Tbc1d3及其家族在制备肿瘤诊断药物与预后判断药物中的应用

文档序号：183946 发布日期：2021-11-02 浏览：22次 >En<

阅读说明：本技术 Tbc1d3及其家族在制备肿瘤诊断药物与预后判断药物中的应用 (Application of TBC1D3 and its family in preparing tumor diagnosis medicine and prognosis judgment medicine ) 是由王北陈丹丹袁凤来于 2021-06-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了TBC1D3及其家族在制备肿瘤诊断药物与预后判断药物中的应用,属于生物医药技术领域。本发明发现肾透明细胞癌组织中TBC1D3及其家族基因的表达显著高于癌旁正常组织；肾透明细胞癌中TBC1D3及其家族蛋白的表达水平与患者的预后密切相关。本发明提出TBC1D3可作为肾透明细胞癌诊断和预后判断的分子标记及治疗药物的靶标。TBC1D3家族成员可以作为肾透明细胞癌的免疫治疗靶点。(The invention provides application of TBC1D3 and a family thereof in preparation of tumor diagnosis drugs and prognosis judgment drugs, belonging to the technical field of biological medicines. The invention finds that the expression of TBC1D3 and the family gene thereof in the renal clear cell carcinoma tissue is obviously higher than that of a paracancer normal tissue; the expression level of TBC1D3 and its family proteins in renal clear cell carcinoma is closely related to the prognosis of the patient. The TBC1D3 provided by the invention can be used as a molecular marker for diagnosis and prognosis judgment of renal clear cell carcinoma and a target of a therapeutic drug. TBC1D3 family members can be targeted for immunotherapy of renal clear cell carcinoma.)

TBC1D3及其家族在制备肿瘤诊断药物与预后判断药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其是指TBC1D3及其家族在制备肿瘤诊断药物与预后判断药物中的应用。

背景技术

肾透明细胞癌是肾癌中最常见的恶性肿瘤，占原发性肾脏恶性肿瘤的75-82％。在各种临床和基因组研究中，肾透明细胞癌被证明是一种高度免疫浸润的肿瘤，是最早的免疫治疗肿瘤之一。由于肾透明细胞癌对常规放疗和化疗不敏感，其治疗主要依赖于靶向治疗和免疫治疗。靶向治疗包括酪氨酸激酶抑制剂，如舒尼替尼和索拉非尼。然而，肿瘤异质性、动态变化和对治疗的适应细胞死亡相关信号通路的改变显著限制了靶向药物在肾透明细胞癌治疗中的应用。

发明内容

本发明通过在线数据库发现肾透明细胞癌组织中TBC1D3及其家族基因的表达显著高于癌旁正常组织；肾透明细胞癌中TBC1D3及其家族蛋白的表达水平与患者的预后密切相关，肾透明细胞癌组织中TBC1D3及其家族蛋白表达水平高的患者总的生存率低于表达低的患者。同时我们构建TBC1D3质粒，转染肾透明细胞癌细胞，发现可以促进其细胞增殖。同时发现TBC1D3家族成员与免疫浸润相关。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指内源性或外源性双链RNA介导的细胞内mRNA发生特异性降解，导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。目前，RNAi特异性的抑制基因表达，已应用于基因病、病毒感染性疾病、癌症的基因治疗等方面。

TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C、TBC1D3D、TBC1D3E、TBC1D3F、TBC1D3G 或TBC1D3H作为肿瘤诊断及预后标记物的应用。

在本发明的一个实施例中，所述TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C、TBC1D3D、 TBC1D3E、TBC1D3F、TBC1D3G或TBC1D3H的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8所示。

在本发明的一个实施例中，所述肿瘤为肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌和甲状腺癌。

TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C、TBC1D3D、TBC1D3E、TBC1D3F、TBC1D3G 或TBC1D3H的RNA干扰靶点序列分别如SEQ ID NO.9-SEQ ID NO.14所示。

所述的TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C、TBC1D3F、TBC1D3G或TBC1D3H的 RNA干扰靶点序列在制备治疗肿瘤药物中的应用。

