用于治疗癌症的免疫疗法

文档序号：143609 发布日期：2021-10-22 浏览：22次 >En<

阅读说明：本技术 用于治疗癌症的免疫疗法 (Immunotherapy for the treatment of cancer ) 是由 D·布洛卡 D·可莱克希亚 L·德’阿米科 E·基塔斯 A·列维茨基 E·波博-维勒 A 于 2020-04-03 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种成套试剂盒和一种组合物,所述成套试剂盒包括以下并且所述组合物包括以下：多聚复合物,所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物,所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分,并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及至少一种抗体,其中所述至少一种抗体能够调节免疫检查点蛋白。进一步地,本发明涉及用于治疗癌症的此组合物或成套试剂盒。(The present invention relates to a kit of parts and a composition, said kit of parts comprising the following and said composition comprising the following: a multimeric complex comprising double-stranded rna (dsrna) and a polymeric conjugate comprising Polyethyleneimine (PEI), one or more polyethylene glycol (PEG) moieties, and one or more targeting moieties, and wherein each targeting moiety of the one or more targeting moieties is capable of binding to a cancer antigen; and at least one antibody, wherein the at least one antibody is capable of modulating an immune checkpoint protein. Further, the present invention relates to such a composition or kit of parts for use in the treatment of cancer.)

用于治疗癌症的免疫疗法

本发明涉及免疫疗法性癌症治疗的领域。特别是，本发明涉及一种成套试剂盒和一种组合物，所述成套试剂盒和所述组合物包括：多聚复合物(polyplex)，所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及至少一种抗体，其中所述至少一种抗体能够调节免疫检查点蛋白。进一步地，本发明涉及用于治疗癌症的此组合物或成套试剂盒。

背景技术

靶向肿瘤相关抗原的抗体已成为恶性肿瘤的重要治疗模态。几种单克隆抗体(mAb)已被证明具有相对良好的耐受性并且对于治疗许多不同的恶性疾病是有效的。尽管这些抗体通常用于临床，但其功效通常适度。mAb必须克服实质性障碍才能使靶细胞上呈递的抗原具有治疗价值(Christiansen等人,《分子癌症疗法(Mol Cancer Ther)》,2004,3(11),1493-1501)。此外，靶向肿瘤相关抗原的抗体的效率会由于免疫系统的抗肿瘤应答的活化不足和对肿瘤本身诱导的免疫反应的抑制而降低。

靶向细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的检查点阻断抗体已证明了可接受的毒性、有前途的临床应答、持久的疾病控制以及一些患有晚期黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)和其它肿瘤类型的患者的存活率的提高。PD-1通过其配体PD-L1或PD-L2的接合诱导阴性控制信号，从而导致抑制T细胞增殖、细胞因子产生和细胞毒活性。(Ma等人,“针对PD-1/PD-L1免疫检查点阻断疗法的转化生物标志物研究的现状和前景(Current status and perspectives in translational biomarker research forPD-1/PD-L1 immune checkpoint blockade therapy)”,《血液学与肿瘤学杂志(Journalof Hematology&Oncology)》,(2016)9:47)。

与肿瘤坏死因子(TNF)相关的细胞因子提供了对于将多种细胞类型协调成病原体和恶性细胞的有效宿主防御系统所必须的通信网络。肿瘤坏死因子配体超家族(TNFSF)和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)提供了各种细胞类型之间在发育期间的关键通信信号。FTNF受体(TNFR)共享由富含半胱氨酸的特征定义的保守胞外结构域。具有共刺激名声的TNFR由驻留在染色体区域1p36中的免疫应答基因座内的基因进行编码，并且包含GITR(糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子)、OX40、4-1BB和CD30(Ward-Kavanagh等人,“共刺激和共抑制应答中的TNF受体超家族(The TNF Receptor Superfamily in Co-stimulating andCo-inhibitory Responses)”,《免疫(Immunity)》44,2016年5月17日)。

用于治疗恶性肿瘤的不同方法是基于疫苗的疗法。肿瘤相关抗原的分子定义引入了靶向肿瘤细胞的特定疫苗的可能性。基于来自定义的肿瘤相关抗原(TAA)的肽或蛋白质的重组疫苗通常与佐剂或免疫调节剂一起施用。尽管这些疫苗能够诱导抗原特异性T细胞应答，但是临床结果是令人失望的(Guo等人,《癌症研究进展(Adv Cancer Res)》,2013,119:421-475)。

癌症免疫疗法的另外的方法是指将疫苗与通过阻断或抑制免疫检查点来活化抗肿瘤免疫的抗体组合。免疫检查点是指硬接线到免疫系统中的对于维持自身耐受性和调节生理免疫应答的持续时间和幅度很重要的大量抑制通路。肿瘤增选某些免疫检查点通路作为免疫抵抗的主要机制。因为许多免疫检查点是通过配体-受体相互作用引发的，因此其可能易于被抗体的阻断或抑制，或者通过配体或受体的重组形式调节。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体是此类别的免疫治疗剂中第一个获得美国食品和药物管理局(USFood and Drug Administration，FDA)批准的抗体。然而，开发具有抗体的疫苗的组合方法仍然是一个挑战。组合策略必须通过机械考虑和临床前模型来智能地设计和指导(Pardoll,《自然癌症综述(Nat Rev Cancer)》2012,12(4),252-264)。

已经提出了几种用于肿瘤学的免疫疗法的新颖组合(Morrisey等人,《临床和转化科学(Clin.Transl.Sci)》2016,9,89-104)，包含利用裸polyIC的非抗原特异性免疫疗法和靶向程序性细胞死亡-1(PD-1)通路的阻断抗体，所述阻断抗体能够抑制B16黑色素瘤、Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma)和MC38结肠癌的癌症小鼠模型的肿瘤(Nagato等人,《肿瘤免疫学(OncoImmunology)》2014,3:e28440)。

尽管最初的结果令人鼓舞，但癌症的免疫疗法的开发仍然是肿瘤免疫学家的主要挑战。因此，非常需要用于治疗癌症的有效且耐受良好的免疫疗法。

发明内容

本发明提供了一种用于治疗癌症的新颖组合免疫治疗方法。

在第一方面，本发明提供了一种成套试剂盒，所述成套试剂盒包括

a.多聚复合物，所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分，其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及

b.至少一种抗体，其中所述至少一种抗体能够调节免疫检查点蛋白。

在另外的方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物包括：

b.至少一种抗体，其中所述至少一种抗体能够调节免疫检查点蛋白。

在另外的方面，本发明提供了根据本发明的用于治疗哺乳动物的癌症的组合物或成套试剂盒。

诸位发明人惊讶地发现，利用包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物的多聚复合物以及根据本发明的一种或多种抗检查点抗体进行的组合治疗增强免疫系统的活性并导致有效抗肿瘤活性。与单独的多聚复合物相比，通过将包括dsRNA和聚合缀合物的多聚复合物和一种或多种抗检查点抗体的组合更有效地抑制了肿瘤生长。在一些个体中，多聚复合物和抗检查点抗体的组合完全根除了肿瘤，并且产生了对癌细胞的持续肿瘤防御和记忆。

与单独的多聚复合物相比，通过将本发明的多聚复合物和抗检查点抗体组合增加了干扰素分泌。将免疫细胞，优选地外周血单核细胞(PBMC)暴露于来自用本发明的多聚复合物处理的EGFR过表达细胞的培养基或在用本发明的多聚复合物处理的细胞存在的情况下培养所述免疫细胞诱导PBMC分泌干扰素。向其添加抗检查点抗体导致干扰素分泌进一步增加(参见图3和4)。

在携带HER2过表达肿瘤的有免疫能力的小鼠中，小鼠示出在用抗检查点抗体、优选地单克隆抗PD-1抗体和本发明的多聚复合物进行组合治疗之后肿瘤完全消退。治愈的小鼠的肿瘤再攻击未诱导肿瘤生长，这表明已经产生了对肿瘤的免疫应答。

发现用单独的免疫调节抗体治疗肿瘤无效或示出仅有限的功效。单独的抗PD-1抗体不会减小RENCA肿瘤的肿瘤大小(图5)。然而，靶向的且特异性递送的dsRNA和免疫调节抗体的组合示出抗肿瘤作用增加。用本发明的HER2靶向的多聚复合物，即包括PEI-PEG-HER2亲和体(PPHA)的与polyIC(pIC/PPHA)+抗PD-1形成复合物的三缀合物治疗RENCA HER2肿瘤令人惊讶地产生了肿瘤生长的消退(图6)。在与polyIC/PPHA+抗PD-1的组合组中观察到肿瘤完全消退。治愈的小鼠示出对肿瘤再攻击的完全保护，这表明已经产生了对肿瘤的免疫应答。

因此根据本发明的靶向的多聚复合物和抗检查点抗体的组合能够拓宽抗体对目前未示出任何应答的患者的功效。利用对dsRNA，优选地polyIC与抗检查点抗体的组合的靶向递送示出由于本发明组合物和成套试剂盒能够恢复针对肿瘤的免疫系统引起的显著功效。

附图说明

图1：用PEI-PEG-EGF/polyIC治疗之后从癌细胞的IP-10分泌。用各种浓度(0.125、0.25、0.5、1μg/ml)的PEI-PEG-EGF/polyIC对A431、U87和MCF7细胞(40,000细胞每孔)进行处理持续5小时。与表达极少量EGFR的U87和MCF7细胞相比，在A431 EGFR表达细胞中人IP-10(CXCL10)分泌更高。

图2：在用PEI-PEG-EGF/polyIC处理之后A431细胞上的PD-L1(在本文中可与“PDL1”互换使用并且相当于“PDL1”)表达。用浓度为0.125μg/ml的PEI-PEG-EGF/polyIC对A431细胞进行处理，持续5小时。与未经处理的对照细胞(MFI＝431，(B))相比，在PEI-PEG-EGF/polyIC处理之后PD-L1表达显著增加(MFI＝751，(C))。同种型对照用作阴性对照(MFI＝13，(A))。

图3：PEI-PEG-EGF/polyIC的疗法与纳武单抗(Nivolumab)的组合显著增加了由PBMC产生IFN-y。将PEI-PEG-EGF/polyIC与纳武单抗组合显著增加了由用含有单独的PEI-PEG-EGF/polyIC(0.125μg/ml)或与纳武单抗的组合(20μg/ml)的经稀释培养基攻击48小时的PBMC的产生IFN-y。

图4：将PEI-PEG-EGF/polyIC与4-1BB抗体组合显著增加了由PBMC产生IFN-y。用CD3(0.5μg/ml)对PBMC进行刺激并且与用单独的PEI-PEG-EGF/polyIC(0.5μg/ml)或与4-1BB的抗体的组合(10μg/ml)处理的A431细胞共培养16小时。

图5：RMP1-14在治疗s.c.RENCA鼠肾癌模型中的抗肿瘤活性：抗PD-1(可与抗PD1互换使用并且相当于抗PD1)抗体(RMP1-14)在治疗RENCA鼠肾癌异种移植物模型的皮下肿瘤中无抗肿瘤活性(“用于开发靶向免疫系统的癌症治疗剂的同基因模型(Syngeneic Modelsfor Developing Cancer Therapeutics Targeting Immune System)”,Lan Zhang等人,《EORTC-NCI-AACR国际分子靶标与癌症治疗大会(International Conference onMolecular Targets and Cancer Therapeutics)》,2014年11月18-21日,西班牙巴塞罗那(Barcelona,Spain),P013)。

图6：polyIC和与HER2亲和体(HA)缀合的化学载体聚乙烯亚胺-聚乙二醇(PP)的多聚复合物，在本文中简称为polyIC/PPHA加上抗PD-1(polyIC/PPHA +PD-1)对有免疫能力的小鼠的s.c.RENCA HER2肿瘤生长(s.c.RENCA HER2异种移植物模型)的影响。将携带s.c.RENCA HER2肿瘤的小鼠随机分为4组，7-8个动物/组，平均肿瘤体积为235mm³。每24小时用polyIC/PPHA静脉内对小鼠进行治疗，6.25mg/小鼠，N/P 8。在所指示的时间点处腹膜内注射抗PD-1，200mg/小鼠。尽管单独的polyIC/PPHA与polyIC/PPHA+抗PD-1的组合疗法之间似乎无显著差异，但polyIC/PPHA+抗PD-1组中的两只小鼠在治疗开始后50天仍然无肿瘤。

图7：第21天时有免疫能力的小鼠(s.c.RENCA HER2异种移植物模型)的影响。在经polyIC/PPHA+抗PD-1治疗的动物中，8只小鼠中有2只小鼠观察到肿瘤生长完全消退。这些小鼠在再次攻击之后保持无肿瘤。

图8：PD-L1在用polyIC/PPHA处理之后的RENCA HER2细胞中的表达增加。使用X轴线通道：PE-A计算中值的原始值。

图9：PEI-PEG-EGF/polyIC+抗PD-1对有免疫能力的小鼠的Renca EGFR肺转移的影响。

图10：PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和纳武单抗的组合增加了PBMC活化，如通过IFN-γ(本文中可与IFNγ互换使用并且相当于IFNγ)ELISA所证明的。用所指示浓度的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物对单独的A431或培养基进行处理持续5小时。PBMC用抗CD3进行刺激或不刺激，并且用或不用纳武单抗进行治疗。然后，将培养基或未经处理的培养基中的来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的或未经处理的(UT)A431癌细胞或PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的上清液转移到PBMC中。过夜培育之后，执行IFN-γELISA以对PBMC活化进行定量。

