Fcrn抗体及其使用方法

文档序号：1102037 发布日期：2020-09-25 浏览：7次 >En<

阅读说明：本技术 Fcrn抗体及其使用方法 (FCRN antibodies and methods of use thereof ) 是由 L·E·凌 D·尼克斯 N·A·克利丰于 2018-12-13 设计创作，主要内容包括：本发明的特征在于结合人新生儿Fc受体(FcRn)的抗体。这些抗-FcRn抗体可用于,例如,促进受试者中自身抗体的清除,抑制受试者中的抗原呈递,阻断免疫应答,例如阻断受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活,和治疗受试者中的免疫性疾病(例如,自身免疫疾病)。这些抗-FcRn抗体也可用于,例如,减少经怀孕受试者的胎盘的病原性抗体运输,增加怀孕受试者中的病原性抗体分解代谢,和治疗胎儿或新生儿中抗体介导的病毒性疾病增强。(The invention features antibodies that bind to human neonatal Fc receptor (FcRn). These anti-FcRn antibodies are useful, for example, to promote clearance of autoantibodies in a subject, inhibit antigen presentation in a subject, block an immune response, e.g., block immune complex-based activation of an immune response in a subject, and treat an immune disease (e.g., an autoimmune disease) in a subject. These anti-FcRn antibodies may also be used, for example, to reduce pathogenic antibody trafficking through the placenta of a pregnant subject, to increase pathogenic antibody catabolism in a pregnant subject, and to treat antibody-mediated viral disease enhancement in a fetus or neonate.)

FCRN抗体及其使用方法

背景技术

治疗性蛋白质(例如治疗性抗体)已迅速成为具有免疫性疾病的患者的临床上重要的药物类别。众多自身免疫和同种免疫疾病是由病原性抗体介导的。需要治疗免疫性疾病的新方法。

发明内容

本发明表征了针对人新生儿Fc受体(FcRn)的新抗体。这些抗-FcRn抗体可用于，例如，促进受试者中自身抗体的清除，抑制受试者中的抗原呈递，阻断免疫应答，例如阻断受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活，或治疗受试者中的免疫性疾病(例如，自身免疫疾病)。

在一个方面，本发明表征了结合人FcRn的分离的抗体。所述分离的抗体含有：(1)包括CDR L1、CDRL2和CDR L3的轻链可变区和(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区，其中所述CDR L1包含与TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列相比具有不超过两个氨基酸置换的序列，所述CDR L2包含与GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列，所述CDR L3包含与SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列，所述CDR H1包含与TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列，所述CDR H2包含与SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGASGAQTRYADS(SEQ IDNO:9)或SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)的序列相比具有不超过两个氨基酸置换的序列，且所述CDR H3包含与LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列。

在某些实施方案中，所述抗体以小于200、150、100、50或40pM的K_D结合人FcRn。

在某些实施方案中，所述抗体结合人FcRn的K_D小于或等于具有N022、N023、N024、N026或N027的轻链可变区和重链可变区且进一步具有与它所对比的抗体相同的Fc区的抗体。在另一个方面，本发明表征了一种分离的抗体，其含有：(1)包括CDR L1、CDR L2和CDRL3的轻链可变区和(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区，其中所述CDR L₁包含X1GTGSDVGSYNX₂VS(SEQ ID NO:12)的序列，所述CDR L2包含GDX₃X₄RPS(SEQ ID NO:13)的序列，所述CDR L3包含X₅SYX₆GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列，所述CDRH1包含Z₁YAMG(SEQ IDNO:15)的序列，所述CDR H2包含SIGZ₂SGZ₃QTZ₄YADS(SEQ ID NO:16)的序列，且所述CDR H3包含LAZ₅Z₆DSY(SEQ ID NO:17)的序列，其中X₁是极性的或疏水的氨基酸,X₂是疏水的氨基酸,X₃是极性的氨基酸,X₄是极性的或酸性的氨基酸，X₅是极性的或疏水的氨基酸,X₆是疏水的氨基酸，Z₁是极性的或酸性的氨基酸，Z₂是极性的或疏水的氨基酸，Z₃是G、S或A，Z₄是碱性的氨基酸，Z₅是疏水的或碱性的氨基酸，且Z₆是G、S、D、Q或H，且其中所述抗体结合人FcRn的K_D小于或等于具有N026的轻链可变区和重链可变区且进一步具有与所对比的抗体相同的Fc区的抗体。在某些实施方案中，X₁是T、A、S或I。在其它实施方案中，X₂是L或I。在某些实施方案中，X₃是S、N或T。在其它实施方案中，X₄是Q、E或N，X₅是C、S、I或Y。在某些实施方案中，X₆是A或V，Z₁是E、T、D或N。在其它实施方案中，Z₂是S或A。在某些实施方案中，Z₄是K或R。在其它实施方案中，Z₅是I、L或H。

在另一个方面，本发明表征了一种分离的抗体，其含有轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2和具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3，所述重链可变区包括具有Z₁YAMG(SEQ ID NO:15)的序列的CDR H1，具有SIGZ₂SGZ₃QTRYADS(SEQ IDNO:18)的序列的CDR H2，和具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDR H3，其中Z₁是T、D或N，Z₂是S或A，且Z₃是G、S或A。

在某些实施方案中，所述分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有TYAMG(SEQ ID NO:4)的序列的CDR H1、具有SIGSSGAQTRYADS(SEQID NO:7)的序列的CDR H2和具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。

在某些实施方案中，所述分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有DYAMG(SEQ ID NO:5)的序列的CDR H1、具有SIGASGSQTRYADS(SEQID NO:8)的序列的CDR H2和具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。

在某些实施方案中，所述分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列的CDR H1、具有SIGASGAQTRYADS(SEQID NO:9)的序列的CDR H2和具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。

在其它实施方案中，所述分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有TYAMG(SEQ ID NO:4)的序列的CDR H1、具有SIGASGGQTRYADS(SEQID NO:10)的序列的CDR H2和具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。

在其它实施方案中，所述分离的抗体含有具有TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDRL1、具有GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2、具有SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列的CDR L3、具有TYAMG(SEQ ID NO:4)的序列的CDR H1、具有SIGASGSQTRYADS(SEQID NO:8)的序列的CDR H2和具有LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDRH3。

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体的轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQID NO:19)。

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:20)。

在其它实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:21)。

在其它实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:22)。

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:23)。

在其它实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQID NO:24)。

在另一个方面，本发明表征了一种分离的含有轻链和重链的抗体，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

在再一个方面，本发明表征了一种分离的含有轻链和重链的抗体，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列具有至少95％、97％、99％或100％同一性的序列。在其它实施方案中，本发明的分离的抗体的轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少95％、97％、99％或100％同一性的序列。

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体进一步包括与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的氨基酸置换N297A。

在其它实施方案中，所述分离的抗体进一步包括与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的氨基酸置换D355E和L357M。

在其它实施方案中，本发明的分离的抗体进一步包括下述氨基酸置换中的任意一种或多种：与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的A23V、S30R、L80V、A84T、E85D、A93V，和与SEQ ID NO:19的序列相比的Q38H、V58I和G99D。

在其它实施方案中，与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比，本发明的分离的抗体不含有在残基446处的C-端赖氨酸。

在某些实施方案中，以上方面中的任一个的抗体结合人FcRn的K_D小于或等于具有N022、N023、N024、N026或N027的轻链可变区和重链可变区且也具有与所对比的抗体相同的Fc区的抗体。例如，在特定K_D测定中，所述抗体的K_D小于200、150、100、50或40pM。

根据Kabat的EU索引(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))定义分配给本文所述的任何分离的抗体的互补决定区(CDR)和框架区(FR)的氨基酸位置。

在另一个方面，本发明表征了一种分离的含有轻链和重链的抗体，其中所述轻链包含序列

在再一个方面，本发明表征了一种分离的含有轻链和重链的抗体，其中所述轻链包含序列

在以上方面中的任一个的某些实施方案中，本发明的分离的抗体是单克隆抗体。在某些实施方案中，所述分离的抗体是IgG1。在某些实施方案中，所述分离的抗体包括λ轻链。在某些实施方案中，所述分离的抗体包括κ轻链。

在以上方面中的任一个的某些实施方案中,本发明的分离的抗体是人源化或全人抗体。

在某些实施方案中，所述分离的抗体以1-100、5-150、5-100、5-75、5-50、10-50或10-40pM的K_D结合人FcRn。

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体结合啮齿动物(例如，小鼠或大鼠)FcRn。在某些实施方案中，本发明的分离的抗体以小于200、150、100、50或40pM的K_D结合啮齿动物(例如，小鼠或大鼠)FcRn。

在另一个方面，本发明表征了一种核酸分子，其编码本文描述的任何分离的抗体。

在再一个方面，本发明表征了一种载体，其含有编码本文描述的任何抗体的核酸分子。

在另一个方面，本发明表征了一种宿主细胞，其表达本文描述的任何分离的抗体。所述宿主细胞包括编码本文描述的任何分离的抗体的核酸分子或含有编码本文描述的任何分离的抗体的核酸分子的载体，其中所述核酸分子或载体由所述宿主细胞表达。

在某些实施方案中，所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在某些实施方案中，所述宿主细胞是Sp2细胞或NS0细胞。

在另一个方面，本发明表征了一种制备本文描述的任何分离的抗体的方法。所述方法包括：a)提供宿主细胞，其包括编码本文描述的任何分离的抗体的核酸分子或含有编码本文描述的任何分离的抗体的核酸分子的载体，和b)在允许所述抗体形成的条件下在所述宿主细胞中表达所述核酸分子或载体。

在某些实施方案中，所述方法包括从所述宿主细胞回收所述抗体的步骤，例如，在约1-100、1-50、1-25、2-50、5-50或2-20mg/ml的浓度。

在其它实施方案中，在所述方法中使用的宿主细胞是CHO细胞。

在另一个方面，本发明表征了一种药物组合物，其包括本文描述的任何分离的抗体和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

在某些实施方案中，所述药物组合物包括治疗有效剂量的抗体。

在另一个方面，本发明表征了一种增加受试者中的IgG分解代谢的方法。在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中的自身抗体的方法。在再一个方面，本发明表征了一种治疗或减少受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活的方法。所述方法包括给所述受试者施用本文描述的任何分离的抗体或包含本文描述的任何分离的抗体的药物组合物。

在某些实施方案中，所述受试者中的免疫应答是急性或慢性免疫应答。

在某些实施方案中，所述受试者具有选自以下的医学病症或所述急性免疫应答被选自以下的医学病症活化：寻常型天疱疮、狼疮肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗-磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力损失、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。

在某些实施方案中，所述受试者具有选自以下的医学病症或所述慢性免疫应答被选自以下的医学病症活化：慢性炎症性脱髓鞘多神经病(CIDP)、全身性狼疮、指示急性治疗的障碍的慢性形式、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎。

在某些实施方案中，所述受试者具有自身免疫病或所述免疫应答被自身免疫病活化。具体地，所述自身免疫病选自斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、阿狄森氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风和韦格纳氏肉芽肿病。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含与TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列相比具有不超过两个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含与GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含与SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H1包含与TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H2包含与SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)或SIGASGGQTRYADS(SEQID NO:10)的序列相比具有不超过两个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，且所述CDR H3包含与LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述抗体以小于或等于抗体N026的KD结合人FcRn。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ IDNO:1)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH1包含序列TYAMG(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH2包含序列SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、由其组成或基本上由其组成，且所述CDR H3包含序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ IDNO:1)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H1包含序列DYAMG(SEQ ID NO:5)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H2包含序列SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、由其组成或基本上由其组成，且所述CDRH3包含序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ IDNO:1)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H1包含序列NYAMG(SEQ ID NO:6)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH2包含序列SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)、由其组成或基本上由其组成，且所述CDRH3包含序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ IDNO:1)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH1包含序列TYAMG(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH2包含序列SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)、由其组成或基本上由其组成，且所述CDR H3包含序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ IDNO:1)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH1包含序列TYAMG(SEQ ID NO:4)、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH2包含序列SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、由其组成或基本上由其组成，且所述CDR H3包含序列LAIGDSY(SEQ ID NO:11)、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述受试者具有先前患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的历史。例如，在某些实施方案中，所述怀孕的受试者先前已经怀孕，其中胎儿或新生儿已经患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。在所有方面的某些实施方案中，所述受试者处于患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的风险中。

在所有方面的某些实施方案中，所述胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍选自：胎儿和新生儿同种免疫血小板减少症、胎儿和新生儿的溶血性疾病、同种免疫泛-血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病、贝切特氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。在所有方面的某些实施方案中，所述胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫障碍是胎儿和新生儿的溶血性疾病。在所有方面的某些实施方案中，所述胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫障碍是胎儿和新生儿同种免疫血小板减少症。在所有方面的某些实施方案中，所述胎儿和新生儿自身免疫和/或自身免疫障碍是先天性心脏传导阻滞。

在所有方面的某些实施方案中，治疗降低流产的风险。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成，其中X1是极性的或疏水的氨基酸,X2是疏水的氨基酸,X3是极性的氨基酸,X4是极性的或酸性的氨基酸，X5是极性的或疏水的氨基酸,X6是疏水的氨基酸，Z1是极性的或酸性的氨基酸，Z2是极性的或疏水的氨基酸，Z3是G、S或A，Z4是碱性的氨基酸，Z5是疏水的或碱性的氨基酸，且Z6是G、S、D、Q或H，且其中所述抗体以小于200、150、100、50或40pM的KD结合人FcRn。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成，其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在所有方面的某些实施方案中，所述CDR L1包含与TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列相比具有不超过两个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDRL2包含与GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR L3包含与SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H1包含与TYAMG(SEQ IDNO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H2包含与SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)或SIGASGGQTRYADS(SEQ ID NO:10)的序列相比具有不超过两个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成，且所述CDRH3包含与LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列相比具有不超过一个氨基酸置换的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述受试者具有先前患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的历史。例如，在某些实施方案中，所述怀孕的受试者先前已经怀孕，其中所述胎儿或新生儿已经患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。在所有方面的某些实施方案中，所述受试者处于患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的风险中。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链可变区和重链可变区、由其组成或基本上由其组成，所述轻链可变区包含具有序列TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的CDR L1、具有序列GDSERPS(SEQ ID NO:2)的CDR L2和具有序列SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的CDR L3、由其组成或基本上由其组成，所述重链可变区包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成，其中所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTRYADS(SEQ ID NO:18)的序列、由其组成或基本上由其组成，且所述CDR H3包含序列LAIGDSY(SEQID NO:11)、由其组成或基本上由其组成，且其中Z1是T、D或N；Z2是S或A；且Z3是G、S或A。

在所有方面的某些实施方案中，所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)。

在所有方面的某些实施方案中，所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:20)。

在所有方面的某些实施方案中，所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成

在所有方面的某些实施方案中，所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:23)。

在所有方面的某些实施方案中，所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:24)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:20)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:21)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:22)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:23)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:24)。

在所有方面的某些实施方案中，所述重链包含与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列具有至少95％、97％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。在所有方面的某些实施方案中，所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少95％、97％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述抗体进一步包含与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的氨基酸置换N297A、由其组成或基本上由其组成。在所有方面的某些实施方案中，所述抗体进一步包含与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的氨基酸置换D355E和L357M、由其组成或基本上由其组成。在所有方面的某些实施方案中，所述抗体进一步包含下述氨基酸置换中的任意一种或多种、由其组成或基本上由其组成：与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的A23V、S30R、L80V、A84T、E85D、A93V和与SEQ ID NO:19的序列相比的Q38H、V58I和G99D。

在所有方面的某些实施方案中，与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比，所述抗体不含有在残基446处的C-端赖氨酸。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGSSGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:20)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:21)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGAQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:22)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGGQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:23)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYGDSERPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYAGSGIYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:19)；且所述重链包含以下序列、由其组成或基本上由其组成：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMGWVRQAPGKGLEWVSSIGASGSQTRYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLAIGDSYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:24)。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗与胎儿和新生儿的溶血性疾病有关的胎儿贫血的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成，所述CDRH2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成；其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗与胎儿和新生儿的溶血性疾病有关的胎儿贫血的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗与胎儿和新生儿的溶血性疾病有关的胎儿贫血的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述方法治疗怀孕的受试者、怀孕的受试者的胎儿和/或它们的组合。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO：17)的序列、由其组成或基本上由其组成；其中X1是T、A、S或I；

