一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法
阅读说明：本技术 一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法 (Analysis method of related substances in amiodarone hydrochloride injection ) 是由 戴德标 陆文通 单胜男 耿爽 于 2019-08-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法,采用高效液相色谱法,其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,以pH＝4.85-4.95的乙酸缓冲水溶液和混合溶剂的体积比为1：0.9-1.1为流动相A,以混合溶剂为流动相B,其中,混合溶剂为甲醇和乙腈体积比为3：3.8-4.2的混合溶剂,检测波长为238-242nm,进行梯度洗脱；本发明检出的杂质多,能快速、有效、准确监控盐酸胺碘酮注射液中的有关物质；本发明具有良好的专属性,检测限、定量限均较小,本发明的灵敏度好；增加本发明有关物质检测的准确性。(The invention discloses an analytical method of related substances in amiodarone hydrochloride injection, which adopts high performance liquid chromatography, and the chromatographic conditions comprise: the chromatographic column is an octadecylsilane chemically bonded silica chromatographic column, and the volume ratio of acetic acid buffer aqueous solution with pH of 4.85-4.95 to mixed solvent is 1: 0.9-1.1 of the mixed solvent is mobile phase A, and a mixed solvent is mobile phase B, wherein the volume ratio of methanol to acetonitrile is 3: 3.8-4.2, detecting the wavelength of 238-242nm, and performing gradient elution; the invention detects more impurities, and can quickly, effectively and accurately monitor related substances in the amiodarone hydrochloride injection; the invention has good specificity, small detection limit and quantification limit, and good sensitivity; the accuracy of the detection of the related substances of the invention is increased.)
技术领域
本发明涉及化学药物分析方法技术领域，尤其涉及一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法。
背景技术
盐酸胺碘酮(Amiodarone hydrochloride)，化学名为2-丁基-3-苯并呋喃-4-[2-(二乙氨基)乙氧基]-3,5-二碘苯基甲酮盐酸盐，其分子式为C25H29I2NO3·HCl，分子量为681.78，CAS号为19774-82-4，其结构式如下：
盐酸胺碘酮注射液的适应症为当不宜口服给药时，应用本品治疗严重的心律失常，尤其适用于下列情况：房性心律失常伴快速室性心律；W-P-W综合征的心动过速；严重的室性心律失常；体外电除颤无效的室颤相关心脏停搏的心肺复苏。
制药过程中为了保证药物的安全有效，需要对药物原料及其制剂中的有关物质进行研究、检测和监控。由于药品的合成工艺不同，药品的杂质谱也会发生变化；相同合成工艺时，由于制剂对杂质种类、杂质含量的要求与原料药不同，或制剂中所含辅料的不同，也会导致原料药和制剂对所监控的杂质要求不同，因此需要根据不同的合成工艺、制剂种类建立合适的分析方法，达到对盐酸胺碘酮注射液有关物质准确、有效的检测和监控。
发明内容
基本背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法，本发明检出的杂质多，能快速、有效、准确监控盐酸胺碘酮注射液中的有关物质；本发明具有良好的专属性，检测限、定量限均较小，本发明的灵敏度好；增加本发明有关物质检测的准确性。
本发明提出的一种盐酸胺碘酮注射液中有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以pH＝4.85-4.95的乙酸缓冲水溶液和混合溶剂的体积比为1：0.9-1.1为流动相A，以混合溶剂为流动相B，其中，混合溶剂为甲醇和乙腈体积比为3：3.8-4.2的混合溶剂，检测波长为238-242nm，进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱过程为：0-25min内，流动相A和流动相B的体积比从100：0匀速渐变至60：40；25-50min内，流动相A和流动相B的体积比从60：40匀速渐变至0：100；50-60min内，流动相A和流动相B的体积比为0：100；60-60.1min内，流动相A和流动相B的体积比从0：100匀速渐变至100：0；60.1-70min内，流动相A和流动相B的体积比为100：0。
