阅读说明：本技术 一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法 (A kind of method of inspection of Levobupivacaine HCL injection optical isomer ) 是由 吕海亮 余丹 刘亚军 王晓翠 关东 谢斌 陈新民 兰柳琴 于 2019-08-30 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物分析技术领域,涉及一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法,该方法利用方便快捷的高效液相色谱法,对盐酸左布比卡因注射液光学异构体进行检测,可用于监测盐酸左布比卡因注射液的质量,本发明所述的检测方法对盐酸左布比卡因注射液光学异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性,同时在专属性、精密度、准确度方面都符合标准,具有专属性强、系统适用性良好、精密度良好、准确度良好、线性关系良好、耐用性良好等特点,同时本发明的测定方法操作简单,所用时间比较短,成本低,耗时短。(The invention belongs to Pharmaceutical Analysis technical fields, it is related to a kind of method of inspection of Levobupivacaine HCL injection optical isomer, this method utilizes conveniently high performance liquid chromatography, Levobupivacaine HCL injection optical isomer is detected, it can be used for monitoring the quality of Levobupivacaine HCL injection, detection method of the present invention is high to the chromatographic peak separating degree of Levobupivacaine HCL injection optical isomer, system suitability with higher, simultaneously in specificity, precision, it is all complied with standard in terms of accuracy, it is strong with specificity, system suitability is good, precision is good, accuracy is good, linear relationship is good, the features such as good tolerance, measuring method of the invention simultaneously is easy to operate, time used is shorter, it is at low cost, it is time-consuming short.)

一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法

技术领域

本发明涉及一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

盐酸左布比卡因，英文名：Levobupivacaine Hydrochloride，化学名称为：S-(-)-1-丁基-N-(2,6-二甲基苯基)-2-哌啶甲酰胺盐酸盐，分子式为：C₁₈H₂₈N₂O·HCl，化学结构式如下：，盐酸左布比卡因是酰胺类局部***布比卡因的左旋异构体，主要用于外科硬膜外阻滞麻醉，左布比卡因具有较低的神经和心血管毒性，但其右旋异构体的心肌抑制作用强，因此控制盐酸左布比卡因中的右旋异构体对药品的质量控制非常重要，布比卡因的右旋异构体结构式Ⅱ如下：。

《中国药典》2015年版第一增补本中关于盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法中，用0.02mol/L磷酸盐缓冲溶液（磷酸二氢钾2.72g，加水800ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0）-异丙醇（90:10）为流动相，α1-酸糖蛋白键合硅胶填充剂为色谱柱，检测波长为215nm，用该方法检测盐酸左布比卡因中的光学异构体，所测样品的右布比卡因与左布比卡因未能达到基线分离，不符合右布比卡因与左布比卡因色谱峰之间的分离度应≥1.5的要求。

我司自主研发了一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法，该方法公开了一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法，该方法所测样品的右布比卡因与左布比卡因分离度大于1.5，分离度良好，同时在系统适用性、重复性、稳定性、精密度和准确度方面符合中国药典方法验证的指导原则。

发明内容

本发明的目的是提供一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于盐酸左布比卡因注射液的质量控制。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法，包括以下步骤：

（1）配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液及对照溶液，所述空白溶液为稀释液。

（2）测定方法：待系统稳定后，分别将空白溶液，系统适用性溶液，对照溶液，测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：直链淀粉键合硅胶为填充剂，流速1.0±0.1mL/min，柱温：25±5℃，进样量：10-20μl，检测波长：215nm，流动相为二乙胺：乙腈体系。

优选的，所述稀释液为水；

所述系统适用性溶液的配制步骤为：称取适量盐酸布比卡因对照品，置于容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；

所述测试溶液：移取适量盐酸左布比卡因注射液，置于容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；

所述对照溶液：移取适量测试溶液，置于容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；

所述流动相为：

流动相A：体积浓度为0.1%二乙胺溶液；

流动相B：乙腈；

所述二乙胺为HPLC级；

所述乙腈为HPLC级；

所述水为HPLC级；

所述色谱柱为Chiral INA 250×4.6mm，5μm。

更优选的，本发明所述的测定方法，包括以下步骤：

(1)配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液及对照溶液；所述空白溶液为稀释液，所述稀释液为水；

系统适用性溶液：取盐酸布比卡因对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液2ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.01mg/ml）

测试溶液：精密量取盐酸左布比卡因注射液2ml置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.1mg/ml）

对照溶液：精密量取测试溶液1ml置200ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.5μg/ml）

（2）测定方法：待系统稳定后，分别将空白溶液，系统适用性溶液，对照溶液，测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图,色谱条件如下: 色谱柱：直链淀粉键合硅胶为填充剂，流速1.0mL/min，柱温：25℃，进样量：20μl，检测波长：215nm，流动相为体积浓度为0.1%DEA-乙腈（40:60）；

