阅读说明：本技术 用于治疗癌症的组合物和方法 (Compositions and methods for treating cancer ) 是由 希纳尼特·科尔泰 约拉姆·卡普尔尼克 德沃拉·南达尔 莫兰·马祖兹 伊多·莱什 蒂姆娜·纳 于 2018-03-05 设计创作，主要内容包括：提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法。所述方法包括：对所述受试者施用一大麻提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量,所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢大麻酚酸,以及一大麻提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量,所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％大麻萜酚酸,其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢大麻酚酸之外的大麻衍生的多个活性成分,并且所述第二液相色谱馏分包括除所述大麻萜酚酸之外的大麻衍生的多个活性成分,从而治疗所述受试者中的恶性疾病。(A method of treating a malignant disease in a subject in need thereof is provided. The method comprises the following steps: administering to the subject a therapeutically effective amount of a first liquid chromatography fraction of a cannabis extract, the therapeutically effective amount of the first liquid chromatography fraction comprising at least 75% tetrahydrocannabinolic acid, and a therapeutically effective amount of a second liquid chromatography fraction of a cannabis extract, the therapeutically effective amount of the second liquid chromatography fraction comprising at least 75% cannabigerolic acid, wherein the first liquid chromatography fraction comprises cannabis derived active ingredients other than the tetrahydrocannabinolic acid, and the second liquid chromatography fraction comprises cannabis derived active ingredients other than the cannabigerolic acid, thereby treating a malignant disease in the subject.)

用于治疗癌症的组合物和方法

技术领域与背景技术

在本发明的一些实施例中，本发明涉及用于治疗癌性疾病的多种组合物和多种方法。

癌症是继冠心病(coronary disease)之后人类死亡的第二大原因。全世界每年有数百万人死于癌症。虽然心脏病死亡人数显著下降，但癌症引起的死亡人数却普遍上升。尽管在癌症研究上花费了数十亿美元，但尚未开发出完整有效的治疗方法。部分原因是肿瘤细胞由多种细胞类型组成，当细胞增殖并产生不同的突变时产生多种细胞类型。与其他细胞相比，抗药性癌细胞提供了强大的选择性优势，并且随着时间的推移，这些抗性细胞的频率增加。因此，有效的癌症治疗将得益于早期攻击癌症以及积极攻击癌症。

尽管由于筛查和预防性结肠镜检查的进步，结肠直肠癌(Colorectal cancer,CRC)导致的死亡率有所降低，但它仍然是全球第三大常见癌症诊断和癌症相关死亡的第四大原因。CRC是一种异质性疾病(heterogeneous disease)，其在临床表现上、分子特征上和预后上有所差异。一系列组织病理学和分子学变化导致正常的结肠上皮细胞形成异常的隐窝灶(aberrant crypt foci)和息肉(polyps)，其可进一步转化为结肠直肠癌，并且腺瘤性息肉是CRC的良好的建立前体(precursor)。除息肉切除术外，使用天然或合成药物进行化学预防是一级预防的另一基石。由于CRC的自然史是旷日持久的，临床试验主要集中于预防腺瘤(adenomas)，腺瘤是一种上皮内瘤的一形式并且是癌的前体。

***(marijuana,Cannabis sativa)含有500多种成分，其中有超过一百种被称为植物性***素(phytocannabinoids)的萜烯酚化合物(terpenophenolic compounds)[ElSohl等人所著，植物化学的***植物化学家Phytochemistry of Cannabis sativaL.Phytocannabinoids,Spri纳克er(2017)1-36。越来越多的研究表明植物性***素可以预防多种癌细胞类型的增殖、转移、血管生成和诱导细胞凋亡，包括乳腺癌、肺癌、***癌、皮肤癌、肠癌、神经胶质瘤等。这是由于它们能够调节对细胞生长和生存至关重要的信号传导途径[Javid等人所住，欧洲药理学杂志European journal of pharmacology(2016)775：1-14]。在CRC细胞中，四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)的治疗是以一CB1依赖性方式，诱导细胞凋亡并抑制各种生存信号级联反应(cascade)，同时激活促凋亡BCL-2家族成员BAD(pro-apoptotic BCL-2family member BAD)[Greenhough等人所著，国际癌症杂志International journal of cancer(2007)121(10):2172-2180]。***二酚(cannabidiol，CBD)减少结肠癌细胞系中的细胞增殖。在动物模型中，其减少异常隐的窝病灶(aberrant crypt foci,ACF，肿瘤前病变preneoplastic lesions)、息肉和肿瘤形成，并抵消了结肠癌诱导的基因表达变化[Aviello等，Journal of molecular medicine(2012)90(8)：925-934]。此外，显示富含CBD的***提取物抑制结肠直肠癌细胞增殖并减少结肠癌发生。所述活性涉及CB1和CB2的受体活化[Romano等人所著，植物要学Phytomedicine(2014)21(5)：631-639]。***萜酚(cannabigerol,CBG)促进细胞凋亡，刺激ROS产生并减少CRC细胞的细胞生长。在体内CBG抑制化学诱导的结肠癌变和异种移植(xenograft)肿瘤的生长[Borrelli等人所著，癌变Carcinogenesis(2014)35(12)：2787-2797]。此外与一分离的化合物相比，花序的未精制成分似乎具有优势[Russo所著，英国药理学杂志Britishjournal of pharmacology(2011)163(7)：1344-1364；Ben-Shabat等人所著，欧洲药理学杂志European journal of pharmacology(1998)353(1)：23-31]。

其他背景技术包括：美国专利申请20160106705、20100249223、20130059018、20140221469。

www.theleafonline.com/c/science/2014/07/cannabinoid-profile-crash-course-thca/

发明内容

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括：对所述受试者施用一***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，以及一***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***萜酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括：对所述受试者施用一***提取物的一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及20％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述液相色谱馏分包括除所述***环萜酚和所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括：对所述受试者施用一***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，以及一***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及至少20％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***环萜酚以及所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量以及一种***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％***萜酚酸(cannabigerolicacid，CBGA)，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***萜酚酸之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种***提取物的一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及至少20％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述液相色谱馏分包括除所述***环萜酚以及所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***萜酚酸之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量以及一种***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及20％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***环萜酚以及所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括：对所述受试者施用***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸以及***萜酚酸，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括***环萜酚以及四氢***酚酸，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸以及***萜酚酸，从而治疗一受试者的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，其特征在于：所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括可被在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括***环萜酚以及四氢***酚酸，从而治疗有需要的一受试者的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括四氢***酚酸以及***萜酚酸，其中所述组合物不含***环萜酚(Cannabichromene，CBC)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)和/或***二酚(cannabidiol，CBD)中的至少一者，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，其特征在于：所述方法包括对所述受试者施用一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括***环萜酚以及四氢***酚酸，其中所述组合物不含***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***环萜酚酸(cannabichromenic acid，CBCA)、***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)中的至少一者，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物的一治疗有效量，所述组合物的一治疗有效量包括四氢***酚酸以及***萜酚酸，其中所述组合物不含***环萜酚(Cannabichromene，CBC)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)和/或***二酚(cannabidiol，CBD)中的至少一者，从而治疗有需要的一受试者的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物的一治疗有效量，所述组合物的一治疗有效量包括***环萜酚以及四氢***酚酸，其中所述组合物不含***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***环萜酚酸(cannabichromenic acid，CBCA)、***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)(CBGA)中的至少一者，从而治疗有需要的一受试者的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括一***提取物的液相色谱合并馏分，所述***提取物的液相色谱合并馏分包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，所述多个活性成分包括***萜酚酸。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，所述***提取物的多个液相色谱合并馏分包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，所述多个活性成分包括***环萜酚以及四氢***酚酸。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，所述***提取物的多个液相色谱合并馏分包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，所述多个活性成分包括***环萜酚和四氢***酚酸，所述组合物的特征在于对癌细胞具有一细胞毒活性。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包含四氢***酚酸和***萜酚酸的，其中所述组合物不含***环萜酚(Cannabichromene，CBC)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)和/或***二酚(cannabidiol，CBD)中的至少一者。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，其特征在于：所述组合物包含***环萜酚和四氢***酚酸，其中所述组合物不含***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***环萜酚酸(cannabichromenic acid，CBCA)、***萜酚酸(cannabigerolicacid，CBGA)中的至少一者。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用本发明的一些实施例的所述组合物的一治疗有效量，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供本发明的一些实施例的所述组合物的一治疗有效量，所述治疗有效量用于治疗有需要的一受试者的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种产生一细胞毒活性组合物的方法，所述方法包括：(1)对一干燥的***花序中加入一极性溶剂，以获得一粗提取物；(2)过滤所述粗提取物，以获得一过滤的提取物；(3)在一高压液相色谱上分馏所述过滤的提取物；(4)收集多个馏分，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，并且包括一组分，所述组分选自由以下所组成的一群组：(a)***萜酚酸；和(b)***环萜酚以及四氢***酚酸。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种细胞毒活性组合物，所述细胞毒活性组合物可通过本发明的一些实施例的所述方法获得。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用本发明的一些实施例的组合物的一治疗有效量，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供本发明的一些实施例的所述组合物的一治疗有效量，用于治疗有需要的一受试者的一恶性疾病。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种测定本发明的一些实施例的所述组合物的一细胞毒活性的方法，其中所述方法包括使一受试者的一恶性组织与所述组合物离体接触，其中所述恶性组织的细胞中细胞死亡的增加高于一预定阈值，表示所述组合物的细胞毒活性。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种测定本发明的一些实施例的所述组合物的一细胞毒活性的方法，其中所述方法包括使一受试者的一恶性组织与所述组合物离体接触，其中所述恶性组织的细胞中细胞增生的降低低于一预定阈值，表示所述组合物的细胞毒活性。

根据本发明的一些实施例，所述***环萜酚与所述四氢***酚酸的比率为1：1。

根据本发明的一些实施例，所述***环萜酚与所述四氢***酚酸比率高于1：1。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包含***萜酚酸作为一活性成分。

根据本发明的一些实施例，所述组合物中所述活性成分包括至少75％***萜酚酸。根据本发明的一些实施例，所述组合物包括***环萜酚和四氢***酚酸作为一活性成分。

根据本发明的一些实施例，所述***环萜酚和所述四氢***酚酸比率为1：1。

根据本发明的一些实施例，所述***环萜酚和所述四氢***酚酸比率高于1：1。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸和/或***酚中的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸和/或***酚。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括表2中所列出多个组分的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸(Cystine)中的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括姜黄酮和胱氨酸。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包含四氢***酚酸作为一活性成分。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚中(cannabigerol,CBG)的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚中(cannabigerol，CBG)。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括表3中所列出多个组分的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物的特征在于对癌细胞具有细胞毒活性。

根据本发明的一些实施例，：所述四氢***酚酸包含具有一细胞毒活性的一合成的四氢***酚酸或其类似物。

根据本发明的一些实施例，所述四氢***酚酸包括一***提取物的一液相色谱馏分，所述馏分包含至少75％四氢***酚酸，其中所述馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分。

根据本发明的一些实施例，所述***提取物包含至少约80至95％四氢***酚酸。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚中(cannabigerol,CBG)的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚中(cannabigerol，CBG)的至少二者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包含表3中所列出的多个组分。

根据本发明的一些实施例，所述***萜酚酸包括具有一细胞毒活性的一合成的***萜酚酸或其类似物。

根据本发明的一些实施例，所述***萜酚酸包括一***提取物的一液相色谱馏分，所述馏分包括至少75％***萜酚酸，其中所述馏分包括除所述***萜酚酸之外的***衍生的多个活性成分。

根据本发明的一些实施例，所述***提取物包括至少约80至95％的***萜酚酸。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸和/或***酚中的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸和/或***酚。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括表2中所列出多个组分的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述***环萜酚包括具有一细胞毒活性的一合成的***环萜酚或其类似物。

根据本发明的一些实施例，所述***环萜酚和所述四氢***酚酸包括一***提取物的一液相色谱馏分，所述馏分包含至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)和至少20％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述馏分包括除所述***环萜酚和所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分。

根据本发明的一些实施例，所述***提取物包括至少约20至35％的***环萜酚。

根据本发明的一些实施例，所述***提取物包括至少约20至35％的四氢***酚酸。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括姜黄酮和/或胱氨酸之中的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述组合物包括姜黄酮和胱氨酸。

根据本发明的一些实施例，所述提取物是一新鲜提取物。

根据本发明的一些实施例，所述提取物是一乙醇提取物。

根据本发明的一些实施例，所述液相色谱包括高压液相色谱。

根据本发明的一些实施例，在一相反的固定相上执行所述液相色谱。

根据本发明的一些实施例，使用包括10至30％酸性水溶液和90至70％醇的一流动相执行所述液相色谱。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续28至35分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续28至35分钟。

根据本发明的一些实施例，所述检测器是一二极管阵列检测器。

根据本发明的一些实施例，所述恶性疾病是一实体瘤或一恶性血液病。

根据本发明的一些实施例，所述实体瘤选自以下所组成的一群组：肠癌(intestinal cancer)、神经胶质瘤(glioma)、乳腺癌(breast cancer)、肺癌、***癌、皮肤癌、肾癌、卵巢癌、头部和颈部癌(head and neck cancer)、纤维瘤(fibrosarcoma)、子***(uterine cervix cancer)、食道癌、直肠癌、口腔癌、肝癌和胰腺癌。

根据本发明的一些实施例，所述受试者是一人类受试者。

根据本发明的一些实施例，所述馏分包括至少约75％的***萜酚酸。

根据本发明的一些实施例，所述馏分包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸和/或***酚中的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述馏分包括表2中所列出多个组分的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述馏分包括至少约20％的***环萜酚。

根据本发明的一些实施例，所述级分包括至少20％的四氢***酚酸。

根据本发明的一些实施例，所述多个馏分包括姜黄酮和/或胱氨酸中的至少一者。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟。

根据本发明的一些实施例，所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟。

根据本发明的一些实施例，所述检测器是一二极管阵列检测器。

根据本发明的一些实施例，所述恶性组织是一癌组织活组检体。

除非另有定义，否则所有本文使用的技术和/或科学术语与本发明所属领域的通常技术人员所理解的具有相同含义。尽管与本文所描述的类似或相同的方法或材料可以用于实践或测试本发明的实施例，但是仍将示例性的方法和/或材料描述如下。在冲突的情况下，以专利说明书所包含的定义为主。此外材料、方法和实施例仅是用于说明，而非旨在必然性地限制各自实施例。

附图说明

本发明的一些实施例在本文中仅以示例性的方式描述，并参考附图。现在具体详细地参照附图，重要的是其所显示的细节是通过示例的方式，用于说明及讨论本发明的实施例。在这点上，描述并结合附图使得本领域技术人员能够明了本发明的实施例如何被实施。

在图式中：

图1A至图1D描绘C.sativa乙醇提取物对HCT116结肠癌细胞和CCD18结肠健康细胞的生存力的剂量-效应曲线。新鲜花序(C2F)(图1A；IC₅₀＝83.9微克/毫升)和加热的花序(C2B)(图1B；IC₅₀＝84.1微克/毫升)的C.sativa乙醇提取物对HCT116结肠癌细胞的生存力以及C2F(图1C；IC₅₀＝144.2微克/毫升)和C2B(图1D；IC₅₀＝54.6微克/毫升)对CCD18结肠健康细胞的生存力的剂量-效应曲线。通过Alamar Blue荧光(刃天青分析Resazurin assay)测定细胞生存力。将HCT116和CCD18细胞在500微升的生长培养基中以三重复方式接种(每孔50,000个)，并在37℃潮湿的5％CO₂-95％空气环境下孵育24小时。将细胞用不同稀释度的C2F、C2B以及50纳克/毫升TNF-α处理16小时。接着将细胞与Alamar Blue一起温育4小时。在544/590纳米的激发/发射下测量相对荧光。在减少无细胞的Alamar Blue的自发荧光(n＝3)后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。对于剂量反应测定，数据点通过S形的剂量-反应关系的非线性回归线连接。GraphPad Prism用于产生C2F和C2B的剂量-反应曲线和IC₅₀剂量。

图2A至图2B描绘C.sativa乙醇提取物的HPLC色谱图。新鲜***提取物(图2B，C2F，0.1毫克/毫升)和烘烤过(即在150℃下烘烤3小时的鲜花，图2A)的***提取物(C2B，0.1毫克/毫升)的色谱图，所述***提取物是从等度洗脱(isocratic elution)获得，以含有0.1％乙酸(溶剂A)和85％MeOH(溶剂B)的15％水的混合物，在220纳米下总运行时间为35分钟。以0.58毫克/毫升的浓度注射体积20微升的C2B样品，以0.33毫克/毫升注射20微升体积的C2F样品。

图3A描绘C.sativa乙醇提取物的馏分的HPLC图谱。以含有0.1％乙酸(溶剂A)和85％MeOH(溶剂B)的15％水的混合物等度洗脱得到HPLC曲线，在220纳米下总运行时间为40分钟。以每次循环以0.1毫克粗干燥提取物/每毫升的浓度注射50微升体积的样品。每2分钟收集一次馏分。F1-F9代表九个馏分，其被分离成多个峰值。

