阅读说明：本技术 与洛铂有关物质的检测方法 (Method for detecting lobaplatin-related substance ) 是由 窦啟玲 汪立冬 常新亮 于 2019-03-19 设计创作，主要内容包括：本发明涉及与铂类有关物质的检测方法。本发明提供了一种与洛铂有关物质的检测方法,其中,所述与洛铂有关物质包括式Ⅰ和Ⅱ结构的化合物,所述式Ⅰ结构为<Image he="225" wi="671" file="DDA0001999876170000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>所述式Ⅱ结构为<Image he="213" wi="562" file="DDA0001999876170000012.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>所述的检测方法为HPLC-MS法或者HPLC法,所述HPLC-MS法的检测条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以10-12mmol/L的乙酸铵为流动相A,甲醇：乙腈的体积比例＝1:(0.8-1.2)为流动相B,进行梯度洗脱。本发明建立了具有式Ⅰ和Ⅱ结构的铂类化合物作为洛铂质量标准中的有关物质进行检测的方法,以建立洛铂质量检测体系,该方法灵敏度高,专属性强,重复性好。(The invention relates to a method for detecting platinum-related substances. The invention provides a method for detecting a lobaplatin related substance, wherein the lobaplatin related substance comprises compounds with structures shown in formulas I and II, and the structure of the formula I is shown in the specification The structure of the formula II is The detection method is an HPLC-MS method or an HPLC method, and the detection conditions of the HPLC-MS method are as follows: octadecylsilane chemically bonded silica is used as a filling agent, 10-12mmol/L ammonium acetate is used as a mobile phase A, and methanol: acetonitrile with volume ratio of 1 (0.8-1.2) as mobile phase B, and gradient elution is carried out. The invention establishes platinum compounds with structures shown as formulas I and II as related substances in lobaplatin quality standard for detectionThe method is used for establishing a lobaplatin quality detection system, and has the advantages of high sensitivity, strong specificity and good repeatability.)

与洛铂有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及药物领域，特别涉及一种与洛铂有关物质的检测方法，属于药物分析质量控制技术领域。

背景技术

洛铂(Lobaplatin，D19466)，又名洛巴铂，是继顺铂、卡铂之后的第三代铂类抗肿瘤药物，其化学名称为：顺式-[反式-1,2-环丁烷双(甲胺)-N,N']-[(2S)-乳酸-O1,O2]-铂(II)，分子式为C₉H₁₈N₂O₃Pt，分子量为397.34，化学结构式如下式(a)所示：

洛铂具有烷化作用，属烷化剂(广义)，具有良好的抗肿瘤作用，如对离体AH135-瘤、B16-黑色素瘤、结肠癌115，在体小鼠P338白血病等具有很好的抑制作用。洛铂的特点是抗癌活性强，毒性低，无蓄积毒性和肾毒性，并且对骨髓毒性较小，目前已上市的注射用洛铂主要用于乳腺癌、小细胞肺癌及慢性粒细胞性白血病的治疗。

发明内容

为了保证该药物的安全、有效、质量可控，对其有关物质及有关物质的检测方法的研究显得十分重要。针对该药物，由于三个手性碳的存在以及制备过程产生的有关物质，因此寻找到合适的检测方法用于控制该药物的产品质量成为本领域急需解决的技术问题。

本发明要解决的技术问题是提供一种新的检测方法以建立针对洛铂中有关物质的检测，从而对洛铂化合物进行质量控制。

本领域技术人员知道，任何影响药物纯度的物质统称为有关物质。有关物质的研究是药品研发的一项重要内容，它包括选择合适的分析方法，准确地分辨与测定有关物质的含量并综合药学、毒理及临床研究的结果确定有关物质的合理限度。这一研究贯穿于药品研发的整个过程。

具体来说，本发明通过如下技术方案实现的。

本发明提供了一种与洛铂有关物质的检测方法，其中，所述与洛铂有关物质包括式Ⅰ和式Ⅱ结构的化合物，所述式Ⅰ结构为

所述式Ⅱ结构为

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，所述检测方法为HPLC-MS法或者HPLC法。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，所述HPLC-MS法的检测条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以10-12mmol/L的乙酸铵为流动相A，甲醇：乙腈的体积比例＝1:(0.8-1.2)为流动相B，进行梯度洗脱；优选的，流动相A为10mmol/L的乙酸铵溶液，流动相B为甲醇：乙腈的体积比例＝1:1。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，所述HPLC-MS法中的梯度洗脱方式如下：

