一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法
阅读说明：本技术 一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法 (Method for preparing bee venom antitoxic serum ) 是由 张鑫 陈则 罗敏 李丹 蒋春英 范铁炯 于 2021-07-19 设计创作，主要内容包括：本发明涉及生物技术领域,具体地说是一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法。一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法,其特征在于：具体方法如下：鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；毒素进行甲醛灭活脱毒处理；进行动物免疫；免疫后采血；保存；S/D病毒灭活处理；将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；进行超滤；将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理；将F(ab’)-(2)免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中；将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤,分装。同现有技术相比,制备出来的胡蜂毒素抗毒血清对七里蜂,凹纹胡蜂,黑腹虎头蜂等不同胡蜂种类,云南大理胡蜂,陕西安康胡蜂等不同地域的胡蜂的毒素具有有效的中和效果。(The invention relates to the field of biotechnology and particularly relates to a biological enzyme preparation,in particular to a method for preparing bee venom antitoxic serum. A method for preparing bee venom antitoxic serum is characterized by comprising the following steps: the specific method comprises the following steps: identifying and screening the black abdominal tiger head bees; performing formaldehyde inactivation and detoxification treatment on the toxin; carrying out animal immunization; blood is collected after immunization; storing; S/D virus inactivation treatment; carrying out alum adsorption treatment on the collected plasma precipitate; carrying out ultrafiltration; carrying out DEAE gel column chromatography treatment on the plasma mixture after ultrafiltration; mixing F (ab') 2 Adding the immunoglobulin antibody into a solution of a proper amount of NaCl and m-cresol; sterilizing and filtering the stock solution of the wasp toxin antitoxic serum, and subpackaging. Compared with the prior art, the prepared wasp toxin antitoxic serum has an effective neutralization effect on the toxins of different wasp species such as seven-li wasps, vespid fossilizid, black-belly tiger head wasps and the like, and different regions such as Yunnan Dali wasps, Shaanxi Ankang wasps and the like.)