图11：PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物诱导细胞因子分泌。用所指示浓度的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、PEI-PEG-EGF三缀合物或pIC对三种细胞系高EGFR(表皮生长因子受体)表达细胞(MDA-MB-468和A431)以及低EGFR表达细胞(MCF7)进行处理持续5小时。然后收集培养基并且利用ELISA测定对培养基的(A)IP10、(B)GROα和(C)CCL5(RANTES)进行分析。

图12：PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物诱导PBMC活化，如通过IFN-γ和TNFαELISA所测量的。在多聚复合物内用pIC或pLGA(聚-L-谷氨酸)的所指示浓度的PEI-PEG-EGF/polyIC、pIC和PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物对三种细胞系MDA-MB-468(高EGFR)、A431(高EGFR)和MCF7(低EGFR)或单独的培养基进行处理，持续5小时。收集上清液和培养基并将其转移到PBMC中持续16小时。来自没有PBMC的经处理的癌细胞的上清液用作对照，并且同样培育16小时。在分别对MDA-MB-468(A，D)；A431(B，E)；和MCF7细胞(C、F)进行处理之后，使用ELISA对IFN-γ和TNFα进行定量。

图13：PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理诱导EGFR过表达细胞在如与对照处理相比的高功效和选择性下的癌细胞死亡。用以下试剂对具有不同EGFR表达水平的癌细胞进行处理持续72小时：PEI-PEG-EGF/polyIC、单独的pIC(裸pIC)、jetPEI-pIC、RNAiMax-pIC和PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物。示出的浓度反映了pIC或pLGA的浓度。使用Celtiter-Glo对细胞存活率进行了分析。对于每种化合物，将存活率百分比归一化为未经处理的细胞的存活率百分比。(A，B)高EGFR表达细胞系BT20、MDA-MB-468、A431和HCC70，(C)中等EGFR表达细胞系U87MG，(D)低EGFR表达细胞系U138和MCF7，以及(E)非癌细胞系WI-38和MCF10A。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。

贯穿本说明书以及随附权利要求书中，除非上下文另外要求，否则词语“包括(comprise)”或词语“包含(include)”和变化形式(如“包括/包含(comprises/includes)”或“包括/包含(comprising/including)”)应被理解为暗示纳入要素、所述整数、步骤或要素、所述整数、步骤的组，但不排除任何其它要素、所述整数、步骤或任何其它要素、所述整数、步骤的组。

如在本说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包含复数指示物，除非上下文另外明确指明。

术语“约”或“大约”在与数值结合使用时意指涵盖在下限比所指示的数值小0-10％并且上限比所指示的数值大0-10％的范围内的数值。术语“约”或“大约”意指优选地±10％、更优选地±5％、再次更优选地±3％或最优选地±0％(分别参考给定数值)。在本发明的实施例中的每个实施例中，“约”可以被删除。本文所公开的值的所有范围应指并包含落入所述范围内的任何和所有值，包含限定所述范围的值。

在一方面，本发明涉及一种组合物，所述组合物包括

a.多聚复合物，所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，

其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分，其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及

b.至少一种抗体，其中所述至少一种抗体能够调节免疫检查点蛋白。

在另外的方面，本发明涉及一种成套试剂盒，所述成套试剂盒包括

a.组合物，其中所述组合物包括多聚复合物，所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分，其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及

b.至少一种抗体，其中所述抗体能够调节免疫检查点蛋白。

在一个优选实施例中，本发明的所述组合物包括至少一种药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在一个特别优选的实施例中，根据本发明的组合物是固定剂量组合物，其在单一剂型中包括多聚复合物和一种或多种免疫调节抗体。在另一个优选实施例中，所述药物组合物包含一种或多种佐剂。

如本文所用，术语“成套试剂盒”优选地是指至少两个单独部分，即所述多聚复合物和所述一种或多种免疫调节抗体的组合。在一个优选实施例中，所述组合物是药物组合物。此类成套试剂盒的布置和构造对于本领域的技术人员来说是常规已知的。在一个特别优选的实施例中，本发明的所述成套试剂盒或本发明的成套试剂盒的所述部分，即多聚复合物和/或一种或多种免疫调节抗体彼此独立地包括至少一种药学可接受的稀释剂、赋形剂或载体。在另一个优选实施例中，本发明的所述成套试剂盒或本发明的成套试剂盒的所述部分，即多聚复合物和/或一种或多种免疫调节抗体彼此独立地包括一种或多种佐剂。

在某些实施例中，根据本发明的组合物和成套试剂盒被调配成用于通过任何已知方法施用。根据本发明的组合物和成套试剂盒，即多聚复合物和/或一种或多种免疫调节抗体，和药物组合物可以被调配成用于任何合适的施用途径，包含但不限于静脉内、脑内(大脑内)、口服、肌肉内、皮下、经皮、皮内、经粘膜、鼻内、舌下、腹膜内或眼内施用。

在另一个更优选的实施例中，根据本发明的所述组合物或成套试剂盒被调配成用于全身施用。再次更优选地，根据本发明的组合物和成套试剂盒，即多聚复合物和/或一种或多种免疫调节抗体被调配成用于静脉内、覆膜内或皮下施用。更优选地，根据本发明的组合物和成套试剂盒，即多聚复合物和/或一种或多种免疫调节抗体被调配为适合于注射的一种或多种剂型，优选地调配为适合于注射的溶液、乳液或悬浮液。

在一个实施例中，根据本发明的组合物和成套试剂盒包括本发明的多聚复合物和一种或多种免疫调节抗体，其中所述多聚复合物和所述一种或多种免疫调节抗体以治疗有效量存在于组合物和成套试剂盒中。

本发明的所述成套试剂盒可以包含含有多聚复合物和/或一种或多种抗体的容器和/或用于施用试剂盒的部分，即多聚复合物和/或一种或多种抗体的设备。在一个优选实施例中，本发明的所述成套试剂盒包括包含有效剂量的所述多聚复合物的至少一个容器和包含有效剂量的所述一种或多种抗体的至少一个容器以及任选地说明书插页。

术语“免疫检查点蛋白”或“免疫检查点”是本领域已知和描述的(参见例如Pardoll,2012,《自然癌症综述(Nature Rev Cancer)》12:252-264；Darvin等人,2018,《实验与分子医学(Experimental&Molecular Medicine)》50:165)。如本文使用的术语“免疫检查点蛋白”是指T细胞、B细胞和自然杀伤细胞(NK)的受体以及其可以刺激或抑制免疫系统的活性的可溶性或结合的配体和反受体。在一个优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是指T细胞和自然杀伤细胞的受体以及其可以共刺激或共抑制免疫系统的活性的可溶性或结合的配体和反受体。优选地，免疫系统的所述活性通过如本文所示(例如实例2)的测量T细胞应答来检测。

免疫检查点蛋白是维持免疫稳态和预防自身免疫的重要免疫调节剂。这些免疫调节剂由对于维持自身耐受性和调节免疫应答的类型、幅度和持续时间很重要的刺激性和抑制性受体和配体组成。免疫稳态受活化和抑制免疫检查点蛋白的仔细平衡调节。在正常情况下，免疫检查点允许免疫系统在保护组织免受可能源于此动作的任何伤害的同时对感染和恶性肿瘤做出应答。

对肿瘤细胞已经开发了利用这些检查点并绕过宿主免疫防御的几种策略。免疫检查点蛋白的表达可能通过肿瘤作为重要的免疫抵抗机制而失调。因此，抑制或活化检查点受体和配体已成为限制肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)抑制来自肿瘤并使单核细胞循环的信号、阻断抑制T细胞活性的阴性信号和细胞因子并且刺激全身免疫的潜在策略。

活化治疗性抗肿瘤免疫的最有希望的方法之一是阻断对免疫检查点蛋白的抑制或活化刺激性免疫检查点蛋白。免疫检查点是指免疫系统的对于维持自身耐受性和调节生理免疫应答的持续时间和幅度以最小化侧枝组织损伤至关重要的抑制性和活化蛋白。肿瘤增选某些免疫检查点通路作为具体地对于肿瘤抗原具有特异性的T细胞的免疫抵抗的主要机制。由于以下原因，T细胞一直是治疗上操纵内源性抗肿瘤免疫的主要工作重点：T细胞在所有细胞隔室中选择性识别衍生自蛋白质的肽的能力；T细胞直接识别并杀死抗原表达细胞(通过CD8+效应子T细胞，CTL)的能力；以及T细胞编排各种免疫应答(通过CD4+辅助T细胞)的整合适应性和先天效应机制的能力。因此，共刺激受体的激动剂或抑制信号的拮抗剂是目前临床测试中的药剂，两者都导致抗原特异性T细胞应答放大。因为许多免疫检查点是通过配体-受体相互作用引发的，因此其可能易于被抗体调节。

优选地，免疫检查点蛋白是人免疫检查点蛋白。

在本发明内，能够调节免疫检查点蛋白的抗体是调节免疫检查点蛋白的功能并且由此促进免疫系统的活性的任何化合物。免疫系统活性的促进包含导致针对抗原的免疫应答增强和/或针对抗原的免疫抑制性免疫应答减少。优选地，免疫系统活性的促进导致免疫介导的肿瘤细胞消除。

术语“调节”(或“调节剂”)包含与共刺激免疫检查点蛋白的功能刺激或增强相关的活化，以及对与活性的降低和共抑制免疫检查点蛋白的完全阻断相关的抑制共抑制免疫检查点蛋白的抑制。名称“调节免疫检查点蛋白”包含刺激包含T辅助细胞、CTL自然杀伤T细胞和自然杀伤细胞(NK)的T细胞。由免疫检查点蛋白的调节诱导的刺激(或活化)优选地通过测量与未施用如本文所述(例如，实例2)的免疫检查点蛋白调节抗体的对照相比，如干扰素等细胞因子，尤其是具体地通过T和NK细胞产生或释放的IFN-γ的水平增加来检测。

免疫检查点蛋白的实例包含但不限于并且优选地选自由以下组成的组：PD-1(程序性死亡1，在本文中可与PD1互换使用并且相当于PD1)、PD-L1、PD-L2、CTLA-4/B7-1/CD152(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)、CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、TIM-3(T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)、LAG3、By-He、H4、HAVCR2、ID01、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、GITR(糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因)/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278、ICOS配体/B7-H2、CD122、CD155/PVR、CD226/DNAM-1、CD27、HVEM/TNFRSF14、TNFSF14/LIGHT/CD258、CD70/CD27L/TNFSF7、CD28/TP44、CD80/B7-1、CD86/B7-2、A2AR、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、NOX2/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH氧化酶异构体2、SIGLEC7(唾液酸结合性免疫球蛋白类凝集素7)/CD328、SIGLEC9(唾液酸结合性免疫球蛋白类凝集素9)/CD329、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、VTCN1/B7-H4/B7S1/7x、VISTA(T细胞活化V结构域Ig抑制剂)/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、吲哚胺2,3-双加氧酶-双加氧酶/IDO、TDO/色氨酸2,3-双加氧酶、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、TIGIT/VSTM3、HVEM(疱疹病毒侵入介体)/TNFRSF14、BTLA(B和T淋巴细胞衰减子)/CD272、CD160、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2、CD30、CD30L、TMIGD2、HHLA2、TL1A、DR3、LTβR、TNF、TNFR2和2B4/CD244。

在一个优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是B7-CD28家族或TNFR家族的蛋白质。在一个优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是T细胞相关检查点抑制剂或非T细胞相关检查点抑制剂。

在一个优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS(可诱导T细胞共刺激分子)/AILIM/CD278、ICOS配体/B7-H2、CD122、A2AR(腺苷A2A受体)、KIR、NOX2、SIGLEC7/CD328、SIGLEC9/CD329、PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、2,3-双加氧酶/IDO、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278、ICOS配体/B7-H2、PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-9/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM3、GITR、GITR配体、CD40、CD40L、OX40、OX-40L、ICOS和ICOS配体。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、CD40、OX40和ICOS。

在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR、OX40、OX-40L、ICOS和CD40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR、OX40、OX-40L、ICOS和CD40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、GITR、CD40、OX40和ICOS。

在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、LAG3、TIM3、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L24-1BB、LAG3、TIM3、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、LAG3、TIM3、GITR、CD40和OX40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、LAG3、TIM3、GITR、CD40和OX40。

在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40和OX40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、GITR、CD40和OX40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40和OX40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR和OX40。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和OX40。

在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、LAG3和TIM3。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、LAG3和TIM3。

在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR和ICOS。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、LAG3、TIGIT、TIM-3和GITR。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、CTLA-4、4-1BB、LAG3、TIGIT、TIM-3、GITR和ICOS。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和4-1BB。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2和4-1BB。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-1或4-1BB。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-1。在另一个优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-1、PD-L1或PD-L2。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-1或PD-L1。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-1。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-L1。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是PD-L2。在另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在另一个优选实施例中，所述免疫检查点蛋白是CTLA-4。

如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有与抗原选择性结合的抗原结合位点的分子，其中所述抗原包括半抗原、表位、受体或配体或其部分。如此，术语“抗体”不仅涵盖完整抗体分子，而且还涵盖抗体片段以及其变体(包含衍生物)、抗体片段和融合蛋白。术语“抗体”还指代包含两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的抗体，以及包含全长抗体和其部分的多种形式；包含例如免疫球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、人源化抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体(dAb)、双抗体、裸抗体、抗体-药物缀合物和双或三特异性抗体、抗独特型抗体、anticalin以及其功能活性表位结合片段。在一个特别优选的实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述抗体是单克隆抗体、人源化抗体或全人抗体。如本文所用的术语“能够调节免疫检查点蛋白的抗体”是指调节检查点受体、反受体或其结合和可溶性配体的活性的抗体。