在本发明的一个实施例中，所述肿瘤为肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌或甲状腺癌。

一种抗肿瘤的药物，所述药物中含有所述TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C、 TBC1D3F、TBC1D3G或TBC1D3H的RNA干扰靶点序列。

在本发明的一个实施例中，所述药物还包括抑制CD4+T细胞或T细胞耗竭的抑制剂。

在本发明的一个实施例中，所述肿瘤为肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌或甲状腺癌。

在本发明的一个实施例中，所述TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C、TBC1D3F、 TBC1D3G或TBC1D3H的RNA干扰靶点序列分别如SEQ ID NO.9-SEQ ID NO.14所示。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：

本发明首次证实TBC1D3及其家族是一个肾透明细胞癌预后标记物，首次发现TBC1D3可作为肾透明细胞癌诊断和预后判断的分子标记及治疗药物的靶标。TBC1D3 家族成员可以作为肾透明细胞癌的免疫治疗靶点。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1-1与图1-2是本发明TBC1D3泛癌表达分析，TBC1D3家族在TCGA数据库中的表达。

图2是本发明中TBC1D3家族成员的基因组改变以及TBC1D3家族基因的基因-基因和蛋白质-蛋白质相互作用网络。

图3-1、图3-2与图3-3是本发明中TBC1D3家族成员在肾透明细胞癌中预后表达。

图4是本发明中TBC1D3家族成员在肾透明细胞癌中的功能。

图5-1、图5-2、图5-3与图5-4是本发明中TBC1D3家族蛋白与免疫抑制剂的相关性。

图6-1、图6-2、图6-3、图6-4与图6-5是本发明中TBC1D3家族成员蛋白与肾透明细胞癌免疫浸润相关性。

图7-1、图7-2与图7-3是本发明中肾透明细胞癌免疫浸润水平与TBC1D3家族成员不同体细胞拷贝数改变的相关性。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1 TBC1D3及其家族在肾功能透明细胞癌中的表达

通过GSCA数据库分析，TBC1D3在肾透明细胞癌中的表达。发现TBC1D3表达在肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌和甲状腺癌中高表达，在头颈部鳞状细胞癌中低表达。我们同时通过UALCAN数据库和下载肾透明细胞癌TCGA 数据，通过R语言分析数据，发现TBC1D3家族(TBC1D3，TBC1D3B，TBC1D3C， TBC1D3D，TBC1D3E，TBC1D3F，TBC1D3G，TBC1D3H)在肾透明细胞癌中相比于癌旁组织都高表达。

实施例2 TBC1D3及其家族的基因和蛋白网络的基因改变

我们使用cBioportal数据库来确定TCGA KIRC样本中TBC1D3家族改变的类型和频率。结果显示TBC1D3家族成员很少发生突变(少于5个频率)，这是高度保守的(结果见图2-A)。然后，我们使用cBioportal的“相关分析”对TBC1D3家族的五个成员进行分析，结果表明，TBC1D3家族成员之间的关联呈正相关，但TBC1D3C与TBC1D3G 呈负相关(结果见图2-D)。利用GeneMANIA和STRING生成的基因-基因和蛋白质-蛋白质相互作用网络显示，20个潜在靶基因和11个潜在靶蛋白与TBC1D3家族相互作用 (结果见图2-B与图2-C)。

实施例3 TBC1D3家族成员在肾透明细胞癌中预后表达

使用GSCA、TISIDB、LinkedOmics和Kaplan-Meier绘图仪评估TBC1D3家族表达对生存率的影响。GSCA分析显示，TBC1D3在KIRC多发性肿瘤中的表达与OS和PFS 呈正相关。此外，高表达的TBC1D3存活时间短(结果见图3-1)。TISIDB和LinkedOmics 的总生存率分析表明，TBC1D3家族成员高表达的患者总生存期较短(结果见图3-2与图3-3)。为了进一步探讨TBC1D3在KIRC临床特征中的作用，我们使用Kaplan-Meier 绘图仪研究了TBC1D3表达与KIRC临床病理特征之间的关系。如表1所示，TBC1D3 和TBC1D3B的高表达与I期、II期、III期、IV期、3级和4级患者的OS恶化相关。为了探讨TBC1D3表达是否是KIRC患者总生存率的独立预测因素，我们进行了单变量和多变量Cox回归分析。单因素Cox回归分析显示，年龄、分级、分期、TNM分级均为OS的独立危险因素(p＝0.012、3.61E-08、1.26E-10、2.69E-08、2.76E-10和0.001)；在多变量Cox回归分析中，年龄、年级和TBC1D3表达是OS的独立危险因素(分别 p＝0.0003、0.014和0.013)(结果见表2)。