X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗自身免疫障碍的方法，其包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述自身免疫障碍选自：斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、阿狄森氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风或韦格纳氏肉芽肿病。

在所有方面的某些实施方案中，所述治疗降低胎儿的流产/丢失的风险。

在另一个方面，本发明表征了一种降低自身免疫或同种免疫障碍的风险或降低发生自身免疫或同种免疫障碍的风险的方法，所述方法包括将FcRn抗体施用给怀孕的受试者、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成；其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种降低自身免疫或同种免疫障碍的风险或降低发生自身免疫或同种免疫障碍的风险的方法，所述方法包括将FcRn抗体施用给怀孕的受试者、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种降低自身免疫或同种免疫障碍的风险或降低发生自身免疫或同种免疫障碍的风险的方法，所述方法包括将FcRn抗体施用给怀孕的受试者、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述治疗降低胎儿的流产/丢失的风险。

在另一个方面，本发明表征了一种增加受试者中的抗体分解代谢的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述施用的抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成；其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种增加受试者中的抗体分解代谢的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述施用的抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种增加受试者中的抗体分解代谢的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述施用的抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，增加抗体分解代谢包括增加病原性抗体分解代谢。在所有方面的某些实施方案中，所述病原性抗体对母亲、胎儿、或者母亲和胎儿二者是病原性的。在所有方面的某些实施方案中，所述病原性抗体是IgG抗体。在所有方面的某些实施方案中，所述抗体造成怀孕的受试者中的胎儿的胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。

在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中的自身抗体的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成，其中X1是T、A、S或I；

X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中的自身抗体的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中的自身抗体的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成；其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种减少受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述免疫应答是所述受试者中的急性或慢性免疫应答。

在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被选自以下的医学病症活化：寻常型天疱疮、狼疮肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗-磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力损失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。例如，在某些实施方案中，所述急性免疫应答被怀孕的受试者中的医学病症活化。例如，在某些实施方案中，所述急性免疫应答在胎儿或新生儿中被怀孕的受试者中的医学病症活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被怀孕的受试者中的医学病症活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答在胎儿或新生儿中被怀孕的受试者中的医学病症活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被特发性血小板减少性紫癜活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被寻常型天疱疮活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被灾难性抗-磷脂抗体综合征活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被视神经脊髓炎活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被抗体介导的排斥活化。在所有方面的某些实施方案中，所述急性免疫应答被重症肌无力活化。

本文还描述了一种治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的方法，其包括以下步骤、由其组成或基本上由其组成：给怀孕的受试者施用M281(例如，在15mg/kg或30mg/kg的剂量，例如，每周剂量)，和如果所述受试者表现出低清蛋白血症(例如，低于30g/l、25g/l、20g/l的血清白蛋白水平)则停止施用。还描述了包括治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍、由其组成或基本上由其组成的方法，所述方法包括将M281施用给怀孕的受试者(例如，在15mg/kg或30mg/kg的剂量，例如，每周剂量)，和如果所述受试者表现出低清蛋白血症(例如，低于30g/l、25g/l、20g/l的血清白蛋白水平)则施用白蛋白。还描述了包括治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍、由其组成或基本上由其组成的方法，所述方法包括将M281施用给怀孕的受试者(例如，在15mg/kg或30mg/kg的剂量，例如，每周剂量)，和如果所述受试者表现出低清蛋白血症(例如，低于30g/l、25g/l、20g/l的血清白蛋白水平)则施用高渗溶液(例如，本领域已知的甘露醇或其它溶液)。还描述了一种包括治疗胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍、由其组成或基本上由其组成的方法，所述方法包括将M281(例如，在15mg/kg或30mg/kg的剂量，例如，每周剂量)施用给怀孕的受试者，和在M281施用之前或之后试验所述受试者的血清白蛋白水平至少一次。在该方法的某些情况下，可以继续或不继续M281的施用。

在所有方面的某些实施方案中，所述慢性免疫应答被选自以下的医学病症活化：慢性炎症性脱髓鞘多神经病(CIDP),全身性狼疮,反应性关节病,原发性胆汁性肝硬化,溃疡性结肠炎,和抗中性粒细胞胞浆抗体相关的血管炎。在所有方面的某些实施方案中，所述慢性免疫应答被慢性炎症性脱髓鞘多神经病活化。

在所有方面的某些实施方案中，所述受试者具有自身免疫病。在所有方面的某些实施方案中，所述自身免疫病选自斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、阿狄森氏病、溶血性贫血、温型自身免疫性溶血性贫血、抗-因子抗体、肝素诱导的血小板减少症(敏化的移植物、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风和韦格纳氏肉芽肿病。在所有方面的某些实施方案中，所述自身免疫病是温型自身免疫性溶血性贫血。在所有方面的某些实施方案中，所述自身免疫病是抗-因子抗体。在所有方面的某些实施方案中，所述自身免疫病是肝素诱导的血小板减少症。在所有方面的某些实施方案中，所述自身免疫病是敏化的移植物。

在另一个方面，本发明表征了一种减少跨怀孕受试者的胎盘的抗体运输的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成，

所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成；其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种减少跨怀孕受试者的胎盘的抗体运输的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种减少跨怀孕受试者的胎盘的抗体运输的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿或新生儿中抗体介导的病毒性疾病增强的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含以下区域、由其组成或基本上由其组成：(1)包含CDR L1、CDR L2和CDR L3、由其组成或基本上由其组成的轻链可变区和(2)包含CDR H1、CDR H2和CDR H3、由其组成或基本上由其组成的重链可变区，其中所述CDR L1包含X1GTGSDVGSYNX2VS(SEQ ID NO:12)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L2包含GDX3X4RPS(SEQ ID NO:13)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR L3包含X5SYX6GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDRH1包含Z1YAMG(SEQ ID NO:15)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H2包含SIGZ2SGZ3QTZ4YADS(SEQ ID NO:16)的序列、由其组成或基本上由其组成；所述CDR H3包含LAZ5Z6DSY(SEQ ID NO:17)的序列、由其组成或基本上由其组成，其中X1是T、A、S或I；X2是L或I；X3是S、N或T；X4是Q、E或N；X5是C、S、I或Y；X6是A或V；Z1是E、T、D或N；Z2是S或A；Z3是G、S或A；Z4是K或R；Z5是I、L或H；且Z6是G、S、D、Q或H。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿或新生儿中抗体介导的病毒性疾病增强的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含与选自SEQID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列具有至少90％同一性的序列、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种治疗胎儿或新生儿中抗体介导的病毒性疾病增强的方法，所述方法包括给怀孕的受试者施用抗体、由其组成或基本上由其组成，其中所述抗体包含轻链和重链、由其组成或基本上由其组成，其中所述轻链包含SEQ ID NO:19的序列、由其组成或基本上由其组成；且所述重链包含选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的序列、由其组成或基本上由其组成。

在所有方面的某些实施方案中，所述病毒性疾病由选自以下的病毒造成：α病毒感染、黄病毒感染，寨卡病毒感染、切昆贡亚病毒感染、罗斯河病毒感染、严重急性呼吸综合征冠状病毒感染、中东呼吸综合征、禽流感感染、流感病毒感染、人呼吸道合胞体病毒感染、埃博拉病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、人免疫缺陷病毒感染、呼吸道合胞体病毒感染、汉坦病毒属感染、格塔病毒感染、辛德毕斯病毒感染、布尼亚病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒B感染、兔痘病毒感染、乳酸脱氢酶升高病毒感染、里奥病毒感染、狂犬病病毒感染、***病毒感染、猪生殖和呼吸综合征病毒感染、猴出血热病毒感染、马传染性贫血病毒感染、羊关节炎病毒感染、非洲猪瘟病毒感染、慢病毒感染、BK乳多泡病毒感染、墨累河谷脑炎病毒感染、肠道病毒感染、巨细胞病毒感染、肺病毒感染、麻疹病毒感染和梅寿氏病毒感染。

在所有方面的某些实施方案中，所述怀孕的受试者患有医学病症或处于患有医学病症的风险中，所述医学病症在所述怀孕的受试者中活化免疫应答。在所有方面的某些实施方案中，所述医学病症是寻常型天疱疮、狼疮肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗-磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力损失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病、血清病、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、全身性狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、阿狄森氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风和韦格纳氏肉芽肿病。

在所有方面的某些实施方案中，所述怀孕的受试者具有先前怀有胎儿或新生儿的历史，所述胎儿或新生儿具有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。例如，在某些实施方案中，所述怀孕的受试者已经具有先前妊娠，其中所述胎儿或新生儿具有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。

在所有方面的某些实施方案中，在得自所述怀孕的受试者的生物样品中检测与免疫疾病有关的抗体。在所有方面的某些实施方案中，所述生物样品是血液或尿样品。在所有方面的某些实施方案中，所述生物样品是血液样品。

在所有方面的某些实施方案中，所述施用的抗体是单克隆抗体。在所有方面的某些实施方案中，所述施用的抗体是IgG1。在所有方面的某些实施方案中，所述施用的抗体包含λ轻链、由其组成或基本上由其组成。

在另一个方面，本发明表征了一种用于治疗或减少发生胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的风险的方法，所述方法包括：给孕妇施用包含抗体的组合物(M281)，所述抗体包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链，其中所述M281的施用在第34周孕龄以后停止。

在另一个方面，本发明表征了一种用于治疗或减少发生胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的风险的方法，所述方法包括给孕妇施用包含抗体的组合物(M281)，所述抗体包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链，其中所述M281的施用在出生前至少一周停止。

在两种方法的不同方面，所述方法包括：在M281的施用停止以后和在出生之前(例如，在出生之前40-100小时或1-15天)，将IVIG施用给孕妇；M281的施用在妊娠第35周以后停止；M281的施用在妊娠第36、37或38周之前停止；基于孕妇的重量，在200mg/kg-1000mg/kg施用IVIG；基于孕妇的重量，在30mg/kg施用M281；基于孕妇的重量，在15mg/kg施用M281；所述剂量是每次施用的剂量，并且基于在第一次施用时孕妇的重量并且不基于孕妇的重量增加而向上调节；所述剂量是每次施用的剂量，并且基于在第一次施用时孕妇的重量并且基于孕妇的重量增加而向上调节；至少每隔一周施用所述组合物；每隔一周施用所述组合物；

至少每周施用所述组合物；每周施用所述组合物；在妊娠的第一个三个月期间开始施用；在妊娠的第二个三个月期间开始施用；在妊娠的第三个三个月期间开始施用；所述施用途径是静脉内的；所述孕妇具有严重胎儿贫血的产科史；所述孕妇具有升高的抗RhD、抗-Rhc或抗Kell免疫球蛋白同种抗体滴度；所述孕妇具有升高的抗-Rhc或抗-Kell免疫球蛋白同种抗体滴度；所述孕妇具有升高的选自以下的一种或多种抗体的免疫球蛋白同种抗体滴度：抗-Lua、Lub、Bg、Kna、Yta、E.c.K.Cw、Fya、cE、ce、D、Ce、cE、K、Kpa、Kpb、Fya、M、N、S、Lea、Leb、Fy、Jka.Diego,P和Mia/Mur；所述孕妇具有严重胎儿贫血或≤24周妊娠死产的产科史和升高的抗-D或抗-Kell IgG同种抗体滴度并且孕有抗原阳性的胎儿；第一次定量施用是在妊娠的第12至16周；第一次定量施用是在妊娠的第14周期间；和在妊娠的第一个三个月期间开始施用。

定义

本文中的术语“抗体”以最宽的含义使用，并且包括各种抗体结构，包括、但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出FcRn抗原结合活性。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双体、直链抗体、单链抗体分子和多特异性抗体。

本文中使用的术语“分离的抗体”表示已经从其制备宿主细胞环境的组分中分离和/或回收的抗体。其制备宿主细胞环境的污染物组分是会干扰所述抗体的研究、诊断或治疗用途的物质。污染物组分可以包括酶、激素和其它蛋白性的或非蛋白性的溶质。在某些实施方案中，将抗体纯化(1)至大于95重量％的抗体，例如通过Lowry方法测定，且在某些实施方案中，至大于99重量％；(2)至足以获得N-端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，通过使用例如旋转杯序列分析仪，或(3)至同质性，在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE确定，使用例如考马斯蓝或银染色。分离的抗体包括在重组细胞内的原位抗体。然而，通常，将通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体。分离的抗体的药物制剂通常具有小于250ppm(例如，小于200ppm、150ppm.100ppm)的宿主细胞蛋白(HCP)，这通过按照FDA“Guidance forIndustry”文件的建议所执行的基于ELISA的HCP测定来确定。

本文中使用的术语“单克隆抗体”表示得自基本上均质抗体的群体的抗体，即，该群体中的各个抗体具有相同的基本序列，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变之外。单克隆抗体具有高度特异性，并针对单个抗原位点(即，在人FcRn上的表位)。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每种单克隆抗体均针对抗原上的单个表位。修饰词“单克隆的”指示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得，并且不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。

本文中使用的术语“可变区”和“可变结构域”表示抗体的轻链和重链的部分，其包括互补决定区(CDR，例如，CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3)和框架区(FR)的氨基酸序列。根据在本发明中使用的方法，根据Kabat(Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD.(1991))来定义分配给CDR和FR的氨基酸位置。使用该编号系统，实际的直链氨基酸序列可以含有较少的或额外的氨基酸，其对应于可变区的CDR(在本文中进一步定义)或FR(在本文中进一步定义)的缩短或向其中的***。例如，重链可变区可以包括在CDR H2的残基52之后的单个***残基(即，根据Kabat的残基52a)和在重链FR的残基82之后的***残基(即，根据Kabat的残基82a、82b、82c等)。通过在抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源性区域处的比对，可以为给定抗体确定残基的Kabat编号。

本文中使用的术语“互补决定区”和“CDR”表示抗体可变结构域的区域，其在序列中是高变的和/或形成结构上确定的环。CDR也被称作高变区。轻链和重链可变区各自具有三个CDR。轻链可变区含有CDR L1、CDR L2和CDR L3。重链可变区含有CDR H1、CDR H2和CDRH3。每个CDR可以包括来自如Kabat所定义的互补性决定区的氨基酸残基(即在轻链可变区中的约残基24-34(CDR L1)、50-56(CDR L2)和89-97(CDR L3)以及在重链可变区中的约残基31-35(CDRH1)、50-65(CDRH2)和95-102(CDRH3)。

本文中使用的术语“FcRn”表示与IgG抗体(例如，IgG1抗体)的Fc区结合的新生儿Fc受体。一种示例性的FcRn是具有UniProt ID No.P55899的人FcRn。据信人FcRn如下负责维持IgG的半衰期：将组成性地内化的IgG结合并运输回细胞表面以重复利用IgG。

本文中使用的术语“亲和力”和“结合亲和力”表示两个分子之间的结合相互作用的强度。通常，结合亲和力表示分子的单个结合位点与它的结合配偶体诸如分离的抗体及其靶标(例如，本发明的分离的抗-FcRn抗体与人FcRn)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指出，结合亲和力表示固有结合亲和力，其反映了结合对的成员之间的1:1相互作用。通常用解离常数(K_D)或亲和常数(K_A)描述两个分子之间的结合亲和力。对彼此具有低结合亲和力的两个分子通常缓慢地结合，倾向于容易解离，并且表现出大K_D。对彼此具有高亲和力的两个分子通常容易结合，倾向于保持结合更久，并且表现出小K_D。在实施例2中描述了一种用于确定针对人FcRn的抗体的K_D的方法(“SPR方法”)。使用该方法，N022、N023、N024、N026和N027的K_D分别为31、31.4、35.5、36.5和19.3pM。

本文中使用的术语“抑制IgG与FcRn结合”表示本发明的抗-FcRn抗体的阻断或抑制IgG(例如，IgG1)与人FcRn的结合的能力。在某些实施方案中，本发明的抗-FcRn抗体结合FcRn，例如，在人FcRn上被IgG结合的位点。因此，本发明的抗-FcRn抗体能够抑制IgG(例如，受试者的自身抗体)与FcRn的结合。在某些实施方案中，所述分子(例如，本发明的抗-FcRn抗体)基本上或完全地抑制与IgG的结合。在某些实施方案中，IgG的结合降低了10％、20％、30％、50％、70％、80％、90％、95％或甚至100％。

