阅读说明：本技术 一种异牡荆素的应用 (Application of isovitexin ) 是由 李艳平 汪伟光 何红平 李婷 邹秋萍 于 2020-05-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种异牡荆素的应用,所述的异牡荆素的应用为所述的异牡荆素在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。本发明实验显示异牡荆素能有效改善溃疡性结肠炎小鼠的一般状态、显著抑制DSS诱导的小鼠结肠变短、改善结肠组织病理学、降低髓过氧化物酶、显著减轻炎症反应、降低血清中促炎因子的表达,促进抑炎因子的生成,进而发挥抗炎作用。(The invention discloses an application of isovitexin, which is an application of the isovitexin in preparing an anti-ulcerative colitis medicament. Experiments show that the isovitexin can effectively improve the general state of an ulcerative colitis mouse, obviously inhibit the shortening of the colon of the mouse induced by DSS, improve the histopathology of the colon, reduce myeloperoxidase, obviously relieve inflammatory reaction, reduce the expression of proinflammatory factors in serum, promote the generation of the inflammation-inhibiting factors and further play an anti-inflammatory role.)

一种异牡荆素的应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种异牡荆素的应用。

背景技术

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）是一种病因尚不十分清楚的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病。病变主要限于大肠黏膜与黏膜下层。临床表现为腹泻、黏液脓血便、腹痛。病情轻重不等，多呈反复发作的慢性病程。本病可发生在任何年龄，多见于20到40岁，亦可见于儿童或老年。男女发病率无明显差别。本病在我国较欧美少见，且病情一般较轻，但近年患病率有明显增加，重症也常有报道。溃疡性结肠炎病因复杂，发病环节多，治愈难度大，反复发作，并与结肠癌的发病关系密切。该病由Willks及Moxon于1875年首次描述，并由世界卫生组织(WHO)医学科学组织国际组织委员会于1973年正式命名，被世界卫生组织列为现代难治病之一。因而，对炎性肠病进行有效的预防、发现和早期治疗具有非常重大的社会意义。

UC的致病因素以及发病机制尚不十分明确。目前认为该病发病机制较复杂，与诸多因素有关，如遗传因素、精神因素、免疫因素(细胞因子、瘦素、脂联素、免疫细胞等)、感染因素(细菌)、环境因素(饮食习惯、生活习惯等)以及炎症介质等因素。目前用于治疗 UC 的常规药物主要是 5-氨基水杨酸、皮质类固醇、免疫抑制剂、抗生素及生物制剂(抗TNF-α抗体)等。治疗多以缓解症状为主，而且存在停药后易复发、耐药性增加或不良反应多等诸多问题。如柳氮磺胺吡啶的载体部分磺胺具有一定的毒性，15%～45%的患者服用后会出现明显的不良反应；糖皮质激素虽然具有较强的抗炎作用，但长期应用可导致机体出现糖、脂和蛋白质代谢紊乱，并且出现骨质疏松甚至股骨头坏死等并发症；有研究指出长时间服用免疫抑制剂可能会伴有感染、胰腺炎、头痛发热、肝损伤等不良反应，甚至引发肿瘤形成。某些抗生素，如喹诺酮类环丙沙星、青霉素类、非氨基糖苷类利福昔明也用于UC的治疗。但抗生素的使用不能防止UC的复发，且会导致严重的细菌耐药性的产生。UC 长期慢性炎症状态很可能转化为结直肠癌，因此寻找疗效确切、毒副作用小、价格低廉的药物是近年来探索的热点。

异牡荆素 (isovitexin，IV) 也称为异牡荆苷、或 6-C-葡萄糖洋芹素，其为黄色粉末；分子式：C₂₁H₂₂O₁₀；分子量：432；属于碳苷黄酮类活性物质，广泛存在于自然界几十种植物的根、茎、叶、树皮、果实和种子中。如马鞭草科植物滨牡荆(Vitex littoralisA.Cunn.)的叶、豆科植物皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)与夜关门(Lespedeza cuneataG.Don)的叶，以及绿豆(Vigna radiate L.)的种子等。大量研究表明，异牡荆素具有多种药理学活性，包括降血糖、抗菌、调节记忆、抑制α-葡萄糖苷酶、降血压和抗氧化等作用。但是关于异牡荆素在溃疡性结肠炎应用未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种异牡荆素的应用。

