阅读说明：本技术 木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症药物中的应用 (Application of luteolin in medicine for preventing and treating endometriosis ) 是由 倪晓容 孙奋勇 胡国华 王隆卉 左玲 郭英 杨玲 杨艺娇 夏悦 彭霞 于 2020-07-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症药物中的应用。本发明以纤维化作为治疗靶点,评估将木犀草素应用于大鼠子宫内膜异位症模型中具有抗纤维化作用。木犀草素应用大鼠子宫内膜异位症中,具有治疗异位病灶纤维化的效果。因此,本发明为中药单体木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症纤维化药物的应用提供了直接的实验证据。(The invention relates to application of luteolin in a medicine for preventing and treating endometriosis. The invention takes fibrosis as a treatment target, and evaluates that the luteolin applied to a rat endometriosis model has an anti-fibrosis effect. Luteolin can be used for treating endometriosis and fibrosis of ectopic focus. Therefore, the invention provides direct experimental evidence for the application of the traditional Chinese medicine monomer luteolin in the medicines for preventing and treating endometriosis fibrosis.)

木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，是关于木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症药物中的应用。

背景技术

子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)，是指子宫内膜组织在子宫体以外的地方，随着激素周期性的变化，而出现反复性的出血、损伤、再修复的过程，进而发生微环境的变化，导致纤维化相关因子被激活，发生纤维增生、粘连形成。过度的纤维化导致瘢痕、慢性疼痛和组织功能的改变，从而引起痛经、盆腔疼痛以及***等临床症状。在组织学上，子宫内膜异位症的特征是子宫内膜腺体和间质周围的致密纤维组织。西医对于其的主要的治疗方法为手术或者服用激素，如常用的假孕疗法、假绝经疗法虽一定程度上能帮助患者缓解病情，但是易于复发，不良作用多且不利于妊娠，可能出现骨质疏松、绝经综合征等症状，限制了药物的长期应用。然而，迄今为止，只有很少的研究评估了子宫内膜异位症相关纤维化的候选新疗法。所以寻求一种疗效确切、稳定,副反应小,患者易于接受治疗方案成为本病现代研究的重点与难点。

木犀草素，多以糖苷的形式存在于多种中草药物中。其作为一种天然黄酮类化合物，研究发现木犀草素不仅可以通过一氧化碳及其他炎症因子而具有抗炎活性；并通过抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡，产生抗肿瘤作用；除此之外木犀草素还具有止咳、抗过敏、抗病毒、抗氧化等多用药理活性；近年来木犀草素被广泛应用于肝病纤维化治疗，例如孟欣等人在木犀草素治疗肝纤维化的研究作用中发现木犀草素作为一种天然黄酮类化合物可以有效降解肝组织中的a-平滑肌肌动蛋白和1型胶原蛋白的mRNA水平，抑制肝星状细胞的活化和胶原的合成，有效缓解肝纤维化程度。李杰等人在通过靶向AKT/mTOR/p70S6K和TGFβ/Smad信号通路，木犀草素对肝星状细胞和肝纤维化的抗纤维化作用中，将木犀草素应用于CCL4诱导的小鼠纤维化模型中，发现木犀草素给药显著减轻肝纤维化并且导致p-Smad2和p-AKT的表达降低，抑制细胞的增殖、迁移，以及胶原的合成。以此表明木犀草素通过多种机制阻止肝纤维化的进展，并且具有有效治疗肝纤维化的潜力。

中国专利文献CN103083310A，公开了一种木犀草素在制备抗卵巢衰老药物中的应用。中国专利文献CN111315376A，公开了一种用于在治疗子宫内膜异位症和子宫内膜异位症相关症状中使用的物质和组合物。该发明涉及木犀草素2-(3,4-二羟基苯基)-,5,7二羟基-4-苯并二氢吡喃在用于治疗子宫内膜异位症及其症状的方法中的用途。但是关于中药单体木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症纤维化药物的应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是，针对现有技术中的不足，提供木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症药物中的应用。