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法。
背景技术
黑腹虎头蜂又名杀人蜂，腹黑，全身有绒毛，世界上最毒的毒蜂之一，具有超强攻击性，超强毒性，又因为是群居性生物，一个蜂巢中多达上千只，所以时常有蜇伤蛰死人的报道。
但是，目前为止我国尚无治疗黑腹虎头蜂蜇伤的专用药物，针对胡蜂蜇伤的患者，只能对症采取一般的措施，一般的措施对轻症有一定的效果，但是并未从根本上将体内的毒素消灭，体内的毒素则继续对身体造成破坏，最终造成严重后果。
抗毒血清是目前全世界治疗有毒动物咬伤或蜇伤的最有效的首选急救药物，如抗蛇毒血清等；患者如果可以在第一时间及时注射抗毒血清，其生存的可能性将大大增加，同时为后续抢救和治疗赢得了宝贵的时间。但是，目前我国尚无胡蜂毒素抗毒血清，有效的胡蜂毒素抗毒血清的制备研究也是空白的；并且，由于胡蜂种类的不同，其毒素组成也存在很大差异，实验室鉴定黑腹虎头蜂有较大价值，而且，制备胡蜂毒素抗毒血清，尤其是效价高、纯度好的抗毒血清具有很大难度和挑战。
发明内容
本发明为克服现有技术的不足，提供一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，制备出来的胡蜂毒素抗毒血清不仅对黑腹虎头蜂蜂毒具有中和作用，而且对云南大理胡蜂、凹纹胡蜂、陕西安康胡蜂等多种胡蜂蜂毒具有有效的中和效果。
为实现上述目的，设计一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：
（1）分子鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；
（2）将黑腹虎头蜂胡蜂毒素进行甲醛灭活脱毒处理；
（3）将甲醛灭活脱毒处理后的黑腹虎头蜂胡蜂毒素进行动物免疫；
（4）免疫后采血；
（5）采完的血浆置2~8℃的冷库中保存，保存5年；
（6）将血浆进行S/D病毒灭活处理；
（7）将灭活处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；
（8）将板框压滤后的血浆混合物中添加1.5~2倍的蒸馏水进行血浆稀释；
（9）将稀释后的血浆混合物进行胃酶消化处理；
（10） 将胃酶消化处理后的血浆混合物进行第一次沉淀处理；
（11） 将第一次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；
（12） 将板框压滤处理后的血浆混合物进行第二次沉淀处理；
（13） 将第二次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并收集沉淀物，弃上清；
（14） 将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；
（15） 将明矾吸附处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；
（16） 将板框压滤处理后的血浆混合物加入3倍纯化水进行超滤；
（17） 将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理，纳米膜过滤，制得F（ab’）2免疫球蛋白抗体；
（18） 将F（ab’）2免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中，并调整PH值至6~7制得胡蜂毒素抗毒血清原液；
（19） 将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装。
所述的步骤（1）中黑腹虎头蜂胡蜂的鉴定方法如下：
（1a）将0.2g未知胡蜂毒加2ml的DDH2O进行溶解，3000g离心5min，弃上清；
（1b）加入200ul的LB2，充分混匀，悬浮沉淀；
（1c）加入20ul的RNase A于步骤（1b）的样品中在室温孵育2min；
（1d）加入20ul的PK，涡旋混匀，在室温中孵育2min；
（1e）加入500ul的BB2，立即涡旋5s，再室温中孵育10min；
（1f）将全部溶液加入离心柱中，12000rpm离心30s，弃去流出液；
（1g）加入500ul的CB2，12000rpm离心30s，弃废液；