优选地，pH＝4.85-4.95的乙酸缓冲水溶液和混合溶剂的体积可以比为1：0.9、1：0.95、1：1、1：1.05、1：1.1。
优选地，乙酸缓冲水溶液的pH可以为4.85、4.9、4.95。
优选地，混合溶剂中，甲醇和乙腈体积比可以为3：3.8、3：3.9、3：4.0、3：4.1、3：4.2。
优选地，检测波长可以为238、239、240、241、242nm。
优选地，色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。
优选地，乙酸缓冲水溶液中，用氨水调节pH＝4.85-4.95。
优选地，乙酸缓冲水溶液中，冰乙酸的体积分数为0.25-0.35％。
优选地，乙酸缓冲水溶液中，冰乙酸的体积分数可以为0.25％、0.26％、0.27％、0.28％、0.29％、0.3％、0.31％、0.32％、0.33％、0.34％、0.35％。
优选地，色谱柱的型号为Welch AQ-C18。
优选地，流速为0.95-1.05ml/min。
优选地，流速可以为0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05ml/min。
优选地，柱温为33-37℃。
优选地，柱温可以为33、34、35、36、37。
优选地，进样量为20μl。
优选地，所述有关物质为杂质1-杂质8中的至少一种，杂质1-杂质8的结构式如下所示：
本发明的具体步骤为：分别配制空白溶液、系统适用性溶液和供试品溶液、对照溶液并进样，通过加校正因子的主成分自身对照法计算供试品中各杂质的含量。
上述空白溶液为：流动相A。
上述系统适用性溶液为：分别取杂质1-8适量，精密称定，分别用甲醇溶解并定容获得各杂质的贮备液，其中，杂质1-8储备液的浓度依次为0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml；取盐酸胺碘酮注射液适量，加流动相A溶解，再分别取杂质1-8贮备液适量，置同一量瓶中，用流动相A定容，摇匀获得系统适用性溶液，其中，盐酸胺碘酮、杂质1-8的浓度依次为1mg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、16μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml。
上述供试品溶液为：取盐酸胺碘酮注射液10瓶混匀，精密量取适量，用流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀得到供试品溶液。
上述对照溶液为：精密量取上述供试品溶液1ml至200ml量瓶中，用流动相A定容即得。
本发明人通过筛选合适流动相并优化各组分比例，以及筛选合适的其他色谱条件，对盐酸胺碘酮以及上述8个杂质进行色谱分析，确定了本发明分析方法，具体过程如下：
1.发明人选择上述流动相A、流动性B、流速为1.0ml/min，检测波长为240nm，色谱柱为Welch Ultimate AQ-C18(4.6mm×150mm，5μm)，先设置如下梯度，其中，流动相A与流动性B为体积比：
时间(min)
0
20
30
50
50.1
60
流动相A(％)
75
75
30
30
75
75
流动相B(％)
25
25
70
70
25
25
检测系统适用性溶液中各杂质的分离度，结果如图1和表1，
表1杂质分离情况结果
由图1和表1可以看出，杂质3和杂质4不能有效分离，需要进一步优化方法。
2.根据上述筛选结果，发明人调节梯度程序如下：
时间(min)
0
20
30
45
55
55.1
70
A(％)
75
75
30
0
0
75
75
B(％)
25
25
70
100
100
25
25
检测系统适用性溶液中各杂质的分离度，结果如图2和表2，
表2杂质分离情况结果
峰名称
保留时间min
分离度R
杂质1
2.945
--
杂质2
9.533
27.096
杂质3
13.299
--
杂质4
13.817
--
杂质5
19.013
6.528
杂质6
20.784
2.336
杂质7
26.559
9.340
盐酸胺碘酮
29.225
4.177
杂质8
31.925
4.539
未知杂质
41.863
5.602
由图2和表2可以看出，杂质3和杂质4不能有效分离，且杂质1的出峰时间过早，需要进一步优化方法。
3.根据上述筛选结果，发明人调节梯度程序如下：
时间(min)
0
25
50
60
60.1
70
A(％)
100
60
0
0
100
100
B(％)
0
40
100
100
0
0
检测系统适用性溶液中各杂质的分离度，结果如图3和表3，
表3杂质分离情况结果
峰名称
保留时间min
相对保留时间
分离度R
杂质1
3.950
0.13
--
杂质2
15.334
0.52
43.107
杂质3
20.720
0.70
13.272
杂质4
21.526
0.73
1.669
杂质5
25.060
0.85
7.062
杂质6
25.867
0.88
1.697
杂质7
29.404
---
8.023
盐酸胺碘酮
32.562
1.11
4.873
杂质8
35.849
1.22
4.729
未知杂质
47.711
1.47
28.059
由图3和表3可以看出，杂质1在4min左右出峰，峰形良好；杂质3和杂质4之间的分离度为1.669(＞1.5)，各杂质峰之间、胺碘酮主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，各杂质和主峰均能有效分离，检测方法良好，发明人依此分析方法作为盐酸胺碘酮注射液有关物质的分析方法。
本发明人对盐酸胺碘酮和各杂质的检测限、定量限、校正因子进行检测，结果见表4：
表4盐酸胺碘酮和各杂质的检测限、定量限、校正因子结果
峰名称
检测限ng
定量限ng
