一种橡木中鞣花酸的制备方法
阅读说明：本技术 一种橡木中鞣花酸的制备方法 (Preparation method of ellagic acid in oak ) 是由 石万银 徐剑 杨跃军 李韦琴 王道清 于 2021-07-13 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种橡木中鞣花酸的制备方法,包括提取、干燥、纯化,馏分收集和浓缩步骤,使用液相色谱柱对橡木提取物直接进行分离纯化,操作简单,转移率高,只需在相应时间收集洗脱液即可获取高纯度鞣花酸,工艺简单、操作方便、周期短、效率高。(The invention relates to a preparation method of ellagic acid in oak, which comprises the steps of extraction, drying, purification, fraction collection and concentration, wherein the oak extract is directly separated and purified by using a liquid chromatographic column, the operation is simple, the transfer rate is high, the high-purity ellagic acid can be obtained by collecting eluent only in corresponding time, and the preparation method has the advantages of simple process, convenience in operation, short period and high efficiency.)
技术领域
本发明属于植物提取物制备
技术领域
，具体涉及一种橡木中鞣花酸的制备方法。背景技术
橡木主要成分为纤维素，半纤维素，木质素，鞣酸单宁，微量成分。在长期自然老熟过程中，依靠酒精、水、酒中的酸及空气中的氧的缓慢作用，木质素、单宁及半纤维素等大分子物质分解氧化，生成各种香味成分，鞣花酸为橡木单宁分解后产物的典型代表。
研究表明鞣花酸有很强的清除自由基和抗氧化能力。鞣花酸对氧自由基和羟自由基都有清除作用，其清除自由基的能力大小比芝麻酚、橄榄叶萃取物和叶黄素、元青花素等抗氧化物都高。鞣花酸表现出对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用，特别是对结肠癌、食管癌、肝癌、肺癌、舌及皮肤肿瘤等有很好的抑制作用。
目前的鞣花酸的制备主要采用石榴皮、蓝莓、诃子等为原料，通过加热提取、膜分离、树脂纯化、生物转化、有机溶剂萃取等方法处理，这些方法有工艺复杂、操作不方便、周期长、效率低等缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方便直接、工艺简单、生产成本低、易推广、鞣花酸纯度高的纯化方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种橡木中鞣花酸的制备方法，包括以下操作步骤：
提取：取橡木粉碎，加乙醇加热提取2-3次，粗滤后得橡木粗提液；
干燥：对橡木粗提液进行浓缩干燥，去除乙醇，得到橡木提取物；
纯化：向橡木提取物中加入乙醇溶液溶解，过滤后使用倒入色谱柱进行洗脱；
洗脱液收集：收集相应时间的洗脱液，即得鞣花酸洗脱液；
浓缩：对鞣花酸洗脱液进行浓缩，即得鞣花酸。
优选的是，所述提取步骤中，乙醇浓度为60％-70％。
优选的是，所述提取步骤中，橡木质量(g)与乙醇体积(ml)比为：橡木质量(g)∶乙醇体积(ml)＝1∶10-15。
优选的是，所述提取步骤中的提取操作步骤为，在80℃-90℃下加热回流提取2-3次，每次1-2小时。
优选的是，所述纯化步骤中，橡木提取物中加入40-60倍量60％-70％乙醇溶液进行超声溶解。
优选的是，所述纯化操作步骤中，使用C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％-0.2％甲酸，流速25-35mL/min，洗脱梯度如下：
时间(min)