0～10分钟：流动相A从95体积％减少到40体积％，流动相B从5体积％增加到60体积％；

10～15分钟：流动相A从40体积％减少到10体积％，流动相B从60体积％增加到90体积％；

15～16分钟：流动相A从10体积％增加到95体积％，流动相B从90体积％减少到5体积％；

16～24分钟：95体积％流动相A：5体积％流动相B；

其中，上述梯度洗脱的每段时间范围可以均增加1～2分钟或者可以从10～15分钟起的梯度洗脱时间范围可以均减少1～2分钟；

例如，梯度洗脱对应的时间范围可以为0～11分钟(或0～12分钟)、11～16分钟(或12～17分钟)、16～17分钟(或17～18分钟)、17～25分钟(或18～26分钟)；也可以设为0～10分钟、9～14分钟(或8～13分钟)、14～15分钟(或13～14分钟)、15～23分钟(或14～22分钟)。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，所述HPLC-MS中的MS条件为采用电喷雾离子源。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，所述流速为每分钟0.8-1.2ml，优选为1.0ml；优选的，柱温为38-42℃，优选为40℃。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，在系统适用性试验溶液的色谱图中，所述有关物质与其相邻的有关物质的峰的分离度不小于1.5；优选的，所述式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的峰面积的相对标准偏差均不大于10.0％。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，供试品溶液质谱图中如有式Ⅰ和式Ⅱ结构的化合物，其各峰面积均不得大于对照品溶液的式Ⅰ和式Ⅱ结构的化合物的峰面积。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，所述洛铂包括洛铂非对映体Ⅰ和洛铂非对映体Ⅱ的任一种或两种。

本发明的有益效果如下：

本发明建立了具有式Ⅰ和Ⅱ结构的铂类化合物作为洛铂质量标准中的有关物质进行检测的方法，以建立洛铂质量检测体系，该方法灵敏度高，专属性强，重复性好。

附图说明

图1是实施例1中式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的典型谱图；

图2-1A是实施例4中空白溶液专属性实验中总离子色谱图；

图2-1B是实施例4中空白溶液专属性实验中MS色谱图；

图2-2A是实施例4中式Ⅰ结构的化合物的定位溶液专属性实验中总离子色谱图；

图2-2B是实施例4中式Ⅰ结构的化合物的定位溶液专属性实验中保留时间为t＝1.616min的MS色谱图；

图2-3A是实施例4中式Ⅱ结构的化合物的定位溶液专属性实验中总离子色谱图；

图2-3B是实施例4中式Ⅱ结构的化合物的定位溶液专属性实验中保留时间为t＝10.984min的MS色谱图；

图2-4A是实施例4中洛铂供试品溶液专属性实验中总离子色谱图；

图2-4B是实施例4中洛铂供试品溶液专属性实验中保留时间为t＝5.165min的MS色谱图；

具体实施方式

本发明提供一种与洛铂有关物质的检测方法，其中，所述与洛铂有关物质包括式Ⅰ和Ⅱ结构的化合物，所述式Ⅰ结构为

所述式Ⅱ结构为

在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述检测方法为HPLC-MS法或者HPLC法；优选的，所述HPLC-MS法的检测条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以10-12mmol/L的乙酸铵为流动相A，甲醇：乙腈的体积比例＝1:(0.8-1.2)为流动相B，进行梯度洗脱；优选的，流动相A为10mmol/L的乙酸铵溶液，流动相B为甲醇：乙腈的体积比例＝1:1；优选的，所述流速为每分钟0.8-1.2ml，优选为1.0ml；优选的，柱温为38-42℃，优选为40℃；优选的，在系统适用性试验溶液的色谱图中，所述有关物质与其相邻的有关物质的峰的分离度不小于1.5；优选的，所述式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的峰面积的相对标准偏差均不大于10.0％。

优选的，对于上述所述的检测方法，其中，供试品溶液质谱图中如有式Ⅰ和式Ⅱ结构的化合物，其各峰面积均不得大于对照品溶液的式Ⅰ和式Ⅱ结构的化合物的峰面积(0.05％)，所述的0.05％指的是对照品溶液中式Ⅰ和式Ⅱ结构的化合物的浓度皆为供试品溶液的0.05％。