如本文所用，术语“抗...”涉及与术语“抗”之后提及的靶标选择性结合的抗体。

如本文所用，术语“亲和体”是指被工程化为以高亲和力与靶蛋白或肽结合的模仿单克隆抗体的蛋白质，并且因此是抗体模拟物家族的成员。优选地，亲和体具有源自蛋白质A的高亲和力结合结构域。HER2是HER2亲和体的靶标。

在一个优选实施例中，所述HER2亲和体包括选自由以下组成的组的亲和体：ZHER2:2891、ABY-025、ZHER2:342和ZHER2:2395，优选地ZHER2:2891。

优选地，能够调节免疫检查点蛋白的所述抗体为单克隆抗体、嵌合的抗体、人源化抗体、人抗体、融合蛋白或其组合。

在另外的方面，本发明提供了一种成套试剂盒，所述成套试剂盒包括：(a)多聚复合物，所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分，其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及(b)至少一种抗体。在再次另外的方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物包括：(a)多聚复合物，所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分和一个或多个靶向部分，其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合；以及(b)至少一种抗体。在一个优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L、CD40/TNFRSF5、抗CD40L/CD154/TNFSF5、抗OX40/CD134、抗OX-40L/TNFSF4/CD252、抗GITR/TNFRSF18、抗GITR配体/TNFSF18、抗ICOS(可诱导T细胞共刺激分子)/AILIM/CD278、抗ICOS配体/B7-H2、抗CD122、抗A2AR(腺苷A2A受体)、抗KIR、抗NOX2、抗SIGLEC7/CD328、抗SIGLEC9/CD329、抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗CD80/B7-1、抗CD86/B7-2、抗B7-H3/CD276、抗B7-H4/B7S1/7x、抗VISTA/B7-H5/GI24、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗2,3-双加氧酶/IDO、抗半乳糖凝集素-/LGALS9、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L、抗CD40/TNFRSF5、抗CD40L/CD154/TNFSF5、抗OX40/CD134、抗OX-40L/TNFSF4/CD252、抗GITR/TNFRSF18、抗GITR配体/TNFSF18、抗ICOS/AILIM/CD278、抗ICOS配体/B7-H2、抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗CD80/B7-1、抗CD86/B7-2、抗B7-H3/CD276、抗B7-H4/B7S1/7x、抗VISTA/B7-H5/GI24、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗半乳糖凝集素-9/LGALS9、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB配体(4-1BBL)、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR配体、抗GITR、抗OX40、抗OX-40L、抗ICOS、抗ICOS配体、抗CD40和抗CD40配体。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB配体、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗GITR、抗GITR配体、抗CD40、抗CD40L、抗OX40、抗OX-40L、抗ICOS和抗ICOS配体。

在另外的优选实施例中、所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR、抗OX40、抗ICOS和抗CD40。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗GITR、抗CD40、抗OX40和抗ICOS。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗GITR、抗CD40、抗OX40和抗ICOS。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗CD40、抗OX40和抗ICOS。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR和抗ICOS。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗LAG3、抗TIGIT、抗TIM-3、抗GITR和抗ICOS。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗LAG3、抗TIGIT、抗TIM-3、抗GITR和抗ICOS。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗4-1BB、抗GITR、抗CD40、抗ICOS和抗OX40。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗4-1BB、抗GITR、抗CD40和抗OX40。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗4-1BB、抗GITR和抗OX40。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗4-1BB和抗OX40。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4和抗4-1BB。在另外的优选实施例中，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗4-1BB。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗PD-1或抗4-1BB。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗PD-1。在另一个优选实施例中，所述抗体是抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗PD-1或抗PD-L1。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗PD-1。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗PD-L1。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗PD-L2。在另外的优选实施例中，所述抗体是抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述抗体是抗CTLA-4。

在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L、抗CD40/TNFRSF5、抗CD40L/CD154/TNFSF5、抗OX40/CD134、抗OX-40L/TNFSF4/CD252、抗GITR/TNFRSF18、抗GITR配体/TNFSF18、抗ICOS/AILIM/CD278和抗ICOS配体/B7-H2，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-H3/CD276、抗B7-H4/B7S1/7x、抗VISTA/B7-H5/GI24、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗半乳糖凝集素-/LGALS9、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L、抗GITR/TNFRSF18、抗GITR配体/TNFSF18、抗ICOS/AILIM/CD278和抗ICOS配体/B7-H2，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-H3/CD276、抗B7-H4/B7S1/7x、抗VISTA/B7-H5/GI24、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗半乳糖凝集素-/LGALS9、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗CD40/TNFRSF5、抗OX40/CD134、抗GITR/TNFRSF18、抗ICOS/AILIM/CD278，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-H3/CD276、抗B7-H4/B7S1/7x、抗VISTA/B7-H5/GI24、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗半乳糖凝集素-/LGALS9、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗CD40/TNFRSF5、抗OX40/CD134、抗GITR/TNFRSF18、抗ICOS/AILIM/CD278，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗CD40/TNFRSF5、抗OX40/CD134、抗GITR/TNFRSF18、抗ICOS/AILIM/CD278，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗CD40/TNFRSF5、抗OX40/CD134、抗GITR/TNFRSF18，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗CD40/TNFRSF5、抗OX40/CD134，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗OX40/CD134，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。

在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L、抗GITR/TNFRSF18、抗GITR配体/TNFSF18、抗ICOS/AILIM/CD278和抗ICOS配体/B7-H2，或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗4-1BB、抗GITR、抗OX40、抗ICOS和抗CD40；或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4和抗GITRL；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L；或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在另外的优选实施例中，所述至少一种抗体选自由以下组成的组：(i)抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L；或(ii)抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。

在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述抗体是能够与癌抗原和免疫检查点蛋白结合的双特异性抗体。优选地，所述癌抗原是EGFR、HER2或PSMA，更优选地，所述癌抗原为EGFR或HER2，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和4-1BB。更优选地，所述癌抗原是EGFR或HER2，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2和4-1BB。更优选地，所述癌抗原是EGFR或HER2，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1或4-1BB。再次更优选地，所述癌抗原是HER2或EGFR，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是HER2，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是PSMA，并且所述免疫检查点蛋白选自选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是EGFR，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述抗体是与4-1BB和HER2结合的脂质运载蛋白。

能够调节免疫检查点蛋白PD-1(抗PD-1)的所述抗体的优选实例是人或人源化抗体，所述人或人源化抗体选自由以下组成的组：派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(也被称为MDX-1106或BMS-936558，Topalian等人,2012,《新英格兰医学杂志(N.Eng.J.Med.)》,366:2443-2454,在US8008449 B2中公开)、西米普利单抗(cemiplimab)、IBI308、BCD-100、PDR001、替雷利珠单抗(tislelizumab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)(在Rosenblatt等人,2011,《免疫疗法杂志(J Immunother.)》34:409-18中公开)和帕博利珠单抗(lambrolizumab)(例如，在以下中以hPD109A以及其人源化衍生物h409All、h409A16和h409A17公开：WO2008/156712；Hamid等人,2013，《新英格兰医学杂志》369:134-144)以及可溶性PD-1配体，包含但不限于PD-L2 Fc融合蛋白(也被称为B7-DC-Ig或AMP-244；公开于Mkrtichyan M等人,2012,《免疫学杂志(J Immunol.)》189:2338-47中)。能够调节免疫检查点蛋白PD-1(抗PD-1)的所述抗体的更优选的实例是派姆单抗或纳武单抗。

能够调节免疫检查点蛋白PD-L1(抗PD-L1)的所述抗体的优选实例是选自由以下组成的组的抗体：度伐鲁单抗(durvalumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和阿特珠单抗(atezolizumab)、MEDI-4736(公开于例如WO 2011/066389 Al中)、MPDL328 OA(公开于例如US8217149 B2)和MIH1(美国昂飞公司(Affymetrix))。能够调节免疫检查点蛋白PD-L1(抗PD-L1)的所述抗体的更优选实例是选自由以下组成的组的抗体：度伐鲁单抗、阿维鲁单抗和阿特珠单抗。

能够调节免疫检查点蛋白CTLA-4的所述抗体的优选实例是伊匹木单抗(ipilimumab)或曲美木单抗(tremelimumab)，更优选地是伊匹木单抗。伊匹木单抗是目前以名称Yervoy(百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))销售的全人CTLA-4阻断抗体。另外的CTLA-4抑制剂是曲美木单抗(参考Ribas等人,2013,《临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol.)》31:616-22)。

能够调节免疫检查点蛋白CD27的所述抗体的优选实例是CDX-1127，一种激动性抗CD27单克隆抗体。

能够调节免疫检查点蛋白OX40的所述抗体的优选实例是MEDI0562，一种人源化OX40激动剂；MEDI6469，一种鼠OX4激动剂；以及MEDI6383，一种OX40激动剂。

能够调节免疫检查点蛋白KIR的所述抗体的优选实例是利瑞鲁单抗(Lirilumab)，一种针对KIR的单克隆抗体。

能够调节免疫检查点蛋白4-1BB的所述抗体的优选实例是乌瑞芦单抗(urelumab)。能够调节免疫检查点蛋白LAG-3的所述抗体的优选实例是瑞拉利单抗(relatlimab)。

能够调节免疫检查点蛋白LAG3的所述抗体的优选实例是单克隆抗体BMS-986016。

在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体选自由以下组成的组：派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、IBI308、BCD-100、PDR001、替雷利珠单抗、卡瑞利珠单抗、匹地利珠单抗、帕博利珠单抗、h409All、h409A16、h409A17、如PD-L2 Fc融合蛋白等可溶性PD-1配体、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、MEDI-4736、MPDL328OA、CDX-1127、MIH1、MEDI0562、MEDI6469、MEDI6383、伊匹木单抗、曲美木单抗、瑞拉利单抗、乌瑞芦单抗、抗TIGIT抗体、抗TIM3抗体、抗GITR抗体和抗ICOS抗体。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体选自由以下组成的组：派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、IBI308、BMS-986016、BCD-100、PDR001、替雷利珠单抗、卡瑞利珠单抗、匹地利珠单抗、帕博利珠单抗、h409All、h409A16、h409A17、如PD-L2Fc融合蛋白等可溶性PD-1配体、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、利瑞鲁单抗、MEDI-4736、MPDL328 OA、MIH1、伊匹木单抗、曲美木单抗、瑞拉利单抗和乌瑞芦单抗。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体选自由以下组成的组：派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、IBI308、BCD-100、PDR001、替雷利珠单抗、卡瑞利珠单抗、匹地利珠单抗、帕博利珠单抗、h409All、h409A16、h409A17、如PD-L2 Fc融合蛋白等可溶性PD-1配体、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、MEDI-4736、MPDL328 OA、MIH1、伊匹木单抗、曲美木单抗和乌瑞芦单抗。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体选自由以下组成的组：派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、IBI308、BCD-100、PDR001、替雷利珠单抗、卡瑞利珠单抗、匹地利珠单抗、帕博利珠单抗、h409All、h409A16、h409A17、如PD-L2 Fc融合蛋白等可溶性PD-1配体、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、MEDI-4736、MPDL328 OA、MIH1、曲美木单抗和乌瑞芦单抗。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体选自由以下组成的组：派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、IBI308、BCD-100、PDR001、替雷利珠单抗、卡瑞利珠单抗、匹地利珠单抗、帕博利珠单抗、h409All、h409A16、h409A17、如PD-L2 Fc融合蛋白等可溶性PD-1配体、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、MEDI-4736、MPDL328 OA和MIH1。

在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体(在本文中被称为检查点活化剂)；(ii)能够拮抗抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体(在本文中被称为检查点抑制剂)；或(iii)(i)和(ii)两者的混合物。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种免疫检查点调节抗体是能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体(检查点活化剂)。所述检查点活化剂活化共刺激免疫检查点蛋白。检查点活化剂通过激动所述细胞类型的受体、抑制或阻断抑制配体或激动抗原呈递细胞(APC)上的反受体将活化信号直接递送到T细胞、B细胞或自然杀伤细胞。

在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种免疫检查点调节抗体是能够拮抗抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体(检查点抑制剂)。所述检查点抑制剂去抑制，即降低或去除抑制免疫检查点蛋白的抑制功能。检查点抑制剂通过拮抗所述细胞类型的受体、激动抑制配体或拮抗抗原呈递细胞(APC)上的反受体将拮抗信号直接递送到T细胞、B细胞或自然杀伤细胞。

在另一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是免疫检查点活化剂或抑制剂。在另一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是免疫检查点活化剂和抑制剂。