本文中使用的术语“抑制病原性抗体与FcRn的结合”表示抗-FcRn抗体的阻断或抑制病原性抗体(例如，病原性IgG抗体)与人FcRn的结合的能力。在某些实施方案中，抗-FcRn抗体结合FcRn，例如，在人FcRn上被病原性抗体结合的位点。因此，抗-FcRn抗体能够抑制病原性抗体(例如，病原性IgG抗体)与FcRn的结合。在某些实施方案中，所述分子(例如，抗-FcRn抗体)基本上或完全地抑制与病原性抗体的结合。在某些实施方案中，病原性抗体与FcRn的结合降低了10％、20％、30％、50％、70％、80％、90％、95％或甚至100％。

本文中使用的术语“疏水的氨基酸”表示具有相对低的水溶性的氨基酸。疏水氨基酸包括、但不限于亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和脯氨酸。在本发明中特别优选的疏水氨基酸是丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。

本文中使用的术语“极性的氨基酸”表示在其侧链中具有由具有不同电负性的原子诱导的化学极性的氨基酸。极性氨基酸的极性取决于氨基酸的侧链中的原子之间的电负性和侧链结构的不对称性。极性氨基酸包括、但不限于丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。在本发明中特别优选的极性氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸和酪氨酸。

本文中使用的术语“酸性的氨基酸”表示其侧链含有羧酸基团的氨基酸，所述羧酸基团具有在3.5至4.5之间的pKa。在某些实施方案中，酸性的氨基酸是天冬氨酸和谷氨酸。

本文中使用的术语“碱性的氨基酸”表示其侧链含有氨基基团的氨基酸，所述氨基基团具有在9.5至13之间的pKa。在某些实施方案中，碱性的氨基酸是组氨酸、赖氨酸和精氨酸。

本文中使用的术语“同一性百分比(％)”表示，在比对序列和如果必要的话引入缺口以达到最大同一性百分比(即，可以为了最佳比对在候选序列和参照序列中的一个或两个中引入缺口，并可以为了对比目的抛弃不同源的序列)以后，与参照序列(例如，野生型抗-FcRn抗体)的氨基酸(或核酸)残基相同的候选序列(例如，本发明的抗-FcRn抗体)的氨基酸(或核酸)残基的百分比。可以以在本领域技术范围内的各种方式实现用于确定同一性百分比的目的的比对，例如，使用公众可得到的计算机软件诸如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适参数，包括在所对比的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。在某些实施方案中，如下计算给定的候选序列相对于给定的参照序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比(其可以可替换地表述为相对于给定的参照序列具有或包含特定百分比的氨基酸(或核酸)序列同一性的给定的候选序列)：

100x(A/B的分数)

其中A是在候选序列和参照序列的比对中被评分为相同的氨基酸(或核酸)残基的数目，并且其中B是在参照序列中的氨基酸(或核酸)残基的总数。在候选序列的长度不等于参照序列的长度的某些实施方案中，候选序列相对于参照序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比将不等于参照序列相对于候选序列的氨基酸(或核酸)序列同一性百分比。

在特定实施方案中，为了与候选序列对比而比对的参照序列可能表明，候选序列在候选序列的全长或候选序列的连续氨基酸(或核酸)残基的选定部分上表现出50％至100％同一性。为了对比目的而比对的候选序列的长度是参照序列的长度的至少30％，例如，至少40％，例如，至少50％、60％、70％、80％、90％或100％。当在候选序列中的位置被与参照序列中的相应位置相同的氨基酸(或核酸)残基占据时，则分子在该位置是相同的。通过置换、删除或***，可以改变位置。置换、删除或***可以包含特定数量的氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多个)。当描述不超过n个氨基酸的置换、删除或***时，这意味着所述置换、删除或***包含例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、…或n个氨基酸。当置换、删除或***的数目改变总序列中的5％、10％、15％、20％或更多的氨基酸时，置换、删除或***的数目可以占总序列的某百分比(例如，1％、5％、10％、15％、20％或更多)。

本文中使用的术语“胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍”表示胎儿和/或新生儿中的免疫障碍，其由针对胎儿和/或新生儿抗原的母源抗体(例如，病原性母源抗体)的经胎盘转移造成。例如，怀孕的受试者的抗体(例如，病原性抗体)可能与胎儿中的抗原(例如，从胎儿父亲遗传的胎儿的抗原)反应。本文提供了胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的实例。

本文中使用的术语“病原性抗体”表示在受试者(例如，怀孕的受试者)、怀孕的受试者的胎儿和/或新生儿中引起一种或多种免疫疾病或障碍的抗体。在某些实施方案中，病原性抗体是在受试者(例如，怀孕的受试者)中产生的针对受试者的自身蛋白中的一种或多种的自身抗体，从而在所述受试者中引起自身免疫疾病或障碍。在某些实施方案中，怀孕的受试者中的病原性抗体可以通过胎盘转移至胎儿并与来自胎儿的抗原(例如，从胎儿父亲遗传的胎儿的抗原)反应，从而引起例如胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。

本文中使用的术语“抗体介导的病毒性疾病增强”表示这样的病毒性疾病：其中抗体可以促进病毒进入宿主细胞，从而导致细胞中增加的或增强的侵染性。在某些实施方案中，抗体可以结合病毒表面蛋白，并且抗体/病毒复合物可以通过抗体和受体之间的相互作用而结合细胞表面上的FcRn受体。随后，可以将抗体/病毒复合物内化到细胞中。

本文中使用的术语“宿主细胞”表示媒介物，其包含从其相应核酸表达蛋白质所需的必要细胞组分，例如细胞器。核酸通常被包含在核酸载体中，所述核酸载体可以通过本领域已知的常规技术(例如，转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射等)而引入宿主细胞。宿主细胞可以是原核细胞，例如细菌细胞，或真核细胞，例如哺乳动物细胞(例如，CHO细胞)。如本文所述，使用宿主细胞来表达一种或多种编码本发明的抗-FcRn抗体的多肽。

本文中使用的术语“载体”表示能够转运已与其连接的另一核酸分子的核酸分子。载体的一种类型是“质粒”，其表示环状双链DNA环，在其中可以连接另外的DNA区段。载体的另一种类型是噬菌体载体。载体的另一种类型是病毒载体，其中可以将额外DNA区段连接到病毒基因组内。某些载体能够在它们所引入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)在引入宿主细胞内后可以整合到宿主细胞的基因组内，且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们所可操作地连接的基因的表达。这样的载体在本文中被称作“重组表达载体”(或简称“重组载体”)。一般而言，在重组DNA技术中使用的表达载体通常为质粒的形式。

本文中使用的术语“受试者”表示哺乳动物，例如，优选人。哺乳动物包括，但不限于，人类和家养动物和耕作动物，诸如猴(例如，食蟹猴)、小鼠、狗、猫、马和牛等。

本文中使用的术语“孕龄”描述了妊娠多久。孕龄可以用周数的方式描述。确定孕龄的方法是本领域已知的(例如，Committee on Obstetric Practice American Institute of Ultrasound in Medicine Society for母体-Fetal Medicine,Committee Opinion.Number 700.2017年5月；其整体并入本文)。在某些情况下，通过超声、自最后月经期(LMP)的第一天起的周数或其组合，可以确定孕龄。

本文中使用的术语“药物组合物”表示这样的药物或药物制剂：其含有活性成分以及一种或多种赋形剂和稀释剂，以使所述活性成分适合于施用方法。本发明的药物组合物包括与抗-FcRn抗体相容的药学上可接受的组分。所述药物组合物可以是用于静脉内或皮下施用的水性形式，或者是用于口服施用的片剂或胶囊剂形式。

本文中使用的术语“药学上可接受的载体”表示药物组合物中的赋形剂或稀释剂。药学上可接受的载体必须与制剂的其它成分相容并且对接受者无害。在本发明中，药学上可接受的载体必须为Fc构建体提供足够的药物稳定性。载体的性质随施用模式而不同。例如，对于静脉内施用，通常使用水溶液载体；对于口服施用，固体载体是优选的。

本文中使用的术语“治疗有效量”表示在受试者或患者中诱导期望的生物学效应或治疗患有本文所述病症或障碍的患者中有效的量，例如药物剂量。在本文中还应理解，“治疗有效量”可以解释为产生期望的治疗效果的量，其在一个剂量中或在任何剂量或途径中发生，单独地或与其它治疗剂组合地发生。

本文中使用的术语“不超过”表示小于等于的量。这可以是整数量。例如，不超过两个置换可以表示0、1或2个置换。

本文中使用的术语“治疗”表示减少特定疾病或病症，降低特定疾病或病症，降低特定疾病或病症的风险，或减轻特定疾病或病症的副作用。减少特定疾病或病症、降低特定疾病或病症、降低特定疾病或病症的风险、或减轻特定疾病或病症的副作用是相对于未接受治疗的受试者，例如对照、基线或已知的对照水平或测量值。

附图说明

图1包括两幅图和一张表，其显示抗体N022-N024、N026和N027在pH 6.0与人或食蟹猴FcRn的IgG竞争性结合。

图2包括显示抗体N023、N024、N026和N027对小鼠中的IgG分解代谢的影响的图。

图3包括显示抗体N027对小鼠中的IgG水平和靶标占据的剂量依赖性作用的图。

图4A-4C包括显示在施用不同剂量的抗体N027后食蟹猴中的IgG分解代谢的选择性诱导和靶标占据的图。

图5包括显示N027在小鼠中的生物分布的图。

图6包括实验时间线和曲线图，其显示了N027在小鼠胶原抗体诱导的关节炎模型中的功效。

图7包括实验时间线和两个图，其显示了N027在小鼠慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型中的功效。

图8A-8C显示的图显示了N027分别在主动脉内皮细胞、静脉内皮细胞和胎盘滋养层中实现的剂量依赖性FcRn占据。

图9A-9C显示的图显示了N027的100％FcRn占据分别导致在主动脉内皮细胞、静脉内皮细胞和胎盘滋养层中的细胞内IgG积累的增加。

图10显示的图显示了N027达到100％FcRn占据所需的时间的量。

图11A和11B显示的图分别显示了N027处理不改变人内皮细胞和绒毛滋养层细胞中的FcRn周转率。

图12A和12B显示了位于人内皮和绒毛滋养层细胞中的核内体中的FcRn的图像。

图13A和13B显示的图分别显示了N027处理对人内皮细胞和人胎盘滋养层中的IgG运输的动力学的影响。

图13C和13D显示的图像显示了N027增加细胞内IgG和IgG与溶酶体的共定位(溶酶体标志物：Lamp-1和葡聚糖)。

图14的图显示了在灌注的四个小时内安替比林的经胎盘转移(n＝14)。数据表示100μg/ml的安替比林在t＝0的母体施用以后在胎儿(正方形)和母体(圆圈)循环中的安替比林浓度，作为平均值±标准差(SD)。

图15的图显示了在灌注的四个小时内N027的经胎盘转移。数据表示指定浓度的N027在t＝0的母体施用以后在胎儿和母体循环中的N027浓度，作为平均值±SD。

图16的图显示了在妊娠期间用N027治疗后的母体IgG浓度。

图17的图显示了在妊娠期间用N027治疗母亲后的胎儿IgG水平。

图18的图显示了在单剂量的0.3、3、10、30和60mg/kg的N027以后循环单核细胞中的平均(SD)FcRn受体占据。

图19的图显示了在单剂量的0.3、3、10、30和60mg/kg的N027以后的平均(SD)血清IgG水平。

图20A和20B的图显示了按照施用的积累数目在30和15mg/kg MAD组群中的单核细胞的平均(SD)FcRn受体占据。

图21A和21B的图显示了按照施用的积累数目在30和15mg/kg MAD组群中的平均(SD)血清IgG。

图22的图显示了安替比林的经胎盘转移(在母体蓄池中；n＝8)。数据表示100μg/ml的安替比林在t＝0的母体施用以后在胎儿(实心正方形)和母体(实心圆)循环中的安替比林浓度，作为平均值±SD。

图23的图显示了在灌注的6小时内的胎盘转移(n＝8)。数据表示270μg/ml

在t＝0的母体施用以后在胎儿和母体循环中的

浓度，作为平均值±SD。

图24的图显示了安替比林的经胎盘转移(在母体蓄池中；n＝9)。数据表示100μg/ml的安替比林在t＝0的母体施用以后在胎儿(实心正方形)和母体(实心圆)循环中的安替比林浓度，作为平均值±SD。

图25的图显示了在有不同浓度的N027存在下

的胎盘转移。数据表示270μg/ml

在t＝0的母体施用以后在胎儿和母体循环中的

浓度，作为平均值±SD。

图26的图显示了安替比林的经胎盘转移(在母体蓄池中；n＝5)。数据表示100μg/ml的安替比林在t＝0的母体施用以后在胎儿(实心正方形)和母体(实心圆)循环中的安替比林浓度，作为平均值±SD。

图27的图显示了在有IVIg存在下的的胎盘转移。数据表示270μg/ml

在t＝0的母体施用以后在胎儿(实心正方形)和母体(实心圆)循环中的浓度，作为平均值±SD。

图28的图显示了安替比林的经胎盘转移(

在母体蓄池中；n＝4)。数据表示100μg/ml的安替比林在t＝0的母体施用以后在胎儿(实心正方形)和母体(实心圆)循环中的安替比林浓度，作为平均值±SD。

图29的图显示了在有IVIg+N027存在下的胎盘转移。数据表示270μg/ml在t＝0的母体施用以后在胎儿(实心正方形)和母体(实心圆)循环中的

浓度，作为平均值±SD。

图30的图显示了在用15mg/kg或30mg/kg的3剂N027治疗的受试者中对血清白蛋白的影响。

图31的图显示了在26周重复剂量毒性研究中对用N027治疗的食蟹猴中的血清白蛋白的影响。

图32的表显示了在EFD和ePPND阶段的妊娠期间对用N027治疗的怀孕食蟹猴中的血清白蛋白的影响。

具体实施方式

本发明表征了分离的抗体，其以高亲和力结合人新生儿Fc受体(FcRn)。本发明表征了抗-FcRn抗体，用于制备抗-FcRn抗体的方法和组合物，以及用于阻断FcRn活性、减少免疫应答的基于免疫复合物的激活以及治疗免疫性疾病的方法。本公开内容表征了抗-FcRn抗体，用于制备抗-FcRn抗体的方法和组合物，以及用于阻断FcRn活性、减少免疫应答的基于免疫复合物的激活以及治疗免疫性疾病的方法。此外，抗-FcRn抗体可以用于减少病原性抗体经怀孕受试者的胎盘的运输，增加怀孕受试者中的病原性抗体分解代谢以及治疗胎儿或新生儿中的抗体介导的病毒性疾病增强。

I.抗-FcRn抗体

一般而言，本发明表征了以高亲和力结合人FcRn的分离的抗体。本发明的抗-FcRn抗体表示可以结合人FcRn和抑制IgG(例如，IgG自身抗体)与FcRn的结合的抗体。在某些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在其它实施方案中，所述抗体是多克隆抗体。在某些实施方案中，所述抗体选自嵌合抗体、亲和力成熟的抗体、人源化抗体和人抗体。在某些实施方案中，所述抗体是抗体片段，例如，Fab、Fab、Fab-SH、F(ab)₂或scFv。

在某些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。例如，抗体含有移植给异源非人、人或人源化序列(例如，框架和/或恒定结构域序列)的来自非人供体的抗原结合序列。在一个实施方案中，所述非人供体是小鼠。在另一个实施方案中，抗原结合序列是合成的，例如，通过诱变(例如，噬菌体展示筛选等)得到。在另一个实施方案中，嵌合抗体具有非人(例如，小鼠)可变区和人恒定区。在一个实施例中，使小鼠轻链可变区融合至人κ轻链。在另一个实施例中，使小鼠重链可变区融合至人IgG1恒定区。

