阅读说明：本技术 一种用于清除hpv的复合制剂 (It is a kind of for removing the compound formulation of HPV ) 是由 邓兆群 王京苏 王盛洲 柯金铭 周新路 于 2019-09-20 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种清除效率高、转阴率效果好的复合制剂。由以下重量配比组成：乳清蛋白0.1-5g,壳聚糖0.01-4g,葡聚糖0.01-5g,茶多酚0.1-3g,溶菌酶0.1-2g,山梨酸钾0.2-2g,聚六亚甲基胍0.01-0.1g,乳鉄蛋白0.1-5g,去离子水60～120ml；本发明抗HPV作用机制多样,清除效率高、转阴率效果好本发明制备复合制剂通过利用乳清蛋白,壳聚糖,葡聚糖,茶多酚,溶菌酶,山梨酸钾,聚六亚甲基胍,乳鉄蛋白等原料配比而成,抗HPV能力强,功能多样,副作用小。(The present invention provides the compound formulation that a kind of elimination efficiency is high, negative conversion rate effect is good.It is made of following weight proportion: lactalbumin 0.1-5g, chitosan 0.01-4g, glucan 0.01-5g, tea polyphenols 0.1-3g, lysozyme 0.1-2g, potassium sorbate 0.2-2g, polyhexamethylene guanide 0.01-0.1g, newborn iron albumen 0.1-5g, 60~120ml of deionized water；The anti-HPV mechanism of action multiplicity of the present invention, elimination efficiency is high, the good present invention of negative conversion rate effect prepares compound formulation by utilizing lactalbumin, chitosan, glucan, tea polyphenols, lysozyme, potassium sorbate, polyhexamethylene guanide, the raw material proportionings such as newborn iron albumen form, anti- HPV ability is strong, vdiverse in function, Small side effects.)

一种用于清除HPV的复合制剂

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种可以清除HPV的复合制剂。

背景技术

人***瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)，是一种常见的感染皮肤和黏膜组织的病毒，大约有100多种HPV型别。引起普通疣的HPV型别主要通过皮肤接触传染，常发生在手、足部位。与这类患者共用毛巾或其他物品也会感染这一类型的HPV。

人***瘤病毒是一种DNA肿瘤病毒，应用HPV病毒DNA序列分析技术将其分为不同的型别，目前已经发现130多种型别[1]。根据不同型别HPV与肿瘤发生的危险性高低，将其分为高危型和低危型。国际癌症研究中心明确提出高危型HPV病毒感染是***发生的主要因素。据报道，全球每年大约有50万例新发***病例，20多万人死于***，严重危害了妇女的健康和生命[2]。从最初感染高危型HPV病毒到最后发展成为宫颈***，需要10～15年时间。因此，在发现宫颈感染高危型HPV病毒后积极进行干预，可以及时地阻断疾病的进一步发展，达到防止***发生的目的。

子***主要由高危型人***瘤病毒(HPV)持续感染所致，99.7％的子***中都可检测到高危型HPV。HPV感染与***有明显的相关性(OR＝3.6-254.2)，尤其是HPV16型和18型。国际癌症研究署(IARC)公布的结果显示，2018年全球估计有近57万女性新患子***，31万多女性死于子***。2018年中国新发***病例数约11万例，每年死亡病例近5万人。

HPV感染生殖道是一个长期的过程，可潜伏在细胞内若干年，一旦机体免疫力降低，潜伏的病毒可恢复活动。HPV感染过程通常分为潜伏感染期、亚临床感染期、临床症状期和HPV相关的肿瘤期。***也有一系列的前驱病变，即宫颈上皮不典型增生，在病理上称宫颈上皮内瘤变(CIN)，通常又根据严重程度分成三级：宫颈上皮内轻度瘤变(CINI)、宫颈上皮内中度瘤变(CINII)和宫颈上皮内高度瘤变(CINIII)，这些癌前病变均有可能发展为宫颈***。

西医对宫颈HPV感染的治疗策略以未病先防、既病防变为思路，宫颈HPV的预防性及治疗性疫苗有望彻底的消灭HPV病毒。对于已经感染HPV病毒的患者可采用期待疗法，但许多患者不愿意被动地等待，更愿意采取积极的治疗措施，西医以消除病毒、破坏病毒宿主细胞为主。中药具有提高机体免疫力及抗病毒的作用，能减少物理治疗及手术的创伤，临床上采用中医内服及中药外治法治疗本病，取得了良好的疗效，具有广阔的前景。

现有产品抗HPV作用机制单一，抗HPV效果有限，不能满足临床需求，急需抗HPV效果好，副作用小的新产品。我们的专利产品为中西医相结合，抗HPV能力强，功能多样，主要通过抑制HPV复制增强机体整体及局部免疫力等四多种机制抗HPV，具有很好的抗HPV感染的效果。

[1]de Cremoux P,de la Rochefordière A,Savignoni A,et al.Differentoutcome of invasive cervical cancer associated with high-risk versusintermediate-risk HPV genotype[J].IntJ Cancer,2009,124(4):778-782.