在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD155/PVR、CD226/DNAM-1、CD137/4-1BB、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、4-1BBL/CD137L、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、CD27、CD122、HVEM/TNFRSF14、TNFSF14/LIGHT/CD258、CD70/CD27L/TNFSF7、CD28/TP44、CD30、CD30配体、TMIGD2、HHLA2、CD80/B7-1、CD86/B7-2、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、DR3、TL1A、CD30、CD30L、TMIGD2、HHLA2、TL1A、DR3、LTβR、TNF、TNFR2、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、2,3-双加氧酶/IDO、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2、TIGIT/VSTM3、A2AR、KIR、NOX2、SIGLEC7/CD328、SIGLEC9/CD329和、或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD155/PVR、CD226/DNAM-1、CD137/4-1BB、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、4-1BBL/CD137L、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、CD27、CD122、HVEM/TNFRSF14、TNFSF14/LIGHT/CD258、CD70/CD27L/TNFSF7、CD28/TP44、CD30、CD30配体、TMIGD2、HHLA2、CD80/B7-1、CD86/B7-2、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、DR3、TL1A、CD30、CD30L、TMIGD2、HHLA2、TL1A、DR3、LTβR、TNF、TNFR2、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、2,3-双加氧酶/IDO、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2、TIGIT/VSTM3、A2AR、KIR、NOX2、SIGLEC7/CD328、SIGLEC9/CD329和、或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD155/PVR、CD226/DNAM-1、CD137/4-1BB、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、4-1BBL/CD137L、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、CD27、HVEM/TNFRSF14、TNFSF14/LIGHT/CD258、CD70/CD27L/TNFSF7、CD28/TP44、CD80/B7-1、CD86/B7-2、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、CD30、CD30L、TMIGD2、HHLA2、TL1A、DR3、LTβR、TNF、TNFR2、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD155/PVR、CD226/DNAM-1、CD137/4-1BB、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、4-1BBL/CD137L、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、CD27、HVEM/TNFRSF14、TNFSF14/LIGHT/CD258、CD70/CD27L/TNFSF7、CD28/TP44、CD80/B7-1、CD86/B7-2、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、CD30、CD30L、TMIGD2、HHLA2、TL1A、DR3、LTβR、TNF、TNFR2、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3；或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3；或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、CD40/TNFRSF5、CD40L/CD154/TNFSF5、OX40/CD134、OX-40L/TNFSF4/CD252、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3；或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3；或(iii)两者的混合物。

在本发明的组合物或成套试剂盒的一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、CD40、CD40配体(CD40L)、OX40、OX-40配体(OX-40L)、GITR、GITR配体(GITRL)、ICOS和ICOS配体(ICOSL)；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3、B7-H4、VISTA、LAG-3、半乳糖凝集素-9、TIM-3和TIGIT；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。AVCR2和TIGIT/VSTM3；或(iii)两者的混合物。在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、CD40、OX40、GITR和ICOS；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、B7-H3、B7-H4、VISTA、LAG-3、半乳糖凝集素-9、TIM-3和TIGIT；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、CD40、OX40、GITR和ICOS；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3、B7-H4、VISTA、LAG-3、半乳糖凝集素-9、TIM-3和TIGIT；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。

在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、CD40、OX40和GITR；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3、B7-H4、VISTA、LAG-3、半乳糖凝集素-9、TIM-3和TIGIT；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。

在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、CD40、OX40、ICOS和GITR；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。

在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、CD40、OX40和GITR；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、OX40和GITR；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB和OX40；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2；或(iii)(i)的至少一种抗体和(ii)的至少一种抗体的混合物。

在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L、GITR/TNFRSF18、GITR配体/TNFSF18、ICOS/AILIM/CD278和ICOS配体/B7-H2；或(ii)能够拮抗共抑制性免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制性免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3；或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、GITR、OX40、ICOS和CD40；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4和GITRL；或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4；或(iii)两者的混合物。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是：(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共刺激免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：CD137/4-1BB、4-1BBL/CD137L；或(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2；或(iii)两者的混合物。

在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述激动抗体选自由以下组成的组：抗4-1BB、抗GITR、抗OX40、抗ICOS和抗CD40。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述激动抗体选自由以下组成的组：抗CD137/4-1BB、抗4-1BBL/CD137L、抗GITR/TNFRSF18、抗GITR配体/TNFSF18、抗ICOS/AILIM/CD278和抗ICOS配体/B7-H2。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述激动抗体是抗CD137/4-1BB或抗4-1BBL/CD137L。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(i)能够激动共刺激免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述激动抗体是抗CD137/4-1BB。

在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、2,3-双加氧酶/IDO、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2、TIGIT/VSTM3、A2AR、KIR、NOX2、SIGLEC7/CD328、SIGLEC9/CD329。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD80/B7-1、CD86/B7-2、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、2,3-双加氧酶/IDO、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2、TIGIT/VSTM3、A2AR、KIR、NOX2、SIGLEC7/CD328、SIGLEC9/CD329。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、HVEM/TNFRSF14、BTLA、CD160、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、CEACAM1/CD66a、吲哚胺、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2、2B4/CD244、SIRP、α/CD172a、CD47、CD48/SLAMF2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-H3/CD276、B7-H4/B7S1/7x、VISTA/B7-H5/GI24、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、半乳糖凝集素-/LGALS9、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4和GITRL。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、TIM-3/HAVCR2和TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述共抑制免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1和PD-L2。

在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、4-1BB配体、PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。更优选地，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、4-1BB配体、PD-1、PD-L1和PD-L2。在本发明的组合物或成套试剂盒的另外的优选实施例中，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。更优选地，所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1和PD-L2。

在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述拮抗抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗-抗PD-L2、抗CTLA-4、抗LAG3/CD223/淋巴细胞活化基因3、抗TIM-3/HAVCR2和抗TIGIT/VSTM3。在另外的优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是(ii)能够拮抗共抑制免疫检查点蛋白的至少一种抗体，其中所述拮抗抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1和抗PD-L2。

在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒包括多于一种能够调节免疫检查点蛋白的抗体。在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒包括1种、2种或3种能够调节免疫检查点蛋白的抗体。在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒包括2种或3种能够调节免疫检查点蛋白的抗体。在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒包括2种能够调节免疫检查点蛋白的抗体。在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒包括3种能够调节免疫检查点蛋白的抗体。

在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒进一步包括化学治疗剂。在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒与放射疗法组合。

在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的所述组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：

(i)能够调节免疫检查点蛋白CD27的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2；

(ii)能够调节免疫检查点蛋白CD40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iii)能够调节免疫检查点蛋白GITR的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iv)能够调节免疫检查点蛋白OX40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和CTLA-4；

(v)能够调节免疫检查点蛋白4-1BB的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、OX40、LAG-3和CTLA-4；或者

(vi)能够调节免疫检查点蛋白ICOS的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。

在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(i)能够调节免疫检查点蛋白CD27的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(ii)能够调节免疫检查点蛋白CD40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(iii)能够调节免疫检查点蛋白GITR的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(iv)能够调节免疫检查点蛋白OX40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(v)能够调节免疫检查点蛋白4-1BB的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、OX40、LAG-3和CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(vi)能够调节免疫检查点蛋白ICOS的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2。

在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(i)抗CD27和能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1和抗PD-L2。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(ii)抗CD40和能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(iii)抗GITR和能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(iv)抗OX40能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗4-1BB和抗CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(v)抗4-1BB和能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗OX40、抗LAG-3和抗CTLA-4。在一个优选实施例中，能够调节免疫检查点蛋白的包含在本发明的组合物或成套试剂盒中的所述至少一种抗体是以下的混合物：(vi)抗ICOS能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体，所述抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1和抗PD-L2。

在一个优选实施例中，本发明的所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分、一个或多个接头和一个或多个靶向部分；其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分通过所述一个或多个接头之一与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合。

在一个优选实施例中，本发明的所述多聚复合物包括双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物，其中所述聚合缀合物由聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分、一个或多个接头和一个或多个靶向部分组成；其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分通过所述一个或多个接头之一与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合。

在一个优选实施例中，本发明的所述多聚复合物由双链RNA(dsRNA)和聚合缀合物组成，其中所述聚合缀合物由聚乙烯亚胺(PEI)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分、一个或多个接头和一个或多个靶向部分组成；其中所述PEI与一个或多个PEG部分共价结合，并且所述一个或多个PEG部分中的每个PEG部分通过所述一个或多个接头之一与所述一个或多个靶向部分之一连接，并且其中所述一个或多个靶向部分中的每个靶向部分能够与癌抗原结合。

本发明的所述多聚复合物包括包含双链RNA(dsRNA)的多聚复合物。术语“dsRNA”典型地且优选地指代任何长度的双链核糖核苷酸聚合物，其中一个或多个核糖核苷酸可以是对应天然存在的核糖核苷酸的化学类似物或经修饰衍生物。术语“dsRNA”典型地且优选地还包含错配的dsRNA。

在一个优选实施例中，所述dsRNA是聚肌苷-聚胞苷酸双链RNA(polyIC或pIC)。PolyIC是其中一条链为肌苷酸的聚合物、另一条是胞苷酸的聚合物的双链RNA。

用于根据本发明使用的多聚复合物的polyIC可以由dsRNA构成，其中每条链由至少22个，优选地至少45个核糖核苷酸组成。在某个实施例中，每条链由20个到8000个核糖核苷酸组成。在某个实施例中，每条链由20个到4000个核糖核苷酸组成。在更优选的实施例中，每条链由20个到300个核糖核苷酸组成。

如本文所用的并且具体地当提及如polyIC、PEI和PEG等聚合物时，术语“分子量”是指平均分子量，优选地重均分子量。

PolyIC通过非共价键或共价键与聚合缀合物结合，其中非共价结合是优选的。在一个优选实施例中，所述polyIC与PEI非共价结合，优选地通过离子键。

根据本发明的多聚复合物包括聚合缀合物，其中所述聚合缀合物包括聚乙烯亚胺(PEI)，所述聚乙烯亚胺是由于聚阳离子性质而能够与核酸分子以非共价方式缩合和缔合的聚阳离子。

在一个优选实施例中，所述聚乙烯亚胺(PEI)是线性聚乙烯亚胺(LPEI)。在一个优选实施例中，LPEI包含位于LPEI的一个端部或任一端部处的羟基。优选地，所述羟基替代LPEI的末端-NH₂基团。

在本发明的一个优选实施例中，PEI或优选地LPEI的分子量为约10-30kDa。在本发明的一个优选实施例中，PEI或优选地LPEI的分子量为约15-25kDa(PEI_15-25k//LPEI_15-25k)。在一个另外的更优选的实施例中，PEI或优选地LPEI的分子量为约22kDa(LPEI_22k)。在再次另外的优选实施例中，PEI或优选地LPEI的分子量为约20kDa。表达“LPEI的分子量为约22kDa”被缩写为“LPEI_22k”并在本文中与其同义使用。表达“PEI的分子量为约22kDa”被缩写为“PEI_22k”并在本文中与其同义使用。

在一个优选实施例中，所述PEI或优选地LPEI的分散性低。优选地，PEI或LPEI的多分散性指数PDI为约1。

在一个优选实施例中，所述一个或多个PEG部分与所述PEI或优选地LPEI各自独立地形成-NH-CO-键。

用于根据本发明使用的多聚复合物包含一个或多个聚乙二醇(PEG)部分。根据本发明的PEG部分也被称为聚环氧乙烷(PEO)或聚氧乙烯(POE)部分，这取决于其分子量。如本文所用，术语“聚乙二醇部分”(PEG部分)典型地且优选地指代包括位于聚乙二醇(PEG)的任一端部上的两个官能团的PEG部分。所述官能团能够与所述PEI或优选地LPEI或所述靶向部分反应。

在一个优选实施例中，所述PEG部分是线性的或支链的。在另一个优选实施例中，所述PEG部分是支链的。在另外的优选实施例中，所述PEG部分是线性的。

在本发明的一个实施例中，所述至少一个PEG部分中的每个PEG部分的分子量为1kD或更大。在另一个实施例中，所述至少一个PEG部分中的每个PEG部分的分子量为约0.3-8kDa，优选地约0.5-5Da，更优选地1-3kDa(PEG_1-3k)，最优选地2kDa(PEG_2k)。如所指出的，所述分子量与平均分子量相对应，因此优选的且所使用的PEG_2k是指-(CH₂CH₂O)_n单元的平均值n介于30与60之间(其中一些甚至更小并且一些更大)并且分子量的范围为约1300到2600克/摩尔的聚乙二醇的混合物。

在一个优选实施例中，所述PEI的分子量为约10-30kDa，并且所述至少一个PEG部分的分子量为约0.3-8kDa。在一个更优选的实施例中，PEI的分子量为约22kDa(PEI_22k)，并且所述至少一个PEG部分的分子量为约2kDa(PEG_2k)。在一个更优选的实施例中，PEI是分子量为约20kDa(LPEI_20k)的LPEI，并且所述至少一个PEG部分的分子量为约2kDa(PEG_2k)。

在一个优选实施例中，PEI与一个到五个PEG部分共价连接，优选地PEI与一个到三个PEG部分共价连接。在一个优选实施例中，LPEI与一个到五个PEG部分共价连接，其中优选地LPEI与一个到三个PEG部分共价连接。在一个优选实施例中，PEI_15-25k，优选地PEI_22k与一个到五个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接，其中优选地PEI_15-25k，进一步优选地PEI_22k与一个到三个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在一个优选实施例中，LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k与一个到五个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接，其中优选地PEI_15-25k，进一步优选地PEI_22k与一个到三个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在一个优选实施例中，PEI_15-25k，优选地PEI_22k与一个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分或两个或三个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在另一个优选实施例中，PEI_15-25k，优选地PEI_22k与一个或多个PEG_1-3k，优选地PEG_2k共价连接。在另外的优选实施例中，PEI_15-25k，优选地PEI_22k与两个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在另外的优选实施例中，PEI_15-25k，优选地PEI_22k与三个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在一个优选实施例中，LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k与一个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分或两个或三个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在另一个优选实施例中，LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k与一个PEG_1-3k，优选地PEG_2k共价连接。在另外的优选实施例中，LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k与两个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在另外的优选实施例中，LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k与三个PEG_1-3k，优选地PEG_2k部分共价连接。在另一个优选实施例中，所述多聚复合物的所述PEI与一个、两个或三个PEG部分共价结合。优选地，多聚复合物的所述PEI与一个或三个PEG部分共价结合。在另一个更优选的实施例中，所述多聚复合物的所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价结合的LPEI。更优选地，多聚复合物的所述PEI是与一个或三个PEG部分共价结合的LPEI。