在一个方面，本发明表征了一种能够结合人FcRn的分离的抗体。所述分离的抗体含有：(1)包括CDR L1、CDR L2和CDR L3的轻链可变区和(2)包括CDR H1、CDR H2和CDR H3的重链可变区，其中所述CDR L1包含与TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列具有至少92％同一性的序列，所述CDR L2包含与GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列具有至少85％同一性的序列，所述CDR L3包含与SSYAGSGIYV(SEQ ID NO:3)的序列具有至少90％同一性的序列，所述CDR H1包含与TYAMG(SEQ ID NO:4)、DYAMG(SEQ ID NO:5)或NYAMG(SEQ ID NO:6)的序列具有至少80％同一性的序列，所述CDR H2包含与SIGSSGAQTRYADS(SEQ ID NO:7)、SIGASGSQTRYADS(SEQ ID NO:8)、SIGASGAQTRYADS(SEQ ID NO:9)或SIGASGGQTRYADS(SEQID NO:10)的序列具有至少92％同一性的序列，且所述CDR H3包含与LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列具有至少85％同一性的序列。在某些实施方案中，所述抗体以小于200、150、100、50或40pM的K_D结合人FcRn。在某些实施方案中，所述抗体结合人FcRn的K_D小于或等于具有N022、N023、N024、N026或N027的轻链可变区和重链可变区且进一步具有与所对比的抗体相同的Fc区的抗体。

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体包含：包含X₁GTGSDVGSYNX₂VS(SEQ IDNO:12)的序列的CDR L1，包含GDX₃X₄RPS(SEQ ID NO:13)的序列的CDR L2，包含X₅SYX₆GSGIYV(SEQ ID NO:14)的序列的CDR L3，包含Z₁YAMG(SEQ ID NO:15)的序列的CDRH1，包含SIGZ₂SGZ₃QTZ₄YADS(SEQ ID NO:16)的序列的CDR H2，和包含LAZ₅Z₆DSY(SEQ ID NO:17)的序列的CDR H3，其中X₁是极性的或疏水的氨基酸(例如，优选T、A、S或I)，X₂是疏水的氨基酸(例如，优选L或I)，X₃是极性的氨基酸(例如，优选S、N或T)，X₄是极性的或酸性的氨基酸(例如，优选Q、E或N)，X₅是极性的或疏水的氨基酸(例如，优选C、S、I或Y)，X₆是疏水的氨基酸(例如，优选A或V)，Z₁是极性的或酸性的氨基酸(例如，优选E、T、D或N)，Z₂是极性的或疏水的氨基酸(例如，优选S或A)，Z₃是G、S或A，Z₄是碱性的氨基酸(例如，优选K或R)，Z₅是疏水的或碱性的氨基酸(例如，优选I、L或H)，且Z₆是G、S、D、Q或H，且其中所述抗体以小于200、150、100、50或40pM的K_D结合人FcRn。

在其它实施方案中，本发明的分离的抗体包含：包含TGTGSDVGSYNLVS(SEQ ID NO:1)的序列的CDR L1，包含GDSERPS(SEQ ID NO:2)的序列的CDR L2，包含SSYAGSGIYV(SEQ IDNO:3)的序列的CDR L3，包含Z₁YAMG(SEQ ID NO:15)的序列的CDR H1，包含SIGZ₂SGZ₃QTRYADS(SEQ ID NO:18)的序列的CDR H2，和包含LAIGDSY(SEQ ID NO:11)的序列的CDR H3，其中Z₁是T、D或N，Z₂是S或A，且Z₃是G、S或A。

表1显示了本发明的一些示例性抗-FcRn抗体的轻链和重链互补决定区(CDR)的氨基酸序列。

表1

表2显示了本发明的这些示例性抗-FcRn抗体的轻链和重链的SEQ ID NO。

表2

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体的轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

在某些实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

在其它实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

在再一实施方案中，本发明的分离的抗体的重链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

本发明表征了一种分离的包含轻链和重链的抗体，其中所述轻链包含与以下序列具有至少90％同一性的序列

此外，在本文描述的任何抗-FcRn抗体中，所述抗体的重链包含与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列具有至少95％、97％、99％或100％同一性的序列。在本文描述的任何抗-FcRn抗体中，所述轻链包含与SEQ ID NO:19的序列具有至少95％、97％、99％或100％同一性的序列。

本发明的抗体可以进一步含有在CDR外(即，在框架区(FR)中)的氨基酸置换、添加和/或缺失。在某些实施方案中，本发明的抗体还可以包括下述氨基酸置换中的任意一种或多种：与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的A23V、S30R、L80V、A84T、E85D、A93V，和与SEQ ID NO:19的序列相比的Q38H、V58I和G99D。

所述抗体可以进一步含有在CDR外(即，在框架区(FR)中)的氨基酸置换、添加和/或缺失。氨基酸置换、添加和/或缺失可以是一个或多个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8个或更多个)的置换、添加和/或缺失。氨基酸置换、添加和/或缺失可以是八个或更少、七个或更少、六个或更少、五个或更少、四个或更少、三个或更少或两个或更少单个氨基酸的置换、添加和/或缺失。在某些实施方案中，所述抗体还可以包括下述氨基酸置换中的任意一种或多种：与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的A23V、S30R、L80V、A84T、E85D、A93V，和与SEQ ID NO:19的序列相比的Q38H、V58I和G99D。

在某些实施方案中，本发明的抗体可以包括在抗体的恒定区(例如，Fc区)中的氨基酸置换、添加和/或缺失，其例如导致降低的效应子功能，例如，降低的补体依赖性的细胞裂解(CDC)、抗体依赖性的细胞介导的细胞裂解(ADCC)和/或抗体依赖性的细胞介导的吞噬作用(ADCP)和/或降低的B-细胞杀死。恒定区不直接参与抗体与其靶标的结合，而是表现出各种效应子功能，诸如抗体在抗体依赖性的细胞毒性中的参与。在某些实施方案中，本发明的抗体的特征在于减少的与天然杀伤(NK)细胞上的人补体因子C1q和/或人Fc受体的结合(即，结合的不存在)。在其它实施方案中，本发明的抗体的特征在于减少的与人FcγRI、FcγRIIA和/或FcγRIIIA的结合(即，结合的不存在)。为了改变或减少抗体依赖性的效应子功能，诸如CDC、ADCC、ADCP和/或B-细胞杀死，本发明的抗体可以是IgG类，并且含有一个或多个氨基酸置换E233、L234、G236、D265、D270、N297、E318、K320、K322、A327、A330、P331和/或P329(根据Kabat的EU索引(Sequences ofProteins ofImmunological Interest,第5版.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD.(1991))编号)。在某些实施方案中，所述抗体含有突变L234A/L235A或D265A/N297A。优选地，本发明的抗-FcRn抗体含有与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比的氨基酸hdfn置换N297A，使得本发明的抗体变成去糖基化形式。所得的无效应抗体显示非常少的与补体或Fc受体的结合(即，补体C1q结合)，从而指示低CDC潜力。

在其它实施方案中，本发明的抗体可以包括具有改善抗体稳定性的特定氨基酸变化的抗体。

此外，在其它实施方案中，为了使潜在免疫原性最小化，本发明的某些抗体，例如，N024、N026和N027，可以通过将氨基酸D355和L357(与SEQ ID NO:20-24中的任一个的序列相比)分别置换为谷氨酸和甲硫氨酸而经历从G1m17.1至G1m17的同种异型变化。

在其它实施方案中，本发明的抗体，例如，N022-N024、N026和N027，不含有与SEQID NO:20-24中的任一个的序列相比在残基446处的C-端赖氨酸。

本发明表征了一种分离的含有轻链和重链的抗体，其中所述轻链包含序列

在本文描述的任何抗-FcRn抗体中，在某些实施方案中，所述抗体以小于200、150、100、50或40pM的K_D结合小鼠或大鼠FcRn。

在本文描述的任何抗-FcRn抗体中，在某些实施方案中，所述抗体以在1-100、5-150、5-100、5-75、5-50、10-50或10-40pM之间的亲和力结合人FcRn。

本发明的抗-FcRn抗体可以属于免疫球蛋白抗体同种型IgG、IgE、IgM、IgA或IgD。优选地，所述抗-FcRn抗体属于免疫球蛋白抗体同种型IgG。所述抗-FcRn抗体也可以属于任何免疫球蛋白抗体同种型亚类。例如，所述抗-FcRn抗体可以属于IgG亚类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。优选地，所述抗-FcRn抗体属于亚类IgG1。具体地，本发明的抗-FcRn抗体含有IgGG1m17或G1m17.1同种异型重链。在某些实施方案中，所述抗-FcRn抗体的轻链可以是κ轻链、λ轻链或κ-λ嵌合的轻链。在优选的实施方案中，本发明的抗-FcRn抗体含有全长λ轻链。

在某些实施方案中，本发明的抗体是单克隆的。本发明的抗体也可以是多克隆的、嵌合的、人源化的或全人的。在某些实施方案中，本发明的抗体可以是亲和力成熟的。在其它实施方案中，本发明的抗体可以是抗体片段。

不受理论的约束，据信，本发明的抗-FcRn抗体与IgG竞争和抑制IgG与人FcRn的结合。通过本发明的抗体的氢-氘交换进行的表位作图指示，所述抗体结合位于和/或邻近Fc-FcRn相互作用界面的FcRn上的表位，这提示本发明的抗体通过直接抑制阻断了IgG与FcRn的结合。此外，表位作图的结合位点远离FcRn的白蛋白结合位点。因此，不会抑制血清白蛋白结合并且不会降低血清白蛋白水平。实际上，实验证据表明，小鼠白蛋白水平在抗-FcRn抗体施用后保持恒定，从而指示白蛋白重复利用不受抗体与FcRn的结合干扰。

II.FcRn抑制

FcRn是一种I型跨膜蛋白，其作为结合IgG和血清白蛋白的细胞内囊泡运输蛋白而起作用。FcRn在内皮细胞、腔上皮细胞、肝细胞、足细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和NK细胞中表达，但不在B或T细胞上表达。FcRn通过将组成型内在化的IgG结合并运回细胞表面来维持IgG的半衰期。FcRn与Fc和血清白蛋白的结合发生在pH 6.0的初级内体中，然后将FcRn分拣到囊泡中，然后将FcRn结合的IgG或白蛋白运回细胞表面，在此处FcRn在pH7.4迅速释放IgG或白蛋白。该运输周期如下维持IgG和白蛋白的半衰期：将二者在循环中重复利用，并防止运输到溶酶体进行降解。FcRn还捕获在上皮细胞中内在化的IgG Fc，并将它们双向运输到相对的顶膜或基底外侧膜。此功能允许将IgG转运至胃肠道等器官的内腔，或将IgG或IgG抗原复合物从内腔转运至间质层的脉管系统或淋巴组织。

为了研究FcRn对IgG稳态的贡献，已经对小鼠进行了工程改造，以使FcRn的轻链和重链的部分被“敲除”，从而使这些蛋白质不被表达(Junghans等人,Proc NatlAcad SciUSA 93:5512,1996)。在这些小鼠中，IgG的血清半衰期和浓度急剧降低，从而提示IgG稳态的FcRn依赖性机制。在啮齿动物模型(例如上面讨论的模型)中的研究提示，FcRn的阻断可以增加IgG分解代谢，包括病原性自身抗体的分解代谢，从而抑制疾病(例如，自身免疫病)发展。FcRn还可能通过免疫复合物向抗原降解和MHC装载区室的运输而促进抗原呈递。

本发明提供了分离的抗-FcRn抗体，其以高亲和力结合人FcRn。本发明的抗-FcRn抗体与其它抗-FcRn抗体(例如，IgG、IgG自身抗体)竞争并有效地抑制其与FcRn的结合，从而增加分解代谢并降低其它抗-FcRn抗体(例如，IgG、IgG自身抗体)的半衰期。本发明的抗-FcRn抗体可以用在治疗或减少受试者中的免疫应答的基于免疫复合物的激活的方法中，所述免疫应答是例如由自身免疫疾病中的自身抗体引起的免疫应答。

母体IgG抗体向胎儿的胎盘转移是重要的FcRn依赖性机制，其为新生儿提供保护，而他/她的体液应答是无效的。在胎儿生命期间，在胎盘的合体滋养层中的FcRn负责将母体IgG抗体转移至胎儿。病原性母源抗体(例如，病原性母体IgG抗体)也可以通过与FcRn结合而穿过胎盘，并在胎儿和新生儿中造成同种免疫障碍和/或自身免疫障碍。在某些实施方案中，在怀孕的受试者中的病原性抗体造成怀孕的受试者中的胎儿的胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。本文描述的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)可以与母体病原性抗体(例如，母体病原性IgG抗体)竞争并抑制其与FcRn的结合，从而增加这些病原性抗体的分解代谢并降低其半衰期。

本公开内容提供了分离的结合人FcRn的抗-FcRn抗体。所述抗-FcRn抗体可以与其它抗-FcRn抗体(例如，IgG、IgG自身抗体)竞争并抑制其与FcRn的结合，从而增加其它抗-FcRn抗体(例如，IgG、IgG自身抗体)的分解代谢并降低其半衰期。所述抗-FcRn抗体可以用在治疗或减少受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活的方法中，所述免疫应答是例如由自身免疫疾病中的自身抗体引起的免疫应答。减少免疫应答可以描述为与未接受治疗的受试者(例如，对照受试者)相比减少免疫应答。所述抗-FcRn抗体也可以用在减少经怀孕受试者的胎盘的病原性抗体运输(例如，病原性母体IgG抗体运输)、增加怀孕受试者中的病原性抗体分解代谢和治疗胎儿或新生儿中抗体介导的病毒性疾病增强的方法中，所述方法包括给怀孕的受试者施用分离的结合人FcRn的抗体。减少经怀孕受试者的胎盘的病原性抗体运输可以描述为与未接受治疗的受试者(例如，对照受试者)相比减少病原性抗体运输。

IV.载体、宿主细胞和抗体生产

可以从宿主细胞生产本发明的抗-FcRn抗体。宿主细胞表示这样的载体：其包含从相应核酸表达本文所述的多肽和构建体所需的必要细胞组分，例如细胞器。所述核酸可以包含在核酸载体中，所述核酸载体可以通过本领域已知的常规技术(例如，转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射、感染等)引入宿主细胞。核酸载体的选择部分地取决于要使用的宿主细胞。通常，优选的宿主细胞具有原核(例如，细菌)或真核(例如，哺乳动物)起源。

核酸载体构建和宿主细胞

通过本领域已知的多种方法，可以制备编码本发明的抗-FcRn抗体的氨基酸序列的核酸序列。这些方法包括、但不限于寡核苷酸介导的(或定点的)诱变和PCR诱变。使用标准技术，例如基因合成，可以获得编码本发明的抗-FcRn抗体的核酸分子。可替换地，使用本领域中的标准技术，例如，QuikChange^TM诱变，可以将编码野生型抗-FcRn抗体的核酸分子突变成含有特定氨基酸置换。可以使用使用核苷酸合成仪或PCR技术来合成核酸分子。

可以将编码本发明的抗-FcRn抗体的核酸序列***能够在原核或真核宿主细胞中复制和表达核酸分子的载体。许多载体是在本领域中可获得的，并且可以用于本发明的目的。每种载体可以含有可被调节和优化以与特定宿主细胞相容的各种组分。例如，所述载体组分可以包括、但不限于复制起点、选择标记基因、启动子、核糖体结合位点、信号序列、编码目标蛋白的核酸序列和转录终止序列。

在某些实施方案中，将哺乳动物细胞用作本发明的宿主细胞。哺乳动物细胞类型的例子包括、但不限于人胚胎肾(HEK)(例如，HEK293、HEK293F)、中国仓鼠卵巢(CHO)、HeLa、COS、PC3、Vero、MC3T3、NS0、Sp2/0、VERY、BHK、MDCK、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20、T47D、NS0(不内源地产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。在其它实施方案中，将大肠杆菌细胞用作本发明的宿主细胞。大肠杆菌菌株的例子包括、但不限于大肠杆菌294(31,446),大肠杆菌λ1776(