图3B描绘HCT116细胞生存力的测定，使用Alamar Blue荧光(刃天青分析Resazurin assay)作为活细胞数的一函数。将HCT116细胞在500微升的生长培养基中以三重复方式接种(每孔50,000个)，并在37℃潮湿的5％CO₂-95％空气环境下孵育24小时。用300纳克/毫升的TNF-α和50微升的C2F或馏分的C.ativa乙醇提取物处理细胞4小时。未处里的是指没有TNF-α和没有处里的细胞。接着将细胞与Alamar Blue一起温育2小时。在544/590纳米的激发/发射下测量相对荧光。在减少无细胞的Alamar Blue的自发荧光(n＝3)后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SE(n＝3)。*、***表示与对照组(TNF-α处理的细胞)相比统计学上显著不同的数据，分别为p≤0.01和p≤0.0001。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。

图3C描绘HCT116细胞生存力的测定，使用Alamar Blue荧光(刃天青分析Resazurin assay)作为活细胞数的一函数。将HCT116细胞在500微升的生长培养基中以三重复方式接种(每孔50,000个)，并在37℃潮湿的5％CO₂-95％空气环境下孵育24小时。用300纳克/毫升的TNF-α和50微升的C2F的C.ativa乙醇提取物或多个馏分处理细胞4小时。未处里的是指没有TNF-α和没有处里的细胞。接着将细胞与Alamar Blue一起温育2小时。在544/590纳米的激发/发射下测量相对荧光。在减少无细胞的Alamar Blue的自发荧光(n＝3)后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SE(n＝3)。*、***表示与对照组(TNF-α处理的细胞)相比统计学上显著不同的数据，分别为p≤0.01和p≤0.0001。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。

图4描绘C2F、F7和THCA的HPLC图谱。THCA标准品在40ppm(标记为蓝色)，整个C.sativa提取物在0.1mg/毫升(标记为绿色)，F7在0.04mg/毫升(标记为红色)的色谱图。所有样品均以20μL的体积注射，并从含有0.1％乙酸(溶剂A)和85％MeOH(溶剂B)的15％水的混合物中等度洗脱而获得，在220纳米下总运行时间为40分钟。

图5A至图5B描绘不同组合的C.sativa C2F和HPLC-馏分(F1至F9)对HCT116细胞生存力的影响。(图5A)使用XTT分析作为活细胞数的一函数，测定HCT116细胞生存力。接种细胞并用C.sativa乙醇提取物(C2F)、F1至F9-不包括F7(C2F的HPLC馏分)和馏分F1至F9-包括F7(C2F的HPLC馏分，以C2F粗原料的IC₅₀剂量(58微克/毫升)，并且F至F9稀释为C2F粗原料)，以及50纳克/毫升TNF-α来处理48小时。接着将所述细胞与XTT试剂一起温育2小时。在490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。(图5B)C2F馏分7(F7)与馏分2(F2)和馏分3(F3)的组合对HCT116细胞生存力的测定，使用XXT分析作为活细胞数的一函数。使用XTT分析作为活细胞数的函数，测定C2F馏分7(F7)与馏分2(F2)和馏分3(F3)组合对HCT116细胞生存力的协同作用。接种细胞并使用IC₅₀剂量的F2(7微克/毫升)、F3(36微克/毫升)、F7(20微克/毫升)、F2与F3、F7与F2和F7与F3的组合以及50纳克/毫升的TNF-α处理持续48小时。在490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SE(n＝3)。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。

图6A至图6B描绘C.sativa F1和F3对HT29(图6A)细胞和CaCO2(图6B)细胞生存力的影响。使用XTT分析作为活细胞数的函数，测定细胞生存力。接种细胞并使用IC₅₀剂量的F3(36微克/毫升)、F7(20微克/毫升)与F7与F3的组合以及50纳克/毫升的TNF-α来处理持续48小时。接着将所述细胞与XTT试剂一起温育2小时。在490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SE(n＝3)。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。

图6C描绘C.sativa C2F、C2B、CBD和活性馏分组合对CCD18健康结肠细胞生存力的影响。使用Alamar Blue荧光(刃天青分析Resazurin assay)作为活细胞数的一函数，测定CCD18细胞生存力。接种细胞并使用新鲜花序(C2F,200微克/毫升)、加热过的花序(C2B,200微克/毫升)的C.sativa乙醇提取物、纯***二酚(cannabidiol,CBD,8微克/毫升)、F7(120微克/毫升)、F2(120微克/毫升)、F2(120微克/毫升)、F7与F2和F3的组合以及50纳克/毫升TNF-α来处理16小时。接着将所述细胞与Alamar Blue一起温育4小时。在544/590纳米的激发/发射下测量相对荧光。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SE(n＝3)。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。

图7A至图7C描绘C2F馏分7(F7)和馏分3(F3)的组合中的协同效应，以及THCA和CBGA之间的相互作用。(图7A)F3-不包括F7(IC₅₀＝36.47微克/毫升)和F3-包括F7(IC₅₀＝10.79微克/毫升)对HCT116结肠癌细胞的生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并使用不同浓度的F3(3微克/毫升至160微克/毫升)-包括和不包括IC₅₀剂量的F7(20微克/毫升)以及50纳克/毫升的TNF-α来处理48小时。接着将所述细胞与XTT试剂一起温育2小时。在490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。(图7B)F7-包括F3(IC₅₀＝21.7微克/毫升)和F7-包括F3(IC₅₀＝1.88微克/毫升)对HCT116结肠癌细胞的生存率的剂量-效应曲线。接种细胞并使用不同浓度的F7(7.9微克/毫升至380微克/毫升)-包括和不包括IC₅₀剂量的F3(36微克/毫升)以及50纳克/毫升的TNF-α来处理48小时。接下着如图7A所述，将细胞与XTT试剂一起温育。对于剂量反应测定，数据点通过S形的剂量-反应关系的非线性回归线连接。GraphPad Prism用于产生C2F和C2B的剂量-反应曲线和IC₅₀剂量。(图7C)多个标准物的组合(THCA和CBGA)的协同作用计算。上表中，THCA浓度恒定为13.14微克/毫升，CBGA浓度不同(6.67微克/毫升至53.3微克/毫升)。用红色标记的浓度显示多个标准物之间的协同作用，如通过对HCT116细胞的XTT分析所决定。下表中，CBGA浓度恒定为28微克/毫升，THCA不同浓度(4微克/毫升-50微克/毫升)。用红色标记的浓度显示多个标准物之间的协同作用，如如通过对HCT116细胞的XTT分析所决定。

图7D至图7E描绘馏分3(F3)和馏分7(F7)的IC₅₀剂量的测定。(图7D)F3对HCT116结肠癌细胞生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并使用不同浓度的F3(3微克/毫升至160微克/毫升)以及50纳克/毫升的TNF-α来处理48小时。接着将细胞与XTT试剂一起温育2小时。在490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。对于剂量反应测定，数据点通过S形的剂量-反应关系的非线性回归线连接。GraphPad Prism用于产生C2F和C2B的剂量-反应曲线和IC₅₀剂量。(图7E)F7对HCT116结肠癌细胞生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并使用不同浓度的F7(7.9微克/毫升至380微克/毫升)以及50纳克/毫升TNF-α来处理48小时。接着将细胞与XTT试剂一起温育2小时。在490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。对于剂量反应测定，数据点通过S形的剂量-反应关系的非线性回归线连接。GraphPad Prism用于产生C2F和C2B的剂量-反应曲线和IC₅₀剂量。。

图8A至图8D描绘通过细胞凋亡(apoptosis)或坏死(necrosis)测定馏分7(F7)、馏分3(F3)和F7与F3的组合的细胞毒活性作用。用F7(20微克/毫升)、F3(36微克/毫升)、F7与F3的组合和溶剂对照组(甲醇)以及TNF-α(50纳克/毫升)处理HCT116细胞24小时(图8A、图8B)和48小时(图8C、图8D)。收集处理过的细胞，并在膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)和PI染色后以FACS分析。从每次处理中的10000个事件来分析活的、坏死的、早期和晚期凋亡的细胞百分比。

图9描绘通过馏分7(F7)、馏分3(F3)和F7与F3的组合测定细胞周期停滞。饥饿的HCT116细胞用F7(20微克/毫升)、F3(36微克/毫升)、F7与F3的组合和溶剂对照组(甲醇)以及TNF-α(50纳克/毫升)处理24小时。收集处理的细胞，固定并在PI染色后以FACS分析。从每次处理的10000个事件分析Sub-G0、G0/G1、S和G2/M期的细胞百分比。

图10A至图10B描绘在被F7与F3的组合处理的HCT116细胞中差异表达的基因的分级聚类(hierarchical clusteri纳克)和文氏图(Venn diagram)。(图10A)根据在log2转换之后的基因表达，4种条件之间的分级聚类和Pearson相关性。红色和绿色分别代表正相关和负相关。以R软件计算Pearson相关性。(图10B)文氏图显示三种处理相对于对照组的显著表达的基因之间的关系。

图11A至图11B描绘在被F7与F3的组合处理的HCT116细胞中差异表达的基因的遗传途径。Wnt基因(图11A)和凋亡(图11B)信号传导途径是根据(www(dot)genome(dot)jp/kegg/)。绿色框-显著向上调节的基因；红色框-显著向下调节调的基因。值得注意的是，这些图是来自KEGG(www(dot)genome(dot)jp/kegg/)。

图12A至图12C描绘使用Alamar Blue荧光(刃天青测定Resazurin assay)作为细胞毒活性作用的函数，测定HCT116细胞生存力。将HCT116和CCD18细胞在500微升的生长培养基中以三重复方式接种(每孔50,000个)，并在37℃潮湿的5％CO₂-95％空气环境下孵育24小时。未处里的是指没有TNF-α和没有处里的细胞。在544/590纳米的激发/发射下测量相对荧光。在减少无细胞的Alamar Blue的自发荧光(n＝3)后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SEM(n＝3)。*、**、***表示与对照组(TNF-α处理的细胞)相比统计学上显著不同的数据，分别为p≤0.05、p≤0.001和p≤0.0001。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。

图12D描绘使用Alamar Blue荧光(刃天青测定Resazurin assay)作为细胞毒活性作用的函数，测定HCT116细胞生存力。将HCT116细胞在500微升的生长培养基中以三重复方式接种(每孔50,000个)，并在37℃潮湿的5％CO₂-95％空气环境下孵育24小时。以300纳克/毫升TNF-α和50μL的C2F馏分的C.sativa乙醇提取物来处理细胞4小时。以F7、F1至F9和不含拮抗剂的多个馏分的组合的处理作为阳性对照组(Con)。接着将细胞与Alamar Blue一起温育4小时。在544/590纳米的激发/发射下测量相对荧光。在减少无细胞的Alamar Blue的自发荧光(n＝3)后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。误差条(error bar)表示SE(n＝3)。*、***表示与对照组(TNF-α处理的细胞)相比统计学上显著不同的数据，分别为p≤0.01和p≤0.0001。不同字母的级别表示与Tukey的HSD的所有组合显著不同。CB1为***素受体1型；；CB2为***素受体2型。

图13A至图13B描绘对MDA-MB-231乳腺癌细胞，F7的(图13A)IC₅₀-包括和不包括F3，和F3(图13B)的IC₅₀-包括和不包括F7。(图13A)F3-不包括F7(IC₅₀＝36.47微克/毫升)，和F3-包括F7(F50＝10.79微克/毫升)对MDA-MB-231乳腺癌细胞生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并用不同浓度的F3(3微克/毫升至160微克/毫升)-包括和不包括F7(20微克/毫升)的IC50剂量以及50纳克/毫升的TNF-α来处理48小时。接着将所述细胞与XTT试剂一起温育2小时。490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。(图13B)F7-不包括F3(IC₅₀＝21.7微克/毫升)，和F7-包括F3(F50＝1.88微克/毫升)对MDA-MB-231乳腺癌细胞生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并用不同浓度的73(7.9微克/毫升至3800微克/毫升)-包括和不包括F7(36微克/毫升)的IC₅₀剂量以及50纳克/毫升的TNF-α处理48小时。然后如(图13A)所述将细胞与XTT试剂一起温育对于剂量反应测定，数据点通过S形的剂量-反应关系的非线性回归线连接。GraphPad Prism用于产生C2F和C2B的剂量-反应曲线和IC₅₀剂量。

图14A至图14B描绘对A172神经胶质瘤细胞，F7的(图14A)IC50-包括和不包括F3，和F3(图14B)的IC₅₀-包括和不包括F7。(图14A)F3-不包括F7(IC₅₀＝36.47微克/毫升)，和F3-包括F7(F50＝10.79微克/毫升)对MDA-MB-231乳腺癌细胞生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并用不同浓度的F3(3微克/毫升至160微克/毫升)-包括和不包括F7(20微克/毫升)的IC₅₀剂量以及50纳克/毫升的TNF-α处理48小时。接着将所述细胞与XTT试剂一起温育2小时。490纳米与参考波长650纳米处，记录吸光度。在减少没有细胞的吸光度后，将多个值计算为活细胞相对于未处理的细胞对照组(没有TNF-α和处理的细胞)的百分比。(图14B)F7-不包括F3(IC₅₀＝21.7微克/毫升)，和F7-包括F3(F50＝1.88微克/毫升)对A172神经胶质瘤癌细胞生存力的剂量-效应曲线。接种细胞并用不同浓度的73(7.9微克/毫升至3800微克/毫升)-包括和不包括F7(36微克/毫升)的IC₅₀剂量以及50纳克/毫升的TNF-α处理48小时。然后如(图14A)所述将细胞与XTT试剂一起温育对于剂量反应测定，数据点通过S形的剂量-反应关系的非线性回归线连接。GraphPad Prism用于产生C2F和C2B的剂量-反应曲线和IC₅₀剂量。

具体实施方式

在本发明的一些实施例中，本发明涉及用于治疗癌性疾病的组合物和方法。

在详细解释本发明的至少一实施例之前，应理解本发明不一定限于其应用于以下描述中阐述的细节或通过实施例举例说明的细节。本发明能够具有其他实施例或以各种方式实践或实施。

结直肠癌(CRC)是全球第三大常见癌症诊断和癌症相关死亡的第四大原因。***(Cannabis sativa)的不同制剂已经显示出对多种癌细胞类型中的增殖、转移、血管生成和诱导凋亡具有有益作用。然而，C.sativa提取物含有数百种化合物。积累的知识表明四氢***酚(Δ9-tetrahydro-cannabinol，THC)、***二酚(cannabidiol，CBD)和***酚(cannabigerol，CBG)以及受体激动剂或拮抗剂的益处，但是***提取物中可能具有抗癌活性的其他化合物。

本发明人现已发现***花序提取物的液相色谱馏分作为细胞毒活性剂是有效的，并且可以有效地根除癌细胞。在结直肠癌、乳腺癌和神经胶质瘤细胞和腺瘤性息肉上测试了C.sativa花序提取物和从其获得的馏分的细胞毒活性。

具体地，本发明人获得新鲜***花极性提取物，对癌细胞显示出特异性细胞毒活性(以下实施例部分的实施例1)。将这些提取物进一步分成几个不同的馏分，在这些馏分中说明特定细胞毒活性，即馏分F2、F3和F7。馏分F7显示包含超过80％的THCA(下面的实施例部分中的表3)，显示馏分F3包含超过80％的CBGA(下面的实施例部分中的表2)，并且显示馏分F2包含约20％CBC和约20％THCA(数据未显示)。对于馏分F2观察到显著的细胞毒活性(参见下文实施例部分的图5B和实施例7)。此外虽然馏分F7和F3在所检测的测定中仅显示出较小的细胞毒活性(参见下文实施例部分的实施例3和9)，但当将组分F7和F3或F7和F2组合处理时，在不同的癌细胞类型中显示出协同活性(参见下面实施例部分的实施例7-8和14)。相互作用化合物的细胞毒活性诱导细胞周期停滞和细胞凋亡(参见下面实施例部分的实施例9-10)。此外，馏分F7的作用可能是通过CB2受体所介导的(参见下面实施例部分的实施例13)。

总之本发明人提出这些***提取物可用作抗癌治疗剂：

因此根据本发明的一方面，提供一种产生一细胞毒活性组合物的方法，其特征在于：所述方法包括：(1)对一干燥的***花序中加入一极性溶剂，以获得一粗提取物；(2)过滤所述粗提取物，以获得一过滤的提取物；(3)在一高压液相色谱上分馏所述过滤的提取物；(4)收集多个馏分，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，并且包括一组分，所述组分选自由以下所组成的一群组：(a)***萜酚酸；和(b)***环萜酚以及四氢***酚酸。

***(Cannabis)是***科(Cannabaceae)中的开花植物属，包括三种不同的物种Cannabis sativa、Cannabis indica以及Cannabis ruderalis。术语“***(Cannabis)”包括野生型***及其变体，包括天然含有不同量的各别的***素(cannabinoids)的***化学物。例如一些***品系被选择性繁殖以产生高水平或低水平的THC和其他***素。因此，根据本教示可以使用富含THCA、CBGA和/或CBC的***栽植物。

根据一个实施例，所述***植物是野生型植物。

根据一个实施例，所述***植物是转基因植物。

根据一个实施例，所述***植物是基因组编辑的植物。

根据一个实施例，所述***植物是C.sativa。

所述提取物可以来自栽培的***植物(即不在其自然栖息地中生长)或可以来自在野外生长的***植物。

通常获得提取物的***植物组织是花序。因此提取物可以从植物的完整花序获得，包括茎、杆、苞和花。然而应当理解，本发明的***提取物可以仅从花序的一部分获得，例如从苞和/或花中获得。