如本文所用，术语“与一个PEG部分共价连接的PEI[...]”(在本文中可与“PEI-PEG1:1”互换使用)或“与一个PEG部分共价连接的LPEI[...]”在本文中可与“LPEI-PEG 1:1”互换使用)是指PEI与PEG或LPEI与PEG的摩尔比，其中PEI-PEG 1:1或LPEI-PEG 1:1典型地且优选地意指聚合缀合物中包含每一摩尔PEI或LPEI大约一摩尔PEG。如本文所用，术语“与三个PEG部分共价连接的PEI[...]”(在本文中可与“PEI-PEG 1:3”互换使用)或术语“与三个PEG部分共价连接的LPEI[...]”(在本文中可与“LPEI-PEG 1:3”互换使用)典型地且优选地意指聚合缀合物中包含每一摩尔PEI或LPEI大约三摩尔PEG。所述值优选地通过¹H-NMR分析确定。PEG(-CH₂-CH₂-O-)上的氢原子的相对整数值和PEI或LPEI(-CH₂-CH₂-NH-)上的氢原子的整数值优选地用于通过¹H-NMR确定值。术语“大约”在本文中优选地是指偏差为约0％-10％、更优选地约0％-5％、再次更优选地约0％-2％。

在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI与一个到三个PEG部分共价连接。在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI与一个、两个或三个PEG部分共价连接。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI。

在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI与一个、两个或三个PEG部分共价连接。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI_22k。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG2_k部分共价连接的LPEI。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI_22k。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG2_k部分共价连接的LPEI_22k。

在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI与一个PEG部分共价连接(PEI-PEG 1:1)。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个PEG部分共价连接的LPEI(LPEI-PEG 1:1)。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个PEG部分共价连接的LPEI_22k。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI(PEI-PEG 1:1)。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个PEG部分共价连接的LPEI_22k。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k(PEI-PEG 1:1)。

在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI与三个PEG部分共价连接。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与三个PEG部分共价连接的LPEI。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与三个PEG部分共价连接的LPEI_22k。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与三个PEG_0.3-8k，优选地PEG2_k部分共价连接的LPEI。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与三个PEG部分共价连接的LPEI_22k。在一个更优选的实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k。

在一个优选实施例中，所述多聚复合物的所述dsRNA是polyIC，并且用于根据本发明使用的多聚复合物的聚合缀合物的所述PEI是LPEI_22k。在一个优选实施例中，所述多聚复合物的所述dsRNA是polyIC，并且用于根据本发明使用的多聚复合物的聚合缀合物的所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI_22k。

在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述聚合缀合物的所述一个或多个PEG部分是PEG_0.3-8k，优选地是PEG_2k。在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述LPEI与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接。在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述LPEI与一个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分(LPEI-PEG 1:1)共价连接。在一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述LPEI与PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分(LPEI-PEG 1:3)共价连接。

在一个优选实施例中，所述多聚复合物的所述dsRNA是polyIC，所述聚合缀合物的所述LPEI是LPEI_22k，并且所述一个或多个PEG部分是PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分。在一个优选实施例中，所述多聚复合物的所述dsRNA是polyIC，并且所述LPEI是LPEI_22k并且与一个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分(LPEI-PEG 1:1)或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分(LPEI-PEG1:3)共价连接。

如本文所用，术语“癌抗原”(在本文与肿瘤抗原或肿瘤标志物同义使用)是指在肿瘤细胞中产生或在肿瘤细胞上呈递的触发宿主的免疫应答的抗原物质。在某些实施例中，所述癌抗原选自由以下组成的组：表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、前列腺表面膜抗原(PSMA)、胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)。在另外的优选实施例中，所述癌抗原选自由以下组成的组：表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)和前列腺表面膜抗原(PSMA)。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是EGFR。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是PSMA。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是HER2。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是EGFR或HER2。在另一个优选实施例中，所述癌抗原是EGFR或PSMA。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述癌抗原是EGFR或PSMA。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述癌抗原是EGFR。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述癌抗原是PSMA。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述癌抗原是HER2。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF、HER2亲和体、HER2抗体或DUPA。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体。

对高EGFR(表皮生长因子受体)表达细胞的PEI-PEG-EGF(表皮生长因子)/polyIC多聚复合物处理诱导促炎细胞因子(IP-10、GRO-α和CCL5)分泌，这在低EGFR表达细胞中未观察到的(参见本文图11，实例8)。此外，在与来自具有高EGFR表达的经PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的细胞的上清液一起培育的PBMC中观察到细胞因子(IFN-γ和TNFα)的分泌增加，这在来自低EGFR表达细胞的培养基中未观察到的(参见本文图12，实例9)。与用单独的PEI-PEG-EGF/polyIC、纳武单抗或抗41BB抗体进行处理相比，PEI-PEG-EGF/polyIC与纳武单抗或抗41BB抗体的组合导致PBMC中的细胞因子IFN-y释放进一步增加(参见本文的图3、4和10，实例2和7)。与抗PD-1或PEI-PEG-EGF/polyIC相比，用PEI-PEG-EGF/polyIC与抗PD-1的组合治疗携带RENCA EGFR肿瘤的小鼠示出存活率增加，这证明了如图5和实施例3所示的分别用本发明的组合物和组合处理实现的协同作用。

类似地，polyIC/PEI-PEG与HER2亲和体(pIC/PPHA)缀合的治疗诱导了抗增殖细胞因子(例如，IFN-γ、IFN-α)和免疫刺激细胞因子(例如，IP-10、GRO-α和RANTES)的表达，从而触发了免疫细胞募集和活化并且导致体外广泛癌细胞杀死(Zigler等人,《癌症免疫学研究(Cancer Immunol Res)》；4(8)2016年8月)。如实例5所述并且如图6-9进一步所示，用HER2靶向的polyIC多聚复合物(polyIC/PEI-PEG-HER2亲和体)加上根据本发明的抗PD-1的组合对RENCA HER2肿瘤的治疗导致肿瘤生长完全消退并且对肿瘤再攻击进行完全保护。

在此特别注意的是包括拴系到PSMA配体DUPA(2-[3-(1,3-二羧基丙基)脲基]戊二酸)的PEI-PEG的载体polyIC/PEI-PEG-DUPA(pIC/PPD)将polyIC选择性地递送到PSMA过表达前列腺癌细胞，从而诱导凋亡、细胞因子分泌和人外周血单核细胞(PBMC)募集。具体地，pIC/PPD导致IFN-β、IP-10和RANTES的产生、导致趋化性并且导致从IL-2的强表达显而易见的PBMC活化，并且导致TNF-α和IFN-γ的高水平分泌(Langut等人,《美国国家科学院院报(PNAS)》,2017年12月26日,第114卷,第52期)。

因此，以上清楚地证实并支持包括多聚复合物和能够调节免疫检查点蛋白的至少一种抗体的本发明组合物和成套试剂盒能够导致免疫系统的活化增加和更有效的抗肿瘤活性。包括多聚复合物的优选本发明组合物的情况尤其如此，其中所述癌抗原是EGFR、HER2或PSMA和/或所述一个或多个靶向部分选自EGF、HER2亲和体、HER2抗体和DUPA，并且其中所述抗体能够调节免疫检查点蛋白，优选地抗4-1BB、抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2抗体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是LPEI_15-25k，优选地是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF、HER2亲和体、HER2抗体或DUPA。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是LPEI_15-25k，优选地是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是LPEI_15-25k，优选地是与一个到三个PEG部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF、HER2亲和体、HER2抗体或DUPA。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF、HER2亲和体、HER2抗体或DUPA。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述PEI是与一个到三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k,优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、GITR配体、CD40、CD40配体、OX40、OX40配体、ICOS配体和ICOS。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、GITR配体、CD40、CD40配体、OX40、OX40配体、ICOS配体和ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR、OX40、ICOS和CD40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、CD40、OX40和ICOS。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、CTLA-4、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、CD40和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1和4-1BB。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和OX40。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB和4-1BB配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1或4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1、PD-L1或PD-L2。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-L1。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-L2。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是CTLA-4。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是LAG-3。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是TIGIT。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是TIM3。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是GITR或GITR配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是ICOS或ICOS配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是OX40或OX40配体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB配体(4-1BBL)、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR配体、抗GITR、抗OX40、抗OX-40L、抗ICOS、抗ICOS配体、抗CD40和抗CD40配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB配体、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗GITR配体、抗CD40、抗CD40配体、抗OX40、抗OX40配体、抗ICOS配体和抗ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗4-1BB配体、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗GITR配体、抗CD40、抗CD40配体、抗OX40、抗OX40配体、抗ICOS配体和抗ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR、抗OX40、抗ICOS和抗CD40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗CD40、抗OX40和抗ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB和抗4-1BB配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4和抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-1或抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-1。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-L1。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-L2。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗CTLA-4。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗LAG-3。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗TIGIT。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗TIM3。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗GITR或抗GITR配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗ICOS或ICOS配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗OX40或抗OX40配体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、GITR配体、CD40、CD40配体、OX40、OX40配体、ICOS配体和ICOS。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、GITR配体、CD40、CD40配体、OX40、OX40配体、ICOS配体和ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR、OX40、ICOS和CD40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、CD40、OX40和ICOS。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、GITR、CD40、OX40和ICOS。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR和OX40。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和OX40。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB和4-1BB配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1或4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1、PD-L1或PD-L2。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-L1。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-L2。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是CTLA-4。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是LAG-3。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是TIGIT。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是TIM3。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是GITR或GITR配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是ICOS或ICOS配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_1-3k，进一步优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_15-25k，优选地LPEI_22k，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是OX40或OX40配体。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG部分共价连接的LPEI，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是以下的混合物：(i)能够调节免疫检查点蛋白CD27的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2；

(ii)能够调节免疫检查点蛋白CD40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iii)能够调节免疫检查点蛋白GITR的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iv)能够调节免疫检查点蛋白OX40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和CTLA-4；

(v)能够调节免疫检查点蛋白4-1BB的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、OX40、LAG-3和CTLA-4；或者

(vi)能够调节免疫检查点蛋白ICOS的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述PEI是与一个、两个或三个PEG_0.3-8k，优选地PEG_2k部分共价连接的LPEI_22k，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是以下的混合物：(i)能够调节免疫检查点蛋白CD27的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2；

(ii)能够调节免疫检查点蛋白CD40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iii)能够调节免疫检查点蛋白GITR的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iv)能够调节免疫检查点蛋白OX40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和CTLA-4；

(v)能够调节免疫检查点蛋白4-1BB的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、OX40、LAG-3和CTLA-4；或者

(vi)能够调节免疫检查点蛋白ICOS的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2。

在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒不包含，即排除癌症疫苗或肿瘤相关抗原。在一个优选实施例中，本发明的所述组合物或成套试剂盒包含癌症疫苗或肿瘤相关抗原。

在本发明的多聚复合物中，所述一个或多个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一连接。在一个优选实施例中，所述一个或多个PEG部分与所述一个或多个靶向部分之一直接连接或通过所述一个或多个接头之一与所述一个或多个靶向部分之一连接。

在另外的优选实施例中，所述接头选自-CO-R2-RX-R3或由3个到7个氨基酸残基组成的肽部分，其中R2选自(C₁-C₈)亚烃基、(C₂-C₈)亚烯基、(C₂-C₈)亚炔基、(C₆-C₁₀)亚芳基-二基或杂亚芳基二基；RX不存在或者是-S-；R3不存在或具有式

其中R4选自(C₁-C₈)亚烃基、(C₂-C₈)亚链烯基、(C₂-C₈)亚炔基(C₁-C₈)亚烃基-(C₃-C₈)亚环烷基、(C₂-C₈)亚链烯基-(C₃-C₈)亚环烷基、(C₂-C₈)亚炔基-(C₃-C₈)亚环烷基、(C₆-C₁₀)亚芳基-二基、杂亚芳基二基、(C₁-C₈)亚烃基-(C₆-C₁₀)亚芳基-二基或(C₁-C₈)亚烃基-杂亚芳基二基；其中所述(C₁-C₈)亚烷基、(C₂-C₈)亚链烯基或(C₂-C₈)亚炔基中的每一个任选地被各组独立地选自卤基、-COR5、-COOR5、-OCOOR5、-OCON(R5)₂、-CN、-NO₂、-SR5、-OR5、-N(R5)₂、-CON(R5)₂、-SO₂R5、-SO₃H、-S(＝O)R5、(C₆-C₁₀)芳基、(C₁-C₄)亚烷基-(C₆-C₁₀)芳基、杂芳基或(C₁-C₄)亚烷基-杂芳基的一个或多个基团取代，并且进一步地被一个或多个选自S、O或N的相同或不同杂原子和/或各自独立地选自-NH-CO-、-CO-NH-、-N(R5)-、-N(C₆-C₁₀)芳基-、(C₆-C₁₀)亚芳基-二基或杂亚芳基二基的至少一个基团打断；并且R5是H或(C₁-C₈)烷基。

