。通过膜(0.22μM)过滤澄清的最终溶液然后放置在+4℃。
表3：使用浓度为10、20、40或60mg/ml的经取代聚氨基酸制备100IU/ml且pH 7的甘精胰岛素溶液
实施例B7：制备pH 7的甘精胰岛素/赖谷胰岛素比例为75/25的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/赖谷胰岛素组合物
将0.25ml的实施例B3之赖谷胰岛素溶液添加至0.75ml的根据实施例B6(a)中描述的方案制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以形成pH 7的组合物1ml。组合物是澄清的，证明甘精胰岛素和赖谷胰岛素在这些制剂条件下的良好溶解度。将该澄清溶液通过0.22μM过滤然后放置在+4℃。
实施例B8：制备pH 7的甘精胰岛素/赖脯胰岛素比例为75/25的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
将0.25ml的实施例B2之赖脯胰岛素溶液添加至0.75ml的根据实施例B6(a)中描述的方案制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以形成pH 7的组合物1ml。组合物是澄清的，证明甘精胰岛素和赖脯胰岛素在这些制剂条件下的良好溶解度。将该澄清溶液通过0.22μM过滤然后放置在+4℃。
实施例B9：制备pH 7的甘精胰岛素/门冬胰岛素比例为75/25的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/门冬胰岛素组合物
将0.25ml的实施例B1之门冬胰岛素溶液添加至0.75ml的实施例B6(a)中制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以形成pH 7的组合物1ml。组合物是澄清的，证明甘精胰岛素和门冬胰岛素在这些制剂条件下的良好溶解度。将该澄清溶液通过0.22μM过滤然后放置在+4℃。
实施例B10：制备pH 7的甘精胰岛素/人胰岛素比例为75/25的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/人胰岛素组合物
将0.25ml的实施例B5之人胰岛素溶液添加至0.75ml的实施例B6(a)中制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以形成pH 7的组合物1ml。组合物是澄清的，证明甘精胰岛素和人胰岛素在这些制剂条件下的良好溶解度。将该澄清溶液通过0.22μM过滤然后放置在+4℃。
实施例B11：制备pH 7的甘精胰岛素/赖谷胰岛素比例为60/40的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/赖谷胰岛素组合物
将0.4ml的实施例B3之赖谷胰岛素溶液添加至0.6ml的实施例B6(a)中制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以形成pH 7的组合物1ml。组合物是澄清的，证明甘精胰岛素和赖谷胰岛素在这些制剂条件下的良好溶解度。将该澄清溶液通过0.22μM过滤然后放置在+4℃。实施例B12：制备pH 7的具有甘精胰岛素/赖谷胰岛素比例为40/60的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/赖谷胰岛素组合物
将0.6ml的实施例B3之赖谷胰岛素溶液添加至0.4ml的实施例B6(a)中制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以形成pH 7的组合物1ml。组合物是澄清的，证明甘精胰岛素和赖谷胰岛素在这些制剂条件下的良好溶解度。将该澄清溶液通过0.22μM过滤然后放置在+4℃。
实施例B13：甘精胰岛素的沉淀
将1ml的实施例B4之甘精胰岛素的溶液添加至含有20mg/ml BSA(牛血清白蛋白)的PBS(磷酸盐缓冲盐水)溶液中。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀物，其与甘精胰岛素发挥作用的机制良好吻合(pH提高导致在注射处沉淀)。
