阅读说明：本技术 一种替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定方法 (Method for determining ethyl bromide in tenofovir alafenamide ) 是由 沙薇 吴金平 李晨希 于 2018-09-12 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定方法,采用溶液直接进样法进行测定,将替诺福韦艾拉酚胺制成一定的溶液,用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱对微量的溴乙烷进行测定,用外标法计算出替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷含量。本发明方法只需用合适的溶剂将替诺福韦艾拉酚胺配制成溶液,前处理简单,易操作,且能更好测定替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷含量。(The invention provides a method for measuring ethyl bromide in tenofovir alafenamide, which adopts a solution direct injection method to measure, prepares tenofovir alafenamide into a certain solution, measures trace amount of ethyl bromide by using a capillary column taking 6% cyanopropylphenyl-94% dimethylpolysiloxane as a stationary liquid, and calculates the content of ethyl bromide in tenofovir alafenamide by an external standard method. The method only needs to use a proper solvent to prepare the tenofovir alafenamide into a solution, has simple pretreatment and easy operation, and can better determine the content of ethyl bromide in the tenofovir alafenamide.)

一种替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定方法

技术领域

本发明属于药学分析领域，具体设计一种替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定方法。

背景技术

替诺福韦艾拉酚胺合成路线，在反应过程中可能产生溴乙烷副产物。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的《致癌物清单初步整理参考》，溴乙烷属3类致癌物质。溴乙烷的测定方法国内有很多文献报道，但替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定目前在国内报道很少，偶有报道且方法复杂，灵敏度和准确度都不高。

溴乙烷为无色油状液体，有类似***的气味和灼烧味。露置空气或见光逐渐变为黄色，容易挥发，能与乙醇、***、三氯甲烷和多数有机溶剂混溶，沸点为38.4℃。

发明内容

[1]本发明提供了一种替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的测定方法，本发明方法具有操作简单、灵敏度高、准确度高等优点。

[2]本发明具体技术方案：

（1）将替诺福韦艾拉酚胺用合适的溶剂配制成溶液。

（2）直接进样，用毛细管气相色谱法进行测定，用外标法计算溴乙烷的含量，气相色谱条件为：用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，起始温度35℃～45℃，以每分钟30℃/min的速率升温至220℃，维持5～8分钟；检测器温度为250℃；进样口温度为150℃～220℃，分流比为2:1～5:1，柱流速2～4ml/min。

[3]

具体实施方式

以下通过实施例仅说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明，应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

（1）溶剂的选择

替诺福韦艾拉酚胺在甲醇、乙腈、丙酮和二甲基甲酰胺等有机溶剂中溶解。由于溴乙烷限度较低，需将替诺福韦艾拉酚胺尽量溶解，根据替诺福韦艾拉酚胺溶解性信息，可选用甲醇、乙腈、丙酮和二甲基甲酰胺作为溶剂。二甲基甲酰胺沸点为152.8℃，二甲基甲酰胺与溴乙烷沸点差异较大，优选二甲基甲酰胺作为溶剂。

（2）色谱条件的选择

用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，起始温度35℃～50℃，以每分钟30℃/min的速率升温至220℃，维持5～8分钟；检测器温度为250℃；进样口温度为150℃～220℃，分流比为2:1～5:1，柱流速2～4ml/min，载气流量为1.5ml/min～3ml/min。

起始温度的影响：综合考虑柱温的变化所引起的峰高、分离度、峰型及理论板数的影响，起始温度优选35℃。

载气流量的影响：为了获得更好的分离测定效果，本法优选载气流量为2ml/min

分流比的影响：为了更好的达到各峰的分离效果，保证检测的灵敏度，分流比优选3:1。

平衡时间的影响：平衡时间的长短影响着被测组分分子从样品基质到气相的扩散速度。将样品分别在35℃～50℃平衡5～8分钟，进样考察，温度过高，平衡时间过长，分离度好，故本试验优选35℃平衡5分钟。

（3）用本发明方法测定替诺福韦艾拉酚胺中溴乙烷的含量

标准曲线试验：精密称取溴乙烷适量，用二甲基甲酰胺溶解并稀释制成每1ml约含10.62μg的溶液，摇匀。分别精密量取溴乙烷储备溶液0.2、0.5、1.0、4.0、6.0、8.0ml，分别置20ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为线性关系试验溶液；分别精密量取各线性关系试验溶液1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。以溴乙烷浓度为横坐标x，以溴乙烷峰面积为纵坐标y，进行线性回归，求出线性方程y=0.0329x+0.0053，R²=0.9954，线性关系良好,结果如表1和附图1所示。

表1 线性关系试验

精密度分析：取用二甲基甲酰胺溶解并稀释制成每1ml约含0.531μg的对照品溶液，精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，对照品峰面积的RSD为7.65%、保留时间的RSD为0.12%，仪器精密度良好，各对照品溶液中溴乙烷分离度均大于1.5，分离完全，理论板数均大于10000，峰型良好。结果如表2所示。

表2 精密度试验

进样序号	1	2	3	4	5	6	平均	RSD%
									峰面积	0.024	0.022	0.027	0.026	0.023	0.024	0.024	7.65
分离度	2.47	2.3	2.31	2.49	2.27	2.17	/	/
									理论板数	32854	26797	22604	26572	27030	25413	/	/

回收率试验：采用加标回收率试验。：取样品1g，精密称定，置10ml量瓶中，加入溴乙烷储备溶液0.5ml，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，共6份。按外标法以峰面积计算溴乙烷的测得量，经计算回收率为97.95～112.65%，RSD为5.30%，结果如表3所示，结果表明此方法测定溴乙烷准确度高。

表3 回收率试验

附图说明：

附图1 线性关系和范围实验图。