根据一实施例，所述提取物获自新鲜植物(即在提取过程之前未加热的植物)。新鲜植物包括在收获后立即采集的植物(例如最长达一小时或几小时)，以用于提取，以及在收获后立即冷冻的植物(例如在约-70℃至-90℃，例如在-80℃，在提取之前持续任何所需的时间长度)。

根据一个实施例，所述提取物从新鲜花序获得。

根据一个实施例，所述提取物从冷冻花序获得(例如在约-70℃至-90℃，例如在-80℃下收获后立即冷冻任何所需的时间长度)。因此例如所述提取物可以从冷冻保存的花序中获得，或者从在液氮中或在干冰中冷冻的花序获得。

根据一个实施例，所述提取物从未经受加热的花序获得(例如在例如120℃至180℃，例如在150℃下加热，持续任何时间长度，例如1至5个小时)。

根据一个实施例，所述提取物从干燥的***花序获得。将所述花序干燥可以使用本领域已知的任何方法进行，例如通过用液氮或用干冰/醇混合物粉碎。

在一些实施例中，极性溶剂包含极性质子溶剂(例如乙醇或甲醇)。在一些实施例中，极性溶剂包含极性非质子溶剂(例如丙酮)。适用于本发明的极性溶剂包括但不限于乙醇、甲醇、正丙醇(n-propanol)、异丙醇(iso-propanol,)、丁醇、戊醇、丙酮、甲乙酮(methylethylketone)、乙酸乙酯(ethylacetate)、乙腈(acetonitrile)、四氢呋喃(tetrahydrofuran)、二甲基甲酰胺(dimethylformamide)、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide)、水及其组合。

在一具体实施例中，极性溶剂是乙醇(例如无水乙醇，即高于99.8％，或在水中为99-70％)。

用于将***花序干燥的极性溶剂的浓度或量可以变化。通常干燥的***花序与极性溶剂(重量与体积)的比率是足以提取约70％以上、约75％以上、约80％以上、约85％以上、约90％以上、约95％以上、约97％，或约99％以上的具有细胞毒活性的组合物的量。在一些实施例中，极性溶剂与干燥***花序的比率为约1：2至约1:20(w/v)，例如约1：4至约1:10(w/v)。

在特定的实施例中，所述提取物是一乙醇提取物。

在特定的实施例中，以1：4(w/v)的样品与无水乙醇的比例将无水乙醇加入干燥的花序中。

在一些实施例中，使干燥的***花序与极性溶剂(例如乙醇)接触约15分钟以上的时间、约30分钟以上的时间、约1小时以上的时间、约2小时以上的时间、或约5小时以上的时间。

在接触期间也可以控制温度。在一些实施例中，干燥的***花序与极性溶剂在约15℃至约35℃，或约20℃至约25℃的温度下接触。

根据一具体实施例，使干燥的***花序与极性溶剂(例如乙醇)接触，同时恒定地混合，例如在一振动器上。

在一些实施例中，本发明的方法包括从所述混合物(即粗提取物)中分离一液体提取物(即过滤的提取物)，所述混合物包括一液体提取物和多种固体。用于将所述液体提取物分离出来(即过滤的提取物)的合适方法包括有机合成领域中已知的方法，包括但不限于重力过滤、抽吸和/或真空过滤，离心，凝固和倾析等。在一些实施例中，所述分离方法包括通过孔径为约1至5微米、约0.5至5微米、约0.1至5微米的多孔膜、注射器、海绵、沸石、纸等过滤液体提取物，约1至2微米、约0.5至2微米、约0.1至2微米、约0.5至1微米、约0.1至1微米、约0.25至0.45微米、或约0.1至0.5微米(例如约2微米、约1微米、约0.45微米或约0.25微米)。

根据一具体实施例，所述粗提取物通过0.45微米注射过滤器来过滤，例如可从德国Darmstadt的Merck商购获得。

本发明人考虑在产物产生后，干燥(即除去极性溶剂)和/或冷冻被过滤的提取物。

将被过滤的提取物干燥(即除去极性溶剂)的方法没有特别限制，可包括在减压(例如低于大气压)和/或高温(例如高于约25℃)下的溶剂蒸发。在一些实施例中，可能难以通过标准溶剂去除程序(例如蒸发)从一液体提取物中完全除去一极性溶剂。在一些实施例中，可以使用诸如共蒸发、冻干等的方法从液体级分中完全除去极性溶剂，以形成干粉、干燥颗粒(dry pellet,dry granulate)、糊状物等。根据具体实施例，用一真空蒸发器蒸发极性溶剂。

在产生过滤的提取物之后，本发明人进一步考虑另外的纯化步骤，以便从所述提取物中进一步纯化多种活性剂。

因此例如本发明人进一步提出分馏所述过滤的提取物。分馏可以通过例如但不限于：管柱色谱、制备高效液相色谱(“HPLC”)、减压蒸馏及其组合的方法进行。根据具体实施例，通过HPLC进行分馏。

在一些实施例中，分馏包括将所述过滤的提取物重新悬浮于一极性溶剂(例如甲醇，如上所述)中，将所述极性提取物应用于一分离管柱，并通过管柱色谱法分离具有细胞毒活性的***提取物。

用所述极性提取物将一洗脱溶剂施加到分离管柱上以洗脱来自极性提取物的馏分。适合使用的洗脱溶剂包括但不限于甲醇()、乙醇()、丙醇()、丙酮()、乙酸()、二氧化碳()、甲乙酮(methylethyl ketone)、乙腈(acetonitrile)、丁腈(butyronitrile)、二氧化碳、乙酸乙酯(ethyl acetate)、四氢呋喃(tetrahydrofuran)、二异丙醚(di-iso-propylether)、氨(ammonia)、三乙胺(triethylamine)、N，N-二甲基甲酰胺(N,N-dimethylformamide)、N，N-二甲基乙酰胺(N,N-dimethylacetamide)等以及其组合。

根据替代或另外的实施例，液相色谱包括高效液相色谱(HPLC)。

根据替代或另外的实施例，液相色谱法在相反的固定相上进行。

根据替代或另外的实施例，使用包含10至30％酸性水溶液和90至70％醇的流动相进行液相色谱。

根据具体实施例，一洗脱溶剂包含15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)。

根据替代或另外的实施例，在一HPLC上进行馏分分离，所述HPLC包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱(例如250mm×4.6mm，例如从Merck KGaA，Darmstadt，Germany获得)和一保护柱(例如4mm×4mm)；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟(例如主要包含CBC和THCA的馏分)。

根据替代或另外的实施例，在一HPLC上进行馏分分离，所述HPLC包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱(例如250mm×4.6mm，例如从Merck KGaA，Darmstadt，Germany获得)和一保护柱(例如4mm×4mm)；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟(例如主要包含CBGA的馏分)。

根据替代或另外的实施例，在一HPLC上进行馏分分离，所述HPLC包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱(例如250mm×4.6mm，例如从Merck KGaA，Darmstadt，Germany获得)和一保护柱(例如4mm×4mm)；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续28至35分钟(例如主要包含THCA的馏分)。

根据替代或另外的实施例，收集包含多个组分(活性成分)的级分，通过在220纳米操作的检测器进行检测。

根据替代或另外的实施例，所述检测器是一二极管阵列检测器。

根据替代或另外的实施例，所述检测器是一DAD-300检测器。

根据具体实施例，高压液相色谱(HPLC)的多个条件例如包括一UltiMate3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、PurospherRP-18封端管柱(例如250mm×4.6mm，例如从Merck KGaA，Darmstadt，Germany获得)和一保护柱(例如4mm×4mm)；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟(例如主要包含CBC和THCA的馏分)。

根据具体实施例，高压液相色谱(HPLC)的多个条件例如包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、PurospherRP-18封端管柱(例如250mm×4.6mm，例如从Merck KGaA，Darmstadt，Germany获得)和一保护柱(例如4mm×4mm)；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟(例如主要包含CBGA的馏分)。

根据具体实施例，高压液相色谱(HPLC)的多个条件例如包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、PurospherRP-18封端管柱(例如250mm×4.6mm，例如从Merck KGaA，Darmstadt，Germany获得)和一保护柱(例如4mm×4mm)；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续28至35分钟(例如主要包含THCA的馏分)。

可以测试所述获得的多个提取物和/或馏分的细胞毒活性。

用于测试细胞毒活性的示例性方法在下文以及随后的实施例部分中描述。

为了测试提取物和/或馏分对细胞毒活性的影响，可以使用本领域已知的用于测试细胞毒活性的任何体内(in-vivo)、体外(in-vitro)或离体(ex-vitro)分析。例如使用Alamar Blue、XTT生存力测定、细胞分选(例如用于膜联蛋V annexin V)对癌细胞(例如结肠癌细胞)的细胞生存力分析，如下面实施例部分中详细讨论。

本发明的提取物和/或馏分还可以通过多种分析方法表征，例如但不限于光谱方法，例如但不限于紫外-可见光谱(UV-Vis)、红外光谱(IR)等；质谱法(“MS”)，例如但不限于飞行时间质谱法、四极杆质谱法、电喷雾质谱法、傅里叶变换质谱法、基质辅助激光解吸/电离(“MALDI”)等；色谱方法，例如但不限于气相色谱(“GC”)、液相色谱(“LC”)、高效液相色谱(“HPLC”)等；及其组合(例如GC/MS、LC/MS、HPLC/UV-Vis等)，以及本领域普通技术人员已知的其他分析方法。

根据替代或另外的实施例，通过本发明的一些实施例的方法获得的提取物和/或馏分保持冷冻，例如在冰箱中，直至进一步使用(例如在约-20℃至-90℃，在约-70℃至-90℃，例如在-80℃)，持续任何所需的时间长度。

根据替代或另外的实施例，立即使用通过本发明的一些实施例的方法所获得的提取物和/或馏分(例如在几分钟内，例如最高达30分钟)。

通过本发明的一些实施例的方法获得的提取物和/或馏分可以单独使用。可替代地，可以将不同的提取物(例如来自不同植物或来自各自的提取程序)合并在一起。同样地，可以将不同的馏分(来自相同的提取物，来自不同的提取物，来自不同的植物和/或来自单独的提取程序)合并在一起。

如本文所用的术语“合并(pooled)”是指从液相色谱(例如HPLC)收集的单个馏分或多个馏分。

根据一具体实施例，从***花序的单一提取物获得多个不同的馏分，其可通过使所述***提取物经受液相色谱并收集多个馏分而获得，所述多个馏分包括多种成份在220纳米操作下可被一检测器检测(如上文详细讨论的)。因此例如当使用以下条件时，可以在以下保留时间获得多个馏分：HPLC包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、Purospher RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟：F1-保留时间0至5分钟，F2-保留时间5至9分钟，F3-保留时间9至12分钟，F4-保留时间12至14.5分钟，F5-保留时间18至20，F6-保留时间24至26，F7-保留时间28至35分钟，F8-保留时间35至37，F9-保留时间37至40。

根据替代或另外的实施例，可以将至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个或更多个馏分的任何组合汇集在一起，如下面进一步详细讨论。

根据一实施例，一些实施例的馏分包含THCA。

如本文所用，术语“THCA”是指Δ9-四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolicacid，THCA)，是四氢***酚(tetrahydro-cannabinol)(THC)的前体(precursor)。本文所用的术语THCA包括天然THCA(即源自***植物)，或其合成类似物或衍生物。可以根据本教导使用任何THCA类似物，只要其包含细胞毒活性(单独或作为本文讨论的组合物的一部分)。

术语“类似物(analog)”是指具有至少相同细胞毒活性的结构衍生物。所述类似物可以是合成的或天然存在的。

示例性THCA类似物包括但不限于11-OH-delta9-THCA-A和11-Nor-delta9-THCA-Acarboxylic acid[详见Guillermo Moreno-Sanzn所著的，四氢***酚酸的重要回顾与新型治疗观点Critical Review and Novel Therapeutic Perspectives of D9-tetrahydrocannabinolic acid A，Cannabis and Cannabinoid Research Volume 1.1，(2016)]。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含至少约5至100％的THCA、至少约5至50％的THCA、至少约10至50％的THCA、至少约20至50％的THCA、至少约20至40％的THCA、至少约30至80％的THCA、至少约75至95％的THCA、至少约80至0％的THCA、至少约80至95％的THCA、至少约约80至100％的THCA或至少约90至100％的THCA。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含约5％的THCA、至少约10％的THCA、至少约15％的THCA、至少约20％的THCA、至少约25％的THCA、至少约30％的THCA、至少约35％的THCA、至少约40％的THCA、至少约45％的THCA、至少约50％的THCA、至少约55％的THCA、至少约60％的THCA、至少约65％的THCA、至少约70％的THCA、至少约75％的THCA、至少约80％的THCA、至少约81％的THCA、至少约82％的THCA、至少约83％的THCA、至少约84％的THCA、至少约85％的THCA、至少约86％的THCA、至少约87％的THCA、至少约88％的THCA、至少约89％的THCA、至少约90％的THCA、至少约91％的THCA、至少约92％的THCA、至少约93％的THCA、至少约94％的THCA、至少约95％的THCA、至少约96％的THCA、至少约97％的THCA、至少约98％的THCA、至少约99％的THCA、或约100％的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含15％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含20％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含25％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含30％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含50％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含75％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含80％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含85％或更多的THCA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含95％或更多的THCA。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括除THCA之外的***衍生的活性成分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少一者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少二者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括THCA以及D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的任何一者、二者、三者、四者、五者、六者或七者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括THCA、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据替代或另外的实施例，D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)的任一者可以一合成类似物提供。

根据一替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括下表3中列出的多个组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包括表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包括以THCA及表中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据一实施例，一些实施例的馏分包括CBGA。

如本文所用，术语“CBGA”是指***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)，是THCA、CBDA和CBCA的前体。本文使用的术语CBGA包括天然CBGA(即源自***植物)或其合成类似物或衍生物。可以根据本教导使用任何CBGA类似物，只要其包含细胞毒活性(单独或作为本文讨论的组合物的一部分)。

示例性CBGA类似物包括但不限于CBGVA。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括至少约75至95％的CBGA，至少约80至90％的CBGA，至少约80至95％的CBGA，至少约80至100％的CBGA，或至少约90至100％CBGA。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括至少约60％CBGA，至少约65％CBGA，至少约70％CBGA，至少约75％CBGA，至少约80％CBGA，至少约81％CBGA，至少约82％CBGA，至少约83％CBGA，至少约84％CBGA，至少约85％CBGA，至少约86％CBGA，至少约87％CBGA，至少约88％CBGA，至少约89％CBGA，至少约90％CBGA，至少约91％CBGA，至少约92％CBGA，至少约93％CBGA，至少约94％CBGA，在至少约95％CBGA，至少约96％CBGA，至少约97％CBGA，至少约98％CBGA，至少约99％CBGA，或约100％CBGA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含75％或更多的CBGA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含80％或更多的CBGA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含85％或更多的CBGA。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含95％或更多的CBGA。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含除CBGA之外的***衍生的活性成分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)和/或***酚(CBN)中的至少一者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)和/或***酚(CBN)中的至少一者、二者、三者、四者、五者、六者或七者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)和***酚(CBN)。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括CBGA以及香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)和/或***酚(CBN)中的任何一者、二者、三者、四者、五者、六者或七者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括CBGA、香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)和/或***酚(CBN)。

根据替代或另外的实施例，香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)和/或***酚(CBN)的任一者可以一合成类似物提供。

根据一替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括下表2中列出的多个组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包括表2中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包括CBGA以及表2中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括CBGA、THCA以及香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)、***酚(CBN)、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的任何一者、二者、三者、四者、五者、六者或七者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括CBGA、THCA、香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)、***酚(CBN)、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包括CBGA、THCA以及表2及表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含CBGA与THCA，比例为1：1。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含CBGA与THCA，比例高于1：1。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含1：1至1.5：1的CBGA对THCA的比率(THCA：CBGA)。

根据一实施例，一些实施方例的馏分包含CBC。

如本文所用的术语“CBC”是指***环萜酚(Cannabichromene，CBC)。本文使用的术语CBC包括天然CBC(即源自***植物)或其合成类似物或衍生物。可以根据本教导使用任何CBC类似物，只要其包含细胞毒活性(单独或作为本文讨论的组合物的一部分)。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括至少约5至60％的CBC，至少约5至50％的CBC，至少约10至50％的CBC，或至少约20至40％的CBGA。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括至少约5％CBC，至少约10％CBC，至少约15％CBC，至少约20％CBC，至少约25％CBC，至少约30％CBC，至少约35％CBC，至少约40％CBC，至少约45％CBC，至少约50％CBC，至少约55％CBC，至少约60％CBC，至少约65％CBC，至少约70％CBC，至少约75％CBC，至少约80％CBC，至少约85％CBC，至少约90％CBC，至少约995％CBC，在至少约99％CBC或约100％CBC。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含15％或更多的CBC。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含20％或更多的CBC。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含25％或更多的CBC。

根据一具体实施例，***提取物或馏分包含30％或更多的CBC。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含除CBC之外的***衍生的活性成分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含除THCA之外的***衍生的活性成分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含至少约10至40％的***环萜酚(Cannabichromene，CBC)和至少约10至40％的四氢***酚酸(四氢***酚酸，THCA)。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸中的至少一种。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包含姜黄酮(Tumerone)和胱氨酸。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分CBC、THCA和姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸中的至少一者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分CBC、THCA，姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸。

