叔丁基对苯二酚在制备预防和/或治疗粘膜炎的药物中的用途
阅读说明：本技术 叔丁基对苯二酚在制备预防和/或治疗粘膜炎的药物中的用途 (Application of tert-butyl hydroquinone in preparation of medicine for preventing and/or treating mucositis ) 是由 许颖 常晓松 吴东明 邓仕华 刘腾 于 2021-09-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种叔丁基对苯二酚在制备预防和/或治疗粘膜炎的药物中的用途,属于制药领域。本发明首次发现,叔丁基对苯二酚能够显著改善5-FU诱导的肠粘膜炎,能够改善腹泻,降低肠道长度损失,减轻病理变化(如粘膜损伤,坏死,组织结构丧失,水肿和炎症细胞浸润),降低炎症因子表达水平；本发明还发现,叔丁基对苯二酚对5-FU诱导的人肠上皮细胞损伤具有保护作用。因此,TBHQ在制备预防和/或治疗化疗导致的粘膜炎的药物、以及在制备对人肠上皮细胞损伤具有保护作用的药物中具有良好的应用前景。(The invention provides an application of tert-butyl hydroquinone in preparing a medicament for preventing and/or treating mucositis, belonging to the field of pharmacy. The invention discovers for the first time that tert-butyl hydroquinone can obviously improve 5-FU induced intestinal mucositis, can improve diarrhea, reduce intestinal length loss, relieve pathological changes (such as mucosal injury, necrosis, tissue structure loss, edema and inflammatory cell infiltration) and reduce the expression level of inflammatory factors; the invention also discovers that the tert-butyl hydroquinone has a protective effect on the 5-FU-induced damage of the human intestinal epithelial cells. Therefore, TBHQ has good application prospect in preparing medicaments for preventing and/or treating mucositis caused by chemotherapy and medicaments with protective effect on human intestinal epithelial cell injury.)
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及叔丁基对苯二酚在制备预防和/或治疗粘膜炎的药物中的用途。
背景技术
化疗是治疗恶性肿瘤主要的方法之一，但是研究发现应用甲氨蝶呤(methotraxate，MTX)、5-氟尿嘧啶(5-nuofine urea pyrimidine，5-FU)、阿糖胞苷、长春新碱、依托泊苷等化疗药时，粘膜炎的发生率高达90％。化疗性粘膜炎的发生不仅导致患者的治疗成本上升和住院时间延长，同时增加了患者的身心痛苦，降低了患者的生活质量。因此，开发出有效治疗化疗性粘膜炎的药物具有重要意义。
化疗后所导致的消化道粘膜炎的发生率为40％，化疗致消化道粘膜炎不仅局限于口腔粘膜损伤，如口腔粘膜红斑、脱皮、咽痛、口腔溃疡，还包括胃肠道粘膜损伤，临床表现有：恶心、呕吐、食欲不振、腹痛、腹胀、腹泻、肛周脓肿等。消化道粘膜炎引起的细菌感染可能导致患者严重的全身系统感染，使患者鼻胃管的使用率、胃肠外营养和静脉穿刺次数增加，同时使止痛药的药量和使用频率增加，导致患者的治疗依从性降低，使原化疗方案改变或中断，影响患者的抗肿瘤治疗效果。