（1h）重复步骤（1g）一次；
（1i）加入500ul的WB2，使用前检查有无无水乙醇，12000rpm离心30s，弃废液；
（1j）重复步骤（1i）一次；
（1k）12000rpm离心2min，彻底去除残留的WB2；
（1l）将离心柱置于干净的离心管中，在柱中央加入100ul预热的EB，或去离子水，室温静置1min，12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱的DNA于-20℃保存；
（1m）采用通用引物以及特异性引物从胡蜂DNA核酸序列上PCR扩增出线粒体COI序列的片段，再经过二代测序测出线粒体COI片段的序列，经NCBI网站比对出胡蜂物种。
所述的DDH2O为去离子水；LB2为裂解液；RNase A为RNA酶A；PK为蛋白酶K；BB2为DNA结合液；CB2为由0.1 ml的去离子水、0.1 ml的5 mol·L–1的NaCl及0.8 mL的预冷95%乙醇无水乙醇组合而成的溶液；WB2为75%无水乙醇；EB为DNA洗脱液。
所述的去离子水的PH值大于7.0，EB的预热温度为65℃。
所述的PCR扩增为从未知胡蜂毒素中提取的胡蜂DNA鉴定胡蜂种类，通过Oligo7设计通用引物和特异性引物，使用胡蜂毒素中提取的DNA作为模板，对线粒体COI序列的片段进行扩增。
所述的步骤（5）中S/D病毒灭活处理的具体流程为：
（5a）将血浆中加入1%的Triton X-100、0.3%的TNBP，在25℃的温度下静置6小时；
（5b）在静置6小时后的血浆混合物中添加0.074%的硅藻土。
所述的步骤（6）中板框压滤的滤液在4℃的温度下静置过夜处理。
所述的步骤（8）中胃酶消化处理的具体流程为：
（8a）在血浆混合物中添加胃酶，并在温度为30℃、PH值为3.2的环境下消化45~90分钟；
（8b）经消化后的血浆混合物中添加150g/L的硫酸铵，搅拌溶解；
（8c）调整PH值至5.2~5.4，并加温至56~58℃维持30分钟。
所述的步骤（9）中第一次沉淀处理的具体流程为：降温至45℃以下，并加入5~10g/L的硅藻土。
所述的步骤（11）中第二次沉淀处理的具体流程为：
（11a）加入200g/L的硫酸铵，调整PH值至7.0~7.4，搅拌溶解；
（11b）加入5~10g/L的硅藻土，静置30~60分钟。
所述的步骤（13）中明矾吸附处理的具体流程为：
（13a）在35℃的温度下，按血浆沉淀物量的2~4倍重量加纯化水溶解；
（13b）加0.8%的明矾，并调整PH值至7.7~7.9，搅拌60分钟。
所述的胡蜂毒素抗毒血清原液对云南大理胡蜂、凹纹胡蜂、陕西安康胡蜂等胡蜂的毒素具有中和作用。
所述的中和过程为将制备的胡蜂毒素抗毒血清原液和胡蜂毒素中和之后，腹腔注射小鼠，观察死亡率，根据Reed-muench公式计算得到的中和效价用于评价抗血清的效力。
本发明同现有技术相比，提供一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，制备出来的胡蜂毒素抗毒血清对七里蜂，凹纹胡蜂，黑腹虎头蜂等不同胡蜂种类，云南大理胡蜂，陕西安康胡蜂等不同地域的胡蜂的毒素具有有效的中和效果。
附图说明
附图1显示云南大理胡蜂基因组通用引物的PCR产物。
附图2显示陕西安康胡蜂，凹纹胡蜂基因组通用引物的PCR产物。
附图3显示凹纹胡蜂，阳性对照胡蜂基因组通用引物的PCR产物。
附图4显示陕西安康胡蜂，云南大理胡蜂，阳性对照胡蜂，凹纹胡蜂基因组特异性引物的PCR产物。
附图5显示胡蜂抗毒血清Y2102对云南大理胡蜂毒，陕西安康胡蜂毒以及胡蜂抗毒血清Y2103对云南大理胡蜂毒，凹纹胡蜂毒的免疫双扩散效价。
附图6显示胡蜂抗毒血清Y2101对云南大理胡蜂毒，陕西安康胡蜂毒，凹纹胡蜂毒以及胡蜂抗血清Y2102对凹纹胡蜂毒的免疫双扩散效价。
附图7显示胡蜂抗毒血清Y2103对陕西安康胡蜂毒的免疫双扩散效价以及胡蜂抗毒血清Y2101,Y2102,Y2103对云南大理胡蜂毒，陕西安康胡蜂毒，凹纹胡蜂毒的交叉保护力。
具体实施方式
下面根据附图对本发明做进一步的说明。
一、一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，具体方法如下：
（1）鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；
（2）将黑腹虎头蜂毒素进行甲醛灭活脱毒处理；
（3）将甲醛灭活脱毒处理后的黑腹虎头蜂毒素进行动物免疫；
（4）免疫后采血；
（5）采完的血浆置2~8℃的冷库中保存，保存5年；