在4000rpm进行离心以从上清液分离沉淀物。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。结果为甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。
实施例B14：经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素组合物的沉淀
将1ml实施例B6(a)中制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素溶液添加至2ml含有20mg/ml BSA(牛血清白蛋白)的PBS溶液中。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀物。
在4000rpm进行离心以从上清液分离沉淀物。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。结果为甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。
用相同浓度的其他经取代共聚氨基酸进行与实施例B6(a)和B14中描述的那些相同的溶解和沉淀测试，10mg/ml的经取代共聚氨基酸用于100IU/ml的甘精胰岛素溶液。结果为，对于B6(b)至B6(h)的所有组合物，在将1ml的组合物添加至2ml含有20mg/ml BSA(牛血清白蛋白)的PBS溶液中后，甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。结果总结在表4中。
表4：测试经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素组合物的溶解和沉淀
实施例B15：pH 7的甘精胰岛素/赖谷胰岛素比例为75/25的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/赖谷胰岛素组合物的沉淀
将1ml根据实施例B7之方案制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/赖谷胰岛素75/25组合物添加至2ml含有20mg/ml BSA(牛血清白蛋白)的PBS溶液中。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀物。
在4000rpm进行离心以从上清液分离沉淀物。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。结果为甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。
实施例B16：改变经取代共聚氨基酸的性质时多种组合物的沉淀
在其他共聚氨基酸存在下，在与实施例B15的那些相同的条件下测试其他甘精胰岛素沉淀。
结果整理在下表5中并且观察到保留了甘精胰岛素的溶解和沉淀。
表5：测试经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖谷胰岛素75/25组合物在pH 7的溶解和沉淀
实施例B17：改变餐时胰岛素的性质时多种组合物的沉淀
通过将0.75ml根据实施例B6(a)之方案制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素溶液与0.25ml餐时胰岛素混合制备组合物，以形成1ml的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/餐时胰岛素组合物(含有7.5mg/ml的经取代共聚氨基酸、75IU/ml的甘精胰岛素和25IU/ml的餐时胰岛素)。
将该组合物添加至2ml含有20mg/ml BSA(牛血清白蛋白)的PBS中。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀物。在4000rpm进行离心以从上清液分离沉淀物。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。结果为甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。在测试的4种餐时胰岛素存在下，甘精胰岛素从PBS/BSA混合物沉淀。结果整理在表6中。