进一步优选方案：所述的木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症纤维化药物中的应用。

进一步优选方案：所述的木犀草素抑制子宫内膜纤维化形成。

进一步优选方案：所述的木犀草素抑制子宫内膜异位症纤维化形成。

进一步优选方案：所述木犀草素可以单独使用或者以药物组合物的形式使用，所述药物组合物包含木犀草素、其药学上可接受的盐或它的前药，以及药学上的载体，赋形剂，稀释剂，辅剂和媒介物的至少一种。

本发明公开木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症纤维化药物中的应用。本发明以纤维化作为治疗靶点，评估将木犀草素应用于大鼠子宫内膜异位症模型中是否具有抗纤维化作用。方法：通过自体移植法构建大鼠子宫内膜异位症模型，于造模成功4周后，将造模大鼠模型组、孕三烯酮对照组、木犀草素组，分别用药4周后，剖腹取出异位病灶。通过HE染色、masson染色法相互佐证纤维化程度，免疫组化检测纤维化指标a-SMA表达情况，评估木犀草素抗纤维化作用。结果：木犀草素可以防止子宫内膜异位症中纤维化的发展。因此木犀草素可以潜在的发展用于将来治疗或者预防子宫内膜异位症纤维化的药物。

本发明优点在于：就目前而言关于子宫内膜异位的研究大多从其破坏病理学特点进行探索，如炎症反应、血管形成和细胞增殖、迁移、粘附和侵袭等，但很少从纤维化角度治疗子宫内膜异位症，并且关于子宫内膜异位症纤维化的形成机制的研究也很少，也没有明确有效的药物来改善纤维化，因此安全有效的抑制子宫内膜异位症纤维化，改善临床症状，具有重要的临床意义。本发明公开木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症纤维化药物中的应用。本发明以纤维化作为治疗靶点，评估将木犀草素应用于大鼠子宫内膜异位症模型中具有抗纤维化作用。木犀草素应用大鼠子宫内膜异位症中，具有治疗异位病灶纤维化的效果。因此，本发明为中药单体木犀草素在预防和治疗子宫内膜异位症纤维化药物的应用提供了直接的实验证据。

附图说明

附图1是每只大鼠异位病灶体积变化。

附图2是模型组、孕三烯酮组、木犀草素组的组织学病理评分。

附图3是孕三烯酮组、木犀草素组相对纤维化程度。

附图4是模型组、孕三烯酮组、木犀草素组的免疫组化检测纤维化指标。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

实施案例

a、动物实验(实验动物、实验方法、实验结果)

主要的研究内容：

1.评估木犀草素在子宫内膜异位症中的抗纤维化特性。

主要研究

1.构建大鼠子宫内膜异位症模型

1.1建立动物模型

选择雌性周龄6-8周、体重200-220g的健康清洁级SD大鼠，随机分为受体组和供体组，在术前七天按照0.1mg/kg/d的剂量连续注射七天苯甲酸***，统一动情期。安乐死处理供体组大鼠，常规皮肤消毒后，下腹部正中切口长约2cm，进腹后在膀胱背侧找到子宫，取子宫内膜组织，放入生理盐水培养皿中，剔除多余的脂肪组织，用眼科剪沿着纵轴剖开子宫段，剪成3mm×3mm段，置于生理盐水中备用。

对于受体组大鼠而言，采用3％的戊巴比妥钠水溶液按照60mg/kg剂量腹腔注射方式麻醉，常规皮肤消毒后，备皮后，在下腹距离尿道口1cm处划开2cm左右竖切口，剪开肌肉及腹膜，随机放入10个子宫内膜组织，常规关腹。每笼5只，分笼饲养，给予青霉素钠80000U/只/天，连续三天，预防感染。