[2]Syrjanen S,Naud P,Sarian L,et al.Up-regulation of 14-3-3sigma(stratifin)is associated with high-grade CIN and high-risk,humanpapillomavirus(HPV)at baseline but dose not predict outcomes of HR-HPVinfections or incident CIN in the LAMS study[J].Am J Clin Pathol,2010,133(2):232-240.

发明内容

基于上述背景技术中的问题，本发明拟开发一种清除效率高、转阴率效果好的复合制剂。

一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量配比组成：乳清蛋白0.1-5g，壳聚糖0.01-4g，葡聚糖0.01-5g，茶多酚0.1-3g，溶菌酶0.1-2g，山梨酸钾0.2-2g,聚六亚甲基胍0.01-0.1g,乳鉄蛋白0.1-5g，去离子水60～120ml。

优选地，一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量份的原材料组成：乳清蛋白0.5-4g，壳聚糖0.05-3g，葡聚糖0.5-4g，茶多酚0.5-2g，溶菌酶0.5-1.5g，山梨酸钾0.6-1.5g,聚六亚甲基胍

0.02-0.08g,乳鉄蛋白0.5-4g，去离子水80～110ml。

优选地，一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量份的原材料组成：乳清蛋白3g，壳聚糖2g，葡聚糖3g，茶多酚1g，溶菌酶1g，山梨酸钾1g,聚六亚甲基胍0.05g,乳鉄蛋白2g，去离子水90ml。

一种用于清除HPV的复合制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)原料灭菌：钴60辐照灭菌，杀菌的辐射剂量为1-10kGy；

(2)无菌水制备:自来水高压灭菌，121℃，103.4kPa蒸汽压灭菌维持30min，备用；

(3)初制剂成分混合：高压灭菌的无菌水加热至50度，将壳聚糖搅拌溶解，分别加入乳清蛋白，葡聚糖，茶多酚，溶菌酶，山梨酸钾,乳鉄蛋白，搅拌溶解，混匀；

(4)初制剂过滤：将搅拌混匀混合物固定在管板上，装入耐压桶体内，过滤面积在3-30m²，工作压力在0.2Mpa.过滤精度为〉0.1um的PE过滤膜过滤，收集膜下过滤液体；