根据替代或另外的实施例，姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸可以以一合成类似物提供。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或级分包含CBC与THCA，比例为1：1。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或级分包含CBC与THCA，比例高于1：1。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或级分包含1：3的CBC对THCA的比率(CBC：THCA)。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包含CBC、THCA以及下表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包含CBC、THCA，姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸，以及下表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包含CBC、THCA以及姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少一者。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包含CBC、THCA以及姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少一者、至少两者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者或更多者。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包含CBC、THCA、姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包括CBC、THCA、CBGA，以及本文以下表2或表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，本发明的一些实施例的提取物和/或馏分包含CBC、THCA、CBGA、姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸以及本文以下表2或表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括CBC、THCA、CBGA以及姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)、***酚(CBN)、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的任何一者、二者、三者、四者、五者、六者或七者。

根据替代或另外的实施例，提取物和/或馏分包括CBC、THCA、CBGA、姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、***环萜酚酸(CBCA)、***酚(CBN)、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的任何一者、二者、三者、四者、五者、六者或七者。

本发明还涉及通过本发明的方法所制备的产物。在一些实施例中，提供一细胞毒活性组合物，可通过本发明的一些实施例的方法所获得。

根据本发明的一方面，提供一种组合物，包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，其包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括CBC和THCA。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱(HPLC)并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟(例如用于主要包含CBC和THCA的馏分)。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱(HPLC)并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续5至9分钟(例如用于主要包含CBC和THCA的馏分)。

根据本发明的一方面，提供一种组合物，包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，其包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括CBC和THCA，，所述组合物的特征在于对癌细胞具有细胞毒活性。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含THCA(例如作为一活性成分)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含至少约5至100％THCA，至少约5至50％THCA，至少约10至50％THCA，至少约20至50％THCA，至少THCA约20至40％，THCA至少约30至80％，THCA至少约75至95％，THCA至少约80至90％，THCA至少约80至95％，至少约80至100％THCA，或至少约90至100％THCA。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含约5％THCA，至少约10％THCA，至少约15％THCA，至少约20％THCA，至少约25％THCA，至少约30％THCA，THCA至少约35％，THCA至少约40％，THCA至少约45％，THCA至少约50％，THCA至少约55％，THCA至少约60％，THCA至少约65％，THCA至少约70％，THCA至少约75％，THCA至少约80％，THCA至少约81％，THCA至少约82％，THCA至少约83％，THCA至少约84％，THCA至少约85％，THCA至少约86％，THCA至少约87％，THCA至少约88％，THCA至少约89％，THCA至少约90％，THCA至少约91％，THCA至少约92％，THCA至少约93％，THCA至少约94％，THCA至少约95％，THCA至少约96％，THCA至少约97％，THCA至少约98％，至少大约99％THCA，或大约100％THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含15％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含20％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含25％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含30％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含50％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含75％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含80％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含85％或更多的THCA。

根据一具体实施例，所述组合物包含95％或更多的THCA。

根据替代或另外的实施例，包含THCA(作为活性成分)的组合物可包含0.1至1000毫克/毫升，0.1至100毫克/毫升，0.1至50毫克/毫升，0.1至10毫克/毫升，0.1至5毫克/毫升，0.1至2.5毫克/毫升，0.1至1毫克/毫升，0.2至2000毫克/毫升，0.2至200毫克/毫升，0.2至20毫克/毫升，0.2至2毫克/毫升，1至1000毫克/毫升，10至100毫克/毫升，10至50毫克/毫升，2至2000毫克/毫升，20至200毫克/毫升，20至100毫克/毫升，例如20至30毫克/毫升或例如0.2至0.7毫克/毫升的一THCA剂量范围。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含5至100毫克/毫升/克新鲜***的THCA，例如20至30毫克/毫升毫克/毫升/克的新鲜***。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC(例如作为一活性成分)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含至少约5至60％的CBC，至少约5至50％的CBC，至少约10至50％的CBC，至少约20至50％的CBC，或在至少约20至40％的CBC。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含至少约5％CBC，至少约10％CBC，至少约15％CBC，至少约20％CBC，至少约25％CBC，至少约30％CBC，至少约35％CBC，至少约40％CBC，至少约45％CBC，至少约50％CBC，至少约55％CBC，至少约60％CBC，至少约65％CBC，至少约70％CBC，至少约75％CBC，至少约80％CBC，至少约85％CBC，至少约90％CBC，至少约95％CBC，至少约99％CBC，或约100％CBC。

根据一具体实施例，所述组合物包含15％或更多的CBC。

根据一具体实施例，所述组合物包含20％或更多的CBC。

根据一具体实施例，所述组合物包含25％或更多的CBC。

根据一具体实施例，所述组合物包含30％或更多的CBC。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC与THCA，比例为1：1。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC与THCA，比率高于1：1。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC与THCA，比率为1：3(CBC：THCA)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含除THCA和CBC之外的***衍生的活性成分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA以及在下表3中所列出的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA，姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸，以及下表3中列出的至少何一者、二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA以及姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少一者。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少一者、至少两者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA、姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA、CBGA以及在下表2或下表3中所列出的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA、CBGA、姜黄酮(Tumerone)和/或胱氨酸以及在下表2或下表3中所列出的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA、CBGA以及姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的至少一者、至少两者、至少三者、至少四者、至少五者、至少六者、至少七者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBC、THCA、CBGA以及姜黄酮(Tumerone)、胱氨酸、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据本发明的一方面，提供一种组合物，包含一***提取物的液相色谱合并馏分，其包含在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，所述多个活性成分包含CBGA。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱(HPLC)并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱包括一固定相，所述固定相包含RP-18封端管柱；以及一流动相，具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟(例如用于主要包含CBGA)。

根据本发明一些实施例的一方面，提供一种组合物，所述组合物包括液相色谱纯化的***提取物，所述液相色谱纯化的***提取物可通过使所述***提取物经受高压液相色谱(HPLC)并收集多个馏分而获得，所述多个馏分在220纳米操作下可被一检测器检测，其中所述高压液相色谱的多个条件包括一UltiMate 3000高压液相色谱系统，结合WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器、一Purospher RP-18封端管柱、一流动相具有15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)，流速为1.5毫升/分钟，持续9至12分钟(例如用于主要包含CBGA)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA(例如作为活性成分)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含至少约75％至95％的CBGA、至少约80至90％的CBGA，至少约80-95％的CBGA，至少约80至100％的CBGA、或至少约90至100％的CBGA。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含至少约60％的CBGA，至少约65％的CBGA，至少约70％的CBGA，至少约75％的CBGA，至少约80％的CBGA，至少约81％的CBGA，至少约82％的CBGA，至少约83％的CBGA，至少约84％的CBGA、至少约85％的CBGA、至少约86％的CBGA，至少约87％的CBGA，至少约88％的CBGA，至少约89％的CBGA，至少约90％的CBGA，至少约91％的CBGA，至少约92％的CBGA，至少约93％的CBGA，至少约94％的CBGA，至少约95％的CBGA，至少约96％的CBGA，至少约97％的CBGA，至少约98％的CBGA，至少约99％的CBGA，或约100％的CBGA。

根据具体实施例，所述组合物包含75％或更多的CBGA。

根据具体实施例，所述组合物包含80％或更多的CBGA。

根据具体实施例，所述组合物包含85％或更多的CBGA。

根据具体实施例，所述组合物包含95％或更多的CBGA。

根据替代或另外的实施例，包含CBGA(作为活性成分)的所述组合物可包含0.1至1000毫克/毫升，0.1至100毫克/毫升，0.1至50毫克/毫升，0.1至10毫克/毫升，0.1至5毫克/毫升，0.1至2.5毫克/毫升，0.1至1毫克/毫升，1至1000毫克/毫升，1至100毫克/毫升，1至50毫克/毫升，例如3至40毫克/毫升，例如4毫克/毫升的一CBGA剂量范围。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA，于0.4至40毫克/毫升/克新鲜***的一范围，例如3.5至4毫克/毫升/克新鲜***。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含除CBGA之外的***衍生的活性成分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA和THCA(作为活性成分)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA和THCA，比例为1：1。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA和THCA，比例高于1：1A。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含THCA对CBGA的比例为1至1.5：1至4.5(THCA：CBGA)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和/或CBN中的至少一种。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和/或CBN中的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和CBN。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA以及香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-红没药醇)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和/或CBN中的任何一者、两者、三者、四者、五者、六者或七者。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA、香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-红没药醇)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和/或CBN。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含如下表2中所列出的多个组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含下表2中所列出的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多者组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA以及如下表2中所列出的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十种或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA、THCA以及香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和CBN、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和/或***萜酚(cannabigerol,CBG)中的任何一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者或更多组分。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA、THCA、香橙烯(Aromadendrene)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(α-alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、CBCA和CBN、D-柠檬烯(D-Limonene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、α-石竹烯(Humulene)、苹果酸(malic acid)、α-法呢烯(α-Farnesene)、***酚(cannabinol，CBN)、Δ9-四氢***酚(Δ9-tetrahydrocannabinol，THC)和***萜酚(cannabigerol,CBG)。

根据替代或另外的实施例，所述组合物包含CBGA、THCA以及下表2或下表3中列出的至少一者、两者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多种组分。

根据本发明的一方面，提供了一种组合物，包含THCA和CBGA，其中所述组合物不含***环萜酚(Cannabichromene，CBC)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)和/或***二酚(cannabidiol，CBD)中的至少一者。

根据本发明的一方面，提供了一种包含CBC和THCA的组合物，其中所述组合物不含***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***环萜酚酸(cannabichromenic acid，CBCA)、***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)中的至少一者。

根据一替代或另外的实施例，不同的组分(例如THCA、CBC和/或CBD)是离散的，即不包含在相同的馏分中。

根据替代或另外的实施例，将多个馏分组合成单一组合物。

根据替代或另外的实施例，所述馏分包含在不同的配方/组合物中。

根据替代或另外的实施例，包含THCA和CBGA(作为活性成分)的所述组合物可包含如上所述的THCA和CBGA的剂量范围。

根据替代或另外的实施例，包含CBC和THCA的组合物(作为活性成分)可包含如上所述的剂量范围的CBC和THCA。

由于本发明所述的多个提取物，由其衍生的活性馏分和包含其的组合物具有细胞毒活性，因此它们可用于治疗恶性疾病。

因此根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用本发明的一些实施例的所述组合物的一治疗有效量，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供本发明的一些实施例的所述组合物的一治疗有效量，用于治疗有需要的一受试者的一恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的受试者的恶性疾病的方法，所述方法包括给所述受试者施用一种***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量以及一种***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量以及一种***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，其特征在于：所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％***萜酚酸(cannabigerolicacid，CBGA)，其中所述第一液相色谱馏分(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的受试者的恶性疾病的方法，所述方法包括给所述受试者施用一种***提取物的一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及至少20％四氢***酚酸(tetrahydro-cannabinolic acid，THCA)，其中所述液相色谱馏分包括除所述***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及所述四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolicacid，THCA)之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种***提取物的一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及至少20％四氢***酚酸(tetrahydro-cannabinolic acid，THCA)，其中所述液相色谱馏分包括除所述***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及所述四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)之外的***衍生的多个活性成分，用于治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolicacid，THCA)，以及一***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及至少20％四氢***酚酸，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***环萜酚以及所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

据本发明的一方面，提供一***提取物的一第一液相色谱馏分的一治疗有效量以及一***提取物的一第二液相色谱馏分的一治疗有效量，所述第一液相色谱馏分的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，所述第二液相色谱馏分的治疗有效量包括至少20％***环萜酚(Cannabichromene，CBC)以及至少20％四氢***酚酸，其中所述第一液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，并且所述第二液相色谱馏分包括除所述***环萜酚以及所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一种***提取物的一治疗有效量，所述***提取物的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗所述受试者中的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种***提取物的一治疗有效量，所述***提取物的治疗有效量包括至少75％四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)，其中所述液相色谱馏分包括除所述四氢***酚酸之外的***衍生的多个活性成分，从而治疗一受试者中的一恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸(THCA)以及***萜酚酸(CBGA)，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸(THCA)以及***萜酚酸(CBGA)，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括***环萜酚(CBC)以及四氢***酚酸(THCA)，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括***环萜酚(CBC)以及四氢***酚酸(THCA)，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸(THCA)，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供***提取物的多个液相色谱合并馏分的一治疗有效量，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸(THCA)，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括四氢***酚酸(THCA)以及***萜酚酸(CBGA)，其中所述组合物不含***环萜酚(Cannabichromene，CBC)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)和/或***二酚(cannabidiol，CBD)中的至少一者，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括四氢***酚酸(THCA)以及***萜酚酸(CBGA)，其中所述组合物不含***环萜酚(Cannabichromene，CBC)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)和/或***二酚(cannabidiol，CBD)中的至少一者，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括至少约20％四氢***酚酸(THCA)以及至少约20％***萜酚酸(CBGA)。

根据本发明的一方面，提供一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括至少约20％四氢***酚酸(THCA)以及至少约20％***萜酚酸(CBGA)。

根据一实施例，所述组合物包含至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的THCA和至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的CBGA。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括***环萜酚(CBC)以及四氢***酚酸(THCA)，其中所述组合物不含***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***环萜酚酸(cannabichromenic acid，CBCA)、***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)中的至少一者，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括***环萜酚(CBC)以及四氢***酚酸(THCA)，其中所述组合物不含***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***环萜酚酸(cannabichromenic acid，CBCA)、***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)中的至少一者，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据本发明的一方面，提供一种治疗有需要的一受试者的一恶性疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括至少约10％的THCA以及至少大约10％的CBC。

根据本发明的一方面，提供一组合物的一治疗有效量，所述组合物的治疗有效量包括至少约10％的THCA以及至少大约10％的CBC，从而治疗所述受试者的恶性疾病。

根据一实施例，所述组合物包含至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的THCA和至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的CBC。

根据替代或另外的实施例，THCA构成组合物中至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％的活性成分。

根据替代或另外的实施例，CBC构成组合物中至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％的活性成分。

根据替代或另外的实根据替代或另外的实施例，CBGA构成组合物中至少约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％的活性成分。

如本文所用，术语“受试者”或“有此需要的受试者”包括哺乳动物、优选任何年龄或性别的人。受试者可能是健康的或显示病理学的初步迹象，例如，恶性肿瘤或是与恶性肿瘤相关的病理学。所述术语还包括有发展病理学风险的个体(例如恶性肿瘤)。

如本文所用，术语“治疗(treating)”是指治愈(curing)、逆转(reversing)、减弱(attenuating)、减轻(alleviating)、最小化(minimizing)、抑制(suppressing)或停止(halting)疾病或病症(例如恶性肿瘤)的有害作用。本领域技术人员将理解，可以使用各种方法和测定来评估病理学的发展，并且类似地，可以使用各种方法和测定来评估病理学(例如恶性肿瘤)的减少、缓解或消退，如下所述。

根据具体实施例，治疗是预防。

如本文所用，术语“恶性肿瘤(malignancy)”或“恶性疾病(malignant disease)”是指任何癌性疾病，在本文中也称为“癌症(cancer)”。癌细胞可能与表型相关，例如不受控制的增殖、特异性的功能的丧失、永生、显著的转移(metastasis)潜能、抗细胞凋亡活性的显著增加、快速生长和增殖速率，以及某些特征形态和细胞标记。在某些情况下，癌细胞将呈肿瘤形式，这种细胞可能存在于动物体内(例如实体瘤)，或者癌细胞可作为独立细胞在血流或淋巴系统中循环，例如分别是白血病细胞或淋巴瘤细胞(例如非实体肿瘤，如恶性血液病)，或者可以分散在整个身体中(例如转移)。应当理解，本文所用的术语癌症包括任何阶段和任何形式的所有类型的癌症。

适合通过本发明的一些实施例的方法而治疗的癌性疾病的类型包括良性肿瘤、疣(warts)、息肉(polyps)、癌症前(pre-cancer)、恶性肿瘤/癌症和转移。