表6：测试经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素/餐时胰岛素75/25组合物的溶解和沉淀
实施例B18：慢效胰岛素类似物(甘精胰岛素)的浓缩溶液的制备
将由Sanofi-Aventis公司以的名称销售的商业甘精胰岛素溶液在3kDa再生纤维素膜(由Millipore公司销售的Ultra-15)上通过超滤浓缩。在超滤步骤的结束时，通过反相液相色谱(RP-HPLC)在渗余物中测定甘精胰岛素的浓度。然后通过添加100IU/ml的商业甘精胰岛素溶液调节甘精胰岛素的终浓度，以获得期望的终浓度。这一过程使得获得多种浓度大于100IU/ml的称为C甘精胰岛素的甘精胰岛素浓缩溶液成为可能，使得C甘精胰岛素＝200、250、300和333IU/ml。通过0.22μM过滤浓缩的溶液然后贮存在+4℃。
实施例B19：商业速效胰岛素类似物(赖脯胰岛素)之溶液的透析
将由Eli Lilly公司以的名称销售的商业赖脯胰岛素溶液在3kDa再生纤维素膜(由Millipore公司销售的Ultra-15)上通过超滤透析。在pH 7的1mM磷酸盐缓冲液中进行透析。在透析步骤结束时，通过通过反相液相色谱(RP-HPLC)确定渗余物中经透析的浓度C赖脯胰岛素。经透析的溶液贮存在-80℃的冰箱中。
实施例B20：商业形式的速效胰岛素类似物(赖脯胰岛素)溶液的冻干
将商业形式的浓度为100IU/ml的速效赖脯胰岛素溶液之体积VHumalog放置在高压灭菌器中预先灭菌的托盘中。将托盘放置在80℃的冰箱中约1小时然后用温度20℃和压力0.31mbar的参数进行冻干。
将所产生的无菌冻干物在室温贮存。
实施例B21：已经被透析的商业速效胰岛素类似物(赖脯胰岛素)溶液的冻干
将浓度为C经透析的赖脯胰岛素的根据实施例B19获得的速效赖脯胰岛素溶液之体积V经透析的Humalog放置在高压灭菌器中预先灭菌的托盘中。将托盘放置在-80℃的冰箱中约1小时然后用温度20℃和压力0.31mbar的参数进行冻干。
将所产生的无菌冻干物在室温贮存。
实施例B22：根据使用液体形式的甘精胰岛素(溶液中)和固体形式的共聚氨基酸(冻干的)的流程，使用经取代共聚氨基酸5制备pH 7的经替代共聚氨基酸/甘精胰岛素组合物。
准确称出共聚氨基酸5的重量w共聚氨基酸。将该冻干物用根据实施例18制备甘精胰岛素浓缩溶液之体积V甘精胰岛素吸收以获得组合物，其具有共聚氨基酸浓度C共聚氨基酸(mg/ml)＝w共聚氨基酸/V甘精胰岛素和甘精胰岛素浓度C甘精胰岛素(IU/ml)。溶液是乳白色的。该溶液的pH约为6.3。通过添加浓NaOH将pH调节到7然后将溶液静止放在37℃的培养箱中约1小时直到获得完全溶解。将这一目视澄清的溶液之体积V共聚氨基酸/甘精胰岛素放置在+4℃。
实施例B23：根据使用液体形式的甘精(溶液中)和液体形式的共聚氨基酸(溶液中)的流程，使用经取代共聚氨基酸5制备pH 7的经替代共聚氨基酸5/甘精组合物。
将间甲酚、甘油和的浓溶液添加至pH 7的共聚氨基酸5的原液溶液(其具有浓度C共聚氨基酸原液)以获得在这些赋形剂下的浓度C共聚氨基酸原液/赋形剂(mg/ml)的共聚氨基酸溶液，所述赋形剂的量等同于在10ml瓶中以与商业溶液中描述的那些。
在灭菌罐中，将浓度为100IU/ml的以的名称销售的商业慢效甘精胰岛素溶液的体积VLantus，添加至浓度C共聚氨基酸原液/赋形剂(mg/ml)的共聚氨基酸溶液的体积V共聚氨基酸原液/赋形剂中。出现浑浊。通过添加浓NaOH将pH调节为pH7并且将溶液静止放置在37℃培养箱中约1小时直到获得完全溶解。将这一目视澄清的溶液放置在+4℃。
实施例B24：根据用于浓缩稀溶液的过程，使用经取代的共聚氨基酸5制备pH＝7的经浓缩共聚氨基酸5/甘精胰岛素组合物。
将实施例B23中描述的pH 7的稀共聚氨基酸5/甘精胰岛素组合物通过在3kDa再生纤维素膜(由Millipore公司销售的Ultra-15)上超滤浓缩。在超滤步骤结束时，渗余物是澄清的并且通过反相液相色谱(RP-HPLC)测定组合物中甘精胰岛素的浓度。如果必要，然后通过在具有间甲酚/甘油赋形剂的溶液中稀释将甘精胰岛素的浓度调节为期望的值，对于各个实体，浓度等同于在商业溶液(在10ml瓶中)中所描述的浓度。该溶液在pH 7是目视澄清的并且具有甘精浓度C甘精胰岛素(IU/ml)和共聚氨基酸浓度C共聚氨基酸(mg/ml)，将其放置在+4℃。
