阅读说明：本技术 葡萄糖酸氯己定的含量检测方法 (Content detection method of chlorhexidine gluconate ) 是由 徐奇清 孙迎 林孝崇 聂姣 叶小妹 于 2018-07-23 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种葡萄糖酸氯己定的含量检测方法,包括如下步骤：用溶剂将待测样品稀释成葡萄糖酸氯己定的含量为0.02mg/mL～0.2mg/mL的供试品溶液；取10μL～20μL所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测,得到所述待测样品中葡萄糖酸氯己定的含量；所述高效液相色谱检测时的色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇、水和三乙胺的体积比为(50～70):(30～50):1,pH值为3.5±0.1；流速：0.5mL/min～1.5mL/min；柱温：25℃～35℃；检测波长：258～259nm；所述溶剂与所述流动相相同。该检测方法条件响应值高,在保证待测样品中组分分离度的情况下,葡萄糖酸氯己定出峰快,能够实现快速测定其含量,大大提高了检测工作效率,有利于控制产品的质量。(The invention relates to a content detection method of chlorhexidine gluconate, which comprises the following steps: diluting a sample to be detected into a sample solution to be detected with a solvent, wherein the content of chlorhexidine gluconate is 0.02 mg/mL-0.2 mg/mL; injecting 10-20 mu L of the sample solution into a high performance liquid chromatograph for detection to obtain the content of chlorhexidine gluconate in the sample to be detected; the chromatographic conditions in the high performance liquid chromatography detection are as follows: a chromatographic column: octadecylsilane chemically bonded silica is used as a filling agent; mobile phase: the volume ratio of the methanol to the water to the triethylamine is (50-70): 30-50): 1, and the pH value is 3.5 +/-0.1; flow rate: 0.5mL/min to 1.5 mL/min; column temperature: 25-35 ℃; detection wavelength: 258 to 259 nm; the solvent is the same as the mobile phase. The detection method has high condition response value, ensures the separation degree of components in a sample to be detected, has fast peak emergence of the chlorhexidine gluconate, can realize fast determination of the content of the chlorhexidine gluconate, greatly improves the detection working efficiency, and is beneficial to controlling the quality of products.)

葡萄糖酸氯己定的含量检测方法

技术领域

本发明涉及化学检测技术领域，特别是涉及一种葡萄糖酸氯己定的含量检测方法。

背景技术

香波是外来语“shampoo”的译音，主要由洗涤剂、辅助洗涤剂和添加剂组成，主要具有清洁和保养毛发的作用；添加剂可满足香波的特殊需要并赋予香波多种不同的功效，使香波的作用不断细化，在香波中添加具有抗菌作用的葡萄糖酸氯己定等药用成分制成的复方香波制剂，是一种新型的宠物用兽药香波制剂。

目前尚未有针对该类制剂的质量标准和检测其中葡萄糖酸氯己定的含量的有效方法。中国药典中关于稀葡萄糖酸氯己定溶液的含量检测方法，是采用紫外-可见分光光度法进行检测，此检测方法准确度不高；葡萄糖酸氯己定含漱液中的葡萄糖酸氯己定含量检测是采用梯度洗脱的高效液相色谱法(HPLC，High Performance Liquid Chromatography)检测，但是该方法的洗脱出峰时间较慢、洗脱时间需要21分钟，耗时较长，且响应值较低；经过采用该方法进行香波中葡萄糖酸氯己定含量测定的实验验证，表明其不适用于香波制剂中葡萄糖酸氯己定的含量检测。

发明内容

基于此，提供一种葡萄糖酸氯己定的含量检测方法，能够快速、有效的检测出含葡萄糖酸氯己定的香波中葡萄糖酸氯己定的含量。

一种葡萄糖酸氯己定的含量检测方法，包括如下步骤：

用溶剂将待测样品稀释成葡萄糖酸氯己定的含量为0.02mg/mL～0.2mg/mL的供试品溶液；

取10μL～20μL所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测，得到所述待测样品中葡萄糖酸氯己定的含量；

所述高效液相色谱检测时的色谱条件为：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：甲醇、水和三乙胺的体积比为(50～70):(30～50):1，pH值为3.5±0.1；

