阅读说明：本技术 11β-羟基类固醇脱氢1型酶选择性抑制剂在制备治疗***的药物中的用途 (Use of 11 β -hydroxysteroid dehydrogenase type 1 enzyme selective inhibitor in preparation of medicine for treating polycystic ovary syndrome ) 是由 孙贇 于 2019-12-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了11β-羟基类固醇脱氢1型酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 1,11β-HSD1)抑制剂在制备治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的药物中的用途,所述的11β-HSD1的分子式为：C<Sub>17</Sub>H<Sub>21</Sub>ClN<Sub>4</Sub>O<Sub>3</Sub>S<Sub>2</Sub>,结构式如下所示,<Image he="282" wi="639" file="DDA0002330221630000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>本发明发现11β-HSD1选择性抑制剂可以抑制PCOS大鼠卵巢局部11β-HSD1活性及表达,能改善PCOS大鼠卵巢局部皮质醇浓度升高的现象,同时11β-HSD1选择性抑制剂不仅能改善PCOS大鼠外周胰岛素抵抗,而且可以改善卵泡生长发育及激素合成等排卵功能障碍。这提示11β-HSD1选择性抑制剂治疗PCOS的代谢异常与生殖功能障碍有着重要意义。(The invention provides application of an 11 β -hydroxysteroid dehydrogenation type 1 enzyme (11 β -hydroxysteroid dehydrogenase1,11 β -HSD1) inhibitor in preparation of a medicine for treating polycystic ovary syndrome (PCOS), wherein the molecular formula of the 11 β -HSD1 is C 17 H 21 ClN 4 O 3 S 2 The structural formula is shown as follows, the invention discovers that the 11 β -HSD1 selective inhibitor can inhibit the activity and expression of 11 β -HSD1 in the ovary part of a PCOS rat, can improve the phenomenon that the concentration of cortisol in the ovary part of the PCOS rat is increased, and simultaneously, the 11 β -HSD1 selective inhibitor can improve the peripheral insulin resistance of the PCOS rat, improve ovulation dysfunction such as follicle growth and development, hormone synthesis and the likeThis suggests that 11 β -HSD1 selective inhibitors have important implications for the treatment of metabolic abnormalities and reproductive dysfunction of PCOS.)

11β-羟基类固醇脱氢1型酶选择性抑制剂在制备治疗多囊卵 巢综合征的药物中的用途

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种用于治疗***的药物，具体来说是11β-羟基类固醇脱氢1型酶选择性抑制剂在制备治疗***的药物中的用途。

背景技术

***(polycystic ovary syndrome，PCOS)是女性最为常见的生殖内分泌异常及代谢紊乱疾病，在育龄期女性中的发病率为9％～18％，是75％以上女性无***性***的病因。PCOS以稀发***或不***，临床或生化上的高雄激素血症，卵巢多囊样改变主要特征，主要临床表现为***、肥胖和胰岛素抵抗等，影响女性生育力及代谢异常。

糖皮质激素主要由肾上腺分泌，具有调节糖脂代谢、抗炎和免疫抑制、抗毒和抗休克作用等，广泛应用于临床治疗中。糖皮质激素在机体作用不仅依赖于血液循环中的糖皮质激素、皮质激素结合蛋白水平及组织中糖皮质激素受体水平，而且近年来发现更加取决于组织细胞内11β羟化类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehdrogenases,11β-HSDs)的亚型和表达。11β-HSDs分为2种亚型，即11β-HSD1和11β-HSD2，两种酶具有组织特异性表达特点并发挥不同的作用。11β-羟基类固醇脱氢1型酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase1,11β-HSD1)是皮质醇代谢的关键酶，兼有氧化酶与还原酶活性，在体内主要发挥还原酶活性，在NADPH的作用下，把无活性的可的松转换为有活性的皮质醇。11β-HSD2仅具有氧化酶活性，在NAD⁺的作用下，能够使皮质醇失活转换为可的松。

皮质醇在机体中发挥着各种重要的生理作用，11β-HSDs的表达维持着体内靶器官皮质醇的平衡，PCOS患者的肝脏、脂肪组织以及卵巢局部11β-HSD1及皮质醇水平较健康人群升高。外周代谢重要靶器官肝脏、脂肪组织11β-HSD1的表达升高会导致外周胰岛素抵抗。我们的前期研究发现卵巢局部11β-HSD1表达导致的皮质醇再生会导致PCOS卵巢局部胰岛素抵抗，从而可能影响PCOS卵泡生长发育及激素合成紊乱。