可以使用本发明的方法治疗的癌性疾病的具体实例包括但不限于胃肠道肿瘤(结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌(colorectal carcinoma,colorectal cancer)、结肠直肠腺瘤、遗传性非息肉病1型、遗传性非息肉病2型、遗传性非息肉病3型、遗传性非息肉病6型；结直肠癌、遗传性非息肉病7型、小肠和/或大肠癌、食道癌、食道癌胼胝症(tylosis withesophageal cancer)、胃癌、胰腺癌、胰腺内分泌肿瘤)、子宫内膜癌(endometrialcarcinoma)、皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcoma protuberans)、胆囊癌、胆管肿瘤、***癌(prostate carcinoma)、***腺癌(prostate adenocarcinoma)，肾癌(例如威尔姆氏肿瘤2型或1型，Wilms’tumor type2or type 1)，肝癌(如肝母细胞瘤(hepatoblastoma)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)、肝细胞癌(hepatocellular cancer))，膀胱癌、胚胎性横纹肌肉瘤(embryonal rhabdomyosarcoma)、生殖细胞肿瘤、滋养细胞肿瘤(trophoblastic tumor)、睾丸生殖细胞肿瘤、卵巢未成熟畸胎瘤(immature teratoma ofovary)、子宫肿瘤、上皮性卵巢肿瘤、骶尾部肿瘤(sacrococcygeal tumor)、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、胎盘部位滋养细胞肿瘤(placental site trophoblastic tumor,epithelial adult tumor)、上皮性成人肿瘤(epithelial adult tumor)、巢癌(ovariancarcinoma)，浆液性卵巢癌(serous ovarian cancer,)、卵巢性索肿瘤(ovarian sex cordtumors)、***(cervical carcinoma)、子***(uterine cervix carcinoma)、小细胞和非-小细胞肺癌(small-cell and non-small cell lung carcinoma)、鼻咽癌(nasopharyngeal)、乳腺癌(如导管乳腺癌(ductal breast cancer)、浸润性导管内乳腺癌(invasive intraductal breast cancer,)、散发性(sporadic)；乳腺癌、乳腺癌易感性(susceptibility to breast cancer)、4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3；乳腺癌卵巢癌(breast-ovarian cancer)、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，例如头颈部)、神经源性肿瘤(neurogenic tumor)、星形细胞瘤(astrocytoma)、神经母细胞瘤(ganglioblastoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、淋巴瘤(lymphomas)(如霍奇金病(Hodgkin's disease)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、B细胞、伯基特(Burkitt)、皮肤T细胞、组织细胞、淋巴细胞、T细胞、胸腺)、胶质瘤(gliomas)、腺癌(adenocarcinoma)、肾上腺肿瘤(adrenal tumor)、遗传性肾上腺皮质癌(hereditaryadrenocortical carcinoma)、脑恶性肿瘤(brain malignancy tumor)、各种其他癌(例如支气管大细胞、导管、Ehrlich-Lettre腹水(Ehrlich-Lettre ascites)、表皮样(epidermoid)、大细胞、Lewis肺、髓质(medullary)、粘液表皮样(mucoepidermoid)、Oat细胞、小细胞、梭形细胞、棘细胞(spindle cell)、过渡细胞、未分化、癌肉瘤(carcinosarcoma)、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、囊腺癌(cystadenocarcinoma)、内淋巴母细胞瘤(ependimoblastoma)、上皮瘤(epithelioma)、红白血病(erythroleukemia)(如Friend、淋巴母细胞)、纤维肉瘤(fibrosarcoma)、巨细胞瘤、胶质瘤(glial tumor,)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)(如多形性，星形细胞瘤)、胶质瘤肝癌(glioma hepatoma)、异种杂交瘤(heterohybridoma)、异体骨髓瘤(heteromyeloma)、组织细胞瘤(histiocytoma)、杂交瘤(hybridoma，例如B细胞)、过度肾炎(hypernephroma)、胰岛素瘤(insulinoma)、胰岛肿瘤(islet tumor)、角膜瘤(keratoma)、平滑肌母细胞瘤(leiomyoblastoma)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、白血病(leukemia)(例如急性淋巴细胞性(acute lymphatic)、急性淋巴母细胞性(acute lymphoblastic)、急性淋巴细胞前B细胞(acute lymphoblastic pre-Bcell)、急性淋巴细胞性T细胞白血病(acute lymphoblastic T cell leukemia)、急性巨核细胞(acute-megakaryoblastic)、单核细胞(monocytic)、急性髓性(acute myelogenous)、急性髓细胞(acute myeloid,)、嗜酸性粒细胞性急性髓细胞(acute myeloid witheosinophilia)、B细胞、嗜碱性粒细胞(basophilic)、慢性粒细胞(chronic myeloid)、慢性B细胞、嗜酸性粒细胞(eosinophilic)、Friend、粒细胞或髓细胞(granulocytic ormyelocytic)、毛细胞、淋巴细胞、巨核细胞(megakaryoblastic)、单核细胞、单核细胞-巨噬细胞(monocytic-macrophage)、成髓细胞(myeloblastic)、骨髓(myeloid)、髓单核细胞(myelomonocytic)、浆细胞、前B细胞、早幼粒细胞(promyelocytic)、亚急性(subacute)、T细胞，淋巴样肿瘤(lymphoid neoplasm)、骨髓恶性肿瘤易感性(predisposition tomyeloid malignancy)、急性非淋巴细胞白血病(acute nonlymphocytic leukemia)、淋巴肉瘤(lymphosarcoma)、黑色素瘤(melanoma)、乳腺肿瘤、肥大细胞瘤(mastocytoma)、成神经管细胞瘤(medulloblastoma)、间皮瘤(mesothelioma)、转移性肿瘤、单核细胞瘤、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome)、骨髓瘤(myeloma)、肾母细胞瘤(nephroblastoma)、神经组织胶质瘤(nervous tissue glialtumor)、神经组织神经元瘤(nervous tissue neuronal tumor)、神经瘤(neurinoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、少突神经胶质瘤(oligodendroglioma)、骨软骨瘤(osteochondroma)、骨髓瘤(osteomyeloma)、骨肉瘤(osteosarcoma)(如艾文氏Ewing's)、***状瘤(papilloma)、移行细胞(transitional cell)、嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma)、垂体瘤(pituitary tumor)(侵袭性)(invasive)、浆细胞瘤(plasmacytoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、横纹肌炎肉瘤(rhabdomyosarcoma)、肉瘤(例如艾文氏Ewing's、组织细胞、Jensen、成骨细胞(osteogenic)、网状细胞(reticulum cell))、神经鞘瘤(schwannoma)、皮下肿瘤、畸胎瘤(teratocarcinoma)(例如多能pluripotent)、畸胎瘤(teratoma)、睾丸肿瘤、胸腺瘤(thymoma)和毛发上皮瘤(trichoepithelioma)、胃癌(gastric cancer)、纤维肉瘤(fibrosarcoma)、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme)；多发性血管球瘤(multiple glomus tumors)、Li-Fraumeni综合征(Li-Fraumeni syndrome)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、lynch癌症家族综合征II(lynch cancerfamily syndrome II)、男性生殖细胞肿瘤、肥大细胞白血病、甲状腺髓样(medullarythyroid)、多发性脑膜瘤(multiple meningioma)、内分泌肿瘤(endocrine neoplasia)、粘液瘤(myxosarcoma)、副神经节瘤(paraganglioma)、家族性非嗜铬细胞瘤(familialnonchromaffin)、毛细血管瘤(pilomatricoma)、***状(papillary)、家族性和散发性横纹肌样易患综合征(rhabdoid predisposition syndrome)、家族性、横纹肌样瘤(rhabdoidtumors)，软组织肉瘤和Turcot综合征(Turcot syndrome)伴胶质母细胞瘤(glioblastoma)。

癌状态(pre-cancer)已被充分表征并且是本领域已知的(例如参见Berman JJ和Henson DE所著，2003分类前癌症：元数据方法Classifying the pre-cancers:a metadataapproach.BMC Med Inform Decis Mak.3：8)。适合通过本发明方法治疗的癌前状态类型包括获得的微小或微观癌前状态，获得的核异型(nuclear atypia)的大病灶(largelesions)，伴随癌症进展的遗传性增生综合征而发生的前驱病变，以及获得的弥漫性增生和弥漫转化生(metaplasias)。微小或微观癌症的实例包括HGSIL(子宫颈的高级鳞状上皮内病变(High grade squamous intraepithelial lesion of uterine cervix)、AIN(***上皮内瘤形成，anal intraepithelial neoplasia)，声带发育不良、(结肠)异常隐窝(aberrant crypts)、PIN(***上皮内瘤形成，prostatic intraepithelialneoplasia)。获得的核异型的大病灶的实例包括管状腺瘤，AILD(具有异常蛋白血症的血管免疫母细胞性***病，angioimmunoblastic lymphadenopathy with dysproteinemia)，非典型脑膜瘤(atypical meningioma)、胃息肉(gastric polyp)、大斑块性瘫痪(largeplaque parapsoriasis)、骨髓增生异常(myelodysplasia)、原位***状移行细胞癌(papillary transitional cell carcinoma in-situ)，具有过量母细胞的难治性贫血(refractory anemia with excess blasts)和施奈德氏***状瘤(Schneiderianpapilloma)。伴随癌症进展的遗传性增生综合征发生的前驱病变的实例包括非典型痣综合征(atypical mole syndrome)、C细胞腺瘤病(C cell adenomatosis)和MEA。获得性弥漫性增生和弥漫性转生的实例包括AIDS、非典型淋巴样增生(atypical lymphoidhyperplasia)、Paget's骨病、移植后淋巴组织增生性疾病(post-transplantlymphoproliferative disease)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)。

根据本发明所述方面的具体实施例，癌症包括肠癌、神经胶质瘤、乳腺癌、肺癌、***癌、皮肤癌、肾癌、卵巢癌、头颈癌、纤维肉瘤、子***、食道癌、直肠癌、口腔癌、肝癌和胰腺癌。

本发明的一些实施例的各种组合物本身可以施用于生物体，或者在药物组合物中与合适的载体或赋形剂混合。

如本文所使用的“药物组合物”是指本文所述化合物的制备物，与其它化学组分例如药学上可接受的及适合的载体和赋形剂(carriers and excipients)。药物组合物的目的是促进将化合物施用于生物体。

本文中术语“活性成分”是指***衍生的活性成分，其负责生物学效应。

下文中，术语“生理学上可接受的载体”和“药学上可接受的载体”是指一载体或稀释剂对生物体不会引起显著刺激，且不会消除所施用化合物的生物学活性和特性。这些短语包括佐剂(adjuvant)。

此处的“赋形剂(excipient)”是指加入到药物组合物中以进一步促进施用一化合物的惰性物质。赋形剂的非限制性实施例包括碳酸钙(calcium carbonate)，磷酸钙(calcium phosphate)，各种糖和各种类型的淀粉(starch)，纤维素衍生物(cellulosederivatives)，明胶(gelatin)，植物油和聚乙二醇(poly-ethylene glycols)。

可以在“雷明顿的制药科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)”Mack出版公司(Mack Publishing Co.，Easton，latest edition)发现用于配制和施用药物的技术，在此引入作为参考。

合适的给药途径可以包括例如口服、直肠、经粘膜、特别是经鼻、、肠或肠胃外给药，包括肌肉内、皮下和髓内注射以及鞘内、直接心室内、心内，例如进入右心室腔或左心室腔，进入冠状动脉、静脉注射、腹膜内、鼻内或眼内注射。

用于向中枢神经系统(CNS)递送药物的常规方法包括：神经外科策略(例如，脑内注射或脑室内输注)、所述试剂的分子操作(例如，嵌合融合蛋白的产生，其包含对内皮细胞表面分子具有亲和力的转运肽以及本身不能穿过BBB的试剂)以试图利用其中一种脑血屏障(BBB)的内源转运途径；设计用于增加药剂脂质溶解度的药理学策略(例如，水溶性药剂与脂质或胆固醇载体的结合)；通过高渗性破坏(由甘露醇(mannitol)溶液注入颈动脉或使用生物活性所引起，如血管紧张素肽(angiotensin peptide))对BBB完整性的短暂破坏。然而这些策略中的每一种都具有局限性，例如与侵入性外科手术相关的固有风险，内源性转运系统固有的限制所施加的尺寸限制，与包含的嵌合分子的全身施用相关的潜在不期望的生物学副作用，所述嵌合分子的载体部分可能在CNS外活跃，以及在BBB被破坏的脑区域内可能存在脑损伤的风险，这使得它成为次优选的递送方法。

可替代地，可以以局部而非全身的方式施用药物组合物，例如，通过将药物组合物直接注射到患者的组织区域中。

术语“组织”是指生物体的一部分，由用于执行一种或多种功能的细胞所组成。实例包括但不限于脑组织、视网膜、皮肤组织、肝组织、胰腺组织、骨、软骨、***、血液组织、肌肉组织、心脏组织脑组织、血管组织、肾组织、肺组织、性腺组织、造血组织。

本发明的一些实施例的药物组合物可以通过本领域熟知的方法制备，例如，通过常规的混合、溶解、制粒、制糖衣、研磨、乳化、包封、包埋或冻干方法。

因此使用于根据本发明的一些实施例的药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制，所述载体包括赋形剂(excipients)和助剂(auxiliaries)，其有助于将活性成分加工成可以药学上使用的制剂。适当的配方取决于所选择的给药途径。

对于注射，药物组合物的活性成分可以配制在水溶液中，优选在生理上相容的缓冲液中，例如Hank溶液，Ringer溶液或生理盐缓冲液。对于渗透粘膜给药，在制剂中使用适合于要渗透的屏障的渗透剂。这种渗透剂通常是本领域已知的。

对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体组合来容易地配制药物组合物。这些载体使药物组合物能够配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，供患者口服摄入。口服使用的药物制剂可以使用固体赋形剂制备，任选地研磨所得混合物，并且如果需要，在加入合适的助剂后加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸核心。合适的赋形剂特别是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素(hydroxypropylmethyl-cellulose)、羧甲基纤维素钠(sodium carbomethylcellulose)；和/或生理学上可接受的聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone，PVP)。如果需要，可以加入崩解剂(disintegrating agents)，例如交联聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)、琼脂或海藻酸(alginic acid)或其盐，例如海藻酸钠(sodium alginate)。

糖衣丸芯具有合适的涂层。为此目的，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地含有***树胶(gum arabic)、滑石(talc)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)、卡波姆凝胶(carbopol gel)、聚乙二醇(polyethylene glycol,)、二氧化钛(titanium dioxide)、漆溶液(lacquer solutions)和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中以用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。

可口服使用的药物组合物包括由明胶制成的推入式胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制成的软密封胶囊。推入式胶囊可含有活性成分与填充剂(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)、润滑剂(如滑石粉或硬脂酸镁)和任选的稳定剂的混合物。在软胶囊中，活性成分可以溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外可以添加稳定剂。用于口服给药的所有制剂应该是适合于所选择的给药途径的剂量。

对于经皮给药，所述组合物可以配制成凝胶、乳膏、软膏、糊剂、乳液、乳汁、悬浮液、气溶胶、喷雾剂、泡沫、血清、棉签(swab)、拭子(pledget)、垫片(pad)或贴片(patch)。用于经皮递送的制剂通常可包括载体，例如水，液体醇、液体二醇(liquid glycols)、液体聚亚烷基二醇(liquid polyalkylene glycols)、液体酯(liquid esters)、液体酰胺(liquidamides)、液体蛋白质水解产物、液体烷基化蛋白质水解产物、液体羊毛脂(liquidlanolin)、羊毛脂衍生物(lanolin derivatives)、甘油、矿物油、硅胶、凡士林(petroleumjelly)、羊毛脂(lanolin)、脂肪酸、植物油、对羟基苯甲酸酯(parabens)、蜡等材料通常用于局部组合物中。本领域技术人员已知的各种添加剂可包括在本发明的经皮制剂中。例如溶剂可用于溶解某些活性成分物质。其他任选的添加剂包括皮肤渗透增强剂、遮光剂、抗氧化剂、胶凝剂、增稠剂、稳定剂等。

对于口腔(buccal)给药，所述组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂(lozenges)的形式。

对于鼻吸入给药，根据本发明的一些实施例使用的活性成分可方便地以加压包装或喷雾器的气溶胶喷雾(aerosol spray)形式递送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷(dichlorodifluoromethane)、三氯氟甲烷(trichlorofluoromethane)、二氯四氟乙烷(dichloro-tetrafluoroethane)或二氧化碳。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以通过提供阀门来递送被测量的量来确定。可以配制用于分配器(dispenser)的胶囊和药筒(例如明胶)，其含有所述化合物和合适的粉末基质的粉末混合物，如乳糖或淀粉。

本文所述的药物组合物可以配制用于肠胃外给药，例如通过推注或连续输注。用于注射的制剂可以以单位剂量形式存在，例如在安瓿(ampoules)中或在多剂量容器中，任选地，添加的防腐剂。所述组合物可以是油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液，并且可以含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。

用于肠胃外给药的药物组合物包括水溶形式的活性制剂的水溶液。另外活性成分的悬浮液可以制备成适当的油性或水基注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油(例如芝麻油(sesame oil))或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯(ethyl oleate)、甘油三酯(triglycerides)或脂质体(liposomes))。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethyl cellulose)、山梨糖醇(sorbitol)或葡聚醣(dextran)。

任选地，所述悬浮液还可含有合适的稳定剂或增加活性成分溶解度的试剂，以制备高浓度溶液。

可替代地，所述活性成分可以是粉末形式，用于在使用前用合适的载体(例如无菌、无热原的水基溶液)构建。

本发明的一些实施例的药物组合物也可以配制成多种直肠组合物，例如栓剂(suppositories)或滞留灌肠剂(retention enemas)，例如使用常规的栓剂基质，如可可脂(cocoa butter)或其它甘油酯。

适用于本发明一些实施例的药物组合物包括多个组合物，其中含有有效量的活性成分以达到预期目的。更具体地，所述治疗有效量是指多种活性成分的一剂量(***来源的活性成分)，其有效预防、缓解或改善病症(例如IBD)症状或延长所治疗对象生存。

一治疗有效量的决定完全在本领域技术人员的能力范围内，特别是根据本文所提供的详细揭露内容。

对于本发明方法中使用的任何制剂，最初可以从体外和细胞培养测定中估计治疗有效量或剂量。例如可以在动物模型中配制剂量以达到所需的浓度或滴度。这些信息可用于更准确地确定人体中的有用剂量。