表1

注：粗体字表示p＜0.05。

表2

注：粗体字表示p＜0.05。

表3

注：TAM,肿瘤相关巨噬细胞；Th,T辅助细胞；Tfh,卵泡辅助性T细胞；Treg,调节性T细胞；*P<0.01；**P<0.001；***P<0.0001。

实施例4 TBC1D3在肾透明细胞癌中的功能

为了研究TBC1D3家族在KIRC中的功能，我们使用CancerSEA进行了单细胞分析。结果表明，TBC1D3D正调控KIRC细胞的增殖，负调控炎症(图4A-B)。我们构建了 TBC1D3质粒并转染Caki-1细胞，结果显示TBC1D3能促进肾透明细胞癌细胞的增殖(结果见图4-C)。TBC1D3的生物学过程通过过表达富集分析(ORA)进行鉴定，结果表明 TBC1D3的表达与免疫应答密切相关(结果见图4-D)。

实施例5 TBC1D3家族表达与免疫抑制剂在肾透明细胞癌中的相关性

选择TISIDB数据库研究TBC1D3家族表达与免疫抑制效应之间的关系。因此，TBC1D3、TBC1D3B、TBC1D3C和TBC1D3G是TBC1D3家族的四个成员，分别与CD160、 CTLA4、CD244、KDR、LAG3、PDCD1、PDCD1LG2和TIGIT相关。此外，TGFBR1 和HAVCR2与TBC1D3、TBC1D3B和TBC1D3G相关。CD274与TBC1D3B、TBC1D3C 和TBC1D3G相关。此外，TBC1D3与LGALS9相关。TBC1D3B与CD274相关。TBC1D3C 与CD96和LGALS9相关。TBC1D3G与IL10RB和PVRL2相关(结果见图5-1，图5-2，图5-3，图5-4)。

实施例6 TBC1D3家族表达与免疫浸润在肾透明细胞癌中的相关性

采用TIMER数据库探讨TBC1D3家族表达与肾透明细胞癌浸润淋巴细胞的关系。TBC1D3家族表达与CD4+T细胞浸润水平呈正相关。此外，巨噬细胞浸润水平仅与 TBC1D3表达显著相关，树突状细胞浸润水平与TBC1D3B表达呈负相关。中性粒细胞浸润水平与TBC1D3和TBC1D3H表达呈正相关(结果见图6-1，图6-2，图6-3，图6-4，图6-5)。为了进一步证实TBC1D3在KIRC中的表达与免疫细胞浸润水平之间的关系，我们使用TIMER数据库来探讨TBC1D3表达与各种免疫浸润相关标记物之间的关系。我们的结果显示，TBC1D3的表达与大多数中性粒细胞、Th1、Th2、Treg和T细胞衰竭的标志物之间存在显著相关性(结果见表3)。特别是T细胞衰竭，结果与DISTIB分析一致。体细胞拷贝数改变(SCNA)模块显示TBC1D3家族成员的臂水平缺失与肾透明细胞癌中的免疫细胞浸润水平显著相关(结果见图7-1，图7-2，图7-3)。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

