阅读说明：本技术 猪瘟弱毒株与猪***(o型)灭活抗原二联苗 (Bivalent vaccine of hog cholera attenuated strain and inactivated swine foot-and-mouth disease (o type) antigen ) 是由 令世鑫 令瑛 柏家林 马忠仁 乔自林 冯若飞 李明生 于 2018-06-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了猪瘟弱毒株与猪口蹄疫(o型)灭活抗原二联苗,其特征在于：按每瓶20-50头份计算:猪瘟抗原毒液0.25-0.625份、口蹄疫抗原0.8-2份、耐热保护剂1.575-3.9375份。对O型口蹄疫灭活抗原进行高倍浓缩纯化,除去了大部分异源蛋白、热源和灭活剂,猪瘟弱毒进行2-3倍浓缩,除去异源蛋白,减轻副反应,使用时随用随稀释,该二联苗能使猪瘟的免疫抗体比使用单苗提高8倍以上,为使用者提供了一针防两病的方便条件。与传统的疫苗相比,本发明中的二联苗现有技术具有制备方便,稳定性好,效果强、易保存、使用方便、适用广等优点,可以在兽用生物制品领域得到广泛应用。(The invention discloses a bivalent vaccine of a swine fever attenuated strain and a swine foot-and-mouth disease (o type) inactivated antigen, which is characterized by comprising the following components in parts by weight: according to 20-50 parts of each bottle, the swine fever antigen venom is 0.25-0.625 part, the foot-and-mouth disease antigen is 0.8-2 parts, and the heat-resistant protective agent is 1.575-3.9375 parts. The O-type foot-and-mouth disease inactivated antigen is highly concentrated and purified, most of heterologous protein, heat source and inactivator are removed, the hog cholera attenuated virus is concentrated by 2-3 times, the heterologous protein is removed, the side reaction is reduced, the inactivated vaccine is diluted when being used, the immune antibody of the hog cholera can be improved by more than 8 times compared with that of a single vaccine, and the convenient condition of preventing two diseases by one injection is provided for a user. Compared with the traditional vaccine, the bivalent vaccine of the invention has the advantages of convenient preparation, good stability, strong effect, easy storage, convenient use, wide application and the like in the prior art, and can be widely applied to the field of biological products for livestock.)

猪瘟弱毒株与猪***(o型)灭活抗原二联苗

技术领域

本发明涉及兽用生物制品领域，具体地说是猪瘟弱毒株与猪***o型灭活抗原经高倍浓缩纯化后制备成二联苗的配方及其制备方法方法。

背景技术

猪瘟俗称"烂肠瘟"是披盖病毒科的瘟病毒属(Pestivirus)中的猪瘟病毒。具有高度传染性疫病，是威胁养猪业的主要传染病之一，其特征是:急性，呈败血性变化，实质器官出血，坏死和梗死；主要通过直接接触，或由于接触污染的媒介物而发病。消化道、鼻腔粘膜和破裂的皮肤均是感染途径。

目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有以下三种:

1.猪瘟活疫苗(I)---乳兔苗。

2.猪瘟活疫苗(II)---细胞苗。

3.猪瘟活疫苗(I)---淋脾苗。

该三种疫苗的制备：

1>.制备毒液：按2000年版《兽用生物制品规程》载猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法制备毒液，病毒效价不低于10⁵RID/ML。

2>.疫苗配制：

按每瓶20-50头份计算:抗原0.6-1.1ML,耐热保护剂0.9-1.6。分装在7ML玻璃瓶中，每瓶1.5-3ML，执行猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)冷冻干燥.

3>.疫苗检验：执行猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)，疫苗在-15℃以下保存，有效期为18个月。

使用方法：三种疫苗使用方法相同，为肌肉或皮下注射。使用时按瓶签注明头份随用随稀释，用无菌生理盐水按每头份1毫升稀释，大小猪均为1毫升。注射应在1小时内要用完；如气温在15℃-27℃，应在2小时内用完。注射的时间最好是进食后2小时或进食前。注射4天后即可产生免疫力，免疫期可达12个月。

***是由小核糖核酸病毒科的***病毒引起偶蹄兽的一种急热性和高度接触性的传染病。临诊上以猪口腔粘膜、鼻吻部、蹄部以及***皮肤发生水疱和溃烂为特征。猪***的发病率很高，传染快，流行面大，对仔猪可引起大批死亡，造成严重的经济损失,世界各国对***都十分重视防疫，此病已成为国际重点检疫对象。

目前市场上预防***的灭活疫苗主要有以下二种:

1.猪O型***灭活疫苗。

2.猪O型、亚洲I型***二价灭活疫苗.