用于癌症的动物模型例如描述于Cheon and Orsulic所著的病理回顾年刊,Annu.Rev.Pathol.(2011)6:95-119以及Abate-Shen所著的临床癌症研究Clinic.Cancer.Res.(2006)12(18)。

根据一实施例，一组合物的一治疗有效量包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括四氢***酚酸(THCA)，其范围为0.1至1000毫克/日/公斤、0.1至100毫克/日/公斤、0.1至50毫克/日/公斤、0.1至10毫克/日/公斤、0.1至5毫克/日/公斤、0.1至2.5毫克/日/公斤、0.1至1毫克/日/公斤、0.2至2000毫克/毫升/公斤、0.2至200毫克/毫升/公斤、0.2至20毫克/毫升/公斤、0.2至2毫克/毫升/公斤、1至1000毫克/毫升/公斤、10至100毫克/毫升/公斤、10至50毫克/毫升/公斤、2至2000毫克/毫升/公斤、20至200毫克/毫升/公斤、20至100毫克/毫升/公斤、例如20至30毫克/毫升/公斤、或例如0.2至0.7毫克/毫升/公斤、例如0.7毫克/日/公斤。

根据一实施例，一组合物的一治疗有效量包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括***萜酚酸(CBGA)，其范围为0.11毫克/毫升/公斤至0.95毫克/毫升/公斤，0.1至1000毫克/毫升、0.1至100毫克/毫升、0.1至50毫克/毫升、0.1至10毫克/毫升、0.1至5毫克/毫升、0.1至2.5毫克/毫升、0.1至1毫克/毫升、0.2至2000毫克/毫升/公斤、0.2至200毫克/毫升/公斤、0.2至20毫克/毫升/公斤、0.2至2毫克/毫升/公斤、1至1000毫克/毫升/公斤、10至100毫克/毫升/公斤、10至50毫克/毫升/公斤、2至2000毫克/毫升/公斤、20至200毫克/毫升/公斤、20至100毫克/毫升/公斤、例如0.1至1毫克/毫升/公斤。

根据一实施例，一组合物的一治疗有效量包括***提取物的多个液相色谱合并馏分，所述多个液相色谱合并馏分的治疗有效量包括在220纳米操作下可被一检测器所检测的多个活性成分，其中所述多个活性成分包括***环萜酚(CBC)。

如上所述当THCA(或包含其的组合物)与CBGA(或包含其的组合物)一起施用时，观察到协同细胞毒活性作用。

同样地当THCA(或包含其的组合物)与CBC(或包含其的组合物)一起施用时，观察到协同细胞毒活性作用。

因此根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.6毫克/天/公斤的剂量施用，即以1.2：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.4毫克/天/公斤的剂量施用，即以1.75：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.3毫克/天/公斤的剂量施用，即以2.3：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.2毫克/天/公斤的剂量施用，即以3.5：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.14毫克/天/公斤的剂量施用，即以5：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.07毫克/天/公斤的剂量施用，即以10：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当包含THCA作为活性成分的组合物以0.7毫克/天/公斤的剂量施用时，包含CBGA作为活性成分的组合物以0.04毫克/天/公斤的剂量施用，即以17：1的关系(THCA：CBGA)。

根据一实施例，当组合物包含THCA和CBC作为活性成分时，组合物以CBC与THCA的剂量比1：3(CBC：THCA)施用。

只要如上所述维持THCA：CBGA或THCA：CBC的关系，可以调整这样的剂量，本领域技术人员可以基于所治疗的受试者和在组合物中多个组分的水平进行适当的调整(例如THCA、CBGA、CBC)。

本文所述活性成分的毒性和治疗功效可通过体外标准药学方法、细胞培养物或实验动物来测定。从这些体外和细胞培养测定和动物研究中获得的数据可用于配制用于人类的一系列剂量。剂量可根据使用的剂型和所用的给药途径而变化。确切的配方、给药途径和剂量可以由个体医生根据患者的病情选择。(参见例如Fingl等人所著，1975，治疗学的药学基础“The Pharmacological Basis of Therapeutics”，Ch.1p.1)。

可以个别调整剂量和间隔以提供足以诱导或抑制生物效应的***衍生的活性成分(肠组织)水平(最小有效浓度minimal effective concentration，MEC)。每种制剂的MEC都不同，但可以从体外数据估算。实现MEC所需的剂量取决于个体特征和给药途径。检测分析可用于确定血浆浓度。

根据被治疗的病症的严重程度和反应性，可以是单次给药或多次给药，治疗过程持续数天至数周或直至达成治愈或达成疾病状态的减轻。

当然给药组合物的量取决于所治疗的受试者、痛苦的严重程度、给药方式，处方医师的判断等。

如果需要，本发明的一些实施例的组合物可以存在于一包装或一分配器装置中，例如FDA批准的试剂盒，其可以含有一种或多种活性成分的单位剂型。所述包装可以例如包括金属或塑料箔，例如泡罩包装(blister pack)。所述包装或分配器装置可附有给药说明。所述包装或分配器也可以由与容器相关的通知容纳，以管理药品制造、使用或销售的政府机构的形式，所述通知反映了所述机构批准的组合物的形式或人类或兽医的给药。例如这种通知可以是美国食品和药物管理局批准标示，用于处方药或批准的批准的产品插页。还可以制备多种组合物，其包含在相容的药物载体中配制的本发明制剂，将其置于合适的容器中，并标记用于治疗指定的病症，如上文进一步详述。

根据另一实施例，为了增强对恶性疾病的治疗，本发明进一步设想向受试者施用可有益于治疗的额外的治疗。本领域技术人员能够做出这样的确定。

因此例如本文所述的组合物可以与化疗、放射疗法、激素疗法、靶向疗法、免疫疗法或手术疗法联合给药。此类抗癌疗法和利用它们的方法是本领域技术人员所熟知的。

可以与本发明化合物共同施用的示例性抗癌药物包括但不限于Acivicin；Aclarubicin；Acodazole Hydrochloride；Acronine；Adriamycin；Adozelesin；Aldesleukin；Altretamine；Ambomycin；Ametantrone Acetate；Aminoglutethimide；Amsacrine；Anastrozole；Anthramycin；Asparaginase；Asperlin；Azacitidine；Azetepa；Azotomycin；Batimastat；Benzodepa；Bicalutamide；Bisantrene Hydrochloride；Bisnafide Dimesylate；Bizelesin；Bleomycin Sulfate；Brequinar Sodium；Bropirimine；Busulfan；Cactinomycin；Calusterone；Caracemide；Carbetimer；Carboplatin；Carmustine；Carubicin Hydrochloride；Carzelesin；Cedefingol；Chlorambucil；Cirolemycin；Cisplatin；Cladribine；Crisnatol Mesylate；Cyclophosphamide；Cytarabine；Dacarbazine；Dactinomycin；DaunorubicinHydrochloride；Decitabine；Dexormaplatin；Dezaguanine；Dezaguanine Mesylate；Diaziquone；Docetaxel；Doxorubicin；Doxorubicin Hydrochloride；Droloxifene；Droloxifene Citrate；Dromostanolone Propionate；Duazomycin；Edatrexate；Eflornithine Hydrochloride；Elsamitrucin；Enloplatin；Enpromate；Epipropidine；Epirubicin Hydrochloride；Erbulozole；Esorubicin Hydrochloride；Estramustine；Estramustine Phosphate Sodium；Etanidazole；Etoposide；Etoposide Phosphate；Etoprine；Fadrozole Hydrochloride；Fazarabine；Fenretinide；Floxuridine；Fludarabine Phosphate；Fluorouracil；Flurocitabine；Fosquidone；FostriecinSodium；Gemcitabine；Gemcitabine Hydrochloride；Hydroxyurea；IdarubicinHydrochloride；Ifosfamide；Ilmofosine；Interferon Alfa-2a；Interferon Alfa-2b；Interferon Alfa-n1；Interferon Alfa-n3；Interferon Beta-I a；Interferon Gamma-Ib；Iproplatin；Irinotecan Hydrochloride；Lanreotide Acetate；Letrozole；LeuprolideAcetate；Liarozole Hydrochloride；Lometrexol Sodium；Lomustine；LosoxantroneHydrochloride；Masoprocol；Maytansine；Mechlorethamine Hydrochloride；MegestrolAcetate；Melengestrol Acetate；Melphalan；Menogaril；Mercaptopurine；Methotrexate；Methotrexate Sodium；Metoprine；Meturedepa；Mitindomide；Mitocarcin；Mitocromin；Mitogillin；Mitomalcin；Mitomycin；Mitosper；Mitotane；Mitoxantrone Hydrochloride；Mycophenolic Acid；Nocodazole；Nogalamycin；Ormaplatin；Oxisuran；Paclitaxel；Pegaspargase；Peliomycin；Pentamustine；Peplomycin Sulfate；Perfosfamide；Pipobroman；Piposulfan；Piroxantrone Hydrochloride；Plicamycin；Plomestane；Porfimer Sodium；Porfiromycin；Prednimustine；Procarbazine Hydrochloride；Puromycin；Puromycin Hydrochloride；Pyrazofurin；Riboprine；Rogletimide；Safingol；Safingol Hydrochloride；Semustine；Simtrazene；Sparfosate Sodium；Sparsomycin；Spirogermanium Hydrochloride；Spiromustine；Spiroplatin；Streptonigrin；Streptozocin；Sulofenur；Talisomycin；Taxol；Tecogalan Sodium；Tegafur；Teloxantrone Hydrochloride；Temoporfin；Teniposide；Teroxirone；Testolactone；Thiamiprine；Thioguanine；Thiotepa；Tiazofuirin；Tirapazamine；TopotecanHydrochloride；Toremifene Citrate；Trestolone Acetate；Triciribine Phosphate；Trimetrexate；Trimetrexate Glucuronate；Triptorelin；Tubulozole Hydrochloride；Uracil Mustard；Uredepa；Vapreotide；Verteporfin；Vinblastine Sulfate；VincristineSulfate；Vindesine；Vindesine Sulfate；Vinepidine Sulfate；Vinglycinate Sulfate；Vinleurosine Sulfate；Vinorelbine Tartrate；Vinrosidine Sulfate；VinzolidineSulfate；Vorozole；Zeniplatin；Zinostatin；Zorubicin Hydrochloride。额外的抗肿瘤剂包括“抗肿瘤药”第52章(Paul Calabresi和Bruce A.Chabner所著)中公开的那些内容，以及Goodman和Gilman所著的治疗学的药学基础“The Pharmacological Basis ofTherapeutics”，Eighth Edition,1990,McGraw-Hill,Inc.(Health ProfessionsDivision)。

任何上述药剂可以单独给药或组合给药。

本发明的***提取物可以多种其他形式(包括营养药物组合物)给予有需要的受试者(例如人类)。

如本文所用，“营养药物组合物(nutraceutical composition)”是指可被视为食物或食物的一部分并提供医学上或健康益处的任何物质，包括疾病的预防和治疗。在一些实施例中，营养药物组合物旨在补充饮食并含有至少一种或多种以下成分：维生素、矿物质、草药、植物、果实、蔬菜、氨基酸或任何前述成分的浓缩物、代谢物、成分或提取物及其组合。

在一些实施例中，本发明的营养药物组合物可以作为“膳食补充剂(dietarysupplement)”施用，如美国食品和药物管理局所定义，其为口服含有“膳食成分”的产品，例如但不限于维生素、矿物质、草药、其他植物、氨基酸以及诸如酶、器官组织、腺体、代谢物或其提取物或浓缩物的物质。

本发明的营养组合物的非限制性形式包括：片剂、胶囊、丸剂、软凝胶、软胶囊、液体、粉末、溶液、酊剂(tincture)、悬浮液、糖浆或已知的其他形式。对于本领域技术人员而言。营养保健品组合物也可以是食品的形式，例如但不限于食品棒、饮料、食品凝胶、食品添加剂/补充剂、粉末、糖浆及其组合。

根据本发明的另一方面，提供一种确定本发明的一些实施例的组合物的细胞毒活性的方法，所述方法包括使受试者的恶性组织与组合物离体接触，其中恶性组织细胞中的细胞死亡增加高于一预定阈值，指示组合物的细胞毒活性。

根据本发明的另一方面，提供一种确定本发明的一些实施例的组合物的细胞毒活性的方法，所述方法包括使受试者的恶性组织与组合物离体接触，其中恶性组织细胞中的细胞增殖减少低于一预定阈值，指示组合物的细胞毒活性。

根据一实施例，恶性组织是癌组织活组织检体。

示例性组织包括食道、胆囊、肝脏、胰腺、胃、小肠、肠(大肠或结肠和直肠)、***、***、肺、皮肤和脑组织。

根据一实施例，可以通过决定一健康组织(例如一健康的供体受试者、疾病发作前或疾病缓解期间的受试者、或来自商业上可获得的组织培养物)的正常细胞死亡和细胞增殖来建立一预定阈值。

如本文所用的术语“约”是指±10％。

术语“包括(comprises)”、“包括(comprising)”、“包括(includes)”、“包含(including)”、“具有(having)”及其词形变化是指“包括但不限于”。

术语“由...组成(consisting of)”意指“包括并且限于”。

术语“基本上由......组成(essentially consisting of)”是指组合物、方法或结构可包括额外的成分、步骤及/或部件，但只有当额外的成分、步骤及/或部件实质上不改变所要求保护的组合物、方法或结构的基本特征及新特征。

本文所使用的单数形式“一”、“一个”及“至少一”包括复数引用，除非上下文另有明确规定。例如，术语“一化合物”或“至少一种化合物”可以包括多个化合物，包括其混合物。

在整个本申请中，本发明的各种实施例可以以一个范围的形式存在。应当理解，以一范围形式的描述仅仅是因为方便及简洁，不应理解为对本发明范围的硬性限制。因此，应当认为所述的范围描述已经具体公开所有可能的子范围以及所述范围内的单一数值。例如，应当认为从1到6的范围描述已经具体公开子范围，例如从1到3，从1到4，从1到5，从2到4，从2到6，从3到6等，以及所数范围内的单一数字，例如1、2、3、4、5及6，此不管范围为何皆适用。

每当在本文中指出数值范围，是指包括所指范围内的任何引用的数字(分数或整数)。术语，第一指示数字及第二指示数字"之间的范围”及第一指示数字"到”第二指示数字"的范围"在本文中可互换，并指包括第一及第二指示数字，及其间的所有分数及整数。

如本文所用的术语“方法(method)”指的是用于完成一特定任务的方式(manner)，手段(means)，技术(technique)和程序(procedures)，包括但不限于，那些方式，手段，技术和程序，其是已知的，或是从已知的方式，手段，技术或程序很容易地被化学，药理，生物，生化及医学领域从业者所开发。

如本文所使用的，术语“治疗(treating)”包括消除(abrogate)，本质上地抑制(substantially inhibiting)，减慢或逆转(reversing)一状态的进展，本质上改善(ameliorating)一状态的临床或美学的症状，或本质上预防一状态的临床表现或美学症状。

可以理解，本发明中的特定特征，为清楚起见，在分开的实施例的内文中描述，也可以在单一实施例的组合中提供。相反地，本发明中，为简洁起见，在单一实施例的内文中所描述的各种特征，也可以分开地、或者以任何合适的子组合、或者在适用于本发明的任何其他描述的实施例中提供。在各种实施例的内文中所描述的特定特征，并不被认为是那些实施方案的必要特征，除非所述实施例没有那些元素就不起作用。

上文所述的及以权利要求项部分所请求的本发明各种实施例和方面，可在以下的实施例中找到实验支持。

示例：

现在参考以下实施例，其与以上描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施例。

通常本文使用的命名法和本发明中使用的实验室程序包括分子、生物化学、微生物学和重组DNA技术。这些技术在文献中有详尽的解释。例如参见"分子克隆：实验室手册Molecular Cloning:A laboratory Manual"Sambrook等人所著(1989)；"分子生物学中的现行方案Current Protocols in Molecular Biology"Volumes I-III Ausubel,R.M.所著(1994)；Ausubel等人所著,"分子生物学中的现行方案Current Protocols in MolecularBiology",John Wiley和Sons,Baltimore,Maryland等人所著(1989)；Perbal所著,"分子克隆实用指南A Practical Guide to Molecular Cloning",John Wiley&Sons所著New York(1988)；Watson等人所著,"重组DNA Recombinant DNA",Scientific American Books,NewYork；Birren等人所著(eds)"基因组分析：实验室手册系列Genome Analysis:ALaboratory Manual Series",Vols.1-4,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NewYork(1998)；美国专利U.S.Pat.Nos.4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659和5,272,057中所述的方法；"细胞生物学：实验手册Cell Biology:A Laboratory Handbook",Volumes I-III Cellis,J.E.所著(1994)；"目前的免疫学方案Current Protocols inImmunology"Volumes I-III Coligan J.E.所著(1994)；Stites等人所著"基础临床免疫学Basic and Clinical Immunology"(8th Edition),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994)；Mishell和Shiigi所著"细胞免疫学中的选择方法Selected Methods in CellularImmunology",W.H.Freeman and Co.所著New York(1980)；在专利和科学文献中广泛描述可用的免疫测定法U.S.Pat.Nos.3,791,932；3,839,153；3,850,752；3,850,578；3,853,987；3,867,517；3,879,262；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074；4,098,876；4,879,219；5,011,771and 5,281,521；"Oligonucleotide Synthesis"Gait,M.J.所著(1984)；“核酸杂合Nucleic Acid Hybridization"Hames,B.D.和Higgins S.J.所著(1985)；"转录与转译Transcription and Translation"Hames,B.D.,and Higgins S.J.所著(1984)；"动物细胞培养Animal Cell Culture"Freshney,R.I.所著(1986)；"固定的细胞与酵素Immobilized Cells and Enzymes"IRL Press,(1986)；"分子克隆实用指南APractical Guide to Molecular Cloning"Perbal,B.,(1984)and"酵素学的方法Methodsin Enzymology"Vol.1-317,Academic Press；"PCR方案：方法与应用指南PCR Protocols:AGuide To Methods And Applications",Academic Press,San Diego,CA(1990)；Marshak等人所著"蛋白质纯化和表征策略Strategies for Protein Purification andCharacterization-A Laboratory Course Manual"CSHL Press(1996)；