流速：0.5mL/min～1.5mL/min；

柱温：25℃～35℃；

检测波长：258nm～259nm；

所述溶剂的组成与所述流动相相同。

需要说明的是，葡萄糖酸氯己定的含量不限于以mg/mL为单位，还可为质量百分含量、摩尔浓度等其他浓度单位。

较优地，检测波长为259nm。

在其中一个实施例中，所述待测样品为含有葡萄糖酸氯己定的香波。

在其中一个实施例中，所述流动相中甲醇、水和三乙胺的体积比为(60～70):(30～40):1。

在其中一个实施例中，所述流动相中甲醇、水和三乙胺的体积比为65:35:1。

在其中一个实施例中，所述色谱柱为ZORBZX Eclipse XDB-C18Analytical4.6×150mm 5-Micron或Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm。

在其中一个实施例中，所述流速为0.8mL/min～1.2mL/min。

在其中一个实施例中，所述供试品溶液中葡萄糖酸氯己定的含量为0.05mg/mL～0.15mg/mL。

在其中一个实施例中，调节所述流动相的pH值所用的调节剂为磷酸。

在其中一个实施例中，所述检测方法还包括以下步骤：

按外标法用葡萄糖酸氯己定对照品进行HPLC检测，得到葡萄糖酸氯己定的含量与峰面积的关系，根据所述葡萄糖酸氯己定的含量与峰面积的关系及所述供试品溶液在高效液相色谱仪中检测得到的色谱图中葡萄糖酸氯己定的峰面积，计算所述待测样品中葡萄糖酸氯己定的含量。

在其中一个实施例中，按外标法用葡萄糖酸氯己定对照品绘制标准曲线，根据所述标准曲线计算所述待测样品中葡萄糖酸氯己定的含量。

具体地，取适量葡萄糖酸氯己定对照品，于和所述流动相成分相同的溶剂中配制成含0.02mg/mL～0.2mg/mL葡萄糖酸氯己定的对照样品，与所述供试品溶液平行地进行样品处理和检测，测出各峰面积对应的葡萄糖酸氯己定的浓度，绘制出标准曲线；

测出所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测得到的色谱图中葡萄糖酸氯己定的峰面积，根据所述标准曲线，计算得到所述待测样品中葡萄糖酸氯己定的含量。

上述检测方法通过选择合适的流动相组分，并调整流动相的配比组成以及其他参数条件设定，使得检测条件响应值高，在保证组分分离度的情况下，葡萄糖酸氯己定出峰快，能够有效缩短葡萄糖酸氯己定的保留时间，快速准确地测定含有葡萄糖酸氯己定的香波中葡萄糖酸氯己定的含量，大大提高了检测工作效率，有利于控制产品的质量。此外上述检测方法不仅可适用于含有葡萄糖酸氯己定的香波制剂，还可应用于其他产品或制剂中葡萄糖酸氯己定的含量检测。

附图说明

图1为实施例1复方硝酸咪康唑香波中葡萄糖酸氯己定的HPLC检测图谱；

图2为实施例1葡萄糖酸氯己定对照品的HPLC检测图谱；

图3为对比例1复方硝酸咪康唑香波中葡萄糖酸氯己定的HPLC检测图谱。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明所用复方硝酸咪康唑香波为佛山市南海东方澳龙制药有限公司自制，主要由硝酸咪康唑、葡萄糖酸氯己定、洗涤剂和多种添加剂等组成；葡萄糖酸氯己定对照品购自Sigma公司；甲醇和三乙胺为色谱纯，水为超纯水。

实施例1

一种葡萄糖酸氯己定的含量检测方法，包括以下步骤：

1)精密称取复方硝酸咪康唑香波10g，用甲醇、水、三乙胺体积比为65:35:1、pH为3.5的溶剂将其稀释，配制成葡萄糖酸氯己定含量约为0.1mg/mL的供试品溶液。