SEQUENCE LISTING

<110> 江南大学附属医院

<120> TBC1D3及其家族在制备肿瘤诊断药物与预后判断药物中的应用

<130> 14

<160> 14

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2077

<212> RNA

<213> （人工合成）

<400> 1

aguggucuac agcaguuaca cacaggcagu gguaucugug agcagcucug uggacucaaa 60

gguuuucucc cugagaggca ugacccaggc cagcugauuc aucagaauca ggauggacgu 120

gguagagguc gcgggcaguu ggugggcaca agagcgagag gacaucauua ugaaauacga 180

aaagggacac cgagcugggc ugccagagga caaggggccu aagccuuuuc gaagcuacaa 240

caacaacguc gaucauuugg ggauuguaca ugagacggag cugccuccuc ugacugcgcg 300

ggaggcgaag caaauucggc gggagaucag ccgaaagagc aagugggugg auaugcuggg 360

agacugggag aaauacaaaa gcagcagaaa gcucauagau cgagcguaca agggaaugcc 420

caugaacauc cggggcccga uguggucagu ccuccugaac acugaggaaa ugaaguugaa 480

aaaccccgga agauaccaga ucaugaagga gaagggcaag aggucaucug agcacaucca 540

gcgcaucgac cgggacguaa gcgggacauu aaggaagcau auauucuuca gggaucgaua 600

cggaaccaag cagcgggaac uacuccacau ccuccuggca uaugaggagu acaacccgga 660

ggugggcuac ugcagggacc ugagccacau cgccgccuug uuccuccucu aucuuccuga 720

ggaggaugca uucugggcac uggugcagcu gcuggccagu gagaggcacu cccugcaggg 780

auuucacagc ccaaauggcg ggaccgucca ggggcuccaa gaccaacagg agcauguggu 840

agccacguca caacccaaga ccauggggca ucaggacaag aaagaucuau gugggcagug 900

uuccccguua ggcugccuca uccggauauu gauugacggg aucucucucg ggcucacccu 960

gcgccugugg gacguguauc ugguagaagg cgaacaggcg uugaugccga uaacaagaau 1020

cgccuuuaag guucagcaga agcgccucac gaagacgucc agguguggcc cgugggcacg 1080

uuuuugcaac cgguucguug auaccugggc cagggaugag gacacugugc ucaagcaucu 1140

uagggccucu augaagaaac uaacaagaaa gaagggggac cugccacccc cagccaaacc 1200

cgagcaaggg ucgucggcau ccaggccugu gccggcuuca cguggcggga agacccucug 1260

caagggggac aggcaggccc cuccaggccc accagcccgg uucccgcggc ccauuugguc 1320

agcuuccccg ccacgggcac cucguucuuc cacacccugu ccuggugggg cuguccggga 1380

agacaccuac ccugugggca cucagggugu gcccagcccg gcccuggcuc agggaggacc 1440

ucaggguucc uggagauucc ugcaguggaa cuccaugccc cgccucccaa cggaccugga 1500

cguagagggc ccuugguucc gccauuauga uuucaggcag agcugcuggg uccgugccau 1560

aucccaggag gaccagcugg cccccugcug gcaggcugaa cacccugcgg agcgggugag 1620

aucggcuuuc gcugcaccca gcacugauuc cgaccagggc acccccuuca gagcuaggga 1680

cgaacagcag ugugcuccca ccucagggcc uugccucugc ggccuccacu uggaaaguuc 1740

ucaguucccu ccaggcuucu agaagcaucu gggccagggc ucauggcugg auaauuuccc 1800

uaggcuuaac aacccaagca agcuucgcau ccucguuuua uuuuugguua aacuuaugaa 1860

aauguauuaa gaaagagugc agcucgagag agauucagag auggaacaca ccagacccca 1920

gaucacaaag ccaaccaugc ccagccccuc ccagcacccc cagccccacg accaucguuc 1980

ugaauucuga cgacaccgug agccugccuu uguacuucaa acucauggaa ggauaaccac 2040

cuucauguuu ugaaauaaau guuuccuguu gaaauga 2077

<210> 2

<211> 1620

<212> RNA

<213> （人工合成）

<400> 2

agaaugucac uggugcuuag caccuaucug cucucuggcc ugccucagug gucuacagca 60

guuacacaca ggcaguggua ucugugagca gcucugugga cucaaagguu uucucccuga 120

gaggcaugac ccaggccagc ugauucauca gaaucaggau ggacguggua gaggucgcgg 180

