本发明公开了一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途,所述重组溶瘤痘苗病毒可操作地插入能够表达CD47纳米抗体的外源基因,所述外源基因插入痘苗病毒TK基因中;所述外源基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示;所述外源基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。重组溶瘤痘苗病毒在制备用于预防或治疗肿瘤或/和癌症的药物中的用途。所述肿瘤或/和癌症包括乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、结肠腺癌。本申请创造性地将CD47纳米抗体基因插入溶瘤痘苗病毒,使得溶瘤痘苗病毒在肿瘤细胞中复制并裂解细胞,杀死肿瘤细胞的同时,表达CD47纳米抗体,促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用,从而提高了治疗效果。