2)取10μL供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行检测，得到如图1所示的色谱图。

色谱条件为：

色谱柱：ZORBZX Eclipse XDB-C18Analytical 4.6×150mm 5-Micron；

流动相：甲醇、水和三乙胺的体积比为65:35:1，用磷酸溶液调节pH值为3.5；

流速：1.0mL/min

柱温：30℃；

检测波长：259nm。

3)精密称取葡萄糖酸氯己定对照品1g，用步骤1)中的溶剂稀释成0.1mg/mL葡萄糖酸氯己定溶液，同上法测定，得到如图2所示的色谱图。

4)按外标法绘制标准曲线，以峰面积计算，得到供试品溶液液中葡萄糖酸氯己定的含量为0.1mg/mL，进而通过换算得到复方硝酸咪康唑香波中葡萄糖酸氯己定的含量与实际相符。

从图1和图2中可知，实施例1的检测方法响应值高，出峰快，在4min内即可完成对葡萄糖酸氯己定的含量测定，在保证分离度的情况下，实现了快速有效的分析，能够解决复方硝酸咪康唑香波中葡萄糖酸氯己定的含量测定，有利于控制产品的质量。

对比例1

对比例1与实施例1基本相同，不同之处在于流动相不同，对比例1的流动相为甲醇：水：三乙胺＝44:56:1，所得HPLC色谱图如图3所示。

由图3可知，对比例1的检测方法，葡萄糖酸氯己定信号值较低，需要20多分钟才出峰，且峰跨度较大，需要2分钟左右，说明对比例1的检测方法不适于复方硝酸咪康唑中葡萄糖酸氯己定的含量测定。

实施例2系统适用性验证

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-三乙胺(65:35:1)(用磷酸调节pH值至3.5±0.1)为流动相，柱温为30℃，流速1.0mL/min，检测波长259nm。取复方硝酸咪康唑香波适量，加流动相制成约含0.1mg/mL葡萄糖酸氯己定的供试品溶液各10μL，注入色谱仪中，理论塔板数按葡萄糖酸氯己定计应大于3000。

经过实验验证，理论塔板数按葡萄糖酸氯己定计大于3000，且供试品中主成分与其他成分的分离度大于1.5。

实施例3专属性试验

将稀释液(甲醇)精密量取10μL注入液相色谱仪，记录图谱，得到空白图谱；

将葡萄糖酸氯己定对照品加流动相制成每1mL中约含0.1mg的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，得到对照图谱；从图谱中得知葡萄糖酸氯己定的保留时间为3.3min左右；将复方硝酸咪康唑香波供试品加流动相制成每1mL中约含0.2mg葡萄糖酸氯己定的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，按实施例1的色谱条件记录色谱图，得到供试品图谱；从图谱中得知葡萄糖酸氯己定的保留时间为3.3min左右；

通过图谱中保留时间判断该发明检测方法的专属性好。

实施例4线性试验

将葡萄糖酸氯己定对照品加流动相分别配置成0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，按实施例1的色谱条件记录色谱图，获得葡萄糖酸氯己定的回归曲线图，得到R＝0.9999，说明检测方法线性好。

实施例5准确度试验

按复方硝酸咪康唑香波的处方比例，分别按标示量的80％、100％、120％配置三种不同浓度的样品各100mL，每个浓度测定3份，按照按实施例1含量测定的方法进行葡萄糖酸氯己定回收率试验，计算回收率，分别计算RSD值；标示量浓度为80％的回收率为99.57％，RSD为0.02％；标示量浓度为100％的回收率为99.81％，RSD为0.01％,；标示量浓度为120％的回收率为99.78％，RSD为0.01％，说明准确度高。

实施例6精密度试验

1、精密度——重复性

取复方硝酸咪康唑香波供试品，加流动相稀释成约含0.1mg/mL葡萄糖酸氯己定的溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪，按实施例1的色谱条件进行，重复进样6次，比较峰面积，计算其RSD值，得到RSD为0.05％，说明该发明的精密度重现好。

2、精密度——中间精密度

取复方硝酸咪康唑香波供试样品按照实施例1取样量80％、100％、120％，精密称取，每个浓度分别制备3份供试品溶液，按实施例1的检测方法进行测定，计算RSD值，得到RSD为0.12％，说明该发明的精密度中间精密度好。