（6）将血浆进行S/D病毒灭活处理；
（7）将灭活处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；
（8）将板框压滤后的血浆混合物中添加1.5~2倍的蒸馏水进行血浆稀释；
（9）将稀释后的血浆混合物进行胃酶消化处理；
（10） 将胃酶消化处理后的血浆混合物进行第一次沉淀处理；
（11） 将第一次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；
（12） 将板框压滤处理后的血浆混合物进行第二次沉淀处理；
（13） 将第二次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并收集沉淀物，弃上清；
（14） 将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；
（15） 将明矾吸附处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；
（16） 将板框压滤处理后的血浆混合物加入3倍纯化水进行超滤至硫酸铵含量小于0.1%；
（17） 将超滤后的血浆混合物进行凝胶柱层析处理，制得F（ab’）2免疫球蛋白抗体；
（18） 将F（ab’）2免疫球蛋白抗体加入至7.5~9.5g/L的NaCl、间甲酚含量小于0.25%的溶液中，并调整PH值至6~7制得胡蜂毒素抗毒血清原液；
（19） 将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装。
步骤（5）中S/D病毒灭活处理的具体流程为：
（5a）将血浆中加入1%的Triton X-100、0.3%的TNBP，在25℃的温度下静置6小时；
（5b）在静置6小时后的血浆混合物中添加0.074%的硅藻土。
步骤（6）中板框压滤的滤液在4℃的温度下静置过夜处理。
步骤（8）中胃酶消化处理的具体流程为：
（8a）在血浆混合物中添加胃酶，并在温度为30℃、PH值为3.2的环境下消化45~90分钟；
（8b）经消化后的血浆混合物中添加150g/L的硫酸铵，搅拌溶解；
（8c）调整PH值至5.2~5.4，并加温至56~58℃维持30分钟。
步骤（9）中第一次沉淀处理的具体流程为：降温至45℃以下，并加入5~10g/L的硅藻土。
步骤（11）中第二次沉淀处理的具体流程为：
（11a）加入200g/L的硫酸铵，调整PH值至7.0~7.4，搅拌溶解；
（11b）加入5~10g/L的硅藻土，静置30~60分钟。
步骤（13）中明矾吸附处理的具体流程为：
（13a）在35℃的温度下，按血浆沉淀物量的2~4倍重量加纯化水溶解；
（13b）加0.8%的明矾，并调整PH值至7.7~7.9，搅拌60分钟。
胡蜂毒素抗毒血清原液对云南七里胡蜂、黑腹虎头蜂、云南大理胡蜂、凹纹胡蜂、陕西胡蜂中的毒素具有中和作用。
制备出来的胡蜂毒素抗毒血清原液对云南大理，陕西安康不同地域的胡蜂，七里胡蜂、黑腹虎头蜂、凹纹胡蜂等不同类别胡蜂的毒素都具有中和作用，那么如何鉴别胡蜂种类，则对临床指导有着重大的意义，不仅可以帮助医生判断蜇伤的类别，以帮助后续正确用药。而且可以鉴别胡蜂毒素，利用最毒的黑腹虎头蜂的毒素进行抗毒血清的制备，从而获得高中和效果吗，高效价的抗毒血清进行临床治疗。
二、胡蜂种类的鉴定方法，具体方法如下：
1.胡蜂总DNA提取方法：
（1）将0.2g未知胡蜂毒加2ml的DDH2O进行溶解，3000g离心5min，弃上清；
（2）加入200ul的LB2，充分混匀，悬浮沉淀；
（3）加入20ul的RNase A于步骤（2）的样品中在室温孵育2min；
（4）加入20ul的PK，涡旋混匀，在室温中孵育2min；
（5）加入500ul的BB2，立即涡旋5s，再室温中孵育10min；
（6）将全部溶液加入离心柱中，12000rpm离心30s，弃去流出液；
（7）加入500ul的CB2，12000rpm离心30s，弃废液；
（8）重复步骤（7）一次；
（9）加入500ul的WB2，使用前检查有无无水乙醇，12000rpm离心30s，弃废液；
（10）重复步骤（9）一次；
（11）12000rpm离心2min，彻底去除残留的WB2；
（12）将离心柱置于干净的离心管中，在柱中央加入100ul预热的EB，或去离子水，室温静置1min，12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱的DNA于-20℃保存。