(5)产品分装：将过滤液体分装于20-200ml无菌容器中。

所述PE过滤膜的制备方法为：

(1)筛分：将PE粉末用孔径为5-8微米的筛粉机进行筛分；

(2)混合：筛分后的PE粉末加入固化剂和表面活性剂，搅拌形成混合粉末，向模具中加入混合粉末；

(3)烧结：将步骤(2)中装有的混合粉末的模具在80-90℃、2-4MPa的条件下保持120-180min烧结成型，冷却至室温即得到PE骨架；

(4)取步骤(1)筛分得到PE粉，加入3-7倍的溶剂得到PE液；

(5)浇注：将PE注入步骤(3)得到的骨架中控制压力5-8MPa，温度130-180℃，冷却至室温既得一种PE膜。

作为进一步限定，步骤(2)中的固化剂为间苯二胺：已二胺：二丙烯三胺按重量比3:5-7:3-5混合而成。

作为进一步限定，步骤(2)中表面活性剂由卵磷脂:硬脂酸:聚山梨酯按重量比1：3-6:3-4混合而成。

作为进一步限定，步骤(4)所述溶剂为聚砜。

本发明所述各主要功能成分作用机理如下：

乳清蛋白，具有抗菌和抗病毒功能^[3]。以前认为，乳清蛋白中乳铁蛋白的抗菌作用主要在体内清除部分致病菌生长所需要的铁离子(清除肠道内的铁离子)，而牛乳铁蛋白及其在体内被消化产生的乳铁转运蛋白可直接破坏革兰氏阴性菌的外层细胞壁，导致细胞的完整性破坏，最终死亡。乳铁运转蛋白的抗菌作用比乳铁蛋白更强烈，它可以抑制多种致病菌的生长繁殖，如大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌和空肠弯曲杆菌等。乳清蛋白还具有调节免疫和抗氧化的作用。经体外细胞培养试验和动物体内试验发现，乳清蛋白可提高机体非特异性和特异性免疫反应，可阻止化学诱发性癌症的发生，而且还能有效地减慢机体组织发生氧化的压力^[4]。乳清蛋白对免疫功能有促进作用的原理及抗氧化作用机理都与其富含半胱氨酸和谷氨酸有关，这两种氨基酸都是体内合成谷胱甘肽的前提。当摄入富含上述两种氨基酸的乳清蛋白后，能提高机体组织内谷胱甘肽的浓度，而谷胱甘肽是体内游离基的“清道夫”。

溶菌酶，具有溶解细菌细胞壁的酶^[5]，是一种碱性蛋白质,酸性环境下，酶活性很强。溶菌酶具有抗菌消炎、增强免疫力的作用。

壳聚糖，是甲壳素的一种衍生物———脱乙酰产物,可溶于酸性水溶液。在人体内可生物降解,无毒副作用,既可以作为药物载体又可以作为医药用膜和敷料，因而在医学领域用途广泛^[6]，壳聚糖具有抑菌、止血、镇痛等作用。

葡聚糖，是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，葡萄糖单元之间以糖苷键连接。它能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞***素和特殊抗体的含量，全面刺激机体的免疫系统。那么，机体就有更多的准备去抵抗微生物引起的疾病。β-葡聚糖能使受伤机体的淋巴细胞产生细胞因子(IL-1)的能力迅速恢复正常，有效调节机体免疫机能。大量实验表明，β-葡聚糖可促进体内IgM抗体的产生，以提高体液的免疫能力。这种葡聚糖活化的细胞会激发宿主非专一性防御机制，故应用在肿瘤、感染病和治疗创伤方面深受瞩目。经特殊步骤萃取且不含内毒素的β-1,3葡聚糖在美国FDA已认定是一种安全的物质，可添加在一般食品，许多报导显示老鼠口服酵母β-1,3葡聚糖，可增加强腹膜细胞抗菌之吞噬作用。此外，葡聚糖尚有清除游离基、抗辐射、溶解胆固醇，预防高脂血症作用及抵抗滤过性病毒、真菌、细菌等引起的感染^[7]。故广泛用于医药、食品、化妆品等行业。

茶多酚对下列疾病有明显的防治效果：降血压、抗凝血、降血脂肥胖、防治动脉硬化和血栓形成等心血管病、降血糖、防治糖尿病、杀菌抗病毒；防治胃肠道、呼吸道、流感等疾病；防治肝炎、抗衰老和增强免疫机能；健齿、防治牙周炎、防龋齿、消臭解毒等疗效。茶多酚可以作为上述疾病患者的辅助药品和保健药品的原料^[8]。茶多酚作为一种广谱、强效、低毒的抗菌药已被世界上许多国家的学者所公认。

聚六亚甲基胍——环保型高分子聚合物杀菌消毒剂，具有杀菌广谱；有效浓度低；作用速度快；性质稳定；易溶于水的优良性能；可在常温下使用；长期抑菌、无副作用；无腐蚀性；无色、无嗅；无毒；不燃、不爆、使用安全；价格适中；运输方便，可以说是最佳的杀菌剂。事实上，该产品是一种环保型多用途新型聚合物，在工业、农业、医用和日常生活中有着极其广泛的用途。

本发明的有益效果：

(1)抗HPV作用机制多样，清除效率高、转阴率效果好本发明制备复合制剂通过利用乳清蛋白，壳聚糖，葡聚糖，茶多酚，溶菌酶，山梨酸钾,聚六亚甲基胍,乳鉄蛋白等原料配比而成，该产品抗HPV能力强，功能多样，副作用小。主要通过抑制HPV复制增强机体整体及局部免疫力等四多种机制抗HPV，具有很好的抗HPV感染的效果。

(2)副作用小，本产品所用原料多为食品及原料，对人体副作用小。

具体实施方式

实施例1

一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量配比组成：乳清蛋白2g，壳聚糖1.5g，葡聚糖2g，茶多酚0.5g，溶菌酶0.5g，山梨酸钾0.5g,聚六亚甲基胍0.02,乳鉄蛋白1g加水至100g。