3、精密度——再现性

在不同实验室，由不同的试验人员分别取同一批复方硝酸咪康唑香波供试品适量，加流动相稀释成约含0.1mg/mL葡萄糖酸氯己定的溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪，按实施例1的检测方法进行测定，重复进样6次，计算RSD值，得到RSD值为0.04％，说明该发明的精密度再现性好。

实施例7检测限

称取葡萄糖酸氯己定对照品适量，用流动相溶解，并逐级稀释样品溶液，调节供试品溶液浓度，使葡萄糖酸氯己定峰的响应值约为噪音水平的10倍，记录色谱图，得到实施例1检测方法的检测限为0.02mg/mL。

实施例8定量限

称取葡萄糖酸氯己定对照品适量，用流动相溶解，并逐级稀释样品溶液，调节供试品溶液浓度，使葡萄糖酸氯己定峰的响应值约为噪音水平的3倍，记录色谱图，得到实施例1检测方法的定量限为0.018mg/mL。

实施例9耐用性试验

1、耐用性——对色谱柱

在实施例1的检测方法下，在不改变其他色谱条件下将不同的C18柱对本发明进行验证；称取葡萄糖酸氯己定对照品，用流动相稀释成0.1mg/mL的溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪中，重复6次，计算RSD值，得到色谱柱1(ZORBZX Eclipse XDB-C18Analytical 4.6×150mm 5-Micron))的RSD值为0.02％；同法用色谱柱2(Kromasil100-5-C18 4.6×150mm)进行验证，得到RSD值为0.02％；综上结果，可证明该发明对色谱柱的耐用性好。

2、耐用性——对温度

在本发明检测方法下，在不改变其他色谱条件下将色谱柱的温度分别设置为25℃、30℃、35℃，分别计算RSD值，RSD值均在要求范围内(≤2％)，说明本发明的方法对色谱柱的温度耐用性好。

3、耐用性——对流速

在本发明的检测方法下，在不改变其他色谱条件下将洗脱流速设置0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min，分别计算RSD值，RSD值均在要求范围内(≤2％)，说明本发明对流速的耐用性好。

4、耐用性——对流动相中pH

在本发明的检测方法下，在不改变其他色谱条件下将流动相中pH调为3.4、3.5、3.6，分别进样并计算RSD值，RSD值均在要求范围内(≤2％)，说明本发明对流动相中pH的耐用性好。

实施例10

实施例10与实施例1基本相同，不同之处在于流动相为甲醇、水、三乙胺体积比为50:50:1、pH为3.5。

实施例10的色图谱显示，葡萄糖酸氯己定的条件响应值高，分离度大，葡萄糖酸氯己定的出峰响应时间为5.5min左右，能有效测定复方硝酸咪康唑香波中葡萄糖酸氯己定的含量。

实施例11

实施例11与实施例1基本相同，不同之处在于流动相为甲醇、水、三乙胺体积比为70:30:1、pH为3.5。

实施例11的色图谱显示，葡萄糖酸氯己定的条件响应值高，分离度大，葡萄糖酸氯己定的出峰响应时间为2.8min左右，能有效测定复方硝酸咪康唑香波中葡萄糖酸氯己定的含量。

对比例2

对比例2与实施例1基本相同，不同之处在于流动相为甲醇、水、三乙胺体积比为75:25:1、pH为3.5。

对比例2不能很好的将葡萄糖酸氯己定分离出来，从而无法实现有效测定。

结论：通过上述实施例1～11和对比例1～2的检测结果可以说明，本发明实施例的葡萄糖酸氯己定的含量检测方法，检测条件响应值高，能够充分保证组分的分离，葡萄糖酸氯己定出峰快，在4min内即可完成对葡萄糖酸氯己定的分析测定，可以大大提高了检测工作效率，有利于控制产品的质量；而且经过实验验证，本发明上述方法专属性强、线性好、准确度高、精密度好、耐用性好等优势，可应用于葡萄糖酸氯己定及其相关制剂的中葡萄糖酸氯己定的含量检测。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。