阅读说明：本技术 花旗松素在制备抗代谢综合征类药物中的应用 (Application of taxifolin in preparation of anti-metabolic syndrome medicines ) 是由 郑晓珂 张奇 袁培培 齐曼 傅阳 侯颖 魏亚新 高丽媛 冯卫生 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及花旗松素在制备抗代谢综合征类药物中的应用,可有效解决抗代谢综合征的用药问题,其解决的技术方案是,本发明首次证实花旗松素可以治疗MS,可以作为花旗松素被开发为治疗MS类药物的有力论据,开辟了花旗松素的新用途,具有良好的推广和应用价值。(The invention relates to application of taxifolin in preparation of anti-metabolic syndrome medicines, which can effectively solve the problem of medication of anti-metabolic syndrome.)

花旗松素在制备抗代谢综合征类药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是一种花旗松素在制备抗代谢综合征类药物中的应用。

背景技术

代谢综合征(MS)是一组伴有机体蛋白质，脂肪，糖等物质发生代谢紊乱的复杂的代谢紊乱症候群，临床表现包括腹部肥胖或超重，脂代谢异常，高血压，高血糖，胰岛素抵抗，高胰岛素血症等，MS是包括心肌肥大，冠心病，动脉粥样硬化，心肌梗死等多种心血管疾病的重要诱因，寻找预防与治疗代谢综合征有效活性化合物，是当代研究人员义不容辞的责任。

皂角刺是皂荚属皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)的干燥棘刺。2015年版《中华人民共和国药典》记载皂角刺具有消肿托毒、排脓、杀虫等功效。临床上皂角刺主要用来治疗血栓、中风、疥疮、溃疡、湿疹、内分泌以及各种癌症(鼻咽癌、卵巢癌、***癌等)等。本实验首次从发现从皂角刺中提取出来的黄酮类化合物花旗松素具有抗MS的药理活性。(更换成皂角刺的内容)

花旗松素别名二氢槲皮素、紫衫叶素，分子式为C₁₅H₁₂O₇，分子量为304.25，是一种存在于皂角刺中的天然黄酮类化合物，本发明首次证实花旗松素可以治疗MS，可以作为花旗松素被开发为治疗MS类药物的有力论据。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种花旗松素在制备抗代谢综合征类药物中的应用，可有效解决抗代谢综合征的用药问题。

本发明解决的技术方案是，花旗松素，分子式为C₁₅H₁₂O₇，结构式为

提取方法为，将皂角刺用50％丙酮水溶液组织破碎提取3次，浓缩得到总浸膏，总浸膏加水混悬，采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水进行萃取，得到石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位及水部位，将皂角刺乙酸乙酯部位与柱层析硅胶(100-200目)以1:1进行伴样，干法装柱，采用二氯甲烷-甲醇(100:0到0:100)梯度洗脱，然后用TLC检识，合并相同组分，得到A₁-A₈共八个流分，对流分A₈反复经过硅胶、Toyopearl HW-40C、Sephadex LH-20(羟丙基葡聚糖凝胶)、MCL Gel CHP-20、ODS(十八烷基硅烷)柱色谱法及重结晶、制备薄层和制备液相分离进行分离纯化，得到花旗松素。

本发明首次证实花旗松素可以治疗MS，可以作为花旗松素被开发为治疗MS类药物的有力论据，开辟了花旗松素的新用途，具有良好的推广和应用价值。

附图说明

图1为本发明花旗松素的结构式。

图2为本发明花旗松素核磁共振¹³C-NMR图谱。

图3为本发明花旗松素核磁共振¹HNMR图谱。

具体实施方式

以下结合实际情况对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

本发明在具体实施时，花旗松素的提取方法是，将16.5kg皂角刺用50％丙酮水溶液组织破碎提取3次，浓缩得到总浸膏1.6kg，总浸膏加6L水混悬，采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水进行萃取，得到石油醚萃取部位15.1g、乙酸乙酯萃取部位300.9g、正丁醇萃取部位150.5g及水部位992.8g，将皂角刺乙酸乙酯部位与柱层析硅胶(100-200目)以1:1进行伴样，干法装柱，采用二氯甲烷-甲醇(100:0到0:100)梯度洗脱，然后用TLC检识，合并相同组分，得到A₁-A₈共八个流分，对流分A₈反复经过硅胶、Toyopearl HW-40C、Sephadex LH-20(羟丙基葡聚糖凝胶)、MCL Gel CHP-20、ODS(十八烷基硅烷)柱色谱法及重结晶、制备薄层和制备液相分离进行分离纯化，得到花旗松素16.4g。

按上述方法反复进行多次提取，均取得了相同或相近似的结果，平均每1kg皂角刺得0.99g花旗松素。

本发明提取物经¹³C-NMR和¹HNMR测定，其图谱见图2、图3，其分子结构式见图1，分子式为C₁₅H₁₂O₇，分子量为304.25，鉴定为花旗松素，并经实验可以治疗MS，可以作为花旗松素被开发为治疗MS类药物的有力论据，开辟了花旗松素的新用途，实现花旗松素在制备MS类药物中的应用，相关实验资料如下：