所有这些内容都被并入做为参考文献，如同在本文中完整描述，其中的程序被认为是本领域公知的，并且是为了方便读者而提供的。其中包含的所有信息都通过引用结合在此。

一般材料和实验程序：

***花序的提取：

从植物收获C.sativa品系AD的鲜花。将其立即提取并在-80℃下冷冻，或在提取前在150℃下加热(烘烤)2.5至3小时。将新鲜和烘焙的***花(2克)用液氮粉碎。将无水乙醇加入到含有粉末的各管中，样品与无水乙醇的比例为1：4(w/v)。将管在振荡器上彻底混合30分钟，然后通过滤纸过滤提取物。将滤液转移到新管中。用真空蒸发器蒸发溶剂。将干燥的提取物重悬于1毫升的无水甲醇中，并通过0.45微米注射器过滤器过滤。收集过滤的液体用于处理，将重悬的提取物稀释，以用于细胞培养和酶联免疫吸附测定(ELISA)实验中的活组织检查。通过压碎1克具有已知鲜重的植物材料并在60℃下孵育过夜，然后再次称重以计算干重来确定样品干重。

化学特性：

标准品准备：

***素(cannabinoid)标准品：***萜酚(cannabigerol,CBG)，***二酚(cannabidiol，CBD)、***二酚酸(cannabidiolic acid，CBDA)、***酚(cannabinol，CBN)、***萜酚酸(cannabigerolic acid，CBGA)、四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolicacid，THCA)、***环萜酚(Cannabichromene，CBC)和四氢***酚酸(tetrahydrocannabinolic acid，THCA)用甲醇稀释至10ppm浓度，然后进行HPLC分离。为了定量THC和THCA，将标准品以5ppm至40ppm的不同浓度溶解在甲醇中。

样品制备：

对于HPLC，将干提取物(乙醇粗物质)重悬于1毫升甲醇中，并通过0.45微米注射器过滤器(Merck，Darmstadt，Germany)过滤。将过滤的提取物(滤液)用甲醇稀释10倍，然后通过HPLC分离。

HPLC分离：

样品分离在与WPS-3000(T)自动进样器、HPG-3400泵和DAD-300检测器偶联的UltiMate 3000HPLC系统中进行。在具有一保护柱(4mm×4mm I.D.)的Purospher RP-18封端柱(250mm×4.6mm I.D.；Merck KGaA，Darmstadt，Germany)上进行分离。通过等度比例(isocratic proportion)与15％溶剂A(0.1％乙酸水溶液)和85％溶剂B(甲醇)以1.5毫升/分钟的流速持续35分钟形成溶剂梯度。在220、240和280纳米处检测到多个化合物峰值。取220纳米的峰值进行进一步处理。根据获得的色谱将提取物分成9个馏分。

质谱(MS)分析：

使用ESI(Q-TOF)6545(高分辨率)(Agilent)进行级分分析。MS条件如下：ESI阳性模式、m/z 50-1500、气体温度350℃、注射体积5微升、溶剂组合物0.1％甲酸水溶液(46％)、乙腈(acetonitrile，50％)和水(4％)(v/v)。

核磁共振(NMR)分析：

1H和13C光谱在Bruker Avance-400仪器(分别为400.1和100.6MHz)中记录，在CDCl 3中作为溶剂，所述含有四甲基硅烷(Tetramethylsilane，TMS)作为一内部参照，在300K下。此外，进行了三个2D实验：COZY(1H-1H相关)，HMQC(单键1H-13C相关)和HMBC(长范围1H-13C相关)。

气相色谱仪(GC)与质量选择检测器(MSD)(GC/MS)分析：

使用与HP6973质谱仪偶联的HP7890气相色谱仪进行GC/MS分析，电子倍增器电位为2KV，灯丝电流为0.35mA，电子能量为70eV，并且在m/z 40至400的范围内记录光谱。使用Agilent 7683自动进样器进行样品引入。氦气以1.1毫升/秒的恒定流量用作载气。使用1:10分流比注射模式将1μl每种样品注射到GC/MS中。将保持在50℃的等温保持2分钟，然后加热梯度为6℃/每分钟至300℃，最终温度保持4分钟。使用具有0.25微米膜厚的30米，0.25毫米ID 5％交联苯基甲基硅氧烷毛细管柱(cross-linked phenylmethyl siloxanecapillary column，HP-5MS)进行分离，并且注入口温度为220℃。MS界面温度为280℃。借助于谱库谱(library spectra，NIST14.0)进行峰值分配，并与公布的数据和从购自Sigma-Aldrich的标准品注射获得的MS数据进行比较。

细胞培养：

HCT116(ATCC CCL-247)、HT29(ATCC HTB-38)、CaCO2(ATCC HTB-37)和CCD-112CoN(ATCC CRL-1541)结肠细胞在37℃下在潮湿的5％CO₂-95％大气中生长。将细胞维持在McCoy's 5a改良培养基、DMEM培养基(对于CaCO2细胞)和EMEM培养基(对于CCD-112CoN细胞系)中。

乳腺癌细胞系MDA-MB231和成胶质细胞瘤(glioblastoma cell)细胞系A172在37℃，潮湿的5％CO₂-95％大气中生长。将细胞维持在DMEM培养基中。

测定细胞系中的提取物和化合物的细胞毒活性：

使用刃天青(Resazurin)(Alamar blue，R&D Systems，Minneapolis，USA)检查提取物的细胞毒活性作用。为此将10％刃天青添加到处理的各孔中，并在37℃下在潮湿的5％CO₂-95％大气中温育4小时。将上清液(每孔100微升)转移到96孔板中，测量544/590纳米激发/发射的相对荧光。在减少没有细胞的Alamar Blue的自发荧光后，相对于未处理的对照组计算活细胞的百分比。测定新鲜花序(C2F)、加热花序(C2B)的C.sativa乙醇提取物对HCT116结肠癌细胞和CCD18结肠健康细胞的的剂量-效应曲线。将HCT116和CCD18细胞在100μL生长培养基中一式三份接种(每孔10,000个)，并在37℃下在潮湿的5％CO₂-95％空气气氛中孵育24小时。用不同稀释度(35微克/毫升至1600微克/毫升)的C2F、C2B以及50纳克/毫升的TNF-α处理细胞16小时。接下来用Alamar Blue测定细胞生存力。GraphPad Prism用于产生剂量反应曲线和C2F和C2B的IC₅₀剂量。

XTT生存力：

将细胞以10,000个细胞/孔接种到96孔板中，在正常生长培养基中一式三份。在第二天，将培养基换成含有植物提取物/馏分，标准品(THCA和CBGA)的正常生长培养基或仅用于对照组的培养基(图中显示了不同处理的所有浓度)。将细胞孵育48小时，然后使用XTT(2,3，-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-5-[((苯基氨基)-羰基]-2H-四唑内盐，2,3,-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)-carbonyl]-2H-tetrazolium inner salt)还原进行定量的生存力，根据制造商的指示(BI，Kibbutz Beit-Haemek，Israel)。将细胞与XTT试剂在5％的CO₂–95％的潮湿空气中于37℃孵育2小时。用光度计SPEKTRA Fluor Plus(Tecan,Salzburg,澳洲)在490纳米和650纳米的参考波长下记录吸光度。从以下等式估计细胞生存力：％细胞生存力＝100×(At-Ac)(处理)/(At-Ac)(对照)；At和Ac是分别在处理组和对照组培养物中XTT比色反应(BI，Kibbutz Beit-Haemek，以色列)的吸光度(490纳米)减去在650纳米处测得的非特异性吸收。单独的培养基吸光度也从特定读数中扣除。

综合效应分析：

为了检查F3和F7细胞毒活性之间的协同作用，如上所述将XTT测定用于HCT116细胞。有和没有F7 IC₅₀剂量(20微克/毫升)的不同浓度的F3(3微克/毫升到160微克/毫升)或有和没有F3 IC₅₀剂量(36微克/毫升)的不同浓度的F7(7.9微克/毫升到380微克/毫升)用于处理细胞48小时。接下来，如上所述将细胞与XTT试剂一起孵育2小时。对于标准品协同作用检查，使用有和没有CBGA(28微克/毫升)的不同浓度的THCA(4微克/毫升至50微克/毫升)或有和没有THCA(13.14微克/毫升)的不同浓度的CBGA(6.67微克/毫升至53.3微克/毫升)。药物协同作用由先前描述的Bliss独立性药物相互作用模型[Delaney WE等人所著,Antimicrob Agents Chemother.(2004)48:3702-3710]确定，所述模型由以下等式定义：

Exy＝Ex+Ey-(ExEy)

其中(Exy)是药物x和y的累加作用，如其各自的作用(Ex和Ey)所预测。出于计算目的，在本文中，药物的抗癌作用被定义为对获得的结果(1-Exy)的补数(complementary)。在Exy的观察值大于计算的Exy值的情况下，组合治疗被认为是拮抗的。如果观察值小于计算值，则认为组合治疗具有协同作用。如果两个值相等，则组合处理被认为是叠加性的(独立的)。

膜联蛋白V(Annexin V)测定：

使用带有膜联蛋白V-FITC和PI的MEBCYTO细胞凋亡试剂盒(MBL，Enco，4700)评估细胞凋亡。根据制造商的说明进行染色。简而言之，将细胞以1x10⁶个细胞/孔的密度接种在6孔板培养皿中，所述培养基在McCoy's 5a改良培养基中。第二天，将培养基换成含有F7(20微克/毫升)、F3(35微克/毫升)和F7与F3的组合的IC-50剂量以及TNF-α(50纳克/毫升)的培养基，并孵育在37℃和5％的CO²–95％潮湿大气中保持24和48小时。孵育后，分别收获和收集细胞。然后将试管在900g RCF下离心10分钟，将细胞沉淀重悬，并用1毫升PBS洗涤两次。对各样品中的细胞进行计数，如有必要，将细胞数调整成浓度为2x 10⁵个细胞，在85微升的膜联蛋白结合缓冲液中。用10微升膜联蛋白V-FITC溶液和5微升碘化丙啶(propidiumiodide，PI)工作溶液对细胞染色，然后在黑暗中于室温下孵育15分钟。然后对每个试管中加入400微升的膜联蛋白V结合缓冲液，并使用GALLIOS流式细胞仪(GALLIOS flowcytometer，FACS)进行流式细胞术。如果细胞是膜联蛋白V+/PI-(早期凋亡)和膜联蛋V+/PI+(晚期凋亡)，则认为它们是凋亡的。生存的细胞为膜联蛋白V-/PI-，而膜联蛋白V-/PI+为坏死。

细胞周期分析：

将细胞以每孔1×10⁶个细胞的密度接种在6孔板培养皿中。播种24小时后，将细胞培养基替换为饥饿培养基，并在37℃下于5％的CO₂–95％空气湿润环境中孵育24小时。孵育24小时后，将细胞分别用F7(20微克/毫升)、F3(36微克/毫升)、F7与F3的组合和其溶剂对照组以及TNF-α(50纳克/毫升)处理24小时。然后分别收获并收集各孔的细胞，并以900g离心10分钟。将细胞沉淀物(pellet)用1毫升PBS洗涤一次，并在4℃下用70％冷乙醇固定1小时。然后将固定的细胞沉淀出来，并用1毫升PBS洗涤两次。然后通过在黑暗中重悬于250微升包含RNase A(100微克/毫升)的碘化丙啶溶液(50微克/毫升)中持续15分钟，以对细胞沉淀物进行染色。然后对各试管中加入400毫升PBS，并使用GALLIOS流式细胞仪分析细胞。

活检体培养：

同一患者的息肉(polyps)和健康结肠组织的活检体(Biopsy)是从7位安排其医师认为有需要进行结肠镜检查的患者中获得的，这些研究被我们的机构伦理委员会批准(赫尔辛基批准号0121-16)，所有患者均给予他们在结肠镜检查之前的书面知情同意书。结肠镜检查期间采集的活检体样本置于组织培养基中，并立即运送到实验室。接受活检体后，用Hank的平衡盐溶液代替PBS，然后将样品以8000rpm(11,885x g)离心1分钟。然后除去上清液，并用汉克平衡盐溶液洗涤组织四次。每次洗涤后，如上所述将样品离心。然后将组织放在小培养皿上，用干净的手术刀切成4-5片。然后将这些碎片放在Millicel亲水PTFE组织培养***物上(Millicel hydrophilic PTFE tissue-culture insert_S，Millipore，30毫米，0.4微升)。将***物与1.5毫升组织培养基(Dulbecco改良的Eagle培养基，其补充10％v/v热灭活胎牛血清、100U/毫升青霉素、100微克/毫升链霉素，50微克/毫升亮肽素(leupeptin)、1毫摩尔浓度PMSF和50微克/毫升大豆胰蛋白酶抑制剂)一起放入6孔塑料组织培养皿(Costar 3506)中。随后用提取物处理组织，或不对其进行处理(对照组)。对于处理培养质，使用含C2F(1.25毫克/毫升)、F7(不同浓度：100微克/毫升、125微克/毫升、250微克/毫升或400微克/毫升)、F3(75微克/毫升、107微克/毫升或X微克/毫升)或F3+F7(以所需浓度)的培养基代替，并在37℃下加湿的5％CO₂–95％空气中孵育过夜。

细胞分离和刃天青(Resazurin)用于活检体：

16小时后，将来自上述部分的被处理和未处理的组织放入管中，并用PBS洗涤两次。然后将组织转移到培养皿中，并用手术刀切成非常细的碎片。将切碎的小块转移到试管中，然后将500微升的R10培养基(RPMI 1640，其中添加了10％FBS、10mM HEPES、100U/毫升青霉素、100微克/毫升链霉素和50微克/毫升庆大霉素(gentamycin))以及20IU/毫升DNase、0.13单位/毫升的分散酶和1毫克/毫升胶原酶1A一起被加入。然后将组织涡旋搅动，并通过在两者之间每15分钟涡旋搅动，以在37℃下孵育1小时。然后将细胞悬液以950g沉淀10分钟，并用PBS缓冲液洗涤两次。将细胞悬浮液沉淀物重悬于500微升R10培养基中，并在37℃的5％C02–95％空气中与10％刃天青一起孵育4小时，然后将上清液(每孔100毫升)转移至96孔板，并测量了在544/590纳米激发/发射下的相对荧光。减少无细胞的Alamar Blue自发荧光后，计算相对于未处的理对照组的活细胞百分比。

RNA测序和转录组分析：

为了制备RNA，将细胞以每孔1,500,000个细胞/毫升的浓度接种到6孔板中。在潮湿的5％CO2–95％空气中于37℃孵育24小时后，将细胞分别用F3(36微克/毫升)、F7(20微克/毫升)和这些浓度的F3与F7组合以及TNF-α(50纳克/毫升)处理8小时。然后收获细胞并根据制造商的方案使用TRI试剂(Sigma-Aldrich)提取总RNA。将RNA保持在-80℃直至进一步分析。使用INCPM mRNA序列方案制备测序文库。在Illumina hiseq的1个泳道上对60bp单读进行测序。

为了进行转录组(transcriptome)分析，将原始读数进行过滤和清洁程序。SortMeRNA工具用于滤出rRNA[Kopylova等人所著，生物信息学Bioinformatics(2012)28(24):3211-3217]。然后使用FASTX工具包(www.hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/index.html，版本0.0.13.2)通过使用fastq_quality_trimmer，修剪质量得分<30的读端核苷酸，并使用Fastq_quality_filter删除质量得分≤30的碱基对少于70％的读段。

使用Tophat2软件(v2.1；Kim D.等人所著,基因组生物学Genome biology(2013)14(4):R36)将干净的读数与国家生物技术信息中心(NCBI)(GRCh38；www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/guide/human/)提取的人类基因组进行比对。使用Cufflinks[v2.2；Trapnell等人所著，自然生物技术Nat Biotechnol.(2010)28：511]结合了NCBI的基因注释进行基因丰度估算(Gene abundance estimation)。使用RBioconductor[Gentleman,RC等人所著，基因组生物学Genome biology(2004)5(10)：R80]进行热图可视化(Hotmap visualization)。使用edgeR R软件包[Robinson MD等人所述，生物信息学(2010)26(1)：139-140)。与对照相比，差异超过两倍的基因(调整后的P值不超过0.05)被认为是差异表达的[Benjamini Y.和Y.Hochberg皇家统计学会杂志HochbergJournal of the royal statistical society.Series B(Methodological)(1995)289-300]。使用在线工具bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/生成维恩图(Venndiagrams)。基于分配给人类的基因本体论(gene ontology，GO)类别，使用PANTHER(www.pantherdb.org)扩展了重要表达基因的功能注释。使用KEGG数据库(www.genomeome.jp/kegg/)以用于路径分析，其使用KEAGG映射器工具(www.genomeome.jp/kegg/tool/map_pathway2.html)。