该二种疫苗的制备：

1>.制备毒液：按猪***疫苗制造及检验规程方法制备毒液，病毒效价不低于10⁷LD₅₀/0.2ML.

2>.疫苗配制：O型或亚洲I型***病毒接种BHK21细胞培养，收获感染细胞液，毒液除细胞碎片后经BEI灭活，再加阻断剂终止灭活。抗原加油佐剂混合乳化制成。抗原50％、油佐剂50％乳化成乳白色或淡红色粘滞性乳状液，分装在50或100ML塑料瓶中，在2-8℃贮藏。

3>.疫苗检验：执行猪***0型灭活疫苗制造及检验规程，合格疫苗在2-8℃贮藏，有效期为1年。

使用方法：用时耳根后肌内注射，体重10-25kg猪每头1mL；25kg以上猪每头2mL。用于预防猪O型或亚洲I型***,注射疫苗后15日产生免疫力，免疫期6个月。

在两种抗原都具备的条件下，改变最后配苗工艺，制备出猪瘟弱毒株与O型***灭活抗原冻干二联苗。对O型***灭活抗原进行高倍浓缩纯化，除去了大部分异源蛋白、热源和灭活剂，而纯化后再稀释配苗残余的灭活剂不影响猪瘟弱毒的抗原性，彻底解决***抗原长期在矿物油中而被破坏的现象，保证其抗原的有效性和稳定性，是本领域研发人员急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，提供了猪瘟弱毒株与猪***(o型)灭活抗原二联苗的配方及其制备方法，对猪瘟弱毒进行2-3倍浓缩，除去异源蛋白，减轻副反应，使用时随用随稀释，用无菌生理盐水按每头份1毫升稀释，然后用等量油佐剂即时乳化该二联苗，免疫后***抗体符合使用单苗标准，特别能使猪瘟的免疫抗体比使用单苗提高8倍以上，为使用者提供了一针防两病的方便条件。

实现上述目的本发明的技术方案为，猪瘟弱毒株与猪***(o型)灭活抗原二联苗，其特征在于：按每瓶20-50头份计算:猪瘟抗原毒液0.25-0.625份、口疫抗原0.8-2份、耐热保护剂占1.575-3.9375份。

按每瓶20-50头份计算制备方法如下：

步骤(1)按配方比例先制备耐热保护剂，将其116℃高压灭菌30分钟,冷却至30℃在无菌条件下加入无菌猪瘟抗原,搅拌混匀。

步骤(2)按配方比例向步骤(1)所得溶液中无菌条件下加入无菌***抗原，搅拌混匀。

步骤(3)，将步骤(2)得到的兽用疫苗无菌条件下分装在7-20ML玻璃瓶中，每瓶2.625-6.563ML，按猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法冷冻干燥.疫苗在-15℃以下保存。

按每瓶20头份计算:猪瘟抗原毒液0.25份、***抗原0.8份、耐热保护剂占1.575份。

按每瓶20头份计算制备方法如下：

步骤(1)按配方比例先制备耐热保护剂，将其116℃高压灭菌30分钟,冷却至30℃在无菌条件下加入无菌猪瘟抗原,搅拌混匀。

步骤(2)按配方比例向步骤(1)所得溶液中无菌条件下加入无菌***抗原，搅拌混匀。

步骤(3)，将步骤(2)得到的兽用疫苗无菌条件下分装在7ML玻璃瓶中，每瓶2.625ML，按猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法冷冻干燥.疫苗在-15℃以下保存。

按每瓶50头份计算:猪瘟抗原毒液0.625份、***抗原2份、耐热保护剂占3.9375份。

步骤(1)按配方比例先制备耐热保护剂，将其116℃高压灭菌30分钟,冷却至30℃在无菌条件下加入无菌猪瘟抗原,搅拌混匀。

步骤(2)按配方比例向步骤(1)所得溶液中无菌条件下加入无菌***抗原，搅拌混匀。

步骤(3)，将步骤(2)得到的兽用疫苗无菌条件下分装在20ML玻璃瓶中，每瓶6.563ML，按猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法冷冻干燥.疫苗在-15℃以下保存。