实施例B25：从速效赖脯胰岛素的冻干物商业形式制备pH 7的经取代共聚氨基酸5/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
将根据实施例B22制备的具有甘精浓度C甘精胰岛素(IU/ml)和共聚氨基酸5浓度C共聚氨基酸(mg/ml)的pH 7的共聚氨基酸5/甘精溶液之体积V共聚氨基酸/甘精胰岛素添加至通过体积V赖脯胰岛素之冻干获得的赖脯胰岛素冻干物(其制备在实施例B20中描述)，使得比例V共聚氨基酸/甘精胰岛素/V赖脯胰岛素＝100/C赖脯胰岛素，其中C赖脯胰岛素是组合物中靶向的赖脯胰岛素之浓度(IU/ml)。溶液是澄清的。通过添加氯化锌的浓溶液将制剂的锌浓度调节到期望的浓度C锌(μM)。通过添加浓NaOH或HCl将最终pH调节到7。
制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。该溶液通过0.22μM过滤并且放置在+4℃。
实施例B26：从通过商业溶液之透析获得的速效赖脯胰岛素之冻干物制备pH 7的经取代共聚氨基酸5/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
将根据实施例B22制备的具有甘精胰岛素浓度C甘精胰岛素(IU/ml)和共聚氨基酸5浓度C共聚氨基酸(mg/ml)的pH 7的共聚氨基酸5/甘精溶液之体积V共聚氨基酸/甘精胰岛素添加至通过体积V经透析的赖脯胰岛素之冻干获得的赖脯胰岛素冻干物(其制备在实施例B21中描述)，使得比例V共聚氨基酸/甘精胰岛素/V经透析的赖脯胰岛素＝C经透析的赖脯胰岛素/C赖脯胰岛素，其中C经透析的赖脯胰岛素是在商业溶液透析结束时获得的赖脯胰岛素(IU/ml)之浓度(其步骤描述在实施例B19中)，并且C赖脯胰岛素是组合物中靶向的赖脯胰岛素之浓度(IU/ml)。溶液是澄清的。通过添加氯化锌的浓溶液将制剂的锌浓度调节到期望的浓度Czinc(μM)。通过添加浓NaOH或HCl将最终pH调节到7。
制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。该溶液通过0.22μm过滤并且放置在+4℃。
实施例B27：制备甘精胰岛素浓度为200IU/ml并且赖脯胰岛素浓度为66IU/ml(比例为胰岛素的百分比：甘精胰岛素/赖脯胰岛素75/25)的pH 7的经取代共聚氨基酸5/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
根据实施例B18制备200IU/ml的甘精胰岛素浓缩溶液。根据实施例B22中描述的制备方法从共聚氨基酸5制备pH 7的共聚氨基酸5(20mg/ml)/甘精胰岛素200IU/ml的组合物。根据实施例B25中描述的制备方法，将该共聚氨基酸5/甘精胰岛素200IU/ml组合物添加至通过商业形式的速效类似物之溶液的冻干获得的赖脯胰岛素冻干物。溶液是澄清的。通过添加氯化锌的浓溶液将制剂的锌含量调节到期望的浓度。通过添加浓NaOH或HCl将最终pH调节到7。
制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。该溶液通过0.22μm过滤并且放置在+4℃。
该组合物在表11中描述。
根据与实施例B27中描述的相同的制备方法，还用其他共聚氨基酸制备pH 7的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物，经取代共聚氨基酸的浓度为至多40mg/ml。这些制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。这些组合物导致在表7中所列的实施例。
表7
实施例
经取代共聚氨基酸
B28
3
B29
4
B30
7
B31
8
实施例B32：制备甘精胰岛素浓度为300IU/ml并且赖脯胰岛素浓度为100IU/ml(比例为胰岛素的百分比：甘精胰岛素/赖脯胰岛素75/25)的pH 7的经取代共聚氨基酸5/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