本发明的目的是这样实现的，所述的异牡荆素在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。

本发明实验显示异牡荆素能有效改善溃疡性结肠炎小鼠的一般状态、显著抑制DSS诱导的小鼠结肠变短、改善结肠组织病理学、降低髓过氧化物酶、显著减轻炎症反应、降低血清中促炎因子的表达，促进抑炎因子的生成，进而发挥抗炎作用。实验证明异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎的有保护作用。在动物模型上，结果表明异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠有显著的疗效。包括有效改善溃疡性结肠炎小鼠的一般状态、显著抑制DSS诱导的小鼠结肠变短、改善结肠组织病理学、降低髓过氧化物酶、显著减轻炎症反应、降低血清中促炎因子的表达，促进抑炎因子的生成，进而发挥抗炎作用。本发明的异牡荆素可用于制备防治溃疡性结肠炎的药物。

异牡荆素治疗溃疡性结肠炎的优点在于作用迅速、疗效确切且药效良好。

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含异牡荆素或其溶剂合物，以及药学上可接受的载体，所述药物组合物用于治疗溃疡性结肠炎。

上述药物组合物，优选地，为片剂、丸剂、滴丸、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、散剂、注射液、口服液或乳剂。

上述药物组合物，更优选地，为片剂、滴丸、软胶囊剂、硬胶囊剂或乳剂。

再一方面，本发明提供了一种包含异牡荆素的药物组合物的制备方法，其特征在于，将异牡荆素或其药学上可接受的溶剂合物与药学上可接受的载体混合来制备，所述药物组合物用于治疗溃疡性结肠炎。

本发明公开了异牡荆素的抗溃疡性结肠炎的作用，即异牡荆素可用于制备抗溃疡性结肠炎的药物，且药效良好。

术语“药物组合物”表示包含治疗有效量的一种或多种所述有效成分及其药学上可接受的溶剂合物，与其他药学上可接受的载体的混合物。将所述化合物制备成药物组合物的目的是为了更方便地向需用对象给药。

本发明所述的药物组合物可以为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、栓剂、散剂、膏剂、贴剂、注射液、溶液、混悬液、喷雾剂、洗剂、滴剂、擦剂。

本发明所述的药学上可接受的载体，是药学上可接受的成分或者介质，包括但不限于溶剂、赋形剂、稀释剂、佐剂、填充剂等。常见的药学上可接受的载体包括生理盐水，缓冲剂、糖类、明胶、淀粉、林格氏溶液、纤维素等。

除非在本发明中另有说明或与上下文明显矛盾，本发明所述的所有方法可以根据本领域技术人员的理解，以任何合适的顺序进行。

附图说明

图1为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠体重变化趋势的曲线图；

图2为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠DAI评分的曲线图；

图3为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠取材代表性图片；

图4为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠长度差异的条形图；

图5为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠H&E染色图；

图6为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中髓过氧化酶(MPO)的影响；

图7为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠血清炎症因子TNF-α水平的影响示意图；

图8为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠血清炎症因子IL-1β水平的影响示意图；

图9为异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠血清炎症因子IL-6水平的影响示意图；

Control为对照组；DSS为模型组；DSS+5-ASA为5-氨基水杨酸阳性药物组(500 mg/kg)；IV为异牡荆素药物组(100 mg/kg)；n=10；Note: ##P﹤0.05 vs 对照组；**P﹤0.05 vs 模型组。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的异牡荆素的应用为所述的异牡荆素在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。

所述的异牡荆素的有效量为100mg/kg。

所述的药物组合物是以所述的异牡荆素为主要有效成分与其它活性成分组合成治疗溃疡性结肠炎的药物组合物。

所述的治疗溃疡性结肠炎的药物组合物可添加药学上可接受的载体制备成片剂、丸剂、滴丸、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、粉剂、散剂、口服液、注射液或乳剂。