1实验材料

1.1实验动物与细胞

实验动物选用七周龄雄性Wistar Kyoto Rats(WKY)13只和自发性高血压大鼠(SHR)36只，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

1.2试剂与仪器

花旗松素(B20539，源叶生物，China)；果糖(EC06BA0005，Diamond，China)；缬沙坦(国药准字H20050508，海南皇隆制药股份有限公司，China)；总胆固醇测试盒(TG；A111-1，南京建成生物工程研究所，China)；甘油三酯测试盒(T-CHO；A110-1-1，南京建成生物工程研究所，China)；低密度脂蛋白胆固醇测试盒(LDL-C；A113-1，南京建成生物工程研究所，China)；高密度脂蛋白胆固醇测试盒(HDL-C；A112-1，南京建成生物工程研究所，China)；无创尾动脉血压仪(Techman，China)；AB204-N型万分之一精密分析天平(Mettler Toledo，Sweden)；iMARK型酶标仪(Bio-Rad，USA)；Centrifuge-5804R小型高速低温冷冻离心机(Eppendorf，Germany)；超纯水(611VF Sartorius，Gottingen，Germany)；0.9％氯化钠水溶液(河南科伦药业有限公司，China)；-80℃超低温冰箱(海尔集团，China)；-20℃低温冰箱(中科美菱集团，China)。

2实验方法

2.1体内实验

2.1.1分组和给药

实验分为五个小组，以WKY作为正常对照组，给予蒸馏水自由饮用，且每天以1mL/100g剂量灌胃给予蒸馏水。对所有SHR给予10％果糖溶液自由饮用诱导建立MS大鼠模型，并将他们以体重和血压均衡原则划分为四个小组：模型组SHR(F)，与正常组灌胃等剂量的蒸馏水；花旗松素低剂量组SHR(F)+TA-L，灌胃给予25mg/kg花旗松素；花旗松素高剂量组SHR(F)+TA-H，灌胃给予50mg/kg花旗松素；阳性药组SHR(F)+Y，灌胃给予30mg/kg缬沙坦。

2.1.2成模指标，体重和Lee’指数的检测

以无创尾动脉血压仪检测大鼠收缩压(SBP)，在适应性培养期间开始训练，使大鼠适应测量环境。开始药物干预后，每周检测一次。每两周以眶静脉取血法采血，以血糖仪检测空腹血糖值，随后在4℃，3000g条件下离心20min得到血清，以放射性免疫检测空腹胰岛素含量。以花旗松素对SBP和HOMA-IR的影响结果为指标，在实验的第七周进行取材，取材前称量并记录大鼠的体重和体长(鼻尖到***的直线距离)。

胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)＝空腹血糖值×空腹胰岛素含量/22.5

Lee’s指数＝[体重(g)×1000]^(1/3)/体长(cm)

2.1.3生化指标的检测

大鼠腹主动脉取血，血液室温静置后，3000转离心20min，取上清即得血清，检测血清中TG、T-CHO、LDL-C、和HDL-C含量。所有检测步骤均严格遵照试剂盒说明书。

2.1.4统计分析

采用SPSS 18.0软件，对数据进行多组间比较单因素方差分析(One-Way ANOVA)。实验数据均以表示。P<0.05表示差异有显著性，P<0.01表示差异具有极显著性。

3实验结果

3.1花旗松素对MS大鼠基础指标的影响

与WKY组相比，SHR(F)组的大鼠SBP、HOMA-IR、TG、T-CHO和LDL-C水平，体重，Lee’s指数显著升高，HDL-C水平显著降低(P<0.01)，提示SHR(F)组大鼠体内出现高血压、胰岛素抵抗和脂代谢紊乱的病理状态，体型肥胖，已经形成MS，但花旗松素能够显著(P<0.05或P<0.01)改善上述指标，缓解MS大鼠的基础病理表现。见表1-2。

表1金合欢素对MS大鼠SBP，HOMA-IR，体重和Lee’s指数的影响

注：数值表示为

^#P<0.05,^##P<0.01vs.SHR(F)group.

表2花旗松素对MS大鼠脂代谢四项指标的影响

注：数值表示为

^#P<0.05,^##P<0.01vs.SHR(F)group.

4.结论

果糖喂养SHR是目前用于建立MS大鼠模型非常稳定且常用的方法。MS临床表现包括腹部肥胖或超重，脂代谢异常，高血压，高血糖，胰岛素抵抗(IR)，高胰岛素血症等。本实验通过检测大鼠SBP反应高血压状态；检测HOMA-IR反应胰岛素抵抗状态；检测TG，T-CHO，LDL-C，HDL-C反应脂代谢状态；称量并计算大鼠体重和Lee’s指数反应大鼠是否肥胖。结果证实花旗松素能够全面改善MS大鼠体内的各项代谢紊乱性病理状态。

本发明通过上述实验，首次证实花旗松素能够治疗MS，提示花旗松素有被开发为治疗MS类药物的潜力，开辟了花旗松素的新用途，具有良好的推广和应用价值，经济和社会效益显著。