根据实施例B18制备300IU/ml的甘精胰岛素浓缩溶液。根据实施例B22中描述的制备方法从共聚氨基酸5制备pH 7的共聚氨基酸5(10mg/ml)/甘精胰岛素300IU/ml的组合物。根据实施例B25中描述的制备方法，将该共聚氨基酸5/甘精胰岛素300IU/ml组合物添加至通过商业形式的速效类似物溶液之冻干获得的赖脯胰岛素冻干物。溶液是澄清的。通过添加氯化锌的浓溶液将制剂的锌浓度调节到期望的浓度。通过添加浓NaOH或HCl将最终pH调节到7。
制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。该溶液通过0.22μM过滤并且放置在+4℃。该组合物在表7中描述。
根据与实施例B32中描述的相同的制备方法，还用其他共聚氨基酸制备pH 7的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物，经取代共聚氨基酸的浓度为至多40mg/ml。这些制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。这些组合物导致在表8中所列的实施例。
表8
实施例
经取代共聚氨基酸
B33
2
B34
3
B35
7
B36
8
实施例B37：制备甘精胰岛素浓度为250IU/ml并且赖脯胰岛素浓度为150IU/ml(比例为胰岛素的百分比：甘精胰岛素/赖脯胰岛素63/37)的pH 7的经取代共聚氨基酸5/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
根据实施例B18制备250IU/ml的甘精胰岛素浓缩溶液。根据实施例B22中描述的制备方法从共聚氨基酸5制备pH 7的共聚氨基酸5(25mg/ml)/甘精胰岛素250IU/ml组合物。根据实施例B25中描述的制备方法，将该共聚氨基酸5/甘精胰岛素250IU/ml组合物添加至通过商业形式的速效类似物之溶液的冻干获得的赖脯胰岛素冻干物。溶液是澄清的。通过添加氯化锌的浓溶液将制剂的锌浓度调节到期望的浓度。通过添加浓NaOH或HCl将最终pH调节到7。
制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。该溶液通过0.22μM过滤并且放置在+4℃。
该组合物在表11中描述。
根据与实施例B37中描述的相同的制备方法，还用其他共聚氨基酸制备pH 7的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物，经取代共聚氨基酸的浓度为至多40mg/ml。这些制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。这些组合物导致在表9中所列的实施例。
表9
实施例
经取代共聚氨基酸
B38
3
B39
7
B40
8
实施例B41：制备甘精胰岛素浓度为333IU/ml并且赖脯胰岛素浓度为67IU/ml(比例为胰岛素的百分比：甘精胰岛素/赖脯胰岛素83/17)的pH 7的经取代共聚氨基酸5/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物
根据实施例B18制备333IU/ml的甘精胰岛素浓缩溶液。根据实施例B22中描述的制备方法从共聚氨基酸5制备pH 7的共聚氨基酸5(33mg/ml)/甘精胰岛素300IU/ml组合物。根据实施例B25中描述的制备方法，将该共聚氨基酸5/甘精胰岛素333IU/ml组合物添加至通过商业形式的速效类似物之溶液的冻干获得的赖脯胰岛素冻干物。溶液是澄清的。通过添加氯化锌的浓溶液将制剂的锌浓度调节到期望的浓度。通过添加浓NaOH或HCl将最终pH调节到7。
制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。该溶液通过0.22μM过滤并且放置在+4℃。
该组合物在表11中描述。
根据与实施例B41中描述的相同的制备方法，还用其他共聚氨基酸制备pH 7的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物，经取代共聚氨基酸的浓度为至多40mg/ml。这些制剂是澄清的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素和赖脯胰岛素的良好溶解度。这些组合物导致在表10中所列的实施例。
表10
实施例
经取代共聚氨基酸
B42
3
B43
7
B44
8