乙腈(％)
0.1％-0.2％甲酸(％)
0
3-5
97-95
5
3-5
97-96
18
7-10
93-90
30
12-15
88-85
60
27-30
73-70
优选的是，所述纯化操作步骤中，色谱柱柱温为25-35℃。
优选的是，所述鞣花酸洗脱液的收集时段为50-55min。
优选的是，所述浓缩步骤中，采用减压真空浓缩干燥,温度55-65℃。
本发明具有如下有益效果：
一、工艺简单，生产周期短：鞣花酸制备的常规工艺，提取后需要先进行树脂纯化或者有机溶剂萃取等方法。而本发明将橡木片提取液直接浓缩干燥后上制备液相进行分离纯化，从而得到高纯度的鞣花酸，同时达到了简化工艺、缩短周期的目的。
二、高转移率：鞣花酸制备的常规工艺，需要将橡木片提取液浓缩后经过树脂纯化、有机溶剂萃取等操作，鞣花酸损耗较大，而本发明将橡木片提取液浓缩干燥后直接上高效制备液相进行分离纯化，提高了鞣花酸的转移率。
三、产物纯度高：橡木片提取浓缩液经过高效制备液相分离纯化，得到高纯度的鞣花酸单体。
具体实施方式
实施例1
提取：取橡木片粉碎，加60％乙醇溶液提取3次，每次加1000mL，80℃下回流提取1小时，收集并合并滤液，滤网粗滤，粗滤后得橡木片粗提液。
干燥：将上述橡木提取液55℃减压浓缩干燥，得到橡木提取物12g。
纯化：取干燥后的提取物适量加入40倍量60％乙醇超声溶解，过微孔滤膜后倒入C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％甲酸按照下表梯度洗脱，流速25mL/min，检测波长265nm,柱温25℃。
洗脱液收集：收集鞣花酸洗脱液(收集时间段为50-55min)；
浓缩：将洗脱液减压真空浓缩干燥,温度为55℃，即得鞣花酸成品。
实施例2
提取：取100g橡木片粉碎，加65％乙醇溶液提取2次，每次加1200mL，85℃下回流提取1.5小时，收集并合并滤液，滤网粗滤，粗滤后得橡木粗提液。
干燥：将上述橡木粗提液60℃减压浓缩干燥，得到橡木提取物11.8g。
纯化：取干燥后的提取物适量加入50倍量65％乙醇超声溶解，过微孔滤膜后倒入C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.15％甲酸按照下表梯度洗脱，流速30mL/min，检测波长270nm,柱温30℃，
洗脱液收集：收集鞣花酸洗脱液(收集时间段为50-55min)；
浓缩：将洗脱液减压真空浓缩干燥,温度为55℃，即得鞣花酸成品。
实施例3
提取：取100g橡木片粉碎，加70％乙醇溶液提取3次，每次加1500mL，90℃下回流提取2小时，收集并合并滤液，滤网粗滤，粗滤后得橡木片粗提液。
干燥：将上述橡木提取液65℃减压浓缩干燥，得到橡木提取物12.3g。
纯化：取干燥后的提取物适量加入60倍量60％乙醇超声溶解，过微孔滤膜后倒入C18反相色谱柱，流动相为乙腈-0.2％甲酸按照下表梯度洗脱，流速35mL/min，检测波长275nm,柱温35℃，
洗脱液收集：收集鞣花酸洗脱液(收集时间段为50-55min)；
浓缩：将洗脱液减压真空浓缩干燥,温度为55℃，即得鞣花酸成品。
对比例1
选择HPD-600大孔树脂柱对鞣花酸粗提液进行了初次的分离纯化:静态吸附时间为6h,以50％乙醇溶液作为洗脱液,解吸时间为3h；样品浓度控制在2.5mg/mL,流速为3mL/min,进样体积为50mL,之后采用60％乙醇溶液进行洗脱,再用大孔树脂CG-161进行二次分离纯化:静态吸附时间为3.5h,吸附温度25℃,采用13％氢氧化钠-60％乙醇溶液为洗脱剂；上样体积为40mL,洗脱流速为3mL/min，对洗脱液进行真空浓缩干燥，即得鞣花酸。
对各实施例中的产品进行称量，测定纯度并计算产率，最终结果如表1
表1
样品
成品质量(mg)
产率(％)
纯度(％)
实施例1
450
0.45
98.05
实施例2
490
0.49
96.59
实施例3
420
0.42
97.02
对比例1
530
0.53
80.18
从各实施例的最终产物的纯度数据可以看出，使用本发明方法从橡木中提取出的鞣花酸纯度极高，几乎不含其它杂质；与常见的大孔树脂纯化法相比，本发明中的方法制取的鞣花酸纯度提高了近20％，并且操作更加简便，无需进行多次纯化洗脱，只需要收集色谱柱洗脱液即可制备出纯度极高的鞣花酸成品。