化疗致肠粘膜炎是化疗过程中出现的一种消化道粘膜炎，具有发生率高、危害大的特点，严重影响肿瘤患者的治疗及生活质量。由于肠粘膜上皮更新快，对化疗十分敏感，接受胃肠道介入化疗后，肠粘膜上皮细胞更新慢甚至停止，出现粘膜水肿、脱落和溃疡，粘膜下层和固有层裸露，临床表现为不同程度的消化道症状，如恶心、呕吐、腹痛、腹泻和消化道出血。目前，报道的治疗化疗致肠粘膜炎的药物还较少。
叔丁基对苯二酚，Tert-butylhydroquinone，简称TBHQ，结构为研究发现，叔丁基对苯二酚能够减轻高糖诱导的肾小球系膜细胞的氧化应激损伤，其作用机制可能是通过激活Nrf2-ARE信号通路，进而增强抗氧化蛋白、HO-1、γ-GCS的表达而实现的。但是，还未见将叔丁基对苯二酚用来治疗化疗导致的粘膜炎的报道。
发明内容
本发明的一个目的在于提供叔丁基对苯二酚在制备预防和/或治疗粘膜炎的药物中的新用途。本发明的另一个目的在于提供叔丁基对苯二酚在制备对人肠上皮细胞损伤具有保护作用的药物中的新用途。
本发明提供了叔丁基对苯二酚在制备预防和/或治疗粘膜炎的药物中的用途。
进一步地，所述粘膜炎是消化道粘膜炎。
进一步地，所述消化道粘膜炎是肠粘膜炎。
进一步地，所述粘膜炎是化疗药物导致的粘膜炎，所述化疗药物优选为5-FU。
进一步地，所述药物能够改善腹泻，降低肠道长度损失，改善粘膜损伤，降低炎症因子表达水平。
本发明还提供了叔丁基对苯二酚在制备对人肠上皮细胞损伤具有保护作用的药物中的用途。
进一步地，所述人肠上皮细胞损伤是化疗药物导致的人肠上皮细胞损伤，所述化疗药物优选为5-FU。
进一步地，所述药物是以叔丁基对苯二酚为活性成分，加上药学上可接受的辅料制得的制剂。
进一步地，所述制剂为口服制剂。
进一步地，所述制剂为注射制剂。
叔丁基对苯二酚，简称TBHQ。
本发明首次发现，TBHQ对5-FU诱导的人肠上皮细胞损伤具有保护作用，叔丁基对苯二酚能够用于制备对人肠上皮细胞损伤具有保护作用的药物。
本发明首次发现，TBHQ能够显著改善5-FU诱导的肠粘膜炎，能够改善腹泻，降低肠道长度损失，减轻病理变化(如粘膜损伤，坏死，组织结构丧失，水肿和炎症细胞浸润)，降低炎症因子表达水平。因此，TBHQ在制备预防和/或治疗化疗导致的肠粘膜炎的药物中具有良好的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的
具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1.TBHQ减轻5-FU诱导的人肠上皮细胞损伤实验结果。注：(A)不同浓度5-FU处理24及48小时后进行CK-8细胞活力检测，半数致死量约发生于5μM处理48小时。后续实验用5μM的5-FU对HIEC细胞进行处理，并与不同浓度(5、10和20μM)的TBHQ进一步共培养48h，(B)用CytoTox96试剂盒测定LDH释放量；(C)用CCK-8检测试剂盒测定细胞活力；(D)代表性流式细胞仪直方图；(E)代表性7-AAD染色荧光图像。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图2.TBHQ减轻5-FU诱导的小鼠小肠粘膜炎实验结果。注：(A)TBHQ对5-FU诱导的小鼠肠粘膜炎的给药及作用的时间表。从第1天到第8天给药TBHQ(10mg/kg DMSO，i.p.)或溶媒(DMSO，i.p.)，从第1天到第5天给药5-FU(50mg/kg，i.p.)或溶媒(生理盐水，i.p.)。第9天处死动物(n＝6/组)。每日记录体重(B)和腹泻(C)情况。(D)各组小鼠的整个肠道长度。(E)HE染色观察小肠组织学改变(比例尺：100μm)。ELISA法检测各组IL-6(F)、TNF-α(G)、IL-1β(H)的表达。*P<0.05，**P<0.01，**P<0.001。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
叔丁基对苯二酚，Tert-butylhydroquinone，结构为
实施例1：TBHQ减轻5-FU诱导的人肠上皮细胞损伤