实施例B45：具有多种浓度的甘精胰岛素和赖脯胰岛素并且2种胰岛素之多种相对比例的pH 7的多种经替代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物之沉淀
将在实施例B27至B44中制备的1ml的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物添加至2ml的含有20mg/ml之BSA(牛血清白蛋白)的PBS溶液。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀。在4000rpm进行离心以将沉淀从上清液分离。接着通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。结果为甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。
溶解和沉淀结果总结在表11中。
表11：测试具有多种浓度的甘精胰岛素和赖脯胰岛素并且2种胰岛素之多种相对比例的pH 7的多种经替代共聚氨基酸/甘精胰岛素/赖脯胰岛素组合物的沉淀
C部分：证明包含根据本发明之GLP-1类似物或衍生物的组合物的性质实施例C1：0.25mg/ml的GLP-1类似物艾塞那肽溶液
该溶液是由Eli Lilly and Company公司以的名称销售的艾塞那肽溶液。
实施例C2：6mg/ml的GLP-1衍生物利拉鲁肽溶液
该溶液是由Novo Nordisk公司以均名称销售的利拉鲁肽溶液。
实施例C3：制备pH 7.5的70/30组合物
将0.09ml的实施例C1之艾塞那肽溶液添加至0.21ml的实施例B4之甘精胰岛素溶液，以获得0.3ml的组合物，其pH在混合中为4.5。含有70IU/ml之甘精胰岛素和0.075mg/ml之艾塞那肽的组合物是澄清的，证明在这些制剂条件(pH 4.5)下甘精胰岛素和艾塞那肽的良好溶解度。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到7.5。然后组合物变得浑浊，证明甘精胰岛素/艾塞那肽组合物在pH 7.5的差溶解度。
根据类似于实施例C3中描述的类似方案还在pH 4.5-5.5-6.5-8.5和9.5制备70/30组合物。对于这些组合物中的每一个，将0.09ml的实施例C1之艾塞那肽溶液添加至0.21ml的实施例B4之甘精胰岛素溶液，以获得0.3ml的组合物，其pH在混合中为4.5。这些组合物是澄清的，证明在这些制剂条件(pH 4.5)下甘精胰岛素和艾塞那肽的良好溶解度。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到5.5或6.5或8.5或9.5。调节pH后，pH 5.5的组合物轻微浑浊，pH 6.5和8.5的组合物非常浑浊并且pH 9.5的组合物是澄清的。将这些组合物放置在+4℃下48小时。在+4℃下48小时后，仅pH 4.5的组合物是澄清的。多种pH的70/30组合物的48小时后目视外观总结在表12中。
表12：多种pH的70/30组合物在4℃下48小时后的目视外观
实施例C4：制备pH 7.5的70/30组合物
将0.09ml的实施例C2之利拉鲁肽溶液添加至0.21ml的实施例B4之甘精胰岛素溶液，以获得0.3ml的组合物，其pH在混合中为7。含有70IU/ml之甘精胰岛素和1.8mg/ml之利拉鲁肽的组合物是浑浊的，证明在这些制剂条件下甘精胰岛素/利拉鲁肽组合物的差溶解度。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到7.5。调节pH后，组合物保持浑浊。将该组合物放置在+4℃48小时。
根据类似于实施例C4中描述的类似方案还在pH 4.5、5.5、6.5、8.5和9.5制备70/30组合物。对于这些组合物中的每一个，将0.09ml的实施例C2之利拉鲁肽溶液添加至0.21ml的实施例B4之甘精胰岛素溶液，以获得0.3ml的组合物，其pH为7。这些组合物是浑浊的，证明在这些制剂条件(pH 7)下甘精胰岛素/利拉鲁肽组合物的差溶解度。用0.1N的盐酸溶液将pH调节到4.5或5.5或6.5或用0.1N氢氧化钠调节到pH 9.5。调节pH后，pH 4.5-5.5-6.5和8.5的组合物是浑浊的，证明这些制剂条件下甘精胰岛素/利拉鲁肽组合物的差溶解度。将这些组合物放置在+4℃48小时。在+4℃48小时后，仅pH 9.5的组合物是澄清的。多种pH的70/30组合物的48小时后目视外观总结在表13中。