guaguuggug ggcacaagag cgagaggaca ucauuaugaa auacgaaaag ggacaccgag 240

cugggcugcc agaggacaag gggccuaagc cuuuucgaag cuacaacaac aacgucgauc 300

auuuggggau uguacaugag acggagcugc cuccucugac ugcgcgggag gcgaagcaaa 360

uucggcggga gaucagccga aagagcaagu ggguggauau gcugggagac ugggagaaau 420

acaaaagcag cagaaagcuc auagaucgag cguacaaggg aaugcccaug aacauccggg 480

gcccgaugug gucaguccuc cugaacauug aggaaaugaa guugaaaaac cccggaagau 540

accagaucau gaaggagaag ggcaagaggu caucugagca cauccagcgc aucgaccggg 600

acauaagcgg gacauuaagg aagcauaugu ucuucaggga ucgauacgga accaagcagc 660

gggaacuacu ccacauccuc cuggcauaug aggaguauaa cccggaggug ggcuacugca 720

gggaccugag ccacaucgcc gccuuguucc uccucuaucu uccugaggag gaugcauucu 780

gggcacuggu gcagcugcug gccagugaga ggcacucccu gcagggauuu cacagcccaa 840

auggcgggac cguccagggg cuccaagacc aacaggagca ugugguagcc acgucacaau 900

ccaagaccau ggggcaucag gacaagaaag aucuaugugg gcaguguucc ccguuaggcu 960

gccucauccg gauauugauu gacgggaucu cucucgggcu cacccugcgc cugugggacg 1020

uguaucuggu agaaggcgaa caggcguuga ugccgauaac aagaaucgcc uuuaagguuc 1080

agcagaagcg ccucacgaag acguccaggu guggcccgug ggcacguuuu ugcaaccggu 1140

ucguugauac cugggccagg gaugaggaca cugugcucaa gcaucuuagg gccucuauga 1200

agaaacuaac aagaaagcag ggggaccugc cacccccagc caaacccgag caagggucgu 1260

cggcauccag gccugugccg gcuucacgug gcaggaagac ccucugcaag ggggacaggc 1320

aggccccucc aggcccacca gcccgguucc cgcggcccau uuggucagcu uccccgccac 1380

gggcaccucg uucuuccaca cccuguccug guggggcugu ccgggaagac accuacccug 1440

ugggcacuca gggugugccc agcccggccc uggcucaggg aggaccucag gguuccugga 1500

gauuccugca guggaacucc augccccgcc ucccaacgga ccuggacgua gaggggccuu 1560

gguuccgcca uuaugauuuc agacagagcu gcuggguccg ugccauaucc caggaggacc 1620

<210> 3

<211> 1620

<212> RNA

<213> （人工合成）

<400> 3

agcaccuauc ugcucucugg ucugccucag uggucuacag caguuacaca caggcagugg 60

uaucugugag cagcucugug gacucaaagg uuuucucccu gagaggcacg acccaggcca 120

gcugauucau cagaaucagg auggacgugg uagaggucgc gggcaguugg ugggcacaag 180

agcgagagga caucauuaug aaauacgaaa agggacaccg agcugggcug ccagaggaca 240

aggggccuaa gccuuuucga agcuacaaca acaacgucga ucauuugggg auuguacaug 300

agacggagcu gccuccucug acugcgcggg aggcgaagca aauucggcgg gagaucagcc 360

gaaagagcaa guggguggau augcugggag acugggagaa auacaaaagc agcagaaagc 420

ucauagaucg agcguacaag ggaaugccca ugaacauccg gggcccgaug uggucagucc 480

uccugaacac ugaggaaaug aaguugaaaa accccggaag auaccagauc augaaggaga 540

agggcaagag gucaucugag cacauccagc gcaucgaccg ggacguaagc gggacauuaa 600

ggaagcauau auucuucagg gaucgauacg gaaccaagca gcgggaacua cuccacaucc 660

uccuggcaua ugaggaguac aacccggagg ugggcuacug cagggaccug agccacaucg 720

ccgccuuguu ccuccucuau cuuccugagg aggaugcauu cugggcacug gugcagcugc 780

uggccaguga gaggcacucc cugcagggau uucacagccc aaauggcggg accguccagg 840

ggcuccaaga ccaacaggag caugugguag ccacgucaca acccaagacc auggggcauc 900

aggacaagaa agaucuaugu gggcaguguu ccccguuagg cugccucauc cggauauuga 960