下面以具体实施例对本发明做进一步说明：

实施例1

异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠体重变化及DAI指数的影响

试验方法：取健康18-22 g C57BL/6雌性小鼠40 只，随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、5-氨基水杨酸阳性药物组、异牡荆素组。除正常组外，其余各组饮用3% DSS，7天后换成正常水，给药组连续10天灌胃给药。在实验期间，每天观察小鼠的状态。此外，每天称量小鼠的重量，观察小鼠粪样的松软度以及便血情况。根据以上指标，得出小鼠DAI评分，并用于判定小鼠UC的严重程度。DAI评分=（体重下降分数+大便性状分数+便血分数）/3。DAI的具体评分标准如表1。试验结果如图1和图2所示。

表1 DAI评分标准

实验结果：从图1的结果显示，与正常组相比，DSS诱导的UC小鼠显示出更低的体重，模型组小鼠从第三天开始体重略微下降，从第五天起，下降趋势明显增加，给药组体重虽然也呈下降趋势，但下降趋势不明显，表明异牡荆素可以抑制DSS诱导的小鼠体重下降，且与正常组相比，模型组具有显著性差异。

由图2的结果显示，与正常组相比，模型组DAI评分逐渐升高，从第三天开始，升高趋势明显增加，且有显著性差异，给药组的DAI评分与正常组相比也明显增加，但与DSS组相比，其DAI评分明显减少，说明异牡荆素可以有效降低UC小鼠DAI评分。

实验结论：异牡荆素可显著延缓DSS诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠体重降低，并显著改善溃疡性结肠炎小鼠的疾病活动指数评分DAI值。

实施例2

异牡荆素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠长度的影响

试验方法：取健康18-22 g C57BL/6雌性小鼠40 只，随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、5-氨基水杨酸阳性药物组、异牡荆素组。除正常组外，其余各组饮用3% DSS，7天后换成正常水，给药组连续10天灌胃给药。实验结束当天，用颈椎脱臼法处死小鼠，立即解剖，取小鼠结肠（肛管至盲肠部），测量长度并记录。

实验结果：由图3和图4我们可看出，与正常组相比，模型组结肠明显缩短，然而给予药物（异牡荆素）的小鼠，结肠缩短现象被明显抑制，且抑制效果优于阳性药对照组，且具有显著性差异。

实验结论：异牡荆素可显著增加DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的结肠长度

实施例3

异牡荆素对DSS诱导的结肠炎小鼠结肠病理组织分析的影响

试验方法：取健康18-22 g C57BL/6雌性小鼠40 只，随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、5-氨基水杨酸阳性药物组、异牡荆素组。除正常组外，其余各组饮用3% DSS，7天后换成正常水，给药组连续10天灌胃给药。实验结束当天，用颈椎脱臼法处死小鼠，立即解剖，取小鼠结肠（肛管至盲肠部），4％多聚甲醛固定24h，用蒸馏水冲洗10min。取出组织进行脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋切片。取石蜡包埋的组织切片，厚度为 5μm，常规脱蜡；苏木精液染色5min；流水稍洗去苏木精液1-3s；1%盐酸乙醇1-3s；稍水洗10-30s；蒸馏水稍洗1-2s；0.5%伊红液染色1-3min；蒸馏水稍洗1-2s；80%乙醇稍洗1-2s；95%乙醇（Ⅰ）2-3s；95%乙醇（Ⅱ）3-5s；无水乙醇5-10min；石炭酸二甲苯5-10min；二甲苯（Ⅰ）2min；中性树脂封片。

实验结果：由图5的H&E染色结果显示，空白对照组小鼠的组织切片显示正常组织学；而DSS诱导的模型组小鼠表现出典型的症状，包括杯状细胞减少，结肠组织结构完整性被严重破坏，粘膜层细胞坏死脱落，炎症程度、炎症深度、炎症浸润面积等增加，腺体结构部分甚至完全消失；而异牡荆素处理组显著减弱了所有这些组织学变化，主要表现为杯状细胞增多，结肠组织粘膜层、粘膜下层结构基本完整，且腺体结构部分保留，浸润的炎症细胞明显减少。