表13：多种pH的70/30组合物在4℃下48小时后目视外观
实施例C5：制备pH 7的比例为70/30的经取代共聚氨基酸组合物
将0.09ml的实施例C1之艾塞那肽溶液添加至0.21ml的根据实施例B6(a)之方案制备的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素之溶液，以获得0.3ml的pH 5.3的组合物。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到7。含有7mg/ml的经取代共聚氨基酸1、70IU/ml之甘精胰岛素和0.075mg/ml之艾塞那肽的组合物是澄清的，证明在pH 7的经取代共聚氨基酸1的存在下甘精胰岛素和艾塞那肽的良好溶解度。将该澄清溶液放置在+4℃。
普适化：根据与实施例C5中描述的相同的方案，还以VLantus/VByetta体积比90/10、50/50和30/70制备pH 7的经取代共聚氨基酸组合物。因此，将实施例C1之艾塞那肽溶液的体积VByetta添加至根据实施例B6制备的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素溶液之体积V共聚氨基酸/甘精胰岛素，以获得组合物，其pH用0.1N氢氧化钠溶液调节至7。获得的组合物(见表14)是澄清的，证明在pH 7的经取代共聚氨基酸1的存在下甘精胰岛素和艾塞那肽的良好溶解度。将这些澄清溶液放置在+4℃。
实施例C6：制备pH 7的比例为100/50的经取代聚氨基酸组合物
将0.150ml的实施例C1之艾塞那肽溶液冻干，然后将0.3ml的根据实施例B6(a)之方案制备的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素之溶液添加至冻干物，以获得组合物，其pH用0.1N氢氧化钠溶液调节到7。含有10mg/ml的经取代共聚氨基酸1、100IU/ml之甘精胰岛素和0.125mg/ml之艾塞那肽的组合物是澄清的，证明在pH 7的经取代共聚氨基酸1的存在下甘精胰岛素和艾塞那肽的良好溶解度。将该澄清溶液放置在+4℃。
表14：在实施例C5和C6中获得的最终甘精胰岛素、经取代共聚氨基酸1和艾塞那肽溶度
实施例C7：制备pH 7的比例为70/30的经取代共聚氨基酸组合物
将0.09ml的实施例C2之利拉鲁肽溶液添加至0.21ml的根据实施例B6(a)之方案制备的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素之溶液，以获得0.3ml的pH 7.6的组合物。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到7。含有7mg/ml之经取代共聚氨基酸1、70IU/ml之甘精胰岛素和1.8mg/ml之利拉鲁肽的组合物是澄清的，证明在pH 7的经取代共聚氨基酸1的存在下甘精胰岛素和利拉鲁肽的良好溶解度。将该组合物放置在+4℃。获得的最终组合物总结在表15中。
普适化：根据与实施例C7中描述的相同的方案，还以VLantus/VVictoza体积比90/10、50/50和30/70制备pH 7的经取代共聚氨基酸/组合物。因此，将实施例C2之利拉鲁肽溶液的体积VVictoza添加至根据实施例B6之方案制备的共聚氨基酸浓度为40mg/ml的经取代共聚氨基酸1/甘精胰岛素溶液之体积V共聚氨基酸/甘精胰岛素，以获得组合物，其pH用0.1N盐酸溶液调节至7。
获得的组合物(见表15)是澄清的，证明在pH 7的经取代共聚氨基酸的存在下甘精胰岛素和利拉鲁肽的良好溶解度。将这些澄清溶液放置在+4℃。
表15：在实施例C7中获得的最终甘精胰岛素、经取代共聚氨基酸1和利拉鲁肽溶度
实施例C8：制备pH 7的比例为60/20/20的经取代的共聚氨基酸组合物