uugacgggau cucucucggg cucacccugc gccuguggga cguguaucug guagaaggcg 1020

aacaggcguu gaugccgaua acaagaaucg ccuuuaaggu ucagcagaag cgccucacga 1080

agacguccag guguggcccg ugggcacguu uuugcaaccg guucguugau accugggcca 1140

gggaugagga cacugugcuc aagcaucuua gggccucuau gaagaaacua acaagaaaga 1200

agggggaccu gccaccccca gccaaacccg agcaaggguc gucggcaucc aggccugugc 1260

cggcuucacg uggcgggaag acccucugca agggggacag gcaggccccu ccaggcccac 1320

cagcccgguu cccgcggccc auuuggucag cuuccccgcc acgggcaccu cguucuucca 1380

cacccugucc ugguggggcu guccgggaag acaccuaccc ugugggcacu cagggugugc 1440

ccagcccggc ccuggcucag ggaggaccuc aggguuccug gagauuccug caguggaacu 1500

ccaugccccg ccucccaacg gaccuggacg uagagggccc uugguuccgc cauuaugauu 1560

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<210> 4

<211> 2065

<212> RNA

<213> （人工合成）

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gagaggcacg acccaggcca gcugauucau cagaaucagg auggacgugg uagaggucgc 120

gggcaguugg ugggcacaag agcgagagga caucauuaug aaauacgaaa agggacaccg 180

agcugggcug ccagaggaca aggggccuaa gccuuuucga agcuacaaca acaacgucga 240

ucauuugggg auuguacaug agacggagcu gccuccucug acugcgcggg aggcgaagca 300

aauucggcgg gagaucagcc gaaagagcaa guggguggau augcugggag acugggagaa 360

auacaaaagc agcagaaagc ucauagaucg agcguacaag ggaaugccca ugaacauccg 420

gggcccgaug uggucagucc uccugaacac ugaggaaaug aaguugaaaa accccggaag 480

auaccagauc augaaggaga agggcaagag gucaucugag cacauccagc gcaucgaccg 540

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gcgggaacua cuccacaucc uccuggcaua ugaggaguau aacccggagg ugggcuacug 660

cagggaccug agccacaucg ccgccuuguu ccuccucuau cuuccugagg aggaugcauu 720

cugggcacug gugcagcugc uggccaguga gaggcacucc cugcagggau uucacagccc 780

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guucguugau accugggcca gggaugagga cacugugcuc aagcaucuua gggccucuau 1140

gaagaaacua acaagaaagc agggggaccu gccaccccca gccaaacccg agcaaggguc 1200

gucggcaucc aggccugugc cggcuucacg uggcgggaag acccucugca agggggacag 1260

gcaggccccu ccaggcccac cagcccgguu cccgcggccc auuuggucag cuuccccgcc 1320

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gagauuccug caguggaacu ccaugccccg ccucccaacg gaccuggacg uagagggccc 1500

uugguuccgc cauuaugauu ucagacagag cugcuggguc cgugccauau cccaggagga 1560

ccagcuggcc cccugcuggc aggcugaaca cccugcggag cgggugagau cggcuuucgc 1620

ugcacccagc acugauuccg accagggcac ccccuucaga gcuagggacg aacagcagug 1680

ugcucccacc ucagggccuu gccucugcgg ccuccacuug gaaaguucuc aguucccucc 1740

aggcuucuag aagcaucugg gccagggcuc auggcuggau aauuucccua ggcuuaacaa 1800

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acaccgugag ccugccuuug uacuucaaac ucauggaagg auaaccaccu ucauguuuug 2040

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<211> 2082

<212> RNA

<213> （人工合成）

<400> 5

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ucaaagguuu ucucccugag aggcaugacc caggccagcu gauucaucag aaucaggaug 120