在另外的优选实施例中，所述聚合缀合物具有式(i)-(viii)：

其中R6是

其中R7是

其中R6是

其中R7是

其中所述T表示所述靶向部分，n对应于分子量0.3-8kD，优选地0.5-5kD，更优选地1-3kD，最优选地2kD；并且m对应于分子量10-30kD，优选地15-25kD，进一步优选地22kD。

在另外的优选实施例中，所述聚合缀合物具有式(ii)或(vii)，其中R6是SEQ IDNO.4(-(NH-(CH₂)₇-CO)-Phe-Phe-(NH-CH₂-CH(NH₂)-CO)-Asp-Cys-)，并且其中T表示靶向部分HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-(DUPA部分)。在另外的优选实施例中，所述聚合缀合物具有式(iv)或(viii)，其中R7是SEQ ID NO.3(-(NH-(CH₂)₇-CO)-Phe-Gly-Trp-Trp-Gly-Cys-)，并且其中T表示靶向部分HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-(DUPA部分)。

在另外的优选实施例中，

-所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体，并且所述聚合缀合物具有式(i)或(v)，并且所述HER2亲和体或HER2抗体通过其巯基连接；

-所述靶向部分是hEGF(人表皮生长因子；人EGF)，并且所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)，其中所述hEGF通过其氨基连接；或者

-所述靶向部分是HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-(DUPA部分)，并且所述聚合缀合物具有式(iii)、(iv)、(vii)或(viii)。

在另外的优选实施例中，所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体，并且所述聚合缀合物具有式(i)或(v)，并且所述HER2亲和体或所述HER2抗体通过其巯基连接。

在另外的优选实施例中，所述靶向部分是hEGF，并且所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另外的优选实施例中，所述靶向部分是hEGF，并且所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)，其中所述hEGF通过其氨基连接。在另外的优选实施例中，所述靶向部分是hEGF，并且所述聚合缀合物具有式(i)，其中所述hEGF通过其氨基连接。

在另外的优选实施例中，所述靶向部分是HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-(DUPA部分)，并且所述聚合缀合物具有式(iii)、(iv)、(vii)或(viii)。

在另外的优选实施例中，所述靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体，并且所述聚合缀合物具有式(i)或(v)，并且所述HER2亲和体或所述HER2抗体通过其巯基连接。在另外的优选实施例中，所述靶向部分是hEGF，并且所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)，其中所述hEGF通过其氨基连接。在另外的优选实施例中，所述靶向部分是hEGF，并且所述聚合缀合物具有式(i)，其中所述hEGF通过其氨基连接。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、GITR配体、CD40、CD40配体、OX40、OX40配体、ICOS配体和ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、4-1BB配体(4-1BBL)、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR配体、GITR、OX40、OX-40L、ICOS、ICOS配体CD40和CD40配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、4-1BB配体、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、GITR配体、CD40、CD40配体、OX40、OX40配体、ICOS配体和ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM3、B7-H3、B7-H4、VISTA、CCR4、GITR、OX40、ICOS和CD40，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、B7-1、B7-2、4-1BB、TIGIT、LAG3、TIM-3、GITR、CD40、OX40和ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、GITR、CD40、OX40和ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、GITR、CD40和OX40，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB、GITR和OX40，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB和OX40，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、4-1BB和4-1BB配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：PD-1、PD-L1、PD-L2和4-1BB，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1或4-1BB，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1、PD-L1或PD-L2，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-1，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-L1，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是PD-L2，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是CTLA-4，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是LAG-3，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是TIGIT。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是TIM3，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是GITR或GITR配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，并且所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是ICOS或ICOS配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白是OX40或OX40配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB配体(4-1BBL)、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR配体、抗GITR、抗OX40、抗OX-40L、抗ICOS、抗ICOS配体、抗CD40和抗CD40配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗4-1BB配体、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗GITR配体、抗CD40、抗CD40配体、抗OX40、抗OX40配体、抗ICOS配体和抗ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗4-1BB配体(4-1BBL)、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR配体、抗GITR、抗OX40、抗OX-40L、抗ICOS、抗ICOS配体、抗CD40和抗CD40配体，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB、抗4-1BB配体、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗GITR配体、抗CD40、抗CD40配体、抗OX40、抗OX40配体、抗ICOS配体和抗ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM3、抗B7-H3、抗B7-H4、抗VISTA、抗CCR4、抗GITR、抗OX40、抗ICOS、和抗CD40，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗B7-1、抗B7-2、抗4-1BB、抗TIGIT、抗LAG3、抗TIM-3、抗GITR、抗CD40、抗OX40和抗ICOS，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗4-1BB和抗4-1BB配体。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4和抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体选自由以下组成的组：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗4-1BB，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-1或抗4-1BB，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-1、抗PD-L1或抗PD-L2，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是PD-1，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-L1，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗PD-L2，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗4-1BB。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体是抗CTLA-4，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且所述免疫检查点蛋白调节抗体调节抗体是抗LAG-3，并且其中所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是以下的混合物：(i)能够调节免疫检查点蛋白CD27的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2；

(ii)能够调节免疫检查点蛋白CD40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iii)能够调节免疫检查点蛋白GITR的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4；

(iv)能够调节免疫检查点蛋白OX40的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB和CTLA-4；

(v)能够调节免疫检查点蛋白4-1BB的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1、PD-L2、OX40、LAG-3和CTLA-4；或者

(vi)能够调节免疫检查点蛋白ICOS的抗体和能够调节选自由以下组成的组的免疫检查点蛋白的至少一种抗体：PD-1、PD-L1和PD-L2。

在另一个优选实施例中，所述dsRNA是polyIC，所述聚合缀合物具有式(i)、(ii)或(vi)，所述靶向部分是EGF，优选地是人EGF，并且能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体是以下的混合物：(i)抗CD27和选自由以下组成的组的至少一种抗体：抗PD-1、抗PD-L1和抗PD-L2；

(ii)能够调节免疫检查点蛋白抗CD40的抗体和至少一种选自由以下组成的组的抗体：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗CTLA-4；

(iii)能够调节免疫检查点蛋白抗GITR的抗体和至少一种选自由以下组成的组的抗体：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2和抗CTLA-4；

(iv)能够调节免疫检查点蛋白抗OX40的抗体和至少一种选自由以下组成的组的抗体：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗4-1BB和抗CTLA-4；

(v)能够调节免疫检查点蛋白抗4-1BB的抗体和至少一种选自由以下组成的组的抗体：抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗OX40、抗LAG-3和抗CTLA-4；或者

(vi)能够调节免疫检查点蛋白抗ICOS的抗体和至少一种选自由以下组成的组的抗体：抗PD-1、抗PD-L1和抗PD-L2。

本发明的多聚复合物包括一个或多个靶向部分。所述靶向部分可以是天然(native)、天然(natural)或经修饰配体或其旁系同源物，或如抗体等非天然配体、单链可变片段(scFv)或如癌抗原中的任何一个的亲和体或适体等抗体模拟物。

在一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分选自由以下组成的组：EGF、HER2亲和体、HER2抗体和DUPA部分(HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-)。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2亲和体或HER2抗体。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)或HER2亲和体。

在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、ICOS、CD40、GITR和OX 40。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD40、GITR和OX 40。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2、GITR和OX 40。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2和OX 40。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4。

在更优选的实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER 2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1和PD-L2。在更优选的实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白选自由以下组成的组：4-1BB、PD-1、PD-L1和PD-L2。

在再次更优选的实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)、HER2抗体或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB或PD-1。在再次更优选的实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)或HER2亲和体，并且所述免疫检查点蛋白是4-1BB或PD-1。

在另外的优选实施例中，所述一个或多个靶向部分是EGF，包含小鼠和人EGF。在一个更优选的实施例中，所述一个或多个靶向部分是hEGF。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是SEQ ID NO:2的hEGF。

在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是HER2亲和体或HER2抗体，优选地是HER2亲和体。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是HER2亲和体，优选地所述HER2亲和体具有SEQ ID NO:1。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是EGF，优选地是人EGF(hEGF)或DUPA部分(HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-)。在另一个优选实施例中，本发明的多聚复合物的所述一个或多个靶向部分是DUPA部分(HOOC(CH₂)₂-CH(COOH)-NH-CO-NH-CH(COOH)-(CH₂)₂-CO-)。

在另外的方面，本发明涉及根据本发明的用于治疗癌症的组合物或成套试剂盒。

在一个优选实施例，本发明涉及根据本发明的用于治疗哺乳动物的癌症的组合物或成套试剂盒。优选地，所述哺乳动物是人。

在一个优选实施例中，本发明涉及一种用于治疗癌症的方法，其中根据本发明的所述组合物或所述成套试剂盒施用于有需要的患者。

在一个优选实施例中，所述癌症选自由以下组成的组：黑色素瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、外阴癌、尿路上皮癌、膀胱癌、肾癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、结直肠癌、神经胶质瘤、头颈癌、前列腺癌、阴茎癌、睾丸-胚胎癌、神经内分泌肿瘤和肝细胞癌。在一个优选实施例中，包含在根据本发明的成套试剂盒中的所述多聚复合物与能够调节免疫检查点蛋白的一种或多种抗体分开施用。

在一个实施例中，本发明提供了本发明的用于治疗癌症的药物组合物或成套试剂盒的用途，其中所述多聚复合物以治疗有效量与治疗有效量的能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体组合施用于患者。

在一个优选实施例中，本发明的成套试剂盒在治疗癌症中的用途包括独立地给予多聚复合物和能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体。所述多聚复合物和能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体可以同时或依序(连续)施用，即按时间顺序交错。如包含在本发明的成套试剂盒中的所述多聚复合物和能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体可以在施用之前组合并且可以以组合物形式一起施用或者可以分开施用。在一个更优选的实施例中，如包含在本发明的成套试剂盒中的所述多聚复合物和能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体分开施用。

在某些实施例中，根据本发明的供使用的成套试剂盒或组合物通过任何合适的途径施用。根据本发明的供使用的成套试剂盒或组合物可以通过静脉内、脑内(大脑内)、口服、肌肉内、皮下、经皮、皮内、经粘膜、鼻内、舌下、腹膜内或眼内途径施用。在一个优选实施例中，根据本发明的供使用的成套试剂盒或组合物全身施用，即肠内或肠道外。更优选地，根据本发明的供使用的成套试剂盒或组合物静脉内、皮下或腹膜内施用。

在一个更优选的实施例中，根据本发明的成套试剂盒或组合物用于全身施用。更优选地，根据本发明的成套试剂盒或组合物静脉内或腹膜内施用，再次更优选地静脉内施用。

所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体可以通过相同途径或优选地通过不同途径施用。更优选地，所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体通过相同途径施用。在一个优选实施例中，所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体依序或同时、优选地依序施用。在一个优选实施例中，所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体通过不同途径依序施用。更优选地，所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体通过相同途径同时施用。

在一个优选实施例中，所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体依序或同时，优选地依序施用，其中本发明的成套试剂盒的一种化合物(或部分)通过腹膜内注射施用，并且至少一种另一化合物(或部分)通过静脉注射施用。在一个优选实施例中，所述多聚复合物和能够调节根据本发明的成套试剂盒的免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体依序或同时，优选地依序施用，其中所述多聚复合物通过静脉内注射施用，并且免疫调节抗体通过覆膜内或静脉内注射施用。

在另一个优选实施例中，所述多聚复合物在能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体之前施用。在另一个优选实施例中，所述多聚复合物和能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体依序施用，其中所述多聚复合物通过静脉注射施用，并且能够调节免疫检查点蛋白的所述至少一种抗体通过腹膜内或静脉注射施用，并且其中所述多聚复合物在抗体之前施用。

多聚复合物的量或浓度与本发明的成套试剂盒或组合物中的要施用的一种或多种抗体的量或浓度的比率可以变化，例如以应对待治疗的单个患者或患者亚群的需要，其中所述需要可能由于患者的年龄、性别、体重、状况等而不同。

本发明的成套试剂盒进一步可以用作添加疗法。如本文所用，“添加疗法”意指供疗法使用的所述多聚复合物和所述至少一种抗体的组合体，其中接受疗法的受试者开始利用成套试剂盒的一个或多个不同部分的第一治疗方案，之后开始除了第一治疗方案的成套试剂盒的一个或多个不同部分的第二治疗方案，使得疗法中使用的所有药剂并非都同时开始。例如，一种或多种免疫调节抗体施用于已经接受本发明的多聚复合物的患者或反之亦然。

现将通过以下非限制性实例说明本发明。

实例

在下面，通过实例进一步说明本发明。至此已经使用了本发明的优选多聚复合物。已如WO 2015/173824中所述，以及具体地如WO 2015/173824的实例2、8、10到13中所述执行了所述优选多聚复合物的合成。包括EGF作为靶向部分的优选聚合缀合物在本文中缩写为“PEI-PEG-EGF”，并且对应优选多聚复合物可互换地缩写为“PEI-PEG-EGF/polyIC”或“PPE/PIC”。本发明和本文使用的另外的优选多聚复合物包括HER2，具体地作为聚合缀合物内的靶向部分的HER2亲和体和作为双链RNA的polyIC。所述优选多聚复合物在本文中缩写为“PolyIC/PPHA”。