准确称出20mg冻干的经取代共聚氨基酸1。该冻干物用2ml的实施例B4之溶液吸收。在室温用搅拌器机械搅拌后溶液变得澄清。该溶液的pH为6.3。用0.1N氢氧化钠溶液将pH调节到7。将0.2ml的实施例C1之艾塞那肽溶液和0.2ml的实施例B3之赖谷胰岛素溶液添加至0.6ml的预先准备的经取代共聚氨基酸/甘精胰岛素溶液，以获得1ml的pH 7的组合物。含有6mg/ml之经取代共聚氨基酸1、60IU/ml之甘精胰岛素、20IU/ml之赖谷胰岛素和0.05mg/ml之艾塞那肽的组合物是澄清的，证明在pH 7的经取代共聚氨基酸1的存在下甘精胰岛素、赖谷胰岛素和艾塞那肽的良好溶解度。将该澄清溶液通过膜(0.22μM)过滤，然后放置在+4℃。
实施例C9：比例为70/30的pH 7的经取代共聚氨基酸组合物的沉淀
将根据实施例C5之方案制备的0.250ml的经取代共聚氨基酸组合物添加至0.5ml的含有20mg/ml之BSA的PBS溶液。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀。
在4000rpm进行离心以将沉淀从上清液分离。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。结果总结在表16中。
实施例C10：比例为70/30的pH 7的经取代共聚氨基酸组合物的沉淀
将根据实施例C7之方案制备的0.250ml的经取代共聚氨基酸组合物添加至0.5ml的含有20mg/ml之BSA(牛血清白蛋白)的PBS溶液。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀。
在4000rpm进行离心以将沉淀从上清液分离。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。结果总结在表17中。
实施例C11：改变经取代共聚氨基酸的本质时多种组合物的沉淀
在其他经取代共聚氨基酸的存在下，在与实施例C9和C10中描述的那些相同的条件下进行其他测试，并且分别呈现在表16和17中。
至多10mg/ml经取代共聚氨基酸和pH 7的70/30的结果整理在下表16中。观察到保留了甘精胰岛素的溶解和沉淀。
表16：用至多42mg/ml或10mg/ml的经取代共聚氨基酸和pH 7的70/30组合物获得的溶解和沉淀测试的结果
用至多40mg/ml的经取代共聚氨基酸和pH 7的70/30组合物的结果整理在下表17中。观察到保留了甘精胰岛素的溶解和沉淀。
表17：用至多40mg/ml或42mg/ml的经取代共聚氨基酸和pH 7的70/30组合物获得的溶解和沉淀测试的结果
实施例C12：pH 7的经取代共聚氨基酸60/20/20组合物的沉淀
将实施例C8中制备的0.250ml的经取代共聚氨基酸组合物添加至0.5ml的含有20mg/ml之BSA的PBS溶液。PBS/BSA混合物模拟皮下介质的组成。出现沉淀。在4000rpm进行离心以将沉淀从上清液分离。接着，通过RP-HPLC在上清液中分析甘精胰岛素。甘精胰岛素主要见于沉淀形式中。
D部分：证明根据本发明之组合物的药效学性质
实施例D1：用于测量胰岛素溶液之药效学的方案
称重约50kg的家猪10只(预先在颈静脉的水平插管)，在开始实验前剥夺食物2.5小时。在胰岛素注射之前的小时中，采集3次血液样品以确定基础葡萄糖水平。
使用装配了31G针头的Novopen胰岛素笔剂(stylo à insuline)在动物的颈中、耳朵下皮下给予胰岛素注射。在给予双注射作为对照的情况下，注射在颈的每一侧进行。
然后采集血液样品，每10分钟一次持续1小时，然后每30分钟一次直至2小时，然后每小时一次直至16小时。在每次样品采集后，用稀肝素溶液冲洗导管。
采集一滴血以通过血糖仪来确定血糖水平。
然后绘出并比较葡萄糖药效学曲线。
实施例D2：胰岛素溶液的药效学结果
用实施例B2和B4中描述的制剂获得的药效学结果在图1中给出。根据本发明，这些曲线的分析示出(图1)，实施例B32之共聚氨基酸5作为赋形剂的组合的pH 7的甘精胰岛素(300IU/ml)/赖脯胰岛素(100IU/ml)制剂(三角形△)，表现类似于制剂B2和B4的对照双注射(实心正方形■)。在第一个30分钟内血糖水平的降低类似于两种制剂，表明共聚氨基酸5的存在没有干扰赖脯胰岛素的快速性质(nature)。同样，对应于速效胰岛素之末期的30分钟至4小时和对应于基础胰岛素之4小时至16小时的特征曲线对于对照双注射和制剂是相似的。因此，在共聚氨基酸5的存在下，赖脯胰岛素和甘精胰岛素两种胰岛素的组合不改变这两种胰岛素的特征曲线。
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