1.2造模成功评判标准

(1)移植物体积增大；(2)移植物表面有血管形成；(3)移植物呈囊状，为透明、半透明样，内可见清亮液体；(4)病理检查可见子宫内膜腺体和***，其间有炎性细胞浸润。

2.实验分组

造模4周后，将大鼠随机分为3组，每组6只，分别为模型组、西药组、木犀草素组。

木犀草素组：根据“人和动物间体表面积折算的等效剂量比率表”折算临床成人等效剂量的1.5倍，大鼠给药剂量为：80mg/(kg.d),用生理盐水溶液混悬后给药,灌胃体积均为1mL/100g。

西药组：孕三烯酮，采用成人等效剂量，参考2016中华妇产科杂志临床指南荟萃，成人剂量5.0mg/W，经换算大鼠给药剂量为：0.45mg/ml(kg.w)，用蒸馏水溶解成混悬液，调整为0.045mg/ml；(每周一、周三灌药)，其余时间给予生理盐水灌胃。

模型组给予生理盐水灌胃。每日一次。

3.观察指标

(1)用游标卡尺测量异位病灶的长度与宽度，按公式V＝0.52×宽²×长，计算病灶体积。

(2)HE染色，光学显微镜下观察异位病灶的组织形态学特点。并按照以下标准进行评定：根据Keenan JA et al,1999.的评估标准，对所有取材进行浸润深度分级:内皮移植物上皮组织的生长情况病理评分标准如下：3分：上皮粘膜层保存完好，腺体细胞发育良好，腺体丰富；2分：上皮粘膜层保存中等，腺体细胞多见，但不丰富；1分：上皮粘膜层保存差，腺体细胞稀少，上皮细胞偶见；0分：未见上皮组织。实验过程中所有评测人员均采用盲法。

(3)Masson染色法检测大鼠异位病灶纤维化，将切片进行Masson染色，通过ImageProPlus(Yin X.et al,2013)定量Masson染色，来确定纤维化与正常子宫内膜的相对度，实验过程中所有评测人员均采用盲法。

(4)免疫组化检测纤维化指标a-SMA表达情况

4.统计结果分析

统计学分析应用SPSS11.0软件。正态分布数据以均数±标准查表示，组间多重比较应用单因素方差分析(one analysisi of variance ANVOA)。非正态分布数据采用Kruskal-Wallis检验和Mann-whitney U检验分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

5.实验结果

5.1由表1和图1可见，模型组大鼠异位病灶平均体积在给药四周后达到了91.54±10.01mm³,孕三烯酮组大鼠异位病灶的平均体积为12.27±3.17mm³,木犀草素组大鼠异位病灶的平均体积为10.22±2.89mm³’，孕三烯酮组和木犀草素组大鼠异位病灶体积与模型组大鼠异位病灶体积相比，差异有统计学意义(*P＜0.05)。木犀草素组大鼠异位病灶体积与孕三烯酮组大鼠异位病灶体积相当(^#P>0.05)。

表1.给药后各组大鼠异位病灶的体积

5.2由图2可见通过HE染色所示，孕三烯酮组大鼠和木犀草素组大鼠与模型组大鼠相比，组织学病理评分明显减少，差异有统计学意义(*P＜0.05)；且木犀草素组大鼠内异症的组织学病理学评分低于孕三烯酮组大鼠(^#P＜0.05)。图3，通过Masson所示，木犀草素组大鼠相对纤维化程度与孕三烯酮组大鼠相对纤维化程度相比明显降低，差异有统计学意义(*P＜0.05)。

5.3由图4可见免疫组化检测纤维化指标a-SMA表达情况所示，孕三烯酮组大鼠和木犀草素组大鼠与模型组大鼠相比，阳性指标明显减少，并且木犀草素组阳性指标少于孕三烯酮组。

6.实验结果

综上结果所示木犀草素应用大鼠子宫内膜异位症中，具有治疗异位病灶纤维化的效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。