实例1-单独的PEI-PEG-EGF/polyIC的作用

用各种浓度(0.125、0.25、0.5、1μg/ml)的PEI-PEG-EGF/polyIC对A431、U87和MCF7细胞(40,000细胞每孔)进行处理持续5小时。

通过ELISA测定(派普泰克公司(Peprotech)的ABTS ELISA开发试剂盒)对人IP-10(CXCL10)分泌进行定量。在与PEI-PEG-EGF/polyIC一起培育5小时之后，表达高EGFR水平的A431细胞的IP10分泌强烈增加(图1)。

用浓度为0.125μg/ml的PEI-PEG-EGF/polyIC对A431细胞进行处理，持续5小时。然后，在冰上在具有2％FCS的PBS中用PD-L1-PE标记的抗体(Biolegend公司，目录号393607)对A431细胞进行染色持续40分钟，然后洗涤并通过FACS仪器进行分析。与未经处理的对照细胞(MFI＝431)相比，在PEI-PEG-EGF/polyIC处理之后PD-L1表达显著增加(MFI＝751)。同种型对照用作阴性对照(MFI＝13)。

在PEI-PEG-EGF/polyIC处理之后，PD-L1表达显著高于未经处理的细胞(图2A-C)。

结论：在PEI-PEG-EGF/polyIC刺激之后，在EGFR过表达细胞系A431中强烈诱导了有效IFN-y诱导的T细胞趋化因子-IP10的分泌。此外，在低EGFR表达细胞系、MCF7和U87中，IP10水平未受到影响。PEI-PEG-EGF/polyIC刺激之后IP10的增加提供了解决本发明组合的免疫刺激性质的原理。

另外，与未经处理的细胞(MFI＝431)相比，PEI-PEG-EGF/polyIC处理(MFI＝751)之后PD-L1表达显著更高，这为开发与纳武单抗的组合提供了原理(图2)。

实例2-PEI-PEG-EGF/polyIC与免疫调节疗法纳武单抗和4-1BB抗体组合的体外作用

纳武单抗：用浓度为0.125、0.25、0.5、1μg/ml的PEI-PEG-EGF/polyIC对40.000的A431细胞进行处理，持续5小时。然后用CD3(5μg/ml)对200.000个PBMC进行刺激，并且用含有单独的PEI-PEG-EGF/polyIC(0.125μg/ml)或与纳武单抗(20μg/ml)组合的经稀释培养基(1:2)进行攻击持续48小时。48小时之后，收集来自受攻击的PBMC的培养基，并且通过ELISA测定测量INFy产生(图3)。

将PEI-PEG-EGF/polyIC与纳武单抗组合显著增加了由PBMC产生IFN-y(图3)。

4-1BB抗体：用浓度为0.5μg/ml的PEI-PEG-EGF/polyIC对40.000A431细胞进行处理，持续5小时。用CD3(0.5μg/ml)对来自健康供体的200,000个PBMC进行刺激或不刺激，并且与用单独的PEI-PEG-EGF/polyIC或与4-1BB(Biolegend克隆，4B4-1；10μg/ml)的抗体的组合处理的A431细胞共培养持续16小时。16小时之后收集培养基并通过ELISA测定测量IFN-y。

将PEI-PEG-EGF/polyIC与抗4-1BB组合显著增加了由PBMC产生IFN-y(图4)。

结论：将PBMC暴露于来自用PEI-PEG-EGF/polyIC处理的EGFR过表达A431细胞的培养基或在经PEI-PEG-EGF/polyIC处理的A431细胞存在的情况下培养PBMC诱导PBMC分泌IFN-y。添加纳武单抗或抗41BB抗体导致IFN-y进一步增加。

因此，PEI-PEG-EGF/polyIC与免疫疗法的组合导致免疫系统的活化提高并且抗肿瘤活性更有效。从临床角度来看，在PEI-PEG-EGF/polyIC与免疫策略组合治疗时潜在诱导抗肿瘤免疫应答非常有吸引力，因为此类组合应增加患者对免疫疗法做出反应的百分比并且降低发展耐药性的发生率。

实例3–PEI-PEG-mEGF/polyIC+抗PD-1的组合的体内功效

检查了PEI-PEG-EGF/polyIC+抗PD-1对有免疫能力的小鼠的RencaEGFR肺转移的影响。

材料和方法：细胞：RencaEGFR；多聚复合物PEI-PEG-EGF/polyIC和-LPEI/EGF小鼠：1/0.75)；来自道尔顿公司(Dalton)的poly IC；含多聚复合物的HBG(Hepes缓冲葡萄糖)，N/P：8。抗PD-1：大鼠IgG2a，κ抗小鼠PD-1抗体(Bioxcell克隆RMP1-14)。

将250,000RencaEGFR细胞静脉内注射到40Balb/c有免疫能力的雌性小鼠体内(6周大，重量：18-21gr)以诱导RencaEGFR肿瘤在肺部中的形成。10天之后，将动物分为4组，10只动物/组(未经治疗的(UT)、抗PD-1、PEI-PEG-EGF/polyIC和PEI-PEG-EGF/polyIC+aPD1(抗PD-1)。

对携带RencaEGFR肿瘤的小鼠用单独的PEI-PEG-EGF/polyIC以250μg/kg，6次注射/每周静脉内治疗2周，或用与抗PD-1(RPM1-14、大鼠IgG2a、Biox细胞)的组合以10mg/kg在第0天、第2天、第4天、第7天、第10天腹膜内治疗。之后对存活率进行了分析。癌症的临床症状的出现：2次最后称重之间重量降低10％或第1次称重与最后称重之间重量降低20％；移动缓慢/异常；背部弯曲；异常呼吸证实了对小鼠处死的合理性。在经处死的小鼠体内视觉证实了肺部中存在肿瘤。根据如小鼠体重测量结果、一般健康状况等评分参数将小鼠处死。将小鼠处死之后，收集器官并将对IHC进行分析以检测肺部转移的存在。

结论：两组(未经治疗的(UT)、抗PD-1)的肿瘤的吸收率为100％，其中最终平均存活率为41.5天和41.8天。所有小鼠在细胞注射之后均患有肿瘤，这示出所述模型的高可靠性。单独的抗PD-1未能抑制肿瘤生长。在第60天时，在单独的PEI-PEG-EGF/polyIC(PPE/PIC)组中一只动物保持存活。利用PEI-PEG-EGF/polyIC存活率初步增加了约32％。在PEI-PEG-EGF/polyIC+抗PD-1(PPE/PIC+aPD1)组中，仅3只动物死亡。存活率初步增加约63％，这已经表明PEI-PEG-EGF/polyIC与抗PD-1之间具有协同性(图9)。

表1

	UT	aPD1	PPE/PIC	PPE/PIC+aPD1
					平均存活率(天)	41.5	41.8	54.8	67.8
(％)存活率提高		0.7	32.0	63.4

实例4–PEI-PEG-EGF/polyIC+抗CTLA-4的组合的体内功效

如实例3中所述，将RencaEGFR细胞静脉内注射到40只Balb/c有免疫能力的雌性小鼠中以诱导RencaEGFR肿瘤在肺部中的形成。10天之后，将动物分为4组，未经治疗的对照(UT)、抗CTLA-4、PEI-PEG-EGF/polyIC和PEI-PEG-EGF/polyIC+抗CTLA-4。在第0天、第2天、第4天、第7天、第10天，用单独的PEI-PEG-EGF/polyIC或与抗CTLA-4的组合对携带EGFR肿瘤的小鼠进行治疗。

根据如小鼠体重测量结果、一般健康状况等评分参数将小鼠处死。将小鼠处死之后，将收集器官并对IHC进行分析以检测肺部转移的存在。分析存活率以及癌症的临床症状的出现。在经处死的小鼠体内视觉证实肺部中存在肿瘤。

预期癌症的临床症状的减少、肿瘤生长的抑制以及存活率的增加。

实例5-在携带HER-2过表达肿瘤的有免疫能力的小鼠体内用polyIC/PPHA和抗PD-1抗体进行的组合治疗

材料和方法：将RENCA-HER2细胞(过表达HER2的肾细胞癌细胞)(5×10⁶)皮下(s.c.)注射到具有免疫能力的BALB/c雌性小鼠(6-8周龄；哈兰实验室公司(HarlanLaboratories))的右侧腹。将携带s.c.RENCA HER2肿瘤的小鼠随机分为4组(未经治疗的、抗PD-1、polyIC/PEI-PEG-HER2亲和体(PPHA)的多聚复合物和抗PD-1+polyIC/PPHA)，其中7-8个动物/组，平均肿瘤体积为235mm³。优选地如WO 2015/173824的实例，更优选地实例2和WO 2015/173824的第18ff页中所述的合成PolyIC/PPHA。优选地如WO 2015/173824的第20ff页中所述的合成HER2亲和体。

用polyIC/PPHA 0.25mg/kg或6.25mg/小鼠，N/P 8，每24小时对小鼠进行静脉内(i.v.)治疗，持续10天。每4-6天腹膜内(i.p.)注射4剂抗PD-1(BioXCell、InVivoMAb抗小鼠PD-1(CD279)、克隆RMP1-14、目录号BE0146)，200mg/小鼠。用卡尺测量肿瘤异种移植物，并使用下式确定肿瘤体积：长度×宽度²/2，并绘制为均值SEM。

结论：与单独的抗PD-1抗体相比并且与未经治疗的肿瘤相比，在组合小组和单独的polyIC/PPHA两者中观察到肿瘤生长的显著抑制。在组合小组中在8只小鼠的2只小鼠中观察到肿瘤完全消退。这些小鼠在另外的60天内未示出任何肿瘤生长。治愈的小鼠示出对肿瘤再攻击的完全保护(5×10⁶)，这表明已经产生了对肿瘤的免疫应答。

实例6-体外实验，PD-L1表达

材料和方法：示出在用polyIC/PPHA处理之后在RENCA HER2细胞中PD-L1的表达增加。用浓度为1微克/ml的polyIC/PPHA对RENCA HER2细胞进行处理，持续24小时。使用藻红蛋白(PE)缀合的抗小鼠PD-L1抗体对细胞进行分析。处理之后对细胞进行胰蛋白酶化、洗涤并与抗PD-L1抗体CD274(PD-L1、B7-H1)[10F.9G2]Tonbo目录号50-1243-U025或同种型对照一起培育，持续1小时。使用流式细胞术(BD FACS ARIAIII；碧迪生物科学公司(BDBiosciences))对PD-L1表达进行分析。基于SSC和FSC对活细胞进行门控。对PE阳性进行门控并确定平均PE。

结论：用1微克/ml的polyIC/PPHA将RENCA HER-2细胞处理24小时，并且使用流式细胞术对PD-L1表达进行分析。与未经处理的细胞相比，用1微克/ml的polyIC/PPHA处理后观察到PD-L1表达明显增加，这表明polyIC的靶向递送诱导PD-L1表达的上调。

表2

实例7-通过包括polyIC和靶向的聚合缀合物的本发明的多聚复合物直接活化PBMC

以下实验证明了本发明的多聚复合物与纳武单抗的组合优于单一药剂治疗的益处。

材料和方法：对从暴露于经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431细胞的上清液的PBMC的IFNγ伽马释放进行定量。细胞系：所使用的细胞类型是A431癌细胞(ATCC)和PBMC(健康供体147)。将A431细胞在具有10％胎牛血清、100单位/ml盘尼西林(penicillin)、100μg/ml链霉素(streptomycin)的DMEM培养基中进行培养。从健康供体获得血沉棕黄层。从血沉棕黄层中分离出PBMC并且将其在具有10％胎牛血清、100单位/ml盘尼西林、100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养基中进行培养。

在HBG(Hepes缓冲葡萄糖)中制备PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物。PEI-PEG-EGF三缀合物由通过MCC接头与hEGF(hEGF-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸)缀合并且根据WO 2015/173824，实例10合成的PEG化线性聚乙烯亚胺构成。利用单独的抗PD-1抗体(纳武单抗)或与PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的组合。在将培养基从经处理的A431细胞转移之后，使用抗CD3抗体(克隆OKT3)来刺激PBMC。使用抗PD-1抗体(纳武单抗)来对PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和检查点阻断的组合进行测试。根据制造商的说明，用ELISA试剂盒(碧迪生物科学公司)测定人干扰素γ分泌。

将A431细胞接种在平底96孔板(40,000细胞/90μl DMEM培养基)中。并行地，制备具有单独的培养基(没有细胞的90μl培养基)的板作为阴性对照。第二天，用0、0.125或1μg/ml的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物(10μl/孔)对单独的A431细胞或培养基进行处理，在37℃下持续5小时。将冷冻的PBMC解冻并且在U型底96孔板中允许其在37℃下在RPMI-1640培养基中恢复至少5小时(200,000个细胞/100μl)。5小时之后，将来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431细胞或经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物“处理”的培养基的上清液(SN)转移到PBMC中。之后，使用抗CD3抗体(OKT3，500ng/ml)对PBMC进行刺激或/和用纳武单抗(20μg/ml)对其进行处理并且在37℃下o/n培育。收集经刺激的PBMC的SN并且将其储存在-20℃下，直到通过ELISA进行分析为止。