其中，在本发明中，任何影响药物纯度的物质统称为“影响洛铂质量的有关物质”或者“影响质量的有关物质”，简称“有关物质”，例如在检测洛铂质量的HPLC色谱峰中出现的影响洛铂质量的有关物质峰，简称为“有关物质峰”；本发明中的所述“有关物质”有些情况下即是本领域技术人员公知的影响药物纯度的“杂质”，然而，在本发明中所述”有关物质”不限于“杂质”的范畴，还包括具有一定抗癌活性甚至其活性高于洛铂的物质，他们相对于活性分子“洛铂”而言属于与洛铂相关的物质范畴，其抗癌活性或者其他的研发新药物方面积极的作用和功能的原理尚未完全研究清楚。

实施例中所述的化学物质没有标明的均为常规试剂的化学纯级别，其中，

式Ⅰ结构的化合物是根据专利号为CN102093226B实施例1所述的方法制备，并经结构鉴定确认得到；

式Ⅱ结构的化合物是由式Ⅰ结构的化合物制备得到，其制备方法如下：

式Ⅰ结构的化合物

其反应过程如下：

(1)将式Ⅰ结构的化合物(30.0g,101.9mmol),氯亚铂酸钾(36.0g,86.7mmol),碘化钾(86.0g,518.1mmol)和氢氧化钾(24.0g,427.7mmol)分别溶于170mL,180mL,87mL和120mL纯化水,得A,B,C,D液。

(2)将B液升温至30℃。将A料搅拌，打散。

(3)将C液加至B液,搅拌0.5h,得E液。

(4)将D液加至A液,搅拌,体系变澄清，使用0.45微米滤膜过滤,得F液。

(5)将F液加至E液,有黄色固体析出,继续在30℃下搅拌2小时。

(6)过滤,滤饼用纯化水洗涤(100mL*6)至无卤素离子残留。滤饼经旋转蒸发仪干燥,得式Ⅱ结构的化合物粗品(34.0g,crude)为黄色粉末。

将式Ⅱ结构的化合物粗品(34.0g)按以下条件进行制备分离，于40℃以下旋蒸至无液体流出，过滤，于40℃干燥至恒重，得式Ⅱ结构的化合物(15.4g)。

表1制备分离条件

实施例1-1检测方法(式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物作为洛铂中有关物质在洛铂质量控制的方法)

按照质谱法(中国药典2015年版四部通则0431)测定

色谱条件与系统适用性试验

仪器型号：Agilent 1260+6130MS，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(WatersXselect CSH 4.6*150mm，3.5μm)，以10mmol/L乙酸铵为流动相A，甲醇：乙腈的体积比例＝1:1为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml，柱温为40℃。

以单四级杆串联质谱仪检测，离子源为电喷雾(ESI)离子源，使用正离子扫描模式，监测模式为选择离子监测，监测离子为115和580，采集时间为15min，毛细管出口电压为70V。

系统适用性试验溶液的色谱图中，已知洛铂有关物质的峰与相邻洛铂有关物质的峰的分离度应不小于1.5；系统适用性试验溶液连续进样6次，式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的峰面积的相对标准偏差均应不大于10.0％。

表2梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(体积％)	流动相B(体积％)
			0	95	5
10	40	60
			15	10	90
16	95	5
			24	95	5

表3选择离子监测

时间(分钟)	选择离子监测
		0	115
10	580

其中，在0-9.999min扫描m/z为115，115为式Ⅰ结构化合物中的二胺离子，在10-15min扫描m/z为580，580为式Ⅱ结构的化合物离子。

系统适用性试验溶液/对照品溶液的制备

取式Ⅰ结构的化合物对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为式Ⅰ结构的化合物对照品贮备液(1)；取式Ⅱ结构的化合物对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为式Ⅱ结构的化合物对照品贮备液(1)，精密量取式Ⅰ结构的化合物对照品贮备液(1)和式Ⅱ结构的化合物对照品贮备液(1)各1ml，置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(2)，精密量取对照品贮备液(2)100μl，置20ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，同时作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

取待测洛铂样品(采用根据专利CN 102020679 B说明书中实施例2公开的方法制备、并且经过结构鉴定确认得到的的洛铂样品,即本实施例加入洛铂三水合物作为待测洛铂，在各个实施例中涉及洛铂含量时均以洛铂无水物计)约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

测定法

取系统适用性试验溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱-质谱联用仪，记录质谱图至15分钟。

式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的典型谱图如图1所示。

从图1可以看出，式Ⅰ结构的化合物的保留时间为t＝1.72min，式Ⅱ结构的化合物的保留时间为t＝10.966min。

供试品溶液质谱图中如有式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物，其各峰面积均不得大于对照品溶液的式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物峰面积(0.05％)。