国内外多项临床研究提示并不影响全身循环的皮质醇水平，但可通过改善局部靶向器官皮质醇的水平来改善糖尿病、心脏肥大、高血压及非酒精性脂肪肝等疾病。但11β-HSD1选择性抑制剂能否治疗PCOS、是否能够改善PCOS***障碍及代谢异常目前仍未有研究。BVT2733，是一种11β-HSD1选择性抑制剂，其分子式为：C₁₇H₂₁ClN₄O₃S₂，结构式：

发明内容

本发明的目的在于提供11β-羟基类固醇脱氢1型酶选择性抑制剂在制备治疗***的药物中的用途，所述的这种用途要解决现有技术中治疗***的药物效果不佳的技术问题。

本发明提供了11β-羟基类固醇脱氢1型酶选择性抑制剂在制备治疗***的药物中的用途，所述的11β-羟基类固醇脱氢1型酶的分子式为：C₁₇H₂₁ClN₄O₃S₂，结构式如下所示，

本发明发现11β-羟基类固醇脱氢1型酶选择性抑制剂BVT2733可以抑制11β-HSD1活性及表达，能改善PCOS靶器官局部皮质醇浓度升高的现象，能改善PCOS外周胰岛素抵抗以及***障碍、卵泡生长发育等卵巢功能障碍。对于治疗PCOS的代谢异常与生殖障碍有着重要意义。在治疗PCOS方面具有重要的临床应用前景。

本申请公开了11β-HSD1选择性抑制剂的新用途，11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733在用于治疗***的药物中的应用。

本发明和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。实验结果表明，11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对***有综合治疗作用。11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733不仅可以改善***大鼠卵巢多囊样病变，还可以纠正***表现的动情周期紊乱，***障碍，在内分泌代谢方面，还可以有效降低血糖、减轻肥胖状态等。本发明对直接利用11β-HSD1选择性抑制剂治疗***提供了科学依据。

附图说明

图1显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对PCOS大鼠卵巢皮质醇浓度及11β-HSD1蛋白表达水平的影响。

图2显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对PCOS大鼠葡萄糖耐量以及胰岛素耐量的影响。

图3显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对PCOS大鼠性腺周脂肪细胞大小的影响

图4显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对PCOS大鼠动情周期的影响。

图5显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对于PCOS大鼠卵巢影响。

图6显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对于PCOS大鼠性激素影响。

图7显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对于PCOS大鼠***与卵子质量影响。

图8显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对于PCOS大鼠卵巢纤维化相关蛋白的影响。

图9显示了11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733对于PCOS大鼠卵巢纤维化的影响

具体实施方式

下述实验采用的药物为BVT2733，是一种新型的11β-HSD1选择性抑制剂，其分子式为：C₁₇H₂₁ClN₄O₃S₂，结构式为：

实施例1

造模：3周龄雌性SD大鼠分为三组：对照组，PCOS造模组与PCOS+BVT造模组。PCOS造模组予以DHEA(6mg/100g体重)皮下注射21天。PCOS+BVT造模组予以DHEA(6mg/100g体重)皮下注射同时予以11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733(10mg/100g体重)灌胃21天。造模结束前8天起每天进行***涂片观察动情周期以判断造模成功与否后处死。

实验结果1：与对照组相比，PCOS组大鼠卵巢皮质醇浓度、11β-HSD1蛋白表达水平显著上升(p＜0.05)，PCOS+BVT造模组大鼠卵巢皮质醇浓度、11β-HSD1蛋白表达水平较PCOS组大鼠显著下降(p＜0.05)。结果如图1所示。表明11β-HSD1选择性抑制剂改善PCOS大鼠卵巢局部11β-HSD1表达异常。

实验结果2：

1)与对照组相比，PCOS组大鼠动情周期紊乱，而PCOS+BVT造模组动情周期恢复规律性。结果如图4所示。

2)与对照组相比，PCOS组大鼠卵巢小窦卵泡数量增多，黄体数量减少。而PCOS+BVT造模组大鼠较PCOS组大鼠卵巢小窦卵泡数量减少，黄体数量增多。结果如图5所示。

3)与对照组相比，PCOS组大鼠性激素紊乱，黄体生成激素、黄体生成激素与促卵泡生长激素比例与睾酮水平显著上升(p＜0.05)。PCOS+BVT造模组大鼠黄体生成激素，黄体生成激素与促卵泡生长激素比例与睾酮水平较PCOS组大鼠显著降低(p＜0.05)。结果如图6所示。

上述实验结果显示11β-HSD1选择性抑制剂改善PCOS大鼠卵巢功能。

实施例2

葡萄糖耐量实验：造模成功后禁食16小时(17：00-9：00)，腹腔注射葡萄糖(2g/1000g体重)。分别在葡萄糖注射后的0，15，30，60，90和120分钟测大鼠血糖水平。