为了对将PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物与纳武单抗治疗组合对体外免疫细胞活化的作用进行建模，将来自用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431细胞的SN转移到来自健康供体的人PBMC中并且如下与纳武单抗组合进行处理。用所指示浓度的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物对A431细胞进行处理，持续5小时。作为对照，用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物对没有细胞的培养基进行“处理”并且还培育5小时。5小时之后，用以下对用抗CD3抗体刺激或未刺激的PBMC进行处理：单独的纳武单抗；来自单独的经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431细胞的SN；单独的经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物“处理的”培养基；纳武单抗加上来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431细胞的SN；或纳武单抗加上经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物“处理的”培养基。在37℃下o/n培育PBMC。为了评估PBMC活化，通过ELISA对从PBMC分泌的IFN-γ进行定量。

结果：如在图10和表3中可以看到的，相比于接收来自未经处理的(UT)细胞(12.7pg/ml)的SN的PBMC，接收来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431细胞的SN的经CD3刺激的PBMC分泌多得多的IFN-γ(311.1-326.3pg/ml)。通过添加纳武单抗(502-523pg/ml)进一步增强IFN-γ分泌。接收来自未经处理的细胞的SN加上纳武单抗的PBMC分泌低水平的IFN-γ(62.5pg/ml)。单独的纳武单抗治疗不诱导IFN-γ分泌。相比于UT培养基，单独的经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物“处理的”培养基(没有细胞)或与纳武单抗组合不会导致IFN-γ分泌增加。这些结果证明，相比于PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物，PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物与纳武单抗的组合导致PBMC的活化增加，如通过增加的IFN-γ分泌所看到的。此外，PBMC通过从经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的A431癌细胞分泌的细胞因子，而不是通过单独的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理活化。

结论：在A431细胞处理之后，在培养基转移实验中重复包括polyIC和靶向部分人EGF的多聚复合物和纳武单抗的组合。通过ELISA测量IFN-γ水平并且所述水平证明了与单独的单个药剂相比，两种药剂的组合导致IFN-γ增加。作为对照，将单个药剂(多聚复合物或纳武单抗)或组合在不具有细胞的培养基中培育相同的时间过程。然后将培养基转移到PBMC中。与接受从经A431处理的细胞转移的培养基的PBMC相比，此组中的IFN-γ水平显著较低。这些结果证明了，PBMC的活化不是由polyIC多聚复合物直接介导的，而是通过从用polyIC多聚复合物处理的癌细胞中分泌趋化因子介导的。

表3：PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和纳武单抗的组合增加PBMC活化，如通过IFN-γELISA所证明的。

实例8-在用单独的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和每种组分处理之后细胞因子分泌

为了评估PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物或其组分是否诱导促炎细胞因子分泌，用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、三缀合物PEI-PEG-EGF或pIC和IP-10GRO-α对包含两种高EGFR表达系(MDA-MB-468和A431)的三种细胞系和低EGFR系(MCF7)进行处理，并且通过ELISA对CCL5细胞因子分泌进行测量。

材料和方法：用指定浓度的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、PEI-PEG-EGF三缀合物或polyIC对三种细胞系(高EGFR表达MDA-MB-468和A431)和低EGFR(MCF7)进行处理，持续5小时。然后收集培养基并对CCL5(RANTES)、IP10和GROα进行分析。PEI-PEG-EGF由通过接头MCC与hEGF缀合、根据WO 2015/173824，实例10合成的PEG化线性聚乙烯亚胺构成。

肿瘤细胞系：通过ATCC提供MDA-MB-468、A431和MCF7细胞。细胞系每周常规传代一次或两次，并在培养物中维持至多20次传代。使细胞系在37℃下在湿润化气氛中与5％CO2在RPMI-1640培养基(德国柏林的柏楉有限公司(Biochrom,Berlin,Germany)的具有L-谷氨酰胺的25mM HEPES，#FG1385)或补充有10％(v/v)胎牛血清(德国陶夫基兴的西格玛公司(Sigma,Taufkirchen,Germany))、100单位/ml盘尼西林和100μg/ml链霉素的DMEM中生长。

处理：将单独的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物或pIC在HBG(HEPES缓冲葡萄糖)中进行培育。使用pIC的浓度介于0-1μg/ml的试剂。以与不具有pIC的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物类似的方式制备单独的三缀合物PEI-PEG-EGF。

通过ELISA对细胞因子产生进行定量：为了检测IP-10、Gro-α和RANTES分泌，用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和介于0-1μg/ml之间的pIC浓度，或PEI-PEG-EGF三缀合物或pIC的等效浓度对每孔40,000个细胞进行处理，持续5小时。收集上清液并使用SynergyH1板读取器(伯腾公司(Biotek))通过IP-10、GROα和RANTES ELISA(派普泰克公司(Peprotech))对细胞因子分泌进行定量。

结果：高EGFR表达细胞MDA-MB-468和A431的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理诱导IP-10GRO-α和CCL5分泌，同时在低EGFR表达MCF7细胞中，未观察到细胞因子表达(分别为图11A、B和C)。在A431和MDA-MB-468中分别观察到至多337和268pg/ml的IP10、496和757pg/ml的GROα以及607和100pg/ml的RANTES。在用单独的PEI-PEG-EGF三缀合物或pIC进行治疗之后，所有细胞系中均未观察到细胞因子分泌。这些结果证明，PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物而不是其单独组分诱导促炎细胞因子分泌。

实例9-PBMC通过PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和pIC/PPHA活化

材料和方法：肿瘤细胞系：通过ATCC提供MDA-MB-468、A431和MCF7细胞。细胞系每周常规传代一次或两次，并在培养物中维持至多20次传代。使细胞系在37℃下在湿润化气氛中与5％CO2在RPMI-1640培养基(德国柏林的柏楉有限公司的具有L-谷氨酰胺的25mMHEPES，#FG1385)或补充有10％(v/v)胎牛血清(德国陶夫基兴的西格玛公司)、100单位/ml盘尼西林、100μg/ml链霉素的DMEM中生长。

试剂：PEI-PEG-EGF三缀合物由通过MCC接头与hEGF(人表皮生长因子)缀合并且根据WO 2015/173824，实例10合成的PEG化线性聚乙烯亚胺构成。在HBG(HEPES缓冲葡萄糖)中制备PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物和PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物(西格玛公司的PEI-PEG-EGF和聚-L-谷氨酸(pLGA)，50-100kDa p4886)，并且利用裸pIC。在多聚复合物内使用pIC或pLGA的浓度为0到1μg/ml的试剂。

从健康供体(血沉棕黄层)中分离PBMC：从巴塞尔大学医院血库(UniversityHospital Basel Blood Bank)获得来自健康供体的血沉棕黄层。从血沉棕黄层中分离出PBMC并且将其在具有10％胎牛血清、100单位/ml盘尼西林、100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养基中进行培养。

通过ELISA对细胞因子产生进行定量：为了对IFN-γ和TNF-α分泌进行定量，用以下化合物对每孔40,000个细胞或单独的培养基进行处理：pIC浓度介于0-1μg/ml之间的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、单独的pIC(0-1μg/ml)或与0-1μg/ml的聚谷氨酸多聚复合的PEI-PEG-EGF(PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物)。培育5小时之后，收集上清液和单独的培养基，并将其转移到用a-CD3(0.5μg/ml)刺激的200,000个PBMC中，并且培育另外16小时。并行地，在不存在PBMC的情况下，将来自用单独的每种化合物处理的每个细胞系的上清液培育16小时。培育之后，收集培养基并通过ELISA测定(派普泰克公司和英杰公司(Invitrogen))测量TNF-α、IFN-γ和IL-2，并使用来自伯腾公司的Synergy H1板读取器读取。

结果：通过从经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的癌细胞分泌的细胞因子进行PBMC活化：如IP-10等促炎细胞因子已知可诱导淋巴细胞的募集和活化。为了评估PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物或其药物物质pIC是否诱导免疫细胞活化，用所指示浓度的PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、pIC或PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物(与聚谷氨酸(pLGA)多聚复合的PEI-PEG-EGF)对三种细胞系高EGFR表达(MDA-MB-468和A431)和低EGFR(MCF7)进行处理。在PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物中，PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的pIC被聚谷氨酸替代，以证明PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的作用是pIC介导的。处理5小时之后，将来自经处理的癌细胞的上清液转移到来自健康供体的PBMC中(图12；来自每个细胞系的“PBMC+SN”)。然后将PBMC培育16小时，并且通过ELISA分析IFN-γ和TNFα细胞因子的分泌。同时，为了证明PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物不直接诱导PBMC的活化，将PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、pIC或PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物在没有细胞的培养基中培育，并且将此培养基转移到PBMC中，然后培育16小时并且通过ELISA进行测试(图12；“单独的PBMC”)。作为另外的对照，还对来自培育相同时间的经处理的癌细胞的但没有PBMC的上清液进行分析(图12；“单独的SN”)。

在与来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的MDA-MB-468和A431的上清液一起培育的PBMC中观察到IFN-γ的分泌增加。在来自MDA-MB-468和A431的PBMC中分别检测到至多3587pg/ml和2023pg/ml的IFN-γ。与来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的MCF7细胞的上清液一起培育的PBMC不诱导任何细胞因子分泌。用没有细胞的含有PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、pIC或PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物(单独的PBMC)的培养基处理的PBMC不会诱导所有癌细胞系中的IFN-γ分泌。在来自用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、pIC或PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物处理的任何癌细胞系的没有PBMC的上清液中未观察到IFN-γ分泌。

在与来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的MDA-MB-468和A431细胞的培养基一起培育的PBMC中观察到TNFα分泌显著增加。在来自MDA-MB-468和A431的PBMC中分别检测到至多2190pg/ml和3438pg/ml的TNFα。与来自经PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物处理的MCF7细胞的培养基一起培育的PBMC不诱导细胞因子分泌。与UT细胞相比，来自用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、pIC或PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物(单独的PBMC)处理的PBMC的培养基不会诱导所有癌细胞系中的TNFα分泌显著增加。在来自用PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物、pIC或PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物处理的癌细胞系的没有PBMC的上清液中未观察到IFN-γ和TNFα分泌。

实例10-PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物相比于裸pIC、与PEI复合的pIC或基于转染试剂的脂质的功效和选择性

研究的目的是测量PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物与单个组分和非靶向的递送系统以及pIC类似物的选择性和效能。

材料和方法：细胞系：使用了高EGFR表达细胞系(BT20、MDA-MB-468和HCC70)、中等EGFR表达细胞系(U87MG)、低EGFR表达细胞系(MCF7和U138)以及非癌细胞系(WI-38和MCF10A)以供实验。如上培养细胞。

试剂：PEI-PEG-EGF三缀合物由通过MCC接头与hEGF缀合、根据WO 2015/173824，实例10合成的PEG化线性聚乙烯亚胺构成。使用了PEI-PEG-EGF三缀合物和pIC以在HBG(HEPES缓冲葡萄糖)中制备PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物。使用了JetPEI(Polyplus公司)和pIC以根据制造商的说明制备jetPEI-pIC多聚复合物。使用了Lipofectamin RNAiMax(英杰公司，P/N 56531)和pIC以根据制造商的说明制备RNAiMax-pIC多聚复合物。使用了聚-L-谷氨酸(pLGA；西格玛50-100kDa)和PEI-PEG-EGF以制备净电荷与PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物相同的PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物。

处理：将3000个细胞/孔接种在96孔板中。24小时后，用所指示浓度(范围为2μg/ml到0.001μg/ml)的多聚复合物对细胞进行处理。处理之后72小时，通过CellTiter Glo(普洛麦格公司(Promega))对细胞存活率进行评价，并且使用synergy H1细胞板读取器(伯腾公司)记录发光。

结果：将PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物对高和低EGFR表达癌细胞系以及非癌系的活力的作用与裸pIC、jetPEI-pIC、RNAiMax-pIC(基于脂质的转染试剂)和PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物的作用进行比较。

在所有EGFR过表达细胞中，JetPEI-pIC多聚复合物显著不如PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物有效：PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的IC50是jetPEI-pIC的IC50的1/20-1/10。在具有低EGFR的癌细胞系或非癌细胞系中，jetPEI-pIC的毒性比PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物高至多2倍(图13A-E)。这些结果证明，与jetPEI-pIC相比，PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的功效和选择性增加。

与用RNAiMax-pIC进行的处理相比，在4个EGFR过表达细胞系中的3个中观察到PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的功效增加。仅在A431细胞中，RNAiMax-pIC的IC50低于PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的IC50(RNAiMax-pIC的IC50是PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的IC50的1/4)(图13)。在BT20、MDA-MB-468和HCC70细胞中，PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的IC50是RNAiMax-pIC的IC50的大约1/10。发现RNAiMax-pIC在正常细胞(WI-3和MCF10A)以及具有低EGFR表达的癌细胞中具有毒性，而PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物对这些细胞没有毒性。

在所测试的浓度下，裸pIC在所有细胞系中都无效。

PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物对EGFR过表达癌细胞显著不如PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物有效(多于30倍)。PEI-PEG-EGF/pLGA多聚复合物充当PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的对照。结果清楚地证明PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的功效是通过靶向的pIC处理介导的。

PEG-EGF/polyIC多聚复合物在EGFR过表达细胞中示出高特异性和功效，同时其未诱导正常细胞系的毒性。证明了PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物的功效是通过pIC介导的。与PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物相比，RNAiMax/pIC和jetPEI/pIC不如PEI-PEG-EGF/polyIC多聚复合物有效并且不如其有选择性。RNAiMax/pIC在正常细胞中也是高毒性的。

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