实施例1-2检测方法

按照质谱法(中国药典2015年版四部通则0431)测定

色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Xselect CSH 4.6*150mm，3.5μm)，以10mmol/L乙酸铵为流动相A，甲醇：乙腈的体积比例＝1:0.8为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml，柱温为38℃。以单四级杆串联质谱仪检测，离子源为电喷雾(ESI)离子源，使用正离子扫描模式，监测模式为选择离子监测，监测离子为115和580，采集时间为15min，毛细管出口电压为70V。系统适用性试验溶液的色谱图中，已知洛铂有关物质的峰与相邻洛铂有关物质的峰的分离度应不小于1.5；系统适用性试验溶液连续进样6次，式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的峰面积的相对标准偏差均应不大于10.0％。

表4梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(体积％)	流动相B(体积％)
			0	95	5
10	40	60
			15	10	90
16	95	5
			24	95	5

表5选择离子监测

时间(分钟)	选择离子监测
		0	115
10	580

系统适用性试验溶液/对照品溶液的制备

取式Ⅰ结构的化合物对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为式Ⅰ结构的化合物对照品贮备液(1)；取式Ⅱ结构的化合物对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为式Ⅱ结构的化合物对照品贮备液(1)，精密量取式Ⅰ结构的化合物对照品贮备液(1)和式Ⅱ结构的化合物对照品贮备液(1)各1ml，置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(2)，精密量取对照品贮备液(2)100μl，置20ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，同时作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

取待测洛铂样品(来源与实施例1-1相同)约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

测定法

取系统适用性试验溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱-质谱联用仪，记录质谱图至15分钟。

所得到的典型图谱与实施例1-1的典型图谱一致。

实施例1-3检测方法

按照质谱法(中国药典2015年版四部通则0431)测定

色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Xselect CSH 4.6*150mm，3.5μm)，以11mmol/L乙酸铵为流动相A，甲醇：乙腈的体积比例＝1:1.2为流动相B，按下表程序进行梯度洗脱；流速为每分钟1.2ml，柱温为42℃。以单四级杆串联质谱仪检测，离子源为电喷雾(ESI)离子源，使用正离子扫描模式，监测模式为选择离子监测，监测离子为115和580，采集时间为15min，毛细管出口电压为70V。系统适用性试验溶液的色谱图中，已知洛铂有关物质的峰与相邻洛铂有关物质的峰的分离度应不小于1.5；系统适用性试验溶液连续进样6次，式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物的峰面积的相对标准偏差均应不大于10.0％。

表6梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(体积％)	流动相B(体积％)
			0	95	5
10	40	60
			15	10	90
16	95	5
			24	95	5

表7选择离子监测

时间(分钟)	选择离子监测
		0	115
10	580

系统适用性试验溶液/对照品溶液的制备

取式Ⅰ结构的化合物对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为式Ⅰ结构的化合物对照品贮备液(1)；取式Ⅱ结构的化合物对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为式Ⅱ结构的化合物对照品贮备液(1)，精密量取式Ⅰ结构的化合物对照品贮备液(1)和式Ⅱ结构的化合物对照品贮备液(1)各1ml，置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(2)，精密量取对照品贮备液(2)100μl，置20ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，同时作为对照品溶液。

供试品溶液的制备

取待测洛铂样品(来源与实施例1-1相同)约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加水超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

测定法

取系统适用性试验溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱-质谱联用仪，记录质谱图至15分钟。

所得到的典型图谱与实施例1-1的典型图谱一致。

实施例2：检测方法的方法学验证

为了确认本发明检测方法的实用性和准确性，下面对检测方法的专属性、线性方程以及线性范围、检测限和定量限、校正因子、准确度(回收率)、精密性、溶液稳定性、耐用性等方面进行说明：

1.专属性

精密量取空白溶液(纯化水)、式Ⅰ结构的化合物的定位溶液(ID-cpd1)、式Ⅱ结构的化合物定位溶液(ID-cpd2)和洛铂供试品溶液(SPL)各10μL，注入液质联用质谱仪。

其中，ID-cpd1的制备方法为：称量式Ⅰ结构的化合物对照品9.96mg于10mL容量瓶，稀释剂溶解定容，摇匀，得式Ⅰ结构的化合物浓度为0.996mg/mL的溶液，标示为ID-cpd1溶液；

ID-cpd2的制备方法为：称量式Ⅱ结构的化合物对照品9.87mg于10mL容量瓶，DMF溶解定容，摇匀，得式Ⅱ结构的化合物浓度为0.987mg/mL的溶液，并标示为ID-cpd2溶液；