31,537,大肠杆菌BL21(DE3)(BAA-1025),和大肠杆菌RV308(31,608)。不同的宿主细胞具有蛋白产物的翻译后加工和修饰的特征性和特有机制。可以选择适当的细胞系或宿主系统以确保表达的抗-FcRn抗体的正确修饰和加工。使用本领域的常规技术，例如，转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀和直接显微注射，可以将上述表达载体引入合适的宿主细胞中。一旦将所述载体引入宿主细胞进行蛋白生产，就将宿主细胞在常规营养培养基中培养，所述营养培养基经适当修改以诱导启动子、选择转化体或扩增编码所需序列的基因。用于表达治疗性蛋白的方法是本领域已知的，参见，例如，Paulina Balbas,Argelia Lorence(编)Recombinant GeneExpression:Reviews and Protocols(Methods in Molecular Biology),Humana Press；2004年第2版(2004年7月20日)以及Vladimir Voynov和Justin A.Caravella(编)Therapeutic Proteins:Methods andProtocols(Methods in MolecularBiology)HumanaPress；2012年第2版(2012年6月28日)。

蛋白生产、回收和纯化

可以在本领域已知并且适合用于培养所选宿主细胞的培养基中培养用于生产本发明的抗-FcRn抗体的宿主细胞。用于哺乳动物宿主细胞的合适培养基的例子包括最低必需培养基(MEM)、Dulbecco氏改良的伊格尔培养基(DMEM)、Expi293^TM表达培养基、补充了胎牛血清(FBS)的DMEM和RPMI-1640。用于细菌宿主细胞的合适培养基的例子包括Luria液体培养基(LB)加必要的补充剂，诸如选择剂，例如，氨苄西林。在合适的温度(诸如约20℃至约39℃，例如，25℃至约37℃,优选37℃)和CO₂水平诸如5至10％(优选8％)培养宿主细胞。培养基的pH通常为约6.8至7.4，例如，7.0，主要取决于宿主生物。如果在本发明的表达载体中使用诱导型启动子，则在适合于启动子活化的条件下诱导蛋白表达。

蛋白回收通常涉及破坏宿主细胞，通常通过诸如渗透冲击、声处理或裂解等方法。一旦细胞破裂，可以通过离心或过滤除去细胞碎片。可以进一步纯化蛋白。通过蛋白纯化领域中已知的任何方法，例如，通过蛋白A亲和力、其它色谱法(例如，离子交换、亲和力和尺寸排阻柱色谱法)、离心、差异溶解度，或通过用于纯化蛋白的任意其它标准技术(参见Process Scale Purification ofAntibodies,Uwe Gottschalk(编)John Wiley&Sons,Inc.,2009)，可以纯化本发明的抗-FcRn抗体。在某些情况下，可以将抗-FcRn抗体缀合至标志物序列(诸如肽)以促进纯化。标志物氨基酸序列的一个例子是六组氨酸肽(His-标签)，其以微摩尔亲和力结合镍官能化的琼脂糖亲和柱。可用于纯化的其它肽标签包括、但不限于血凝素“HA”标签，其对应于从流感血凝素蛋白衍生出的表位。

可替换地，本发明的抗-FcRn抗体可以由受试者(例如，人)的细胞产生，例如，在治疗的背景下，通过施用含有编码本发明的抗-FcRn抗体的核酸分子的载体(例如，逆转录病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体(例如，牛痘病毒载体，诸如修饰的安哥拉痘苗病毒(Modified Vaccinia Ankara，MVA))、腺相关病毒载体和α病毒载体)。载体一旦进入受试者的细胞内(例如，通过转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射、感染等)，将促进抗-FcRn抗体的表达，然后从细胞中分泌所述抗体。如果疾病或障碍的治疗是期望的结果，则可能不需要其它措施。如果需要收集蛋白，则可以从受试者收集血液并通过本领域已知的方法从血液中纯化蛋白。

V.药物组合物和制备

本发明表征了包含一种或多种本文描述的抗-FcRn抗体的药物组合物。在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含一种或多种本发明的抗体(例如，N022-N024、N026和N027)作为治疗性蛋白。在其它实施方案中，包含一种或多种本发明的抗体(例如，N022-N024、N026和N027)的本发明的药物组合物可以在治疗中与其它试剂(例如，治疗性生物制品和/或小分子)或组合物联合使用。除了治疗有效量的抗体外，药物组合物还可包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，其可以通过本领域技术人员已知的方法配制。

在药物组合物中的可接受的载体和赋形剂在采用的剂量和浓度对接受者是无毒的。可接受的载体和赋形剂可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、聚合物、氨基酸和碳水化合物。本发明的药物组合物可以以可注射制剂的形式胃肠外施用。使用无菌溶液或任何药学上可接受的液体作为媒介物，可以配制用于注射(即静脉内注射)的药物组合物。药学上可接受的媒介物包括、但不限于无菌水、生理盐水和细胞培养基(例如，Dulbecco氏改良的伊格尔培养基(DMEM)、α-改良的伊格尔培养基(α-MEM)、F-12培养基)。制剂方法是本领域已知的，参见例如，Banga(编)Therapeutic Peptides and Proteins:Formulation,Processingand Delivery Systems(第2版)Taylor&Francis Group,CRC Press(2006)。

药物组合物可以根据需要以单位剂量形式形成。在药物制剂中包含的活性组分(例如，一种或多种本发明的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027、优选地N027和/或N024))的量使得提供在指定范围内的合适剂量(例如，在0.01-500mg/kg体重的范围内的剂量)。

VI.途径、剂量和施用

可以将包含一种或多种抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027、优选地N027和/或N024)作为治疗性蛋白的本发明的药物组合物配制成用于静脉内施用、胃肠外施用、皮下施用、肌肉内施用、动脉内施用、鞘内施用或腹膜内施用。特别地，静脉内施用是优选的。所述药物组合物也可以配制成用于口服、经鼻、喷雾、气雾剂、直肠或***施用或通过所述途径施用。对于可注射制剂，各种有效的药物载体是本领域已知的。

本发明的药物组合物的剂量取决于多种因素，包括施用途径、要治疗的疾病和受试者的身体特征，例如、年龄、重量、总体健康。通常，在单剂量内包含的本发明的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027中的任一种，优选N027或N024)的量可以是在不诱发显著毒性的情况下有效地预防、延迟或治疗所述疾病的量。本发明的药物组合物可以包括在0.01至500mg/kg的范围内的本发明的抗-FcRn抗体的剂量(例如，0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)，在一个更具体的实施方案中，约1至约100mg/kg，在一个更具体的实施方案中,约1至约50mg/kg。医师可以根据常规因素例如疾病的程度和受试者的不同参数来调整剂量。另外，医师可以根据诸如孕龄、分娩准备、妇女体重增加和/或妊娠时长等因素来调整剂量。

在某些情况下，在妊娠期间将本文描述的组合物和药物组合物施用给孕妇。在某些情况下，在妊娠的约5-25周(例如，约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25周)，将本文描述的组合物和药物组合物施用给孕妇。在某些情况下，所述组合物和药物组合物的施用在约孕龄34(第34周)以后(例如，在第34、35、36或37周以后)停止。在某些情况下，在所述组合物和药物组合物的施用停止以后，将IVIG施用给孕妇。在某些情况下，在所述组合物和药物组合物的施用停止以后约3-15天(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15天)，施用IVIG。在某些情况下，根据诸如女性体重增加等因素来调整所述组合物和药物组合物的施用停止以后IVIG施用的时间。在某些情况下，在孕龄12以后(例如在12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30以后)第一次施用本文描述的组合物和药物组合物。在某些情况下，在孕龄14至26(例如，14至25；15至25；或15至26等)之间在妊娠期间施用它们。在某些情况下，在孕龄12至36(例如，12至36；12至35；12至34；13至36；13至35；13至34；14至36；14至35；14至34；15至36；15至35；15至34；16至36；16至35；或16至34；等)之间在妊娠期间施用它们。

以与剂量制剂相容的方式和在治疗上有效的量施用所述药物组合物，以导致症状的改善或补救。以多种剂型施用药物组合物，例如，静脉内剂型、皮下剂型和口服剂型(例如，可摄取的溶液、药物释放胶囊剂)。通常，治疗性蛋白的剂量为1-100mg/kg，例如，1-50mg/kg。可以将含有抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027中的任何一种，优选N027或N024)的本发明的药物组合物施用给有此需要的受试者，例如，每天、每周、每月、每半年、每年一次或多次(例如，1-10次或更多次)，或根据医学需要。可以以单剂量或多剂量方案提供剂量。施用之间的时机可以随着医学病症的改善而减少，或随着患者的健康下降而增加。

VII.治疗方法和适应症

本发明的抗-FcRn抗体对人FcRn的阻断在由IgG自身抗体驱动的疾病中可能具有治疗益处。FcRn阻断的诱导整体IgG分解代谢并清除多种自身抗体而又不干扰血清白蛋白、少量循环代谢物或脂蛋白的能力，为扩大自身抗体除去策略对具有自身抗体驱动的自身免疫病病理学的患者的实用性和可达性提供了方法。尽管本发明不受理论束缚，但是本发明的抗-FcRn抗体的主要作用机制可以是增加循环中的病原性自身抗体的分解代谢并减少受影响组织中的自身抗体和免疫复合物沉积。

含有一种或多种抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)的本发明的药物组合物和方法可用于促进受试者中病原性抗体(例如，IgG和IgG自身抗体)的分解代谢和清除，减少免疫应答，例如，阻断受试者中免疫应答的基于免疫复合物的激活，和治疗受试者中的免疫学病症或疾病。具体地，本发明的药物组合物和方法可用于减少或治疗急性或慢性免疫应答的基于免疫复合物的激活。所述急性免疫应答可以被选自以下的医学病症活化：寻常型天疱疮、狼疮肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗-磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力损失、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病和血清病。所述慢性免疫应答可以被选自以下的医学病症活化：慢性炎症性脱髓鞘多神经病(CIDP)、全身性狼疮、指示急性治疗的障碍的慢性形式、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎和抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎。

在某些实施方案中，本发明的药物组合物和方法可用于减轻或治疗被自身免疫病活化的免疫应答。所述自身免疫病可以选自：斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、阿狄森氏病、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风和韦格纳氏肉芽肿病。

具体地，本发明的药物组合物和方法可用于减轻或治疗被系统性红斑狼疮、抗磷脂综合征、寻常型天疱疮/大疱性类天疱疮、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎、重症肌无力或视神经脊髓炎活化的免疫应答。

在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于降低在胎儿中发生贫血的风险。在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减少或消除对IUT(子宫内输血)的需要。在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减少或消除对出生前PP+IVIg、出生后输血、IVIg和/或光疗的需要。

在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减轻或治疗被自身免疫病活化的免疫应答。所述自身免疫病可以选自：斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征(例如，抗磷脂抗体综合征)、阿狄森氏病、溶血性贫血(例如，温型自身免疫性溶血性贫血)、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、大疱性表皮松解症；纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、膜性肾病、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风和韦格纳氏肉芽肿病。在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减轻或治疗胎儿或新生儿中的免疫应答。在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减轻或治疗怀孕母亲中被自身免疫病活化的胎儿或新生儿的免疫应答。

具体地，药物组合物和方法可用于减轻或治疗被系统性红斑狼疮、抗磷脂综合征、寻常型天疱疮/大疱性类天疱疮、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎、重症肌无力或视神经脊髓炎活化的免疫应答。在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减轻或治疗胎儿或新生儿中的免疫应答。在某些实施方案中，所述药物组合物和方法可用于减轻或治疗怀孕母亲中被系统性红斑狼疮、抗磷脂综合征、寻常型天疱疮/大疱性类天疱疮、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎、重症肌无力或视神经脊髓炎活化的免疫应答。

药物组合物和方法可用于以下方法中：减少经怀孕受试者的胎盘的病原性抗体运输(例如，病原性母体IgG抗体运输)，增加怀孕受试者的病原性抗体分解代谢，以及治疗胎儿或新生儿中抗体介导的病毒性疾病增强，所述方法包括向怀孕受试者施用分离的结合人FcRn的抗体。可能受益于本文描述的分离的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)的FcRn抑制作用的疾病和障碍包括胎儿和/或新生儿中的疾病和障碍，其由母体病原性抗体(例如，母体病原性IgG抗体)从怀孕受试者向胎儿和/或新生儿的经胎盘转移引起。

在某些实施方案中，可能受益于本文描述的分离的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)的FcRn抑制作用的疾病和障碍是胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。胎儿和新生儿同种免疫障碍是由怀孕的受试者中的病原性抗体引起的胎儿和/或新生儿的障碍。怀孕的受试者中的病原性抗体可能攻击胎儿的抗原(例如，胎儿从胎儿父亲那里继承的抗原)，从而导致胎儿或新生儿患有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。

通过本文所述的方法可以治疗的胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍的例子包括、但不限于：胎儿和新生儿同种免疫血小板减少症(FNAIT)、胎儿和新生儿的溶血性疾病(HDFN)、同种免疫泛-血小板减少症、先天性心脏传导阻滞、胎儿关节挛缩、新生儿重症肌无力、新生儿自身免疫性溶血性贫血、新生儿抗磷脂综合征、新生儿多肌炎、皮肌炎、新生儿狼疮、新生儿硬皮病。贝切特氏病、新生儿格雷夫斯病、新生儿川崎病、新生儿自身免疫性甲状腺疾病和新生儿I型糖尿病。

在某些实施方案中，可能受益于本文描述的分离的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)的FcRn抑制作用的疾病和障碍是病毒性疾病，其中抗体促进病毒进入宿主细胞，从而导致细胞中增加的或增强的侵染性，例如，抗体介导的病毒性疾病增强。在某些实施方案中，抗体可以结合病毒表面蛋白，并且抗体/病毒复合物可以通过抗体和受体之间的相互作用结合细胞表面上的FcRn。随后，抗体/病毒复合物可以被内化到细胞中。例如，病毒可以通过与母体IgG抗体形成复合物而进入胎儿的细胞和/或组织。母体IgG抗体可以结合病毒表面蛋白，而IgG/病毒复合物可以结合胎盘的合体滋养层中的FcRn，其然后将所述复合物转移进胎儿中。

在某些实施方案中，本文所述的方法可以用于治疗抗体介导的病毒性疾病增强。在某些实施方案中，被病原性抗体(例如，病原性IgG抗体)增强的病毒性疾病包括、但不限于由以下感染造成的病毒性疾病：α病毒感染、黄病毒感染、寨卡病毒感染、切昆贡亚病毒感染、罗斯河病毒感染、严重急性呼吸综合征冠状病毒感染、中东呼吸综合征、禽流感感染、流感病毒感染、人呼吸道合胞体病毒感染、埃博拉病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、人免疫缺陷病毒感染、呼吸道合胞体病毒感染、汉坦病毒属感染、格塔病毒感染、辛德毕斯病毒感染、布尼亚病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒B感染、兔痘病毒感染、乳酸脱氢酶升高病毒感染、里奥病毒感染、狂犬病病毒感染、***病毒感染、猪生殖和呼吸综合征病毒感染、猴出血热病毒感染、马传染性贫血病毒感染、羊关节炎病毒感染、非洲猪瘟病毒感染、慢病毒感染、BK乳多泡病毒感染、墨累河谷脑炎病毒感染、肠道病毒感染、巨细胞病毒感染、肺病毒感染、麻疹病毒感染和梅寿氏病毒感染。

抗-FcRn抗体对人FcRn的阻断在由病原性抗体(例如，病原性IgG抗体)驱动的疾病中可能具有治疗益处。FcRn阻断的诱导整体病原性抗体分解代谢并清除多种病原性抗体、少量循环代谢物或脂蛋白的能力，为扩大病原性抗体除去策略对具有病原性抗体驱动的自身免疫病病理学的患者的实用性和可达性提供了方法。尽管不受理论束缚，但是抗-FcRn抗体的主要作用机制可以是增加循环中的病原性抗体的分解代谢并减少受影响组织中的病原性抗体和免疫复合物沉积。