所述色谱柱为Chiral INA 250×4.6mm，5μm；。

所述的盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检验方法还包括在检测之前的方法验证，该方法验证为按照正式检测的色谱条件，测定结果为：

有益效果

由以上技术方案可知，本发明所述的检测方法对盐酸左布比卡因注射液光学异构体的色谱峰分离度高、具有较高的系统适用性，在重复性方面符合标准。本发明利用方便快捷的高效液相色谱法，对盐酸左布比卡因注射液光学异构体进行检测，可用于监测盐酸左布比卡因注射液的质量。本发明提出的盐酸左布比卡因注射液光学异构体的检测方法，具有专属性强、系统适用性良好、精密度良好、准确度良好、线性关系良好、耐用性良好，适用于盐酸左布比卡因注射液光学异构体检测，以有效控制产品的质量，同时本发明的测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。

附图说明

图1为《中国药典》2015年版第一增补本中关于盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法空白溶液的液相色谱图；

图2为《中国药典》2015年版第一增补本中关于盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法系统适应性溶液的液相色谱图；

图3为《中国药典》2015年版第一增补本中关于盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法测试溶液的液相色谱图；

图4为盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法空白溶液的液相色谱图；

图5为盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法系统适应性溶液的液相色谱图；

图6为盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法测试溶液的液相色谱图；

图7 为盐酸左布比卡因线性关系图。

具体实施方式

下面用具体实施例来进一步解释和说明本发明，但并不以任何方式限制本发明的范围。

对比试验1

（1）《中国药典》2015年版第一增补本中关于盐酸左布比卡因光学异构体的检测方法与本申请方法的对比

（2）进样程序：

待系统稳定后，进样空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、测试溶液各1针，记录色谱图，要求：系统适用性溶液所得色谱图中右布比卡因与左布比卡因色谱峰之间的分离度应≥1.5。

计算：I%=×0.5

其中I%为光学异构体含量

As为测试溶液中右布比卡因峰面积

Ar为对照溶液中左布比卡因峰面积

结果判断：样品中含右布比卡因应不得过0.5%。

（3）检测结果：检测图谱如图1-6所示，结果如下表所示

（4）结论

方法1和方法2的系统适用性溶液中，右布比卡因与左布比卡因的分离度相差不大，均大于1.5。方法1测试溶液中，右布比卡因与左布比卡因未能达到基线分离，方法2测试溶液中，右布比卡因与左布比卡因分离度大于1.5，分离度良好。

由于方法1测试溶液中，右布比卡因与左布比卡因未能达到基线分离，即使基于风险最大的积分参数也未能真实反应右布比卡因含量。

综上，选用方法2，即本申请方法用于盐酸左布比卡因注射液的光学异构体测定，能更有效控制产品的质量。

实施例1

(1)实验材料与仪器条件

仪器：高效液相色谱仪：Agilent 1260；色谱柱：Chiral INA 250×4.6mm，5μm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：20μl；检测波长：215nm，流动相：0.1%DEA-乙腈（40:60）；

（2）实验步骤

配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液及对照溶液；

空白溶液为稀释液，稀释液为水；

系统适用性溶液：取盐酸布比卡因对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.01mg/ml）

测试溶液：精密量取盐酸左布比卡因注射液2ml置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.1mg/ml）

对照溶液：精密量取测试溶液1ml置200ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.5μg/ml）。

LOQ溶液：根据测试溶液所得色谱图中左布比卡因的S/N值，调节稀释比例用稀释液稀释成S/N约为10的溶液。

LOD溶液：精密量取LOQ溶液3ml置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。

线性储备溶液：取盐酸左布比卡因对照品10.20mg，精密称定，置200ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。（浓度：4.8552μg/ml）

标准曲线50%溶液：精密量取线性储备溶液1ml，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（浓度：0.2428μg/ml）；

标准曲线80%溶液：精密量取线性储备溶液2ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（浓度：0.3884μg/ml）；

标准曲线100%溶液：精密量取线性储备溶液1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（浓度：0.4855μg/ml）；

标准曲线200%溶液：精密量取线性储备溶液2ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（浓度：0.9710μg/ml）；

标准曲线300%溶液：精密量取线性储备溶液3ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（浓度：1.4565μg/ml）。

空白辅料储备溶液：精密称取空白辅料29.05mg（相当于处方量盐酸左布比卡因20mg），置20ml量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

空白辅料溶液：精密移取空白辅料储备溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

LOQ回收率溶液：精密量取线性储备溶液1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml和空白辅料储备溶液1ml，置同一10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。（同法配制3份）

100%回收率溶液：精密量取线性储备溶液1ml和空白辅料储备溶液1ml，置同一10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。（同法配制3份）