SPL的制备方法为：称量洛铂供试品10.16mg于10mL容量瓶，稀释剂溶解定容，摇匀，得洛铂供试品浓度为1.016mg/mL的溶液，标示为SPL溶液；

其结果如图2-1A、图2-1B、图2-2A、图2-2B、图2-3A、图2-3B、图2-4A、图2-4B及表8所示。

表8专属性结果-1

样品	保留时间(min)	峰分离度	结论
				空白	---	---	无干扰
式Ⅰ结构的化合物	1.616	---	无干扰
				式Ⅱ结构的化合物	10.984	---	无干扰
洛铂	5.165	---	无干扰

可以看出，空白对照基线干净稳定，在式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物出峰位置没有干扰。

然后，精密量取空白溶液、各条件下的强制降解溶液各10μL，注入液质联用质谱仪，

其中，酸破坏溶液的制备方法为：称量洛铂供试品10.61mg于10mL容量瓶，加2mL水溶解后，加入0.01mol/L盐酸溶液0.1mL，破坏5min，破坏后以0.1mL 0.01mol/L氢氧化钠溶液中和，稀释剂定容，作酸破坏溶液。

碱破坏溶液的制备方法为：称量洛铂供试品10.48mg于10mL容量瓶，加0.01mol/L氢氧化钠溶液1mL，放置10min，破坏后以0.01mol/L盐酸溶液1mL中和，稀释剂定容，作碱破坏溶液。

光照破坏溶液的制备方法为：称量在45,00lx光照强度下破坏10天的洛铂供试品9.82mg于10mL容量瓶，稀释剂溶解定容，作光照破坏溶液。

高温破坏溶液的制备方法为：称量在80℃高温条件下破坏3天的洛铂供试品10.04mg于10mL容量瓶，稀释剂溶解定容，作高温破坏溶液。

氧化破坏溶液的制备方法为：称量洛铂供试品10.83mg于10mL容量瓶，加1mL0.01％过氧化氢溶液，稀释剂定容，作氧化破坏溶液(放置10min)，立即进样；结果如表9所示：

表9专属性结果-2

从上表可以看出，物料平衡在90％～110％之间，满足预期要求。

2.灵敏度

取式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物对照品溶液，逐步稀释，以信噪比(S/N)3为检测限进行检测，检测限结果如表10所示。

表10检测限结果

化合物名称	检测限浓度(ng/mL)	相当于主成分的百分比	S/N
				式Ⅰ结构的化合物	5.210	0.005％	3.5
式Ⅱ结构的化合物	5.065	0.005％	5.5

从表10可以看出，式Ⅰ结构的化合物的检测限浓度为5.210ng/mL(相当于洛铂主成分的0.005％)，式Ⅱ结构的化合物的检测限浓度为5.065ng/mL(相当于洛铂主成分的0.005％)，说明该方法的灵敏度高。

3、溶液稳定性

分别量取对照品溶液，于0h、0.4h、1.1h、1.5h、1.9h、3.4h、4.2h、5.4h进样，考察式Ⅰ结构的化合物和式Ⅱ结构的化合物各峰面积变化，结果如表11所示。

表11溶液稳定性结果

备注：S＝(每个时间间隔溶液中各有关物质的峰面积/0h时溶液中各有关物质的峰面积)×100

从上表可以看出，式Ⅰ结构的化合物对照品溶液在5.4h内S％在90％～110％之间为稳定，式Ⅱ结构的化合物对照品溶液在1.5h内S％在90％～110％之间为稳定。

4、耐用性

取各对照品溶液和供试品溶液，适当调整液质联用质谱系统中的参数，考察系统条件变化后的方法耐用性。以Bracket STD-1中式Ⅰ结构的化合物或式Ⅱ结构的化合物的响应(峰面积/浓度)与前6针STD-1中式Ⅰ结构的化合物或式Ⅱ结构的化合物的响应的RSD不大于10％，和改变条件前供试品中洛铂中式Ⅰ结构的化合物或式Ⅱ结构的化合物的检测结果(SPL中式Ⅰ结构的化合物或式Ⅱ结构的化合物的峰面积与STD中式Ⅰ结构的化合物或式Ⅱ结构的化合物的峰面积的大小关系)不应发生变化为判定标准，结果如表12所示。

表12耐用性结果

其中，Bracket STD-1为随行对照溶液，即为标准溶液STD-1的加针。

从表12可以看出，色谱柱柱温微小变动后，RSD的变化相对较小，说明该方法对色谱柱柱温的耐用性良好。

以上所述，仅是本发明实施的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。