可以将本文描述的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)施用给患有医学病症或处于患有医学病症的风险中的怀孕受试者，所述医学病症在所述怀孕的受试者中活化免疫应答。在某些实施方案中，所述怀孕的受试者可能在过去已经患有在所述怀孕的受试者中活化免疫应答的医学病症。在某些实施方案中，所述怀孕的受试者具有先前怀有胎儿或新生儿的历史，所述胎儿或新生儿具有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。在某些实施方案中，如果在得自怀孕的受试者的生物样品(例如，血液或尿样品)中检测到与免疫疾病有关的病原性抗体，可以将本文描述的抗-FcRn抗体施用给怀孕的受试者。在某些实施方案中，已知在怀孕的受试者的生物样品中检测到的病原性抗体会结合来自怀孕的受试者中的胎儿的抗原(例如，胎儿从胎儿父亲那里继承的抗原)。

在某些实施方案中，可以将本文描述的抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027，优选N027和/或N024)施用给受试者，其计划怀孕并患有医学病症或处于患有医学病症的风险中，所述医学病症在所述怀孕的受试者中活化免疫应答，和/或其在过去已经患有在怀孕的受试者中活化免疫应答的医学病症。在某些实施方案中，受试者正在计划怀孕并且具有先前怀有胎儿或新生儿的历史，所述胎儿或新生儿具有胎儿和新生儿同种免疫和/或自身免疫障碍。在某些实施方案中，可以将本文描述的抗-FcRn抗体施用给受试者，其正在计划怀孕且其生物样品含有与免疫疾病有关的病原性抗体。

在某些实施方案中，可以将本文描述的抗-FcRn抗体施用给受试者(例如，怀孕的受试者)以减轻或治疗所述受试者中的急性或慢性免疫应答的基于免疫复合物的激活。所述急性免疫应答可以被医学病症(例如，寻常型天疱疮、狼疮肾炎、重症肌无力、格-巴二氏综合征、抗体介导的排斥、灾难性抗-磷脂抗体综合征、免疫复合物介导的血管炎、肾小球炎、通道病、视神经脊髓炎、自身免疫性听力损失、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、免疫性嗜中性粒细胞减少症、扩张型心肌病、血清病、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、全身性狼疮、反应性关节病、原发性胆汁性肝硬化、溃疡性结肠炎或抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关的血管炎)活化。

在某些实施方案中，可以将本文描述的抗-FcRn抗体施用给受试者(例如，怀孕的受试者)以减轻或治疗被自身免疫病活化的免疫应答。所述自身免疫病可以是，例如，斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、阿狄森氏病、溶血性贫血、温型自身免疫性溶血性贫血(wAIHA)、抗-因子抗体、肝素诱导的血小板减少症(HICT)、敏化的移植物、自身免疫性肝炎、肝炎、贝赫切特病、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘多神经病、丘斯综合征、瘢痕性类天疱疮、局限性硬皮病(肢端硬皮综合征)、冷凝集素疾病、克罗恩氏病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、纤维肌炎、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、炎性肠病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、特发性肺纤维化、IgA肾病、胰岛素依赖型糖尿病、青少年关节炎、扁平苔藓、狼疮、美尼尔氏病、混合性***病、多发性硬化、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、僵人综合征、大动脉炎、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风或韦格纳氏肉芽肿病。

实施例

实施例1-抗体生产

使用骨结合素分泌信号将IgG重链和轻链核酸分子克隆到载体pCDNA3.3中。在Expi293培养基中在37℃和8％CO₂下培养HEK 293F细胞。以3x10⁶/ml的密度用每升1mg总DNA转染细胞。按照制造商的指示在第2天和第3天添加增强剂，并培养细胞直到第5天或第6天，然后细胞活力下降至低于50％至60％。然后将细胞通过离心分离出来，将用过的培养基无菌过滤，并保存在4℃直至抗体纯化。通过两柱法纯化抗体：POROS蛋白A色谱法，然后是POROS HS-50阳离子交换色谱法。前者从表达的抗体中分离出大部分的宿主细胞蛋白，而后者则除去重链二聚体、轻链二聚体和半抗体，以及更高分子量物质。基于SDS-PAGE凝胶分析，合并来自HS-50阳离子交换柱的级分，以使全长抗体的纯度最大化。将收集的级分置于在pH 7.2的PBS中平衡过的Sephadex G50缓冲液更换柱上。合并峰级分，并使用30kDa旋转浓缩器浓缩至大于10mg/ml，并在-30℃冷冻成2mg和5mg等分试样。通过SDS-PAGE检查最终蛋白样品的纯度。

实施例2-结合亲合力

通过亲和力成熟，我们鉴定了超过100种与人FcRn具有结合亲和力的抗-FcRn抗体，其K_D在亚微摩尔范围内。选择了五种抗体(N022-N024、N026和N027)进行进一步表征。使用表面等离子体共振(SPR)确定这五种抗体中的每种的结合和解离速率(分别是k_a和k_d)。简而言之，将Bio-Rad GLC传感器芯片***ProteOn XPR 36中并进行空气初始化。初始化以后，将运行缓冲液切换为新制备的缓冲液，即适当的HBSP+(0.01M HEPES,0.15M NaCl,0.05％P20,pH 7.4)或磷酸钠缓冲液(0.02M磷酸钠,0.15M NaCl,0.05％P20,pH 6.0)，将其用于测定的其余部分和用于所有稀释。在30μl/分钟以60秒使用0.5％SDS、50mM NaOH和10mM HCl的各一次注射预先调理芯片。将来自GE Healthcare(BR100839)的小鼠抗-人FcmAb在10mM乙酸盐缓冲液pH 5.0中稀释至10μg/ml，并使用标准胺偶联化学以水平方向将约5,700个响应单位(RU)固定化在GLC传感器芯片上。将要测试的抗-hFcRn mAb以垂直方向捕获到表面上，目标是每个相互作用点固定约200个响应单位(RU)。从1.25μg/ml开始，以五点三倍稀释系列稀释rhFcRn，留下一条泳道作为仅缓冲液用于双重参考。分析物以水平方向以100μl/分钟流过传感器表面240s，解离时间为3,600s。通过在水平和垂直方向上以100μl/分钟注射3M MgCl₂30s来完成再生。对所有配体重复这些程序。

使用ProteOn Manager软件进行数据分析。使用Auto Process工具针对Y和X方向调整每个相互作用步骤，然后通过点间通道参照除去非特异性相互作用，并通过空白泳道双重参照除去测定漂移。使用具有分组的Rmax的Langmuir 1:1动力学模型拟合数据。将在单次运行中从ProteOn Manager获得的k_a、k_d和K_D值平均化，并且当N为三或更大时，在Microsoft Excel中计算它们的CV百分比。

表3表明，本发明的五种抗-FcRn抗体N022、N022、N024、N026和N027都在pH 7.4以高亲和力结合人FcRn。关于在pH 7.4结合人FcRn，本发明的抗-FcRn抗体的平衡解离常数K_D是在19.4pM(N027)至36.5pM(N026)的范围内。表3也显示了五种抗-FcRn抗体的快结合速率和慢解离速率。在pH 7.4，关于结合人FcRn，结合速率是在0.93-1.42X10⁶1/Ms的范围内。解离速率是在2.31-4.44X10⁶1/s的范围内。

表3

ka(1/Ms)

kd(1/s)

KD(M)

Rmax

Chi2

KD(pM)

N022

1.42E+06

4.42E-05

3.10E-11

146.93

7.65

N023

9.27E+05

2.91E-05

3.14E-11

193.43

5.26

31.4

N024

1.13E+06

4.03E-05

3.55E-11

181.17

6.12

35.5

N026

1.22E+06

4.44E-05

3.65E-11

163.9

5.68

36.5

N027

1.19E+06

2.31E-05

1.94E-11

211.33

7.81

19.4

实施例3-IgG竞争

在异位表达细胞表面糖磷脂酰肌醇(GPI)-连接的FcRn的人胚胎肾(HEK)293细胞上评价了本发明的抗-FcRn抗体与IgG竞争结合人或食蟹猴FcRn的能力。人和食蟹猴FcRnα氨基酸序列表现出97.5％序列同一性。在人和食蟹猴FcRnα之间，355个氨基酸残基中的九个是不同的，但在表位作图的结合区中没有一个。使用66nM荧光探针标记的非特异性IgG测定细胞结合的IgG的水平。在pH 6.0完成IgG与细胞表面FcRn的结合，这允许IgG的Fc部分与FcRn相互作用。如在图1中所示，随着抗-FcRn抗体(N022-N024、N026或N027)的浓度增加，细胞结合的IgG的量显著减少。本发明的五种示例性抗-FcRn抗体中的每一种以浓度和饱和度依赖性的方式抑制了IgG的结合，从而证实了抗-FcRn抗体N022-N024、N026和N027在pH 6.0有效地与IgG竞争并抑制IgG与FcRn的结合的能力。抗体的EC50值是在2至6nM之间。

实施例4-抗-FcRn抗体对小鼠中的IgG分解代谢的影响

为了测量本发明的抗-FcRn抗体对体内IgG分解代谢的影响，使用了人FcRn转基因小鼠品系FcRn-/-hFcRn(32)Tg小鼠，其缺乏小鼠FcRn，但以类似于内源性小鼠和人FcRn的组织分布表达人FcRn。将在第0天注射了500mg/kg的人IgG的FcRn-/-hFcRn(32)Tg小鼠在第1天和第4天施用10mg/kg的单剂量的抗-FcRn抗体。如在图2中所示，抗-FcRn抗体的施用增加了IgG的分解代谢，如通过在抗-FcRn抗体治疗的小鼠中随时间测量的较低IgG水平所见。N024(K_D＝35.5pM)、N026(K_D＝36.5pM)和N027(K_D＝19.4pM)的活性在10mg/kg似乎是相似的。

实施例5-抗-FcRn抗体的体外和体内功能表征

体外

在异位表达细胞表面糖磷脂酰肌醇(GPI)-连接的人或食蟹猴FcRn的人胚胎肾(HEK)293细胞上测量本发明抗体的细胞结合亲和力。FcRn是一种具有IgG和白蛋白结合结构域的I型跨膜蛋白，所述结构域朝向胞内体膜的腔侧或在转运至质膜时朝向细胞表面。抗-FcRn抗体在pH 7.4与HEK293细胞上的细胞表面膜相关FcRn的结合会模仿在生理相关环境中以及仅抗体的Fab结构域而不是Fc结构域与FcRn相互作用的pH下的结合。FcRn细胞外结构域通过C-端工程改造的GPI连接以高密度展示在细胞表面上。用荧光探针标记本发明的抗-FcRn抗体。使抗体在冰上结合30分钟。然后在4℃洗涤细胞，并使用荧光团-标记的第二抗体(例如，山羊抗-人IgG F(ab)₂)检测结合的抗体。与人FcRn的结合是浓度依赖性的，并且本发明的抗体显示出在4至7nM范围内的EC50值。

还在内源地表达的人FcRn上测量了本发明抗体的细胞结合亲和力。单核细胞表达最高水平的FcRn，并在小鼠和人类血液中显示出FcRn表达的最高阳性百分比。使用单核细胞细胞系THP-1来评价抗-FcRn抗体在pH7.4与内源性人FcRn的结合。由于内源性FcRn主要是在THP-1细胞的细胞内胞内体囊泡中，因此首先将细胞用温和的去污剂透化并固定，然后在有牛血清存在下与抗-FcRn抗体一起在4℃温育30分钟以阻断非特异性的Fc受体结合。该测定能够区分更好地结合内源性人FcRn的抗体。抗-FcRn抗体与THP-1细胞的结合是浓度依赖性的。本发明的所有抗体，例如，N022-N024、N026和N027，显示出比IgG1更好的结合亲和力。抗体N027表现出最高的结合亲和力，具有3.0nM的EC50值。

在异位表达细胞表面GPI-连接的FcRn的人胚胎肾(HEK)293细胞上评价了本发明的抗-FcRn抗体与IgG竞争结合人或食蟹猴FcRn的能力。使用荧光探针标记的非特异性IgG测定了细胞结合的IgG的水平。在pH 6.0完成IgG与细胞表面FcRn的结合，这允许IgG的Fc部分与FcRn相互作用。如在实施例3和图1中所示，细胞结合的IgG的量随着抗-FcRn抗体的浓度增加而显著降低。IgG的结合被本发明的五种示例性抗-FcRn抗体(例如，N022-N024、N026和N027)中的每一种以浓度和饱和度依赖性方式抑制，从而证明了抗-FcRn抗体在pH 6.0有效地与IgG竞争并抑制IgG与FcRn的结合的能力。抗体的EC50值是在2至6nM范围内。

通过本发明的抗体的氢-氘交换进行的表位作图指示，所述抗体结合位于和/或邻近Fc-FcRn相互作用界面的人FcRn上的表位，这提示本发明的抗体通过直接抑制阻断了IgG与FcRn的结合。此外，表位作图的结合位点远离FcRn的白蛋白结合位点。使用酶联免疫吸附测定(ELISA)证实，本发明的抗体不会抑制血清白蛋白与FcRn的结合。使可溶性的His-标记的人FcRn的细胞外结构域结合到板表面，并在pH 6.0与递增浓度的抗-FcRn抗体一起预温育。使辣根过氧化物酶(HRP)-缀合的人血清白蛋白结合可溶性的His-标记的FcRn。抗体都没有抑制白蛋白与FcRn的结合。此外，体内实验证据还显示，小鼠白蛋白水平在抗-FcRn抗体施用后保持恒定，从而指示白蛋白重复利用不受抗体与FcRn的结合干扰。

体内

为了测试本发明的抗-FcRn抗体对IgG分解代谢的体内影响，使用了人FcRn转基因小鼠品系FcRn-/-hFcRn(32)Tg小鼠，其缺乏小鼠FcRn，但以类似于内源性小鼠和人FcRn的组织分布表达人FcRn。将在第0天注射了人IgG的FcRn-/-hFcRn(32)Tg小鼠在第1天和第4天施用10mg/kg的单剂量的抗-FcRn抗体。如在实施例3和图2中所示，抗-FcRn抗体的施用增加了IgG的分解代谢，如通过在抗-FcRn抗体治疗的小鼠中随时间测量的较低IgG水平所见。N024(K_D＝35.5pM)、N026(K_D＝36.5pM)和N027(K_D＝19.4pM)的活性在10mg/kg似乎是相似的。

实施例6-抗-FcRn抗体对小鼠中的IgG水平和靶标占据的影响

在给Tg32人FcRn(hFCGRT)转基因的、小鼠FcRn(mFCGRT)敲除的小鼠施用500mg/kgIVIg(示踪剂)以后24小时静脉内地(i.v.)施用N027。每天通过ELISA检测循环中的人IgG。在用免疫表型细胞表面标志物温育细胞、然后固定和透化后，通过荧光激活细胞分选术(FACS)每天测量来自裂解全血的单核细胞中的靶标占据。通过用Dy650-标记的N027染色(每组n＝4雄性)来测量未占据的FcRn。如在图3中所示，N027的施用以剂量依赖性方式降低了IgG水平和未占据的FcRn的百分比。

实施例7–在食蟹猴中IgG分解代谢的选择性诱导和靶标占据

在t＝0在食蟹猴中静脉注射N027。通过ELISA检测循环中的内源性IgG和白蛋白。在用免疫表型细胞表面标志物温育细胞、然后固定和透化后，通过FACS测量来自裂解全血的单核细胞中的靶标占据。通过用Dy650-标记的N027染色(每组n＝3雄性)来测量未占据的FcRn。如在图4中所示，N027的施用以剂量依赖性方式降低了IgG水平和未占据的FcRn的百分比，而血浆白蛋白水平保持不变。

实施例8-N027在小鼠中的生物分布

将用荧光团(VT680)标记的N027或同种型人IgG1对照抗体以30mg/kg静脉内地施用给Tg32人FcRn转基因的、小鼠FcRn敲除的小鼠。通过定量离体光学成像测量单个器官中的标记抗体的水平。图5显示了N027在小鼠的不同器官中的生物分布。