DDH2O为去离子水；LB2为裂解液；RNase A为RNA酶A；PK为蛋白酶K；BB2为DNA结合液；CB2为由0.1 ml的去离子水、0.1 ml的5 mol·L–1的NaCl及0.8 mL的预冷95%乙醇无水乙醇组合而成的溶液；WB2为75%无水乙醇；EB为DNA洗脱液。
去离子水的PH值大于7.0，EB的预热温度为65℃。
2.胡蜂DNA阳性标准品：
提取了黑腹虎头蜂胡蜂尸体的DNA作为阳性标准品，提取步骤同1。
3. 胡蜂DNA分子鉴定方法：
采用通用引物以及特异性引物从胡蜂DNA核酸序列上PCR扩增出线粒体COI序列的片段，再经过二代测序测出线粒体COI片段的序列，经NCBI网站blast出胡蜂物种。
（1）PCR扩增：
胡蜂毒素中提取的胡蜂DNA鉴定胡蜂种类，通过Oligo7设计通用引物和特异性引物，使用胡蜂毒素中提取的DNA作为模板，并以黑腹虎头蜂尸体提取的DNA为阳性对照，对线粒体COI序列的片段进行扩增。
采用PCR扩增引物：
胡蜂线粒体基因组中的COI序列通用上游引物为H-F：GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG；通用下游引物为H-R：TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；胡蜂线粒体基因组中的COI序列特异性上游引物为HT-F：GTATTAAAGTTTCGATCGGTA；特异性下游引物为HT-R：GATATAGCTTTTCCTCGAAT。
胡蜂COI序列的扩增体系：扩增体系（20μL），如表1所示。
表1。
扩增程序，如表2所示。
表2。
（2）琼脂糖凝胶电泳：
PCR产物经过2%琼脂糖凝胶电泳，120V恒压，电泳40min。
（3）二代测序：
PCR扩增出来的片段，经过双向测序，序列拼接，得到扩增序列，序列如下。
序列1：
云南七里胡蜂测序序列：
CCTTTTTATTTTATTTTTGCTTTATGATCAGGATCTTTAGGAGCCTCTATAAGTTTAATTATTCGTATAGAACTTAGATCCCCAGGAAGATTAATTAACAACGATCAAATCTATAATTCTATTATTACCGCTCATGCTTTTATTATAATTTTTTTTATAGTTATACCTTTTATAATTGGAGGATTTGGAAATTGATTAATTCCTTTAATATTAGGAATTCCAGATATAGCTTTTCCTCGAATAAATAATATAAGATTCTGACTATTACCTCCCTCTTTATTTCTATTAATTATAAGAAATTTTATTGGAGGAGGAGTAGGAACTGGATGAACTCTTTACCCACCTCTATCATCAATTACTGGTCATAATTCTCCAGCTGTTGATCTTAGAATCTTTTCATTACATATTGCAGGAATTTCATCAATTATAGGAGCCATTAATTTCATTGTTACAATTTTAAACATACACATTAAAACTCACTCACTAAGATTCTTACCTTTATTTTCATGATCAGTTTTAATTACAGCATTTTTACTATTATTATCCTTACCTGTTCTAGCAGGAGCAATTACAATACTTCTTACCGATCGAAACTTTAATACATCATTTTTTGATCCCACAGGAGGAGGAGACCCTATTTTATATCAACATTTATTTTGATTTTTTGGTCACCTGAAAGTTTAAAAA。
序列2：
陕西胡蜂测序序列：
TTAAACTTCCACAGGTGACCAAAAAATCAAAATAAATGTTGATATAAAATAGGGTCTCCTCCTCCTGTGGGATCAAAAAATGATGTATTAAAGTTTCGATCGGTAAGAAGTATTGTAATTGCTCCTGCTAGAACAGGTAAGGATAATAATAGTAAAAATGCTGTAATTAAAACTGATCATGAAAATAAAGGTAAGAATCTTAGTGAGTGAGTTTTAATGTGTATGTTTAAAATTGTAACAATAAAATTAATGGCTCCCTATAATTGATGAAATTCCTGCAATATGTAATGAAAAGATTCTAAGATCAACAGCTGGAGAATTATGACCAGTAATTGATGATAGAGGTGGGTAAAGAGTTCATCCAGTTCCTACTCCTCTTCCAATAAAATTTCTTATAATTAATAGAAATAAAGAGGGAGGTAATAGTCAGAATCTTATATTATTTATTCGAGGAAAAGCTATATCTGGAATTCCTAATATTAAAGGAATTAATCAATTTCCAAATCCTCCAATTTATAAAAGGTATAACTATAAAAAAAATTATAATAAAAGCATGAGCGGTAATAATAGAATTATAGATTTGATCGTTGTTAATTAATCTTCCTGGGGATCTAAGTTCTATACGAATAATTAAACTTATAGAGGCTCCTAAAGATCCTGATCATAAAGCAAAAATAAAATAAAGTATTCCAATATCTTTATGTTTGTTTTGACACAAGAAA。