统计分析：

结果表示为重复分析的平均值+SE，代表或包括至少两个独立实验。使用JMP统计软件包通过Tukey–Kramer检验(P≤0.05)对重复平均值进行统计学分析，当P≤0.05时，认为具有统计学意义。

对于剂量反应测定，数据点通过S形剂量反应关系的非线性回归线连接多个数据点。使用GraphPad Prism产生剂量反应曲线和IC₅₀剂量。使用Flowjo软件分析FACS数据。

实施例1：

新鲜花序的紫花苜蓿提取物在降低结肠癌细胞系中的细胞生存力方面具有活性：

细胞毒活性被测定为过夜处理后***C.sativa(C12F)的新鲜花序(C2F)和加热花序(C2B)的无水乙醇提取物在HCT116细胞中的细胞生存力水平。发现用C2F或C2B处理可显著降低HCT116癌细胞的生存力，并具有相似的活性水平(图1A，图1B)。此外尽管两种乙醇提取物C.sativa，C2F和C2B对结肠癌细胞HCT116具有相似的细胞毒活性(图1A，图1B)，但C2F在CCD18健康结肠细胞上的活性却降低了。C2F在HCT116和CCD18细胞系上的IC₅₀分别为83.9和144.2微克/毫升(图1A，图1C)。另一方面，C2B在CCD18上的活性高于HCT116细胞系，IC₅₀分别为54.63微克/毫升和84.1微克/毫升(图1D、图1B)。

例子2：

鲜花和烘烤过的花中***C.sativa提取物的化学成分：

测定了C2F和C2B的HPLC色谱图和主要活性化合物(图2A至图2B和下表1)。

表1：***鲜花和烘烤过的花的HPLC峰面积和面积百分比

在220纳米下，新鲜的和烘烤过的粗提物中鉴别出八种主要***素(cannabinoids)。这些峰值被鉴定为CBD、CBG、CBDA、CBN、CBGA、THC、CBC和THCA，相对于HPLC谱图的保留时间分别为5.9、6.4、10.5、11.6、13.1、14.0、17.5和29.5分钟。***素标准品(未显示)。C2B提取物中CBD、CBG、CBN和THC的含量分别比C2F提取物高2.7、37.4、44.7和560倍。C2F中未发现CBC，但C2B中出现CBC。在C2B中未鉴别出THCA，与C2F相比，C2B中CBDA的含量降低了30倍(上图2和表1)，这是由于加热过程中CBDA和THCA的脱羧所致。在C2B中发现了CBD、CBG和THC，而在C2F中，大多数上述化合物的酸性形式(即CBDA，CBGA，THCA)都存在。

实施例3：

***鲜花提取物活性馏分的鉴别及其与全提取物组合的作用：

用HPLC分离C2F(浓度为163微克/毫升)(图3A)。收集馏分并检查高浓度(0.9微克/毫升)的细胞毒活性，所述活性由HCT116细胞中的细胞生存力所确定。

随后通过稀释提取物并检查C2F、F7、合并的F1至F9(不含F7)的细胞毒活性活性，并对包括F7在内的所有组分进行合并处理，以比较C2F和F7对于HCT116细胞的活性(图3B和3C)。

对于F1至F9不含F7和添加F7的联合处理，分别于190和190微克/毫升浓度，发现更明显的细胞毒活性诱导作用，对于F1至F9不含F7和添加F7，分别在163和190微克/毫升浓度更明显(图3C)。这些结果表明，所述提取物的所有馏分的某些治疗组合导致细胞毒活性活性的显著增加(在短时间内即4小时内)。

实施例4：

***提取物的活性馏分主要包含THCA：

活性馏分(F7)的化学成分通过HPLC和电喷雾电离质谱(electrosprayionization mass spectrometry，ESI–MS)进行了分析。在HPLC色谱图中获得的F7为宽峰。为了分析其结构并验证其纯度，与THCA标准品相比，以不同的稀释度对其进行了分析。结果表明F7是THCA(图4)。ESI-MS结果进一步证实F7含有THCA：C₂₂H₃₀O₄(358.214)；m/z(MH+)359.222,(MNa+)381.203。取得1H和13C光谱以验证确切的结构并确定F7的纯度。NMR结果表明，F7确实是THCA，纯度为80至95％。值得注意的是，F7的不同样品(来自不同的收集)采用两种不同的方法进行分析，因此纯度之间存在差异。在GC/MS中，纯度是5个不同样品的平均值。

实施例5：

馏分F3和F7的化学成分：

对馏分F7和F3的进一步分析表明F3包含三种***素(CBCA、CBGA和CBN)、不同的萜烯(香橙烯(Aromadendrene))和萜烯醇(二异丁基苯酚(Ditertbutylphenol)、表雪松醇(Epicedrol)、α-红没药醇(alpha-Bisabolol)、羽扇豆醇(Lupeol)、植物固醇(苯酚)(phyto-sterol(Phytol))和脂肪酸(表2)。F7包含THCA、THC、CBD和CBN，其他酸(棕榈酸(palmitic acid)、亚麻酸(Linolenic acid)、苹果酸(malic acid)、花生四烯酸(Arachidonic acid)、硬脂酸(stearic acid)和肉荳蔻酸(myristic acid))和化合物，如表3所示。

表2：从分析型HPLC重复收集的馏分3(F3)的组成(5次重复的总结结果)，并使用具有NIST 14.0的GC/MS进行分析

表3：从分析型HPLC重复收集的馏分7(F7)的组成(5次重复的总结结果)，并使用具有NIST 14.0的GC/MS进行分析

值得注意的是：在用100微升BSTFA和1％TMCS甲硅烷基化(silylation)后，将所有样品引入GC/MS

实施例6：

C2F和F7对人类结肠息肉活检体具有细胞毒活性

腺瘤性息肉(Adenomatous polyps)是CRC的主要恶变前体。因此为了检查提取物具有治疗或预防潜力的可能性，对预定结肠镜检查患者的腺瘤性息肉和健康组织的活检体进行了研究。将同一患者的息肉和正常结肠组织的活检体组织暴露于C2F和F7 16小时，然后进行细胞分离和刃天青测定，以确定组织细胞的生存能力。C2F和F7处理(在测试浓度下)均在一定程度上降低了息肉和健康组织的细胞生存力(下表4)。

表4：***F2和F7对人类结肠息肉和健康结肠组织的细胞毒活性活性，以活细胞的百分比表示，仅以甲醇(NT+MeOH)处理过的组织为对照组

值得注意的是：正常组织的健康活检体，n＝3；腺瘤性息肉的息肉活检体，n＝3。

实施例7：

F7与其他***馏分的相互作用诱导细胞毒活性：

由于C2F在癌细胞上的活性与C2B相同，但在正常细胞系上的活性较低(请参见上面的示例1)，因此本发明人进一步分析了C2F的细胞毒活性活性。先前已证明，C2F中HPLC馏分7(F7，主要包含THCA)对HCT116仅具有中等的细胞毒活性。但是F7与其他C2F组分的组合导致细胞毒活性活性显著增加(上图3B和图3C)。在此分别针对每个馏分进一步检查F7与其他***C2F馏分之间的相互作用。

用F7过夜处理仅对细胞生存力产生中等程度的影响，但是发现F7与F2或F3的组合具有增强的细胞毒活性(图5A)。尽管F7和F3的活性为低(F3)至中等(F7)，但仅F7和F3的组合(以C2F中的浓度)导致细胞毒活性增加(图5B)。F7和F7+F3的处理均对HT29和CACO2细胞系具有细胞毒活性(图6A至图6B)。不出所料，F7+F2或F7+F3在正常CCD18细胞系上的效力要弱得多(图6C)。

实施例8：

***素馏分F7和F3与F3化学成分的协同相互作用：

为了确定F7和F3的相互作用是否是协同的，即它们的联合活性大于其单独活性的总和，当将F7和F3以不同的浓度组合，则检查其活性程度。F7和F3的IC₅₀分别确定为20.42和36.03微克/毫升(图7E和图7D)。接下来，针对每个联合实验，根据Bliss独立模型计算药物的局部作用。检查每种组合的五个浓度。对于以下组合发现了协同相互作用：F7以其IC₅₀浓度+F3以26.67、20、13.3微克/毫升的浓度，以及F3以其IC₅₀浓度+F7以15.8、11.9、7.9微克/毫升的浓度(图7A至图7B)。此外F3在其IC₅₀浓度处与F7的结合导致F3的IC₅₀下降了约3倍(从36.03降至10.8微克/毫升；图7A)。F7在其IC₅₀与F3的组合导致F7的IC₅₀降低了11倍(从20.42降至1.9微克/毫升；图7B)。

如以上实施例5所述，发现F3主要包含CBGA(94.15％)、CBN(2.47％)、CBCA(2.38％)、萜烯和萜烯-乙醇化合物(terpenes and terpene-ethanol compound_S，0.48％)、二萜(diterpene_S，0.22％)、酸(0.03％)和短游离脂肪酸(FAA，0.21％)。F3中剩余的化合物(0.06％)尚未确定。

此外，构成大部分馏分的纯化化合物的活性，即F7中的THCA和F3中的CBGA，具有协同作用(协同作用在图7C中用红色标记)。

实施例9：

苜蓿弯曲杆菌F7和F7+F3处理HCT116细胞诱导凋亡性的细胞死亡：

基于488/膜联蛋白V(annexin V)染色的FACS，与对照组相比(未处理和TNF-α或甲醇[MeOH]处理过的细胞)，对细胞生存力的细胞分选表明，用F7处理48小时会导致大部分细胞处于早期或晚期凋亡状态。在F7+F3处理的细胞中，在48小时时所述比例甚至甚至更高，但是仅用F3处理并不会导致细胞死亡(图8A至图8D)。在24小时时，细胞凋亡尚未明显，但是用F7+F3处理，发现细胞坏死(necrosis)的轻微但显著减少(图8A至图8D)。这些结果表明，F7或F7+F3处理可能通过诱导细胞凋亡而发挥作用。

实施例10：

用***F7或F7+F3处理HCT116细胞系分别导致S或GO/G1细胞周期停滞：

通过基于碘化丙锭染色(propidium iodide)的FACS，与对照组相比(未处理和TNF-α或甲醇[MeOH]处理过的细胞；图9)，对细胞周期分析的细胞分选表明，用F7+F3处理细胞(在24小时时)导致G0/G1期细胞比例显著增加。与对照相比，用F7或F3(F3的程度较小)处理导致S期细胞增加(图9)。

实施例11

F7和F7+F3对人类结肠息肉活检体具有细胞毒活性：

接下来，用F7和F7+F3进行的处理来检查是否都导致细胞毒活性的增加。为此，将息肉和正常结肠组织(同一患者)的活检体组织用降低浓度的F7、F3或F7+F3处理16小时，然后进行细胞分离和刃天青测定，以确定组织细胞的生存能力。结果因患者而异(n＝4)。在某些情况下，与单独的F7或F3相比，F7+F3的治疗比单独的F7或F3更为有效，而在其他情况下，与单独的F7或F3相比，用F7+F3的治疗并未改善细胞毒活性(下表5)。然而，除一种情况(P4)外之的所有情况下，处理均会降低息肉细胞的生存力。

表5：***F7、F3和F7+F3对人类结肠息肉和健康结肠组织的的细胞毒活性，以仅用甲醇(NT+MeOH)处理过的组织的活细胞百分比作为对照组)

注意：健康：正常组织活检体(n＝4)；腺瘤性息肉的息肉活检体(n＝4)。Tukey HSD的所有字母组合中，具有不同字母的百分比为显著不同。

实施例12：

与F7或F3处理相比，F7+F3处理可在HCT116细胞中诱导明显的基因表达谱：

为了鉴别在用***提取物馏分处理后在HCT116细胞中差异表达的基因，在用F7、F3或F7+F3处理后6小时进行了HCT116细胞的RNA序列分析。RNA测序结果的样本相关性测试表明，对用F7或F3处理的细胞进行的3次重复测序聚集在一起，而对照处理的3次重复则在单独的分支中聚集。但是用上述显示的多种浓度的F7+F3处理的3次重复具有协同作用，其对于其他处理的聚集成一向外分支(图10A)。

与对照相组比，发现在用F7+F3处理的细胞中差异表达了2283个基因，但在单独用F7或F3处理的细胞中并未发现差异表达(图10B，数据未显示)。对F7+F3处理具有特异的差异表达的基因包括那些与细胞周期G1/S的过渡、Wnt信号通路(图11A)以及p53和凋亡信号通路(图11B)有关的基因。F7+F3处理(但不是F7)抑制了涉及G1/S过渡的18个差异表达基因中的14个(数据未显示)。F7+F3处理减少了大多数(11/14)与Wnt信号通路相关的差异表达基因(图11A；数据未显示)，并影响了凋亡相关基因的表达(图11B；数据未显示)。

实施例13：

CB2受体拮抗剂显著降低细胞毒活性：

为了确定是否通过CB受体赋予HCT116细胞C2F和F7活性，而测定CB1、CB2和GPR55受体拮抗剂(分别为Rimonabant、SR144528和CID16020046)对细胞毒活性的影响。CB2拮抗剂导致HCT116细胞中***提取物C2F、F7和THCA的细胞毒活性显著降低，而CB1拮抗剂仅导致THCA的细胞毒活性显著降低(图12A至图12C)。此外，对于CB2拮抗剂，发现F1-F9不含F7但额外添加F7(分别为163和190微克/毫升)的活性显著降低。但是即使在对照中，CB2拮抗剂也会增加细胞数量(图12D)，表明它通过诱导HCT116细胞增殖来抵消馏分的活性(图12D)。

通过qPCR在HCT116细胞中检测到CB1、CB2和GPR55的转录本(transcript)。在这些细胞中用TNF-α处理后，CB2和GPR55的表达显著增加(数值是TNF-α处理的细胞与未处理的细胞相比，基因表达的稳定态水平；下表6)。

表6：HCT-116细胞中的相对基因表达。在用TNF-α处理细胞过夜后，测量CB1、CB2和GPR55基因表达。使用2-ΔΔCT方法将基因转录本的数值测定为目标基因(CB1、CB2和GPR55)与参考基因(GAPDH)之间的一比值

基因	平均相对表达	标准偏差	统计
				CB1	1.31	0.19	AB
CB2	5.84	1.04	A
				GPR55	5.26	1.57	B

实施例14：

***各馏分及其组合对乳腺癌细胞MDA-MB231和胶质母细胞瘤细胞A172的活性：

如图13A至图13B所示，在使用F3和F7的组合治疗乳腺癌细胞中，细胞毒活性作用的增加是显著的。药物协同作用由Bliss独立性药物相互作用模型测定。检查每种组合的三种浓度。本发明人发现以下组合的协同相互作用：F3(5微克/毫升)+F7浓度为23.8、15.8和11.9微克/毫升(下表7)。

表7：根据bliss模型对MDA-MB-231细胞，恒定的F3和不同浓度的F7的多种组合的XTT实验的实验和计算值

如图14A至图14B所示，在用F3和F7的组合治疗胶质母细胞瘤细胞中，细胞毒活性作用的增加是显著的。检查各组合的八种浓度。本发明人发现以下组合的协同相互作用：50微克/毫升的F7+浓度为40、26.67、20、13.33、10、6.67、5和3.33微克/毫升的F3。

表8：根据bliss模型对A172细胞，恒定的F7和不同浓度的F3的多种组合的XTT实验的实验和计算值

实施例15：

标准品(THCA和CBGA)对HCT116细胞抗癌活性的协同作用

检查标准品(CBGA和THCA)之间的协同作用。检查各组合的六种浓度。如下表9所示，发现以下组合具有协同作用：浓度为13.14微克/毫升的THCA+浓度为40、28、20、13.3和6.67微克/毫升的CBGA。用粗体标记的是显示出协同作用的浓度。

表9：根据bliss模型对HCT116细胞，恒定的THCA和不同浓度的CBGA的多种组合的XTT实验的实验和计算值

此外如表10所示，检查各组合的七个浓度。发现以下组合具有协同作用：

浓度为13.14微克/毫升的CBGA+浓度为30、25、15、12、6和4微克/毫升的THCA。用粗体标记的是显示出协同作用的浓度。

表10：根据bliss模型对HCT116细胞，恒定的CBGA和不同浓度的THCA的多种组合的XTT实验的实验和计算值

虽然本发明结合其具体实施例而被描述，显而易见的是，许多替代、修改及变化对于那些本领域的技术人员将是显而易见的。因此，其意在包括落入所附权利要求书的范围内的所有替代、修改及变化。

在本说明书中提及的所有出版物、专利及专利申请以其整体在此通过引用并入本说明书中。其程度如同各单独的出版物、专利或专利申请被具体及单独地指明而通过引用并入本文中。此外，所引用的或指出的任何参考文献不应被解释为承认这些参考文献可作为本发明的现有技术。标题：本申请中标题部分在本文中用于使本说明书容易理解，而不应被解释为必要的限制。