实施例9-N027在小鼠胶原抗体诱导的关节炎中的效力

通过第1天腹膜内(i.p.)注射ArthritoMab^TM混合液(MD Biosciences)和在第4天用100μg LPS(腹膜内)诱导炎症性疾病活动，在Tg32人FcRn转基因的、小鼠FcRn敲除的小鼠中诱导胶原抗体诱导的关节炎。在疾病诱导和随机化以后第6天，以5mg/kg(箭头)在治疗上静脉内施用N027。在随机化后第6天施用1g/kg的IVIG(阳性对照组)或媒介物-PBS(阴性对照)(n＝5/组)。如在图6中所示，当治疗性施用时，N027有效地抑制人转基因的FcRn小鼠中的胶原抗体诱导的关节炎。

实施例10-N027在小鼠慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)中的效力

通过用皮下(s.c.)微渗透泵连续输注抗-血小板抗体(抗-CD41,MWReg30)，在Tg32人FcRn(hFCGRT)转基因的、小鼠FcRn(mFCGRT)敲除的小鼠中诱导血小板减少症。循环中的血小板水平在泵植入后72小时(第3天)之前下降至300x109/L或更低。在泵植入后72小时(第3天)和120小时(第5天)在治疗上静脉内施用N027(A,n＝4/组；B,n＝7/组)。图7显示了N027对具有血小板减少症的小鼠中的血小板水平的影响。

实施例11-在靶细胞类型中用N027实现了浓度依赖性FcRn占据

在不同细胞类型诸如原代人主动脉内皮细胞(HAEC)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞和胎盘滋养层(HVT)之间对比了N027的受体占据。使细胞在完全EBM-2培养基(Lonza,Waterville)中或在滋养层培养基(ScienCell)中生长至汇合。将细胞单层在1ml含有不同浓度的未标记的N027的培养基中在37℃温育1小时。洗涤以后，将细胞用冷HyQTase收获，固定并和渗透化处理，然后与VivoTag645-标记的N027(10μg/ml)一起在4℃在暗处温育30分钟。温育以后，将细胞用透化缓冲液洗涤，然后重新悬浮在FACS缓冲液中。通过流式细胞计量术测量细胞结合的VivoTag645-N027。值代表几何平均荧光强度(gMFI)±SD(n＝2)。图8A、8B和8C分别显示了HAEC、HUVEC和HVT在N027浓度之间的FcRn占据。在表4中总结的结果表明，人EC(HAEC、HUVEC)以及胎盘HVT表现出N027的类似浓度依赖性受体占据。

表4

人原代细胞	IC<sub>50</sub>	100％FcRn占据剂量
			主动脉内皮细胞(HAEC)	0.23μg/mL	2.43μg/mL
静脉内皮细胞(HUVEC)	0.15μg/mL	4.99μg/mL
			胎盘滋养层细胞(HVT)	0.15μg/mL	2.43μg/mL

实施例12–达到100％受体占据的N027浓度导致增加的细胞内IgG积累

在不同细胞类型之间对比了N027的受体占据水平与IgG细胞内运输的改变之间的关系。在内皮细胞培养物(EBM-2,Lonza)中培养人内皮细胞(HAEC和HUVEC)，而在滋养层培养基(ScienCell)中培养人胎盘滋养层(HVT)。然后将细胞单层在37℃在1mL培养基中脉冲处理4-5小时，所述培养基含有：

1.不同浓度的N027+VivoTag645-IgG(50μg/mL)；或

2.不同浓度的同种型对照IgG+VivoTag645-IgG(50μg/mL)

然后将细胞单层在冷培养基中洗涤，然后通过HyQtase处理使细胞脱离。通过流式细胞计量术测量细胞结合的VivoTag645-N027。值代表几何平均荧光强度(gMFI)±SD(n＝2)。图9A、9B和9C分别显示了与N027的各种剂量对应的HAEC、HUVEC和HVT的细胞内IgG水平。与同种型对照相比，与>100％FcRn占据对应的N027剂量导致明显更高的IgG积累。结果证实，达到IgG积累的饱和水平所需的有效N027浓度在这些靶细胞类型中是相似的，范围为4.99至2.43μg/mL，如表5所示。

表5

人原代细胞	～IC<sub>50</sub>	100％FcRn占据剂量
			主动脉内皮细胞(HAEC)	0.12μg/mL	2.43μg/mL
静脉内皮细胞(HUVEC)	0.15μg/mL	4.99μg/mL
			胎盘滋养层细胞(HVT)	0.07μg/mL	3.68μg/mL

实施例13-达到100％FcRn占据的时间的测量

为了确定N027使FcRn饱和并阻断IgG转运所花费的时间，将汇合的血管内皮细胞(HUVEC)单层在EBM-2培养基中在有或没有饱和浓度的N027(16.6μg/ml)存在下在37℃温育指定的时间(图10)。温育结束后，将细胞洗涤并用冷HyQtase收获，然后固定并透化。然后将这些细胞在透化缓冲液+10％人血清和VivoTag645-标记的N027(10μg/mL)中在4℃在暗处温育30分钟。然后将细胞用透化缓冲液洗涤，重新悬浮于FACS缓冲液中，并通过FACS测量细胞结合的VivoTag645-N027。值代表平均gMFI±SD(n＝2)。图10所示的结果表明，在该内皮细胞类型中在约30分钟达到了N027的100％FcRn占据。

实施例14-人血管内皮细胞和胎盘滋养层表现出相似的FcRn周转率，其不受N027影响

在有和没有N027存在下对比了人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养层(HVT)的FcRn周转率。将细胞在含有培养基的75cm²烧瓶中在25％D₂O(氧化氘,来自Aldrich)下培养三天。三天后，用含有N027(100μg/mL)或对照IgG(100μg/ml)或模拟处理的普通培养基替换培养基。然后在改变培养基后的指定时间从烧瓶收获细胞(图11A和11B)。洗涤细胞单层；将细胞收获，沉淀，将各个沉淀物分别裂解和消化。进行了弹枪蛋白组学和靶向蛋白组学。使用Qual Browser，提取同位素相对强度，并通过将每个强度除以总和来计算每种同位素标记异构体的分数丰度。使用分数丰度值计算在系统中剩余的D₂O-标记的FcRn的百分比。图11A和11B显示，FcRn周转率在人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养层(HVT)之间是相似的。此外，用N027的处理没有改变FcRn周转率。

实施例15-FcRn在靶细胞中的定位

对比了N027在人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养层(HVT)中的定位。在玻璃盖玻片上在EBM-2/TM培养基中培养细胞。将活细胞在含有DyLight594-N027(2μg/mL)的培养基中在37℃温育1小时。然后洗涤细胞，并使用合适的滤光片在共焦模式下用60X干物镜在荧光显微镜上实时成像。代表性的单细胞图像显示了在两种细胞类型中结合到FcRn的内吞池的N027的相似定位模式(图12A和12B)。细胞中心的圆圈指示细胞核的位置。

实施例16-N027处理对IgG运输的动力学的影响：细胞内IgG积累和与溶酶体的共定位

在表达FcRn的靶细胞类型(诸如人血管内皮细胞(HUVEC)和胎盘滋养层(HVT))之间对比了N027处理对细胞内IgG积累的动力学的影响。将细胞在EBM-2培养基(Lonza,Waterville)或TM1培养基(ScienCell)中培养至汇合。然后将汇合的细胞单层在1ml含有N027(2μg/ml)+VivoTag645-IgG(50μg/mL)或同种型对照IgG(2μg/mL)+VivoTag645-IgG(50μg/ml)的培养基中在37℃脉冲处理20小时。然后洗涤细胞单层，然后在含有N027(2μg/mL)或同种型对照(2μg/ml)的追踪培养基中在37℃追踪0分钟、30分钟和90分钟。在每个追踪阶段之后，将细胞洗涤，脱离，并通过HyQtase处理进行收集。通过流式细胞计量术测量细胞结合的VivoTag645-N027。值代表几何平均荧光强度(gMFI)±SD(n＝2)。用N027处理过的细胞显示出更高的细胞内IgG水平。此外，如在图13A和13B中所示，N027对细胞内IgG积累的动力学的影响在测试的两种细胞类型之间是相似的。

我们还确定了N027是否会增加原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的细胞内IgG和IgG与溶酶体的共定位。使细胞在玻璃盖玻片上生长，并在含有10μg/ml Alexa Fluor 594葡聚糖(10,000MW，阴离子型，可固定)的培养基中在37℃温育2小时。温育后，将细胞洗涤，并在含有N027(2μg/ml)+DyLight 488-IgG(50μg/ml)的培养基或含有同种型对照IgG(2μg/ml)+DyLight 488-IgG(50μg/ml)的培养基中或在未经任何IgG处理的培养基中在37℃脉冲处理20小时。将平板在冷培养基中洗涤，然后在37℃追踪0分钟或30分钟。使用以下追踪条件：在有N027(2μg/mL)存在下追踪N027+DyLight 488-IgG脉冲设置；在有同种型对照IgG(2μg/mL)存在下追踪同种型+DyLight 488-IVIG脉冲设置，并在仅培养基中追踪未经任何IgG处理的设置。将细胞洗涤，在BD Cytofix/Cytoperm溶液中在4℃在暗处温育30分钟，用perm洗涤缓冲液洗涤，然后在perm洗涤缓冲液+10％正常小鼠血清+5μg/ml小鼠抗-人Lamp1抗体中在4℃在暗处温育过夜。然后将细胞用perm洗涤缓冲液和PBS洗涤，然后固定在载玻片上。使用共焦模式在具有60X干物镜的Olympus荧光显微镜上以2倍光学放大倍率进行细胞成像。如在图13C和13D中所示，表明与同种型对照IgG处理的细胞相比，N027处理增加了溶酶体隔室中IgG的积累。

实施例17-N027对食蟹猴中的内源性母体和胎儿IgG的抑制以及向胎儿循环的N027转移的缺乏

从妊娠第45天(GD45)至在GD100(妊娠中期)或GD140(妊娠晚期)的剖腹产，每周给怀孕的雌性食蟹猕猴施用。该研究还包括了一组动物，其被允许分娩它们的婴儿(出生日[BD1])。表8列出了设计研究。

表8：研究设计

^a在研究中最初招募了二十四(24)名怀孕雌性(每组8名)。将每组四例妊娠分配给GD140±2剖腹产组群，并将剩余的每组4例妊娠分配给GD100±2组群。

使用标准的经验证的总IgG ELISA在母体和新生儿血液样品中测量IgG浓度(表9)。简而言之，用商购可得的抗-人IgG抗原包被聚苯乙烯板(96孔)。将包被的板洗涤以除去未结合的样品，然后用封闭缓冲液封闭，然后洗涤以除去残留的封闭缓冲液。将血清样品稀释并加入抗-人IgG包被的孔中，并在室温温育60±5分钟。将每个孔洗涤，然后添加缀合至辣根过氧化物酶(HRP)的第二(检测)抗体，并在室温温育60±5分钟。随后将四甲基联苯胺(TMB)底物添加到每个孔中，并在室温在平板振荡器上温育20±5分钟，然后添加2N H₂SO4以终止酶反应。使用190微量培养板读数器在450nm读取每个孔的吸光度。识别总IgG并可与食蟹猴IgG交叉反应的任何商购可得的或专有的抗-人IgG捕获抗体和HRP缀合的抗-人IgG检测抗体对可以用于在ELISA中测量总食蟹猴IgG。IgG检测抗体可以是例如完整的IgG、多克隆血清抗体、单克隆抗体或Fab(2)片段。

表9：方法

对于所有参加研究的怀孕成年雌性，根据表10通过静脉穿刺术从股静脉(优选)或头/隐静脉收集血液。对于通过GD100±2或GD140±2的剖腹产获得的所有胎儿，根据表10从脐带收集血液。使样品(1mL)凝结至少60分钟；离心，并将所得的血清分离，转移至适当地标记的(例如，IgG)聚丙烯试管中，并立即在设定为维持-80℃的冰柜中冷冻。

表10：用于评价的样品收集时间点

^a仅从GD100剖腹产组群中的动物收集的时间点。

^b基于GD44至46的潜在剂量天数列出的收集范围。所有时间点均基于给药日停止。

内源性母体IgG的抑制

N027施用导致成年雌性在给药后72小时开始血清IgG水平的剂量无关降低，并在GD51-53：给药前时间点在100和300mg/kg给药动物中均观察到血清IgG浓度的最大降低(图16)。第2组(100mg/kg)的血清IgG值以剂量依赖性的方式趋向给药前水平，在GD65-67:给药前时间点开始，并持续直到在GD93-95和GD135-137的下一次剂量施用，此后，在施用后72小时内出现相似量级的下降。在整个给药期间的所有给药前时间点(如表10所示)，第3组动物(300mg/kg)保持在最低IgG值。在用媒介物治疗的动物(第1组)中未观察到IgG相对于基线的变化。

在GD44-46、GD93-95和GD135-137给药后2小时，存在血清IgG浓度的剂量依赖性增加。这些增加可能是通过总IgG测定检测N027的结果，并且不被认为与N027的药理学有关。相对于在GD100和GD140以及在BD1时间点在新生儿中的对照值，存在胎儿血清IgG水平的剂量依赖性降低(图17)。

从母体到胎儿循环的N027转移的缺乏

通过测量胎儿循环单核细胞中的N027FcRn占据水平来评价N027从母体循环到胎儿循环的转移。使用流式细胞计数(FACS)测定评估在单核细胞、粒细胞、B-淋巴细胞和T-淋巴细胞上的N027受体占据，以测量在存在和不存在饱和浓度的N027的情况下荧光标记的N027与游离的/未结合的FcRn的结合。不饱和样品表现出在每个给药前和给药后时间点在每个白细胞子集上存在的游离的或未结合的FcRn受体的百分比。向饱和样品中掺入未标记的N027浓度，该浓度经确定可完全饱和在每个给药后时间点保持游离/未结合的任何FcRn受体。在如上所述的不饱和样品分析的背景下，在第GD100和GD140天的胎儿的全血中或在BD1的新生儿中未检测到N027受体占据。

实施例18-N027的经胎盘转移的评价

将从不复杂的足月妊娠获得的人胎盘用在离体双重灌注单胎盘小叶方法中以评价N027的经胎盘转移。简而言之，检查每个胎盘的泪，并用3F和5F脐带导管分别***两条供应单个完整外周子叶的绒毛膜血管(一条动脉和静脉)。将子叶修剪并将其母体表面朝上地放置在灌注室中。将在母体侧上的绒毛间间隙用两根刺穿基板的导管灌注。在胎儿和母体回路中的灌注液介质的流速分别为3.0和12mL/分钟。用由95％O₂和5％CO₂制成的气体混合物平衡母体灌注液，用95％N₂和5％CO₂的混合物平衡胎儿灌注液。所有实验均在37℃的温度进行。

使每个胎盘小叶灌注一小时的初始控制时间，以允许组织使用灌注系统的开-开构型稳定至其新环境。如果在控制阶段发生以下情况之一，则终止灌注：胎儿回路的体积损失超过3mL/h，或胎儿静脉与动脉之间的pO₂差小于60mmHg，表明在两个回路之间不充分的灌注重叠。控制阶段之后是使用灌注系统的闭-闭构型(即，介质的再循环)的四个小时的实验阶段。后者通过替换母体和胎儿蓄池的介质并添加3mg/ml的BSA而引发。

针对三种不同浓度0.3mg/ml、3mg/ml和30mg/ml，测试了经人胎盘小叶的N027转移。将十四个单独胎盘灌注四个小时，并以0.3mg/ml、3mg/ml和30mg/ml将N027加入母体灌注液中。在实验阶段中在0、15、30、60、90、120、150、180、210和240分钟以0.5mL等分试样从母体动脉和胎儿静脉取出样品。将安替比林用作阳性对照以验证回路的完整性(图14-15)。使用灵敏的中尺度发现(MSD)免疫测定法测定在母体和胎儿样品中的N027浓度，其定量下限为5ng/ml。该测定涉及使用抗-独特型抗体对的夹心形式；其中将MSD板用抗-独特型Ab包被，然后与样品一起温育，并用第二种生物素化的抗-独特型Ab揭示，然后用MSD标记的抗生蛋白链菌素检测并添加读取缓冲液。在液-液萃取后，使用HPLC测定通过在260nm紫外检测来确定安替比林的浓度。在十四次实验中安替比林的平均胎儿转移率为41±2.8％。在十四次实验中N027的平均胎儿转移率为0.0027±0.0021％，指示非常低的转移水平。结果提示，N027可以用在治疗孕妇的方法中而不引起胎儿暴露。