校正因子
杂质1
0.2
0.4
0.7
杂质2
1.2
4
1.4
杂质3
0.8
2.8
0.9
杂质4
0.8
2.8
1.1
杂质5
0.2
0.4
1.0
杂质6
0.2
0.4
1.0
杂质7
0.4
1.4
0.8
盐酸胺碘酮
0.8
2.4
---
杂质8
0.6
2.2
1.0
由表4可以看出，盐酸胺碘酮和各杂质的检测限和定量限均较小，本发明对各杂质检测灵敏度均较高。
本发明人配制供试品溶液，分别于配制后的0、2、4、7、9和11h进样并记录图谱，统计供试品中盐酸胺碘酮峰面积，计算相对标准偏差RSD为0.001％，各时间点无新增杂质，结果表明，供试品溶液在11h内稳定。
本发明人取盐酸胺碘酮注射液配制供试品溶液，进样并记录图谱，按面积归一化法计算供试品中杂质1-8的含量，结果见表5和图4。
表5盐酸胺碘酮注射液中各杂质的含量测定结果
由表5和图4可以看出，盐酸胺碘酮注射液供试品中检出0.020％的杂质1、0.012％的杂质2、0.029％的杂质4、0.024％的杂质5，杂质3、杂质6、杂质7和杂质8均未检出。
本发明检出的杂质多，能快速、有效、准确监控盐酸胺碘酮注射液中的有关物质；本发明具有良好的专属性，各杂质峰之间、胺碘酮主成分峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，胺碘酮主峰的理论板数大于7000，杂质峰和主峰可以有效分离；本发明检测限、定量限均较小，本发明的灵敏度好；增加本发明有关物质检测的准确性。
附图说明
图1为本发明条件摸索结果图。
图2为本发明条件摸索结果图。
图3为本发明峰定位结果图。
图4为本发明供试品检测结果图。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
高效液相色谱条件：
色谱柱为Welch Ultimate AQ-C18(4.6mm×150mm，5μm)，以乙酸缓冲水溶液和混合溶剂的体积比为1：1为流动相A，以混合溶剂为流动相B，其中，混合溶剂为甲醇和乙腈体积比为3：4的混合溶剂，乙酸缓冲水溶液的配制方法为：取冰醋酸3.0ml，加水800ml，用氨水调pH＝4.9，加水至1000ml；
检测波长为240nm，流速为1.0ml/min，柱温为35℃，进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱过程为：0-25min内，流动相A和流动相B的体积比从100：0匀速渐变至60：40；25-50min内，流动相A和流动相B的体积比从60：40匀速渐变至0：100；50-60min内，流动相A和流动相B的体积比为0：100；60-60.1min内，流动相A和流动相B的体积比从0：100匀速渐变至100：0；60.1-70min内，流动相A和流动相B的体积比为100：0。
样品配制：
空白溶液为：流动相A。
系统适用性溶液为：分别取杂质1-8适量，精密称定，分别用甲醇溶解并定容获得各杂质的贮备液，其中，杂质1-8储备液的浓度依次为0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml、0.2mg/ml；取盐酸胺碘酮注射液适量，加流动相A溶解，再分别取杂质1-8贮备液适量，置同一量瓶中，用流动相A定容，摇匀获得系统适用性溶液，其中，盐酸胺碘酮、杂质1-8的浓度依次为1mg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、16μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml。
供试品溶液为：取盐酸胺碘酮注射液10瓶混匀，精密量取适量，用流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀得到供试品溶液。
对照溶液为：精密量取上述供试品溶液1ml至200ml量瓶中，用流动相A定容即得。
试验操作：取空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液各20μl进样，记录色谱图。
典型色谱图见图4。
实施例2
高效液相色谱条件：
色谱柱为Welch Ultimate AQ-C18(4.6mm×150mm，5μm)，以乙酸缓冲水溶液和混合溶剂的体积比为1：0.9为流动相A，以混合溶剂为流动相B，其中，混合溶剂为甲醇和乙腈体积比为3：4.2的混合溶剂，乙酸缓冲水溶液的配制方法为：取冰醋酸2.5ml，加水800ml，用氨水调pH＝4.85，加水至1000ml；
检测波长为242nm，流速为0.95ml/min，柱温为37℃，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程同实施例1。
样品配制同实施例1。
试验操作：取空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液各20μl进样，记录色谱图。
实施例3
高效液相色谱条件：
色谱柱为Welch Ultimate AQ-C18(4.6mm×150mm，5μm)，以乙酸缓冲水溶液和混合溶剂的体积比为1：1.1为流动相A，以混合溶剂为流动相B，其中，混合溶剂为甲醇和乙腈体积比为3：3.8的混合溶剂，乙酸缓冲水溶液的配制方法为：取冰醋酸3.5ml，加水800ml，用氨水调pH＝4.95，加水至1000ml；
检测波长为238nm，流速为1.05ml/min，柱温为33℃，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程同实施例1。
样品配制同实施例1。
试验操作：取空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液各20μl进样，记录色谱图。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。