200%回收率溶液：精密量取线性储备溶液2ml和空白辅料储备溶液1ml，置同一10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。（同法配制3份）

进样程序：待系统稳定后，进样空白溶液，系统适用性溶液，对照溶液，样品溶液各1针，记录色谱图。

要求：系统适用性溶液所得色谱图中右布比卡因与左布比卡因色谱峰之间的分离度应≥1.5。

计算：I%=×0.5

其中I%为光学异构体含量

As为测试溶液中右布比卡因峰面积

Ar为对照溶液中左布比卡因峰面积

结果判断：样品中含右布比卡因应不得过0.5%。

实施例2本发明所述检测方法系统适用性试验

系统适用性是通过考察系统适用性溶液在该色谱条件下的分离能力而实现的，要求右布比卡因和左布比卡因色谱峰之间分离度应≥1.5，右布比卡因和左布比卡因的峰面积RSD不大于2.0%，回校针与5针系统适用性溶液中右布比卡因和左布比卡因的峰面积的RSD不得大于2.0%，待系统稳定后，进样空白溶液1～3针，系统适用性溶液5针，回校系统适用性溶液1针，记录色谱图。

实施例3本发明所述检测方法定量限和检测限

定量限和检测限是通过一定浓度的溶液测定其信号与基线噪声的比值而实现的，要求LOQ溶液S/N≥10，6份LOQ溶液所得色谱图中左布比卡因峰面积的RSD 应≤10%，LOD溶液S/N≥3，待系统稳定后，进样对照溶液、LOD溶液各1针，LOQ溶液进6针，记录色谱图。

实施例4本发明所述检测方法精密度

（1）本发明所述检测方法重复性试验

重复性是通过一名检验员测定6份测试溶液，考察6份测试溶液测定结果之间的RSD而实现的，要求6份测试溶液检测结果的RSD≤10.0%，待系统稳定后，进样空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液、对照溶液各1针，记录色谱图。

本发明所述检测方法重现性试验

重现性是另一检验员在不同实验室测定6份测试溶液而实现的，要求6份测试溶液检测结果的RSD≤10%，要求与重复性6次测定结果共计12次测定结果的RSD≤20%，待系统稳定后，进样空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液、测试溶液各1针。

实施例5本发明所述检测方法线性

线性是考察在LOQ～300%(杂质Ⅱ限度3倍)浓度范围内，盐酸左布比卡因的浓度与峰面积是否呈线性关系，要求盐酸左布比卡因在LOQ～300%(杂质Ⅱ限度3倍)浓度范围内，峰面积与浓度呈线性，相关系数R2≥0.99；Y轴截距应在100%响应值的25%以内；响应因子RSD≤5.0%，进空白溶液进1针，各线性溶液各进3针，记录色谱图。如图7所示。

实施例6本发明所述检测方法准确度

准确度是通过测定不同浓度水平下被测组分实测浓度和理论浓度之间的回收率而实现的，要求LOQ浓度下回收率为80.0%~120.0%，RSD≤20%；其他浓度回收率为90.0%~110.0%，RSD≤10%，待系统稳定后，进空白溶液1针，对照品溶液5针，各回收率溶液各1针。

实施例7本发明所述检测方法专属性

专属性是通过考察空白溶液、空白辅料溶液以及样品的加入对光学异构体（右布比卡因）的检测是否有干扰而实现的，要求空白溶液、空白辅料溶液对检测应无干扰；测试溶液：主峰纯度因子不低于980，主峰与相邻峰之间的分离度大于1.5，待系统稳定后，进样空白溶液、空白辅料溶液、测试溶液各1针，记录色谱图。

实施例8本发明所述检测方法耐用性

（1）本发明所述检测方法溶液稳定性

溶液稳定性是考察测试溶液、对照品溶液在2天内检测结果随时间变化的规律，为检测时测试溶液、对照溶液的放置时间提供依据，要求与0天时相比，对照溶液在2天内主成份峰面积的RD不大于2.0%；与0天时相比，测试溶液在2天内杂质Ⅱ含量差值绝对值不大于限度的20%，待系统稳定后，空白溶液进1针，分别在0、1、2天进样上述对照溶液和测试溶液各1针，记录色谱图。

（2）本发明所述检测方法色谱条件微小变化

色谱条件微小变化是考察色谱条件流速（±10%）、柱温（±5℃）、流动相比例（±5%）、更换色谱柱4个因素与正常条件相比较，要求各色谱条件下：右布比卡因与左布比卡因之间的分离度应≥1.5，杂质Ⅱ含量变化不大于限度20%，待系统稳定后，空白溶液进样1针，系统适用性溶液、对照溶液和测试溶液各进样1针，记录色谱图。

以上实施例仅为本发明的优选实施方案，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。