一种蔬菜中灭蝇胺残留量的快速检测方法

文档序号：1427702 发布日期：2020-03-17 浏览：5次 >En<

阅读说明：本技术 一种蔬菜中灭蝇胺残留量的快速检测方法 (Method for rapidly detecting residual quantity of cyromazine in vegetables ) 是由成艳彭桂芝刘祥燕张廷翠曹慧艳郭晓华郑萌萌秦瑶张永勤于 2019-11-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种蔬菜中灭蝇胺的快速检测方法,属于农药检测技术领域。检测方法包括如下步骤：将蔬菜样品粉碎,充分混匀,准确称取蔬菜样品置于离心管中,加入2%乙酸乙腈,使用均质器进行均质且边均质边加入无水Na<Sub>2</Sub>SO<Sub>4</Sub>,NaCL,之后进行离心,离心后取上清液1mL用于净化。净化结束后将处理好的样品于高效液相色谱-质谱仪进行定性和定量分析,得到蔬菜中灭蝇胺的含量。本发明的有益效果在于：本发明检测方法中灭蝇胺的色谱峰响应良好,2.37分钟就能够出峰,仪器响应较高,从而有效的节省了进样的时间,提高了灭蝇胺的检测效率。本发明检测方法中,灭蝇胺的检测的准确率明显提高,样品的加标回收率在90.01%～104.81%之间,相对标准偏差在0.50%～3.49%之间。(The invention discloses a rapid detection method of cyromazine in vegetables, and belongs to the technical field of pesticide detection. The detection method comprises the following steps: crushing a vegetable sample, fully and uniformly mixing, accurately weighing the vegetable sample, placing the vegetable sample in a centrifuge tube, adding 2% acetic acid acetonitrile, homogenizing by using a homogenizer, and adding anhydrous Na while homogenizing 2 SO 4 NaCL, followed by centrifugation, after which 1mL of supernatant was taken for clarification. And after purification, qualitatively and quantitatively analyzing the treated sample in a high performance liquid chromatography-mass spectrometer to obtain the content of cyromazine in the vegetables. The invention has the beneficial effects that: the chromatographic peak response of the cyromazine in the detection method is good, the cyromazine can generate peaks in 2.37 minutes, and the response of an instrument is higher, so that the sample introduction time is effectively saved, and the detection efficiency of the cyromazine is improved. In the detection method, the detection accuracy of cyromazine is obviously improved, and the standard recovery rate of the sample is 90.01-104.81 percent and the relative standard deviation is between 0.50 percent and 3.49 percent.)

一种蔬菜中灭蝇胺残留量的快速检测方法

技术领域

本发明涉及农药检测技术领域，尤其涉及一种蔬菜中灭蝇胺的快速检测方法。

背景技术

灭蝇胺(Cyromazine)又名环丙氨嗪，化学名称为N-环丙基-1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺，是一种三嗪类化合物，对昆虫生长起调节作用，属新型高效、低毒、含氮杂环类杀虫剂，对防治双翅目昆虫幼虫和蛹具有特殊的生理活性，具有内吸传导作用，可以干扰蜕皮和化蛹，使其在形态上发生畸变，导致成虫羽化受到抑制或不全，从而达到控制双翅目害虫繁殖过量、减少害虫数量的目的，是目前防治双翅目昆虫病虫害效果较好的生态农药。

目前，在我国，蔬菜中的灭蝇胺残留十分严重，现有蔬菜中灭蝇胺的检测标准为NY/T 1725-2009高效液相色谱法。该标准是将试样中的灭蝇胺经乙酸铵-乙腈混合溶液提取，在215nm处六元环上的π电子被激发，用紫外检测器检测。根据标准物质峰的保留时间定性，外标法定量。此方法所用仪器检测灵敏度较低，只能根据出峰时间定量，且进样时间较长，因此灭蝇胺残留的检测效果不理想，回收率低且检测速度较慢。因此，目前急需一种检测效果准确且检测速度快的蔬菜中灭蝇胺检测新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测效果好，检测速度快的蔬菜中灭蝇胺的检测方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种蔬菜中灭蝇胺残留量的快速检测方法，所述检测方法包括如下步骤：

步骤1：标准溶液的配制

(1)制备灭蝇胺标准储备液(100μg/mL)：准确称取适量灭蝇胺标准物质于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，避光4℃保存。

(2)制备灭蝇胺标准中间液(10μg/mL)：准确吸取灭蝇胺标准储备液(100μg/mL)1mL于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度。

(3)制备灭蝇胺标准工作液：将灭蝇胺标准中间液(10μg/mL)用空白基质提取液配制成浓度分别为2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的标准溶液备用，用于绘制校准曲线。

步骤2：样品前处理:

(1)样品提取

将蔬菜样品粉碎，充分混匀，准确称取蔬菜样品置于离心管中，加入2％乙酸乙腈，使用均质器进行均质且边均质边加入无水Na₂SO₄，NaCL，之后进行离心，,离心后取上清液1mL用于净化。

(2)样品净化

A.将强阳离子交换柱置于固相萃取装置，用5mL甲醇预淋洗活化，再用5mL水平衡，当溶剂到达柱吸附层表面时，立即将所述上清液1mL转移至SCX柱中。

B.依次用2％甲酸水、甲醇各6mL清洗强阳离子交换柱，弃去流出液并将小柱抽干。

C.用6mL氨水甲醇(5+95)分3次洗脱强阳离子交换柱，收集于圆底烧瓶中。于旋转蒸发器上，40℃以下浓缩至0.5ml，氮气吹干后用乙腈定容至1mL，过0.22μm有机滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。