作为优选，所述的猪瘟抗原毒液按2000年版《兽用生物制品规程》载猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法制备毒液，2-3倍浓缩，病毒效价不低于2X10⁵RID/ML。

作为优选，所述的***抗原效价不低于10⁷LD₅₀/ML.100-200倍浓缩纯化，使最终抗原含量即146S为400ug/ML。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明得到的二联苗，均在-15℃以下保存，彻底解决了***抗原长期在矿物油中而被破坏的现象，保证了其抗原的有效性和稳定性，免疫效果更好，除去异源蛋白，减轻了副反应，而猪瘟的免疫抗体比使用单苗提高8倍以上。***有效期从12个月延长到18个月。本发明配方中的所有原料，易于获取，由专业的兽医生物制品生产企业生产，因此易于制备可以大面积推广应用。

与传统的疫苗相比，本发明中的二联苗现有技术具有制备方便，稳定性好，效果强、易保存、使用方便、适用广等优点，可以在兽用生物制品领域得到广泛应用。

具体实施方式

实施例1：

按每瓶20头份计算:猪瘟抗原毒液0.25ML、口疫抗原0.8ML、耐热保护剂占1.575ML。

按每瓶20头份计算制备方法如下：

步骤(1)按配方比例先制备耐热保护剂，将其116℃高压灭菌30分钟,冷却至30℃在无菌条件下加入无菌猪瘟抗原,搅拌混匀。

步骤(2)按配方比例向步骤(1)所得溶液中无菌条件下加入无菌***抗原，搅拌混匀。

步骤(3)，将步骤(2)得到的兽用疫苗无菌条件下分装在7ML玻璃瓶中，每瓶2.625ML，按猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法冷冻干燥.疫苗在-15℃以下保存。

实施例2：

按每瓶50头份计算:猪瘟抗原毒液0.625ML、***抗原2ML、耐热保护剂占3.9375ML；

步骤(1)按配方比例先制备耐热保护剂，将其116℃高压灭菌30分钟,冷却至30℃在无菌条件下加入无菌猪瘟抗原,搅拌混匀。

步骤(2)按配方比例向步骤(1)所得溶液中无菌条件下加入无菌***抗原，搅拌混匀。

步骤(3)，将步骤(2)得到的兽用疫苗无菌条件下分装在20ML玻璃瓶中，每瓶6.563ML，按猪瘟活疫苗制造及检验规程(I)方法冷冻干燥.疫苗在-15℃以下保存。

猪瘟弱毒株与猪***O型灭活抗原二联苗使用方法

两种头份数均为肌肉注射,使用时按瓶签注明头份随用随稀释，用无菌生理盐水按每头份1毫升稀释，然后用注射器吸到等量备好的油佐剂中，用注射器吹打一次或直接摇匀即时乳化，10公斤以上猪均为肌肉注射1毫升。注射应在1小时内要用完；如气温在15℃-27℃，应在2小时内用完。注射的时间最好是进食后2小时或进食前。猪瘟注射4天后即可产生免疫力，免疫期可达12个月，***O型注射后15日产生免疫力，免疫期6个月。

本发明为兽用疫苗猪瘟弱毒株与猪***O型灭活抗原二联苗，一种是活毒，另一种是灭活毒，该二联苗为国内外首创，对***O型灭活抗原进行高倍浓缩纯化，除去了大部分异源蛋白、热源和灭活剂，而纯化后再稀释配苗残余的灭活剂不影响猪瘟弱毒的抗原性，彻底解决了***抗原长期在矿物油中而被破坏的现象，保证了其抗原的有效性和稳定性，对猪瘟弱毒进行2-3倍浓缩，除去异源蛋白，减轻副反应，使用时随用随稀释，然后即时乳化也为国内外先例，该二联苗能使猪瘟的免疫抗体比使用单苗提高8倍以上，为使用者提供了一针防两病的方便条件。

本发明中的二联苗现有技术具有制备方便，稳定性好，效果强、易保存、使用方便、适用广等优点，可以在兽用生物制品领域得到广泛应用。

上述技术方案仅体现了本发明技术方案的优选技术方案，本技术领域的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本发明的原理，属于本发明的保护范围之内。