序列3：
阳性对照胡蜂的测序序列：
TTAAACTTCCACAGGTGACCAAAAAATCAAAATAAATGTTGATATAAAATAGGGTCTCCTCCTCCTGTGGGATCAAAAAATGATGTATTAAAGTTTCGATCGGTAAGAAGTATTGTAATTGCTCCTGCTAGAACAGGTAAGGATAATAATAGTAAAAATGCTGTAATTAAAACTGATCATGAAAATAAAGGTAAGAATCTTAGTGAGTGAGTTTTAATGTGTATGTTTAAAATTGTAACAATAAAATTAATGGCTCCCTATAATTGATGAAATTCCTGCAATATGTAATGAAAAGATTCTAAGATCAACAGCTGGAGAATTATGACCAGTAATTGATGATAGAGGTGGGTAAAGAGTTCATCCAGTTCCTACTCCTCTTCCAATAAAATTTCTTATAATTAATAGAAATAAAGAGGGAGGTAATAGTCAGAATCTTATATTATTTATTCGAGGAAAAGCTATATCTGGAATTCCTAATATTAAAGGAATTAATCAATTTCCAAATCCTCCAATTTATAAAAGGTATAACTATAAAAAAAATTATAATAAAAGCATGAGCGGTAATAATAGAATTATAGATTTGATCGTTGTTAATTAATCTTCCTGGGGATCTAAGTTCTATACGAATAATTAAACTTATAGAGGCTCCTAAAGATCCTGATCATAAAGCAAAAATAAAATAAAGTATTCCAATATCTTTATGTTTGTTTTGACACAAGAAA。
（4）结果检测与数据分析：
使用通用引物和特异性引物和胡蜂毒素里提取的云南大理，陕西安康，凹纹胡蜂，阳性对照胡蜂DNA样本，采用上述反应体系和程序，经过40个循环的扩增，用2%琼脂糖凝胶电泳，可以得到线粒体基因组中COI序列的条带，特异性引物只能P出黑腹虎头蜂线粒体基因组中COI序列的条带，如果不是黑腹虎头蜂，特异性引物PCR则不会出现阳性条带，结果云南大理胡蜂，陕西安康胡蜂，阳性对照胡蜂DNA都P出了阳性条带，而凹纹胡蜂没有，进一步的二代测序分析，对通用引物的三个PCR产物测序，测序结果经过拼接，blast序列同源性，同源性98%以上可以确定是一个种属。经鉴定，云南大理胡蜂，陕西安康胡蜂同属于黑腹虎头蜂，故选用毒性较强的陕西安康胡蜂毒素用于制备胡蜂抗毒血清。
三、抗毒血清的毒素中和效果测定：
最后，根据制得的胡蜂毒素抗毒血清进行中和作用的验证，就是体外，胡蜂毒素抗毒血清原液和胡蜂毒素中和之后，腹腔注射小鼠，观察死亡率，根据Reed-muench公式来得到的中和效价用于评价抗血清的效力。
三批胡蜂毒素抗毒血清原液与陕西安康胡蜂毒，云南大理胡蜂毒，凹纹胡蜂毒免疫双扩效价，如表3所示。
表3。
胡蜂毒素抗毒血清原液
云南大理胡蜂毒
陕西安康胡蜂毒
凹纹胡蜂毒
Y2101
1:8
1:8
1:8
Y2102
1:8
1:8
1:8
Y2103
1:8
1:8
1:8
如图5至图7所示，三批胡蜂毒素抗毒血清原液与陕西安康胡蜂毒，云南大理胡蜂毒，凹纹胡蜂毒均有沉淀线，表现出对不同胡蜂毒的很好的交叉保护力。
胡蜂毒素抗毒血清原液Y2102与陕西安康胡蜂毒，云南大理胡蜂毒，凹纹胡蜂毒动物中和效价分别为266U/ml，296U/ml，403U/ml，显示胡蜂毒素抗毒血清原液F（ab’）2对不同的胡蜂毒均有一定的保护作用，显示很好的交叉保护力。
免疫双扩散的结果显示胡蜂毒素抗毒血清不仅与云南大理胡蜂毒有结合，还与陕西安康胡蜂毒、凹纹胡蜂毒也有结合，存在着交叉反应。
动物实验的结果显示了胡蜂毒素抗毒血清除了对云南大理胡蜂毒，陕西安康胡蜂毒具有保护作用，对凹纹胡蜂毒也有保护作用，起到中和抗体的保护作用。
因为胡蜂毒素抗毒血清对于胡蜂科的蜂毒具有广泛的交叉保护作用，可以以此为基础发展针对胡蜂科的广谱抗血清。