实验结论：异牡荆素可有效改善溃疡性结肠炎小鼠结肠的病理变化情况。

实施例4

异牡荆素对DSS诱导的结肠炎小鼠结肠组织MPO的影响

试验方法：取健康18-22 g C57BL/6雌性小鼠40 只，随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、5-氨基水杨酸阳性药物组、异牡荆素组。除正常组外，其余各组饮用3% DSS，7天后换成正常水，给药组连续10天灌胃给药。实验结束当天，用颈椎脱臼法处死小鼠，立即解剖，取小鼠结肠，-80°C冻存结肠组织以备用。准确称定组织重量，以试剂盒配备的试剂二为匀浆介质，按重量体积比为1：9加入匀浆介质制备成10％的组织匀浆，无需离心。严格按照试剂盒说明书操作，在460nm处，测吸光度值。按以下公式计算MPO活力(U/g组织湿重)＝(测定管OD值-对照管OD值)/11.3×取样量(g)。

实验结果：MPO的活性也是UC严重程度的重要生物标志物之一。由图6的结果显示，与空白对照组小鼠相比，DSS诱导的UC增强了MPO活性，IBC处理后可显著降低MPO的活性，且具有显著性差异。

实验结论：异牡荆素可显著改善溃疡性结肠炎小鼠结肠的生物标志物的增加，意味着异牡荆素可有效改善溃疡性结肠炎。

实施例5

异牡荆素对DSS诱导的结肠炎小鼠血清炎性因子的影响

试验方法：取健康18-22 g C57BL/6雌性小鼠40 只，随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、5-氨基水杨酸阳性药物组、异牡荆素组。除正常组外，其余各组饮用3% DSS，7天后换成正常水，给药组连续10天灌胃给药。实验结束当天，小鼠采取乙醚麻醉，眼球采血于肝素钠抗凝管中,离心吸取上清，置于4°C保存备用。ELISA测定血清炎症因子(TNF-α，IL-1β、IL-6) ：按照试剂盒说明书进行。（1）实验开始前，从冰箱中取出试剂盒放置室温，待试剂完全溶解，然后按照试剂盒说明书把所有浓缩液稀释为工作液，待用。（2）标准曲线的绘制：将标准品管离心，并按照说明书进行稀释。取7个 1.5ml EP管并从2开始标号，最后一个标为0管，每管加300ul样品稀释液。从1号管吸取300ul加到2号管，充分混匀，再从2号管吸取300ul混合液加到3号管，依次类推，至到7号管停止，0号管不加作为空白对照管。（3）加样：向酶标板的各孔中分别加入100ul的标准品和样品，室温25℃孵育2.5h，并轻轻振摇。（4）弃掉孔中的液体，用洗涤液洗4次，每次加入300ul洗涤液，最后一次洗完结束后，在滤纸上轻轻拍打残留液体，使孔保持干净。（5）每孔中加入100ul检测抗体，轻轻振摇，室温孵育1h。弃掉孔中液体，洗板（重复步骤 4）。（6）每孔中加入100ul HRP-链霉亲和液，室温孵育1h。弃掉孔中液体，洗板（重复步骤4）。（7）每孔中加入100ul显色液，注意避光操作，室温孵育30min。（8） 每孔中加入50ul反应终止液，立即在450nm波长下测各孔样品吸光度值并记录。（9）结果计算：所得样品OD值减去空白对照管OD值极为修正OD值。以标准品的浓度为X轴，以各浓度标准品对应的OD值为Y轴作图，得到标准曲线。将每个样品的OD值代入上述所得曲线方程中，即得到相应的蛋白浓度。

实验结果：由图7、图8和图9的结果显示，与正常组相比，模型组小鼠TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高，且具有显著性差异，而异牡荆素和5-氨基水杨酸阳性药物组可有效降低TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子水平，表明异牡荆素可有效抑制由DSS介导的促炎因子分泌。

实验结论：异牡荆素可显著降低溃疡性结肠炎小鼠结肠的炎症因子水平，意味着异牡荆素可有效改善溃疡性结肠炎。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。