胰岛素耐量实验：造模成功后禁食4小时(9：00-13：00)，腹腔注射礼来优泌林胰岛素(1U/1000g体重)。分别在胰岛素注射后的0，15，30，45和60分钟测大鼠血糖水平。

实验结果：

1)与对照组相比，PCOS组大鼠葡萄糖耐量以及胰岛素耐量异常，出现外周胰岛素抵抗。而PCOS+BVT造模组大鼠葡萄糖耐以及胰岛素耐量较PCOS组大鼠明显改善(p＜0.001)。结果如图2所示。显示11β-HSD1选择性抑制剂改善PCOS大鼠胰岛素抵抗。

2)与对照组相比，PCOS组大鼠性腺周脂肪细胞明显增大，而PCOS+BVT造模组大鼠性腺周脂肪细胞较PCOS组大鼠明显减小。结果如图3所示。

实施例3

1.血清类固醇激素的检测：自大鼠腹主动脉取血，离心3500rpm，10分钟吸取上层血清，保存于-80℃。大鼠促卵泡生成素(Follicular stimulating hormone,FSH)、***(Luteinizing hormone，LH)采用ELISA试剂盒(南京建成)，睾酮(Testosterone,T)采用ELISA试剂盒(R&D)进行检测。

2.Western Blot检测蛋白表达:组织使用蛋白裂解液(RIPA提取细胞总蛋白)冰上裂解，用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，取30μg样品行SDS-PAGE电泳分离，然后将蛋白转移至PVDF膜上，再用5％脱脂牛奶-TBST室温摇床封闭2小时，一抗敷于4℃摇床过夜，二抗于室温孵育1小时，ECL发光剂激发荧光。在G-BOX中化学发光曝光。使用以下抗体：anti-HSD11B1(Abcam)，anti-LOX(Abcam)，anti-p-ERK(CST),anti-total-ERK(CST),anti-COL4(Novus),anti-p-Akt(CST),anti-Akt(CST)，anti-CEBP/β(Santa cruz)，anti-GAPDH(Proteintech)。

3.统计学方法：采用单因素方差分析检验各组均数差异是否具有统计学意义；检验水准为p＜0.05。应用SPSS 19.0统计软件进行数据统计及分析。

4.促***实验：造模成功后，大鼠腹腔注射孕马血清(pergnant mare serumgonadotropin,PMSG)300IU/kg体重。注射PMSG48小时后大鼠腹腔注射hCG300IU/kg体重。注射hCG16小时后于输卵管收集排出卵子。

实验结果1：

1)与对照组相比，PCOS组大鼠动情周期紊乱，而PCOS+BVT造模组动情周期恢复规律性。结果如图4所示。

2)与对照组相比，PCOS组大鼠卵巢小窦卵泡数量增多，黄体数量减少。而PCOS+BVT造模组大鼠较PCOS组大鼠卵巢小窦卵泡数量减少，黄体数量增多。结果如图5所示。

3)与对照组相比，PCOS组大鼠性激素紊乱，黄体生成激素、黄体生成激素与促卵泡生长激素比例与睾酮水平显著上升(p＜0.05)。PCOS+BVT造模组大鼠黄体生成激素，黄体生成激素与促卵泡生长激素比例与睾酮水平较PCOS组大鼠显著降低(p＜0.05)。结果如图6所示。

上述实验结果显示11β-HSD1选择性抑制剂改善PCOS大鼠卵巢功能及激素合成。

实验结果2：

1)与对照组相比，PCOS组大鼠***数量显著减少，MII卵率下降(p＜0.05)，PCOS+BVT造模组大鼠***数(p＜0.0001)与MII卵率(p＜0.05)较PCOS组大鼠显著上升。结果如图7所示。

2)与对照组相比，PCOS组大鼠卵巢纤维化相关蛋白LOX、四型胶原蛋白表达水平显著升高(p＜0.05)，胶原纤维Masson染色显示PCOS组大鼠卵巢纤维化程度较对照组大鼠升高。而PCOS+BVT造模组大鼠卵巢纤维化相关蛋白LOX、四型胶原蛋白表达水平较PCOS组大鼠显著降低(p＜0.05)。结果见图8-9。

上述实验结果显示11β-HSD1选择性抑制剂改善PCOS大鼠***障碍。

综上所述，本发明所指出的11β-HSD1选择性抑制剂BVT2733可以有效抑制PCOS卵巢中升高的11β-HSD1蛋白表达及皮质醇水平。同时11β-HSD1选择性抑制剂可以改善PCOS的外周代谢异常以及卵巢功能障碍、***异常等，在治疗PCOS方面有重要的临床应用前景。