所述的一种用于清除HPV的复合制剂，制备方法为：

(1)原料灭菌：钴60辐照灭菌，杀菌的辐射剂量为5kGy；

(2)无菌水制备:自来水高压灭菌，121℃，103.4kPa蒸汽压灭菌维持30min，备用；

(3)初制剂成分混合：高压灭菌的无菌水加热至50度，将壳聚糖搅拌溶解，分别加入乳清蛋白，葡聚糖，茶多酚，溶菌酶，山梨酸钾,乳鉄蛋白，搅拌溶解，混匀；

(4)初制剂过滤：将搅拌混匀混合物固定在管板上，装入耐压桶体内，过滤面积为3-30m²，工作压力为0.2Mpa.过滤精度为〉0.1um的PE过滤膜过滤，收集膜下过滤液体；

(5)产品分装：将过滤液体分装于150ml无菌容器中。

所述PE过滤膜的制备方法为：

(1)筛分：将PE粉末用孔径为6微米的筛粉机进行筛分；

(2)混合：筛分后的PE粉末加入固化剂和表面活性剂，搅拌形成混合粉末，向模具中加入混合粉末；

(3)烧结：将步骤(2)中装有的混合粉末的模具在85℃、3MPa的条件下保持150min烧结成型，冷却至室温即得到PE骨架；

(4)取步骤(1)筛分得到PE粉，加入5倍的溶剂得到PE液；

(5)浇注：将PE注入步骤(3)得到的骨架中控制压力6MPa，温度150℃，冷却至室温既得一种PE膜。

作为进一步限定，步骤(2)中的固化剂为间苯二胺：已二胺：二丙烯三胺按重量比3:6:4混合而成。

作为进一步限定，步骤(2)中表面活性剂由卵磷脂:硬脂酸:聚山梨酯按重量比1：4:3混合而成。

作为进一步限定，步骤(4)所述溶剂为聚砜。

实施例2

一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量配比组成：乳清蛋白2.5g，壳聚糖1.8g，葡聚糖2.5g，茶多酚0.6g，溶菌酶0.6g，山梨酸钾0.6g,聚六亚甲基胍0.03,乳鉄蛋白1.5g加水至100g。其余同实施例1。

实施例3

一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量配比组成：乳清蛋白3g，壳聚糖2g，葡聚糖3g，茶多酚1g，溶菌酶1g，山梨酸钾1g,聚六亚甲基胍0.05g,乳鉄蛋白2g加水至100g，其余同实施例1。

实施例4

一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量份配比组成：乳清蛋白0.1g，壳聚糖0.01g，葡聚糖0.01g，茶多酚0.1g，溶菌酶0.1g，山梨酸钾0.2g,聚六亚甲基胍0.01g,乳鉄蛋白0.1g，加水至100g，其余同实施例1。

实施例5

一种用于清除HPV的复合制剂，由以下重量份配比组成：乳清蛋白5g，壳聚糖4g，葡聚糖5g，茶多酚3g，溶菌酶2g，山梨酸钾2g,聚六亚甲基胍0.1g,乳鉄蛋白5g加水至100g，其余同实施例1。

对比例1

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加乳清蛋白。

对比例2

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加壳聚糖。

对比例3

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加葡聚糖。

对比例4

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加茶多酚。

对比例5

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加溶菌酶。

对比例6

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加聚六亚甲基胍。

对比例7

与实施例1的区别在于，在制备的复合制剂中没有添加乳铁蛋白。

对比例8

与实施例1的区别在于，过滤过程采用的是普通的PE膜。

功效验证

选择HPV感染阳性女性志愿者进行实验，年龄为20-50岁。以上志愿者分别使用本发明实施例1-5和对比例1-8制备的制剂进行治疗，每组10位患者，使用复合制剂1-3ml，使用前将复合制剂摇匀，拨下复合制剂瓶尖的帽盖；将凝胶注射器的推杆拨出，把1-3毫升复合制剂液体滴入凝胶注射器中，将推杆插回到凝胶注射器中；把装有复合制剂的凝胶注射器******深处，将凝胶注射器中液体注入***；完成后，平躺30分钟。连续使用1-6个月，进行HPV检测，HPV阳性转阴患者为治疗有效。测试结果如下所示：

表1 HPV感染阳性患者人数(单位：人)

从上表可以看出在本发明范围之内的实施例1-5对hpv病毒有明显的抑制效果，对比例1-8制备的注射液对hpv效果不如本发明配方范围之内的实施例。