1、实验方法
为了分析TBHQ的化疗防护作用，本发明首先采用不同浓度的化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)处理人肠上皮细胞(HIEC细胞)，筛选出最佳造模浓度为5μM 5-FU，HIEC细胞半数致死量约发生于5μM 5-FU处理48小时(图1A)。然后用不同浓度的TBHQ预处理HIEC细胞，同时加入5μM的5-FU处理。48小时后，用CytoTox 96试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量，用CCK-8检测试剂盒测定细胞活力。
细胞凋亡试验：收集HIEC细胞，用7-AAD(2μg/mL，中国江苏凯基)染色20分钟，并洗涤三次。然后使用流式细胞仪(FACSCalibur，Becton Dickinson，Franklin Lakes，NJ，USA)分析一部分细胞，并收集数据进行分析。使用0.5％Triton X-100(Sigma Aldrich，USA)通透另一部分细胞2分钟，并清洗三次。随后，用DAPI染色细胞核，然后洗涤三次，荧光显微镜下计数7-ADD阳性细胞数。
2、实验结果
结果显示，LDH释放以TBHQ剂量依赖性方式减少(图1B)，细胞活力以TBHQ的剂量依赖性方式增加(图1C)。同时，通过流式细胞术细胞凋亡结果和7AAD细胞染色结果发现，当TBHQ的预处理浓度为10μM及20μM时对细胞损伤具有良好的保护效果，且保护效果接近，本着节约成本的考虑最终在细胞水平使用了10μM(图1D，1E)。
上述实验结果表明，TBHQ对5-FU诱导的人肠上皮细胞损伤具有有效的保护作用。
实施例2：TBHQ减轻5-FU诱导的小鼠肠粘膜炎
1、实验方法
本发明在小鼠体内研究了TBHQ对5-FU诱导的肠粘膜炎的影响(图2)。
实验操作如下：
雄性C57/BL6小鼠(8周，18-20g)购自成都达硕实验动物有限公司(中国四川)。所有小鼠均在25℃下饲养，光照/暗照周期为12小时，并保持在可自由获取食物和水的塑料笼中。将小鼠随机分为三组(n＝6/组)：对照组、5-FU组、5-FU+TBHQ组。5-FU组和5-FU+TBHQ组分别腹腔注射50mg/kg5-FU，持续5天，以诱发肠粘膜炎。同时，5-FU组和5-FU+TBHQ组分别腹腔注射等量的DMSO或TBHQ(TBHQ是溶解在DMSO中的，10mg/kg)，每天一次，共8天(第1-8天)。每天进行体重和腹泻评估。第9天，处死动物，记录所有动物的肠道长度和HE染色组织病理学分析。酶联免疫吸附试验(ELISA)：收集小鼠小肠，并根据说明书使用ELISA试剂盒(Mlbio，中国上海)检测IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。上述所有实验方案均经成都医学院实验动物伦理委员会批准。
2、实验结果
实验结果表明，TBHQ组显著减轻了5-FU引起的腹泻(图2B)，显著改善了5-FU引起的体重减轻(图2C)。与5-FU组相比，TBHQ给药显著减少了5-FU引起的肠道长度损失(图2D)。通过组织学、H&E染色分析(图2E)观察到与5-FU组相比，TBHQ给药减轻了病理变化，如粘膜损伤，坏死，组织结构丧失，水肿和炎症细胞浸润(如中性粒细胞)。此外，用ELISA法检测小鼠血清炎症因子表达水平时发现TBHQ显著降低了5-FU引起的小鼠的IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平(图2F-H)。
上述实验结果表明，TBHQ能够显著改善5-FU诱导的肠粘膜炎，能够改善腹泻，降低肠道长度损失，减轻病理变化(如粘膜损伤，坏死，组织结构丧失，水肿和炎症细胞浸润)，降低炎症因子表达水平。
综上，本发明首次发现，TBHQ对5-FU诱导的人肠上皮细胞损伤具有保护作用，叔丁基对苯二酚能够用于制备对人肠上皮细胞损伤具有保护作用的药物。本发明首次发现，TBHQ能够显著改善5-FU诱导的肠粘膜炎，能够改善腹泻，降低肠道长度损失，减轻病理变化(如粘膜损伤，坏死，组织结构丧失，水肿和炎症细胞浸润)，降低炎症因子表达水平。因此，TBHQ在制备预防和/或治疗化疗导致的肠粘膜炎的药物中具有良好的应用前景。