(3)样品检测

将处理好的样品使用高效液相色谱-质谱仪进行定性和定量分析去计算蔬菜中灭蝇胺的含量。

A.取5.0μL待测样品溶液进样，用高效液相色谱-串联质谱仪分析检测，得到待测样品溶液的总离子流图、定量离子色谱图和定性离子对相对丰度色谱图；

B.将步骤1中制备的灭蝇胺标准工作液，用高效液相色谱-串联质谱仪分析测定，获得标准溶液的总离子流图、定量离子色谱图和定性离子对相对丰度色谱图；

C.以灭蝇胺的保留时间、定性离子对(m/z)167/108和定量离子对(m/z)167/85进行分析，以定性离子对和定量离子对的色谱峰制作得到灭蝇胺标准曲线。

D.根据待测样品溶液中灭蝇胺的定性离子对和定量离子对的色谱峰，结合标准曲线，计算得到待测样液中农药残留的浓度Ci，并按以下公式计算得到蔬菜中灭蝇胺的含量Xi，含量计算公式为：

公式中：

Xi---试样中灭蝇胺残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

Ci---从标准曲线上得到的被测组分的溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

V---样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)；

m---样品溶液所代表的试样的质量，单位为克(g)。

所述高效液相色谱-质谱仪的液相色谱条件为:色谱柱：Waters BEH hilic(1.7um，2.1×100mm)；进样体积5uL；流动相A：0.2％甲酸乙腈，流动相B：0.2％甲酸水；流速：0.3mL/min；梯度：0min:A:B＝95:5,2min：A:B＝75:25，4-5min：A：B＝50:50,5.1min：A:B＝95:5。

所述高效液相色谱-质谱/质谱仪的MS/MS质谱条件：离子源：电喷雾离子源；离子源温度：400℃。离子化方式：ESI+；干燥气：温度330℃，流量9L/min；鞘气：温度350℃，流量12L/min；雾化气压力：36psi；毛细管电压：4500V，扫描方式：多反应监测(MRM)。

优选地，所述蔬菜样品包括：菠菜，甘蓝，青刀豆，黄秋葵，芋籽。

优选地，所述蔬菜样品重量/乙酸乙腈用量是5g/25ml；所述蔬菜样品：无水Na2SO4：NaCL为5g:5g:2g。

优选地，所述步骤2中所述匀质器的转速为8000r/min。

优选地，所述步骤2中所述离心的条件为4000r/min离心5min。

优选地，所述检测方法的检出限为0.010mg/kg。

本发明的有益效果在于：

1.本发明检测方法中灭蝇胺的色谱峰响应良好，2.37分钟就能够出峰，仪器响应较高，相较于现有技术，本发明的检测方法有效的节省了进样的时间，实现对蔬菜中灭蝇胺的快速检测，提高了灭蝇胺的检测效率。

2.本发明检测方法中，灭蝇胺的检测的准确率明显提高，且本发明灭蝇胺的检出限为0.010mg/kg，加标回收率在90.01％～104.81％之间,相对标准偏差在0.50％～3.49％，相较于现有技术，本发明在保证灭蝇胺检测效率的同时，获得了优异的加标回收率和检测准确率。

3.本发明检测方法通过前处理对样品进行了稀释，减小样品对于仪器的污染。

4.本发明检测方法操作简单，稳定性好,在菠菜，甘蓝，青刀豆，黄秋葵，芋籽中均具有优异的加标回收率且加标回收率结果稳定。

5.本发明采用空白基质配制标准工作液，解决因样品基质抑制效应大而导致样品上机数据过低影响回收率的问题。

6.本发明采用强阳离子交换柱(SCX)对样品进行净化，解决现有技术中常用净化柱：C18固相萃取小柱、氨基固相萃取小柱(NH₂)、石墨化碳黑小柱(Carb)等对灭蝇胺存在严重的拦截、吸附的问题。

附图说明

图1是灭蝇胺校准曲线图

图2是灭蝇胺标准品总离子流图

图3是灭蝇胺定量离子色谱图

图4是灭蝇胺定性离子相对丰度色谱图

具体实施方式

为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。

本发明所使用的试剂和材料为：

乙腈(色谱纯)；甲醇(色谱纯)；氨水、乙酸、甲酸(优级纯)；2％乙酸乙腈：量取20mL乙酸至1L容量瓶中，用乙腈定容至刻度；2％甲酸水：量取2mL甲酸于100mL容量瓶中，用水定容至刻度；氨水甲醇(5+95)：吸取5mL氨水至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度；灭蝇胺标准品(CAS号：66215-27-8)：纯度≥98％；强阳离子交换柱(SCX)：500mg/3mL,SEPUKE。

本发明所使用的仪器为：

Agilent1290/6460高效液相色谱-串联质谱仪,带ESI源；waters BEH hilic色谱柱(1.7um，2.1×100mm)；食品加工机；分析天平：感量0.01g、0,1mg；均质器：6000-36000r/min；旋转蒸发仪；固相萃取装置。

实施例1