实施例19-N027的药代动力学和药效动力学数据

在NHV中进行了1期、单中心、随机化、双盲安慰剂对照的SAD/MAD研究以评价N027的安全性、耐受性、PK和PD。在SAD研究中，5个组群接受了安慰剂的单次静脉内输注(n＝2/组群)或递增剂量的N027，分别为0.3(n＝3)、3(n＝3)、10(n＝6)、30(n＝6)或60(n＝6)mg/kg，并在安全性、PK和PD方面进行了8周随访(图18和19)。

在该研究的MAD部分中，受试者接受了多达4周的N027或安慰剂的静脉内输注，并在施用后10周进行了安全性、PK和PD随访。在第一组群中的受试者接受30mg/kg的N027或安慰剂。结果表明达到了完全FcRn RO并在30mg/kg维持(图20A)。招募第二组受试者以接受15mg/kg的N027(或安慰剂)，并且确定在15mg/kg未维持完全RO(图20B)。

在图18中用图形总结了30和15mg/kg组群中的受试者的平均血清N027浓度数据(第1天Cmax和谷值)。在30mg/kg的N027，第一剂量后的2-小时(Cmax)值是在500-700μg/mL的预期范围内(基于SAD数据)，第7、14和21天的谷值范围为40-140μg/mL。通过重复施用，随着在100-200ug/mL之间建立了稳定状态而减少了组变异性。在15mg/kg的N027，第一剂量后的2-小时(Cmax)值是在200-400ug/mL之间，并且观察到谷浓度的相当大变化，大多数数据低于10μg/mL，从而提供了15mg/kg不能维持完全RO的潜在解释。

在两个剂量水平，血清IgG在施用期间被抑制到相似的程度(图21A和21B)。

在该I期研究中，15mg/kg剂量和30mg/kg剂量都是安全的和良好耐受的。

实施例20-M281(N027)和IVIg对IgG1单克隆抗体的胎盘转移的影响

在该实施例中，研究了已知跨胎盘转移的代表性IgG1单克隆抗体

的平均母体至胎儿转移，并评价了M281(即M281)的抑制

的经胎盘转移的潜力。在选择的浓度评价了M281对IgG转移的影响，所述浓度在从10μg/ml开始至3000μg/ml的治疗剂量所预见的活性血清浓度的范围内，所述10μg/ml接近因靶标介导的处置而导致的增加的M281清除的阈值，并且在M281药代动力学中与当发生FcRn受体的完全占据的丧失时的timeframe相关；所述3000μg/ml是比在60mg/kg的M281的Cmax高2至3倍的浓度，后者是在人健康志愿者研究中首次评价的最高剂量。此外，还使用阳性对照IVIg(多克隆IgG混合物)评估了IgG转移的这种阻断，其为关于IgG转移的FcRn的已知竞争性抑制剂。

胎盘灌注

根据批准的研究方案，在剖腹产剖腹分娩后立即收集正常健康期(38-40周)妊娠的胎盘。本研究不包括在妊娠期间具有母体感染、全身性疾病和药物或酒精滥用的任何证据的胎盘。

根据所描述的已建立的方案，使用人胎盘小叶的双重灌注(DPPL)技术(Nanovskaya T,Deshmukh S,Brooks M,Ahmed MS.Transplacental transferandmetabolism ofbuprenorphine.JPharmacolExp Ther.2002；300(1):26-33)。简而言之，检查每个胎盘的泪，并用3F和5F脐带导管分别***2条供应单个完整外周子叶的绒毛膜血管(一条动脉和静脉)。将子叶修剪并将其母体表面朝上地放置在灌注室中。将在母体侧上的绒毛间间隙用2根刺穿基板的导管灌注。将大静脉排出管连接至蠕动泵，蠕动泵不断地从腔室抽出液体，然后将其送回母体蓄池(闭路)或单独的容器(开路)。在胎儿和母体回路中的灌注液介质的流速分别为3.0和12mL/分钟。用由95％O2、5％CO2制成的气体混合物平衡母体灌注液，用95％N2、5％CO2的混合物平衡胎儿灌注液。所有实验均在37℃的温度进行。

使每个胎盘小叶灌注一小时的初始控制阶段，以允许组织使用灌注系统的开-开构型稳定至其新环境。如果在控制阶段不满足以下质量标准之一，则终止灌注：i)胎儿回路中的体积损失超过3mL/h；或ii)在胎儿静脉和动脉之间的O₂压差小于60mmHg，表明在两个回路之间的灌注重叠不足。

在控制阶段结束时，收集来自母体的10ml流出物和来自胎儿静脉的10ml流出物，以确定内源性IgG的基线水平。在控制阶段结束时，将灌注系统转换为闭合-闭合构型(介质的再循环)。在母体和胎儿蓄池中都更换了培养基，然后在两个蓄池中添加了3mg/ml的BSA。然后将试验物(

或或

或)加入母体蓄池，在将等分试样(1mL)取出并保存为T＝0以后，开始实验阶段。将试验物与阳性对照100μg/ml的安替比林(AP)一起共输注。在实验阶段中在0、30、60、120、180、240、270、300、330和360分钟从母体动脉和胎儿静脉以0.5mL等分试样取出样品。在实验结束时，将灌注区域从邻近的胎盘组织切出，称重，并将灌注的小叶的碎片置于4％PFA中进行IHC分析。

使用具有约1ng/ml的定量下限(LLOQ)的夹心ELISA，确定所有的母体和胎儿样品等分试样中的浓度。通过如下计算的胎儿转移率(FTR)来确定从母体到胎儿蓄池的转移：

测定了所有母体和胎儿样品等分试样中的M281浓度。通过如下计算的胎儿转移率(FTR)来确定M281从母体到胎儿蓄池的转移：

表11.母体和胎儿隔室的组合物

安替比林分析

安替比林(AP)是一种小分子(188Da)，在pH 7.4(pKa 1.4)是不可电离的，因此可通过被动扩散在经胎盘自由转移。此外，由于AP的低辛烷醇/水分配系数0.33并且它与血浆蛋白和血清白蛋白的结合最少，因此AP优先分配到水性的母体和胎儿回路中，在组织中的保留最小。它已经在灌注模型中广泛用作内部渗透性阳性对照以解释不同实验之间的胎盘间差异。

使用改进的如以前的报告所述的HPLC方法(

T.J.，Sorda G.，Bechi N.，Rasmussen B.S.，Nielsen J.B.，Ietta F.，Rytting E.，Mathiesen L.，PauleSu L，Knudsen L.E.Placental transport and in vitro effects of BisphenolA.Reproductive Toxicol.2010；30：131-137)，测量样品中的安替比林浓度。通过如下计算的胎儿转移率(FTR)来确定安替比林从母体到胎儿蓄池的转移：

使用被视为高度灌注重叠的在35-45％之间的安替比林的FTR来验证和对比每个实验。此外，在每个时间点都计算了AP转移的胎儿与母亲(FTM)比率以确定母亲与胎儿侧之间的平衡。在理论上预期FTM比率大于0.75，约60-120分钟；从而证实胎盘完整性。

简而言之，将蛋白用200μl冰冷的乙腈沉淀，所述乙腈在每个200μl样品中含有10μl/ml的内部标准品非那西丁。将样品以8000rpm离心25分钟，然后通过HPLC分析上清液。简而言之，使用配备紫外检测器的Agilent 1200 HPLC系统分析安替比林和非那西丁。所使用的固定相是基于C18的反相柱(Waters Atlantis T3，Atlantis T3柱，3μm，3mm X150mm)。该柱还配备了保护筒(Waters T3，3μm，2.1mm X 150mm)，其在开始每个样品组之前要更换。将柱和样品温度分别维持在25℃和4℃。以从25-95％的甲醇-水的线性梯度在14分钟内以0.3mL/分钟的流速运行样品；注射体积为10μL，并使用260nm的吸光度进行检测。

的转移

在270μg/ml的固定浓度研究了的胎盘转移。总共有8个实验在整个实验过程中保持胎盘完整性，并符合成功灌注的质量标准，例如大于0.75的安替比林FTM比率和不超过3ml/h的胎儿蓄池体积损失；在表12中列出。表12.在这些实验中还分别监测了氧转移水平和消耗作为灌注重叠和组织活力的标志物。

表12.的胎盘转移

¹胎儿与母体灌注液浓度的比率x100％

²在35-45％之间的安替比林转移范围

在这些实验过程中安替比林的胎盘转移显示在图22中，并且在每个时间点以及终点为每个实验计算胎儿与母体(FTM)浓度比率。观察到所有实验在60-180分钟内达到平衡(0.9-1.0的FTM比)；在8个实验的终点时胎儿与母体FTM比率的平均值±SD计算为1.03±0.11；指示在整个实验过程中适当的胎盘完整性。在所有实验中观察到安替比林的母体至胎儿转移水平＞35％，指示所报道的实验的高度灌注重叠。

在八个实验中

的胎盘转移如图23所示。如在表12中所示，胎儿转移率的平均值±SD计算为平均约0.23±0.21％，而在实验结束时胎儿浓度的平均平均值±SD是在0.49±0.49μg/mL之间。

在有M281存在下的转移

研究了在有M281存在下的胎盘转移，保持浓度恒定在270μg/ml，但改变母体蓄池中M281的浓度。所有实验均在整个实验过程中保持胎盘完整性，并满足成功灌注的质量标准，例如大于0.75的安替比林胎儿与母体(FTM)比率和不超过3ml/h的胎儿蓄池体积损失。在表13中显示了研究和结果的摘要。表13如前所述，这些实验还监测了氧转移水平作为组织生存能力的标志物(注：在没有安替比林存在下进行实验PP 75，但也测量了其它参数如胎儿体积和氧转移，并符合良好灌注的质量标准)。

表13.在有M281存在下

的胎盘转移

¹胎儿与母体灌注液浓度的比率x100％

在这些实验过程中安替比林的胎盘转移显示在图24中，并且在每个时间点以及终点为每个实验计算胎儿至母体(FTM)转移比率。经计算，在使用安替比林的8个实验中，在终点的FTM比率的平均值±SD为1.1±0.11(在母体和胎儿回路中达到的平衡)，指示在实验过程中适当的胎盘完整性。观察到安替比林的母体至胎儿转移水平＞35％，指示所报道的实验的高度灌注重叠。

在九个实验中在有M281存在下

的胎盘转移显示在图25中。在有300μg/ml M281存在下的胎儿转移率(平均值±SD)计算为0.06±0.01％(n＝5)，而在有10μg/mL M281(n＝3)存在下使用的实验显示出0.07±0.01％的平均胎儿转移率(平均值±SD)。类似地，在有3000μg/ml M281存在下

的胎儿转移率为0.06(n＝1)。总体而言，在表13中报告的所有9个实验的的胎儿转移率经计算平均约为0.07±0.01％，而平均终末胎儿浓度为0.12±0.02μg/mL。表13

计算在9个实验中M281的集体平均胎儿转移率为0.003±0.007％。如表13所示，对于实验PP77-79，胎儿侧的M281的水平低于检测限度，而使用300μg/ml M281的实验(n＝5)的平均胎儿转移率计算为0.006±0.009％。表13这些观察到的M281的最小经胎盘转移率与先前的实验一致(数据未显示)。

在有IVIg存在下的转移

在5个实验中在有IVIg(6.7mg/ml)存在下研究了

的胎盘转移(母体浓度保持恒定在270μg/ml)。所有实验均在实验过程中保持胎盘完整性，并满足成功灌注的质量标准，例如大于0.75的安替比林FTM比和不超过3ml/h的胎儿蓄池体积损失。如前所述，还监测了这些实验中的氧转移水平作为组织活力的标志物。研究和结果的摘要显示在

表14

表14.在有IVIg存在下的胎盘转移

¹胎儿与母体灌注液浓度的比率x100％

在这些实验过程中安替比林的胎盘转移显示在图26中，并在终点计算每个实验的FTR。应当指出，PP38在5.5小时终止，因此在5.5小时后计算FTR，而其它实验是6小时。计算得出，在5个实验的终点，胎儿与母体(FTM)浓度比率的平均值±SD为1.04±0.04(在母体和胎儿回路中达到的平衡)，表明在实验过程中适当的胎盘完整性。观察到安替比林从母体到胎儿的转移水平≥35％，指示所报道的实验的高度灌注重叠。

在五个实验中在有IVIg存在下的胎盘转移显示在图27中。计算出在有IVIg存在下的胎儿转移率平均约为0.07±0.03％(n＝5)，而的平均终末胎儿浓度为0.12±0.06μg/ml。

在有IVIg+M281存在下的转移

在4个实验中研究了在有IVIg+M281存在下

的胎盘转移，其中在母体蓄池中使浓度保持在270μg/ml，使IVIg保持在6.7mg/mL，使M281保持在300μg/mL。所有实验均在实验过程中保持胎盘完整性，并满足成功灌注的质量标准，例如大于0.75的安替比林胎儿与母体(FTM)比率和不超过3ml/h的胎儿蓄池体积损失。实验的总结如表15所示。如前所述，还监测了这些实验中的氧转移水平作为组织活力的标志物。

表15.在有IVIg+M281存在下

的胎盘转移

¹胎儿与母体灌注液浓度的比率x100％

用于实验的安替比林的胎盘转移显示在图28中，并在所有单独时间点以及在终点为每个实验计算FTM。在表15中显示的4个实验中的安替比林的平均值±SD FTM计算为1.04±0.03(在母体和胎儿回路中达到的平衡)，表明在实验过程中适当的胎盘完整性。观察到安替比林从母体到胎儿的转移水平＞35％，表明报道的实验的高度灌注重叠。

在四个实验中在有IVIg和M281存在下

的胎盘转移显示在图29中。如在表15中所示，计算得出的平均胎儿转移率为约0.04±0.05％(n＝4)，而平均终末胎儿浓度范围为0.07±0.09μg/mL。在这一系列实验中未测量M281转移。

统计分析

所有的实验数据都进行了统计分析。将线性混合效应(LME)模型用于分析所有的实验数据，每个供体ID的斜率和截距均带有随机项，以说明同一供体/PP实验的测量值之间的相关性。在相应时间点将所有胎儿浓度除以母体浓度，然后进行对数转换。还评估了结果对可能的离群值的敏感性，并将其确定为稳健的。调整P值以进行多重比较。

表16.在有/无M281/IVIg存在下经

的经胎盘转移的总结

ND：未测定

NA：不适用

*使用具有随机斜率和截距的线性混合效应模型计算

实施例21-M281(N027)对白蛋白水平的影响

M281(N027)的施用与受试者中的血清白蛋白水平的降低有关。例如，用单次60mg/kg剂量以及当施用多次每周15和30mg/kg剂量时，观察到低于基线约20-25％的最大下降。低清蛋白血症是无症状的。它与蛋白尿、水肿或其它不利事件无关。

M281对白蛋白的影响的分析结果显示于图30-32中。施用60mg/kg的M281的单次剂量的所有受试者具有降至正常范围(正常范围＝34-50g/L)以下的血清白蛋白，并且白蛋白水平在达到其最低点的一周内恢复。在大约第14天，平均最低点是比基线低23±9％(范围8.6-33％)。向基线的恢复发生在最低点的3至4周内，并从FcRn受体占据损失时开始。每周以15或30mg/kg治疗的受试者中的白蛋白水平达到比基线低21-25％的平均最低点。向基线的恢复发生在最低点的3至4周内。一般而言，较低的基线白蛋白水平与较高程度的低清蛋白血症相关。用安慰剂或较低剂量的M281治疗的受试者表现出约10％的相似白蛋白立即下降，在7天后恢复。在30mg/kg或更大的M281单剂量，观察到的白蛋白降低比用安慰剂观察到的降低更大。

其它实施方案

尽管已经结合其具体实施方案描述了本发明，但是应该理解，能够进一步修改，并且本申请意图涵盖总体上遵循本发明的原理的本发明的任何变化、应用或改进。本发明以及包括与本公开内容的这种偏离落入本发明所属领域内的已知或常规实践中和可以应用于在上文中阐述的基本特征。

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