gacgugguag aggucgcggg caguuggugg gcacaagagc gagaggacau cauuaugaaa 180

uacgaaaagg gacaccgagc ugggcugcca gaggacaagg ggccuaagcc uuuucgaagc 240

uacaacaaca acgucgauca uuuggggauu guacaugaga cggagcugcc uccucugacu 300

gcgcgggagg cgaagcaaau ucggcgggag aucagccgaa agagcaagug gguggauaug 360

cugggagacu gggagaaaua caaaagcagc agaaagcuca uagaucaagc guacaaggga 420

augcccauga acauccgggg cccgaugugg ucaguccucc ugaacacuga ggaaaugaag 480

uugaaaaacc ccggaagaua ccagaucaug aaggagaagg gcaagaaguc aucugagcac 540

auccagcgca ucgaccggga cguaagcggg acauuaagga agcauauauu cuucagggau 600

cgauacggaa ccaagcagcg ggaacuacuc cacauccucc uggcauauga ggaguacaac 660

ccggaggugg gcuacugcag ggaccugagc cacaucgccg ccuuguuccu ccucuaucuu 720

ccugaggagg augcauucug ggcacuggug cagcugcugg ccagugagag gcacucccug 780

cagggauuuc acagcccaaa uggcgggacc guccaggggc uccaagacca acaggagcau 840

gugguagcca cgucacaacc caagaccaug gggcaucagg acaagaaaga ucuauguggg 900

caguguuccc cguuaggcug ccucauccgg auauugauug acgggaucuc ucucgggcuc 960

acccugcgcc ugugggacgu guaucuggua gaaggcgaac aggcgcugau gccgauaaca 1020

agaaucgccu uuaagguuca gcagaagcgc cucacgaaga cguccaggug uggcccgugg 1080

gcacguuuuu gcaaccgguu cguugauacc ugggccaggg augaggacac ugugcucaag 1140

caucuuaggg ccucuaugaa gaaacuaaca agaaagaagg gggaccugcc acccccagcc 1200

aaacccgagc aagggucguc ggcauccagg ccugugccgg cuucacgugg cgggaagacc 1260

cucugcaagg gggacaggca ggccccucca ggcccaccag cccgguuccc gcggcccauu 1320

uggucagcuu ccccgccacg ggcaccucgu ucuuccacac ccuguccugg uggggcuguc 1380

cgggaagaca ccuacccugu gggcacucag ggugugccca gcccggcccu ggcucaggga 1440

ggaccucagg guuccuggag auuccugcag uggaacucca ugccccgccu cccaacggac 1500

cuggacguag agggcccuug guuccgccau uaugauuuca gacagagcug cuggguccgu 1560

gccauauccc aggaggacca gcuggccccc ugcuggcagg cugaacaccc ugcggagcgg 1620

gugagaucgg cuuucgcugc acccagcacu gauuccgacc agggcacccc cuucagagcu 1680

agggacgaac agcagugugc ucccaccuca gggccuugcc ucugcggccu ccacuuggaa 1740

aguucucagu ucccuccagg cuucuagaag caucugggcc agggcucaug gcuggauaau 1800

uucccuaggc uuaacaaccc aagcaagcuu cgcauccucg uuuuauuuuu gguuaaacuu 1860

augaaaaugu auuaagaaag agugcagcuc gagagagauu cagagaugga acacaccaga 1920

ccccagauca caaagccaac caugcccagc cccucccagc acccccagcc ccacgaccau 1980

cguucugaau ucugacgaca ccgugagccu gccuuuguac uucaaacuca uggaaggaua 2040

accaccuuca uguuuugaaa uaaauguuuc cuguugaaau ga 2082

<210> 6

<211> 2077

<212> RNA

<213> （人工合成）

<400> 6

aguggucuac agcaguuaca cacaggcagu gguaucugug agcagcucug uggacucaaa 60

gguuuucucc cugagaggca ugacccaggc cagcugauuc aucagaauca ggauggacgu 120

gguagagguc gcggguaguu ggugggcaca agagcgagag gacaucauua ugaaauacga 180

aaagggacac cgagcugggc ugccagagga caaggggccu aagccuuuuc gaagcuacaa 240

caacaacguc gaucauuugg ggauuguaca ugagacggag cugccuccuc ugacugcgcg 300

ggaggcgaag caaauucggc gggagaucag ccgaaagagc aagugggugg auaugcuggg 360

agacugggag aaauacaaaa gcagcagaaa gcucauagau cgagcguaca agggaaugcc 420

caugaacauc cggggcccga uguggucagu ccuccugaac auugaggaaa ugaaguugaa 480