林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用
阅读说明：本技术 林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用 (Application of wood frog antibacterial peptide in preparation of helicobacter pylori resistant medicine ) 是由 林万君 郑玲玲 付鸿瓒 张丹 于 2021-10-11 设计创作，主要内容包括：林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用,涉及抗幽门螺旋杆菌药物领域,所述抗幽门螺旋杆菌药物的剂型为口腔喷剂,包括林蛙抗菌肽浓缩液17-23wt％,金银花提取液1.0-1.8wt％,五味子提取液1.0-1.8wt％,罗汉果提取液1.0-1.8wt％,三氯蔗糖0.001-0.007wt％,蜂蜜3-5wt％,茶多酚0.08-0.12wt％,西瓜霜0.5-1.1wt％,山梨糖醇12.6-14.6wt％,卡松0.1-0.3wt％,薄荷醇0.01-0.1wt％,余量为纯化水。本发明对幽门螺旋杆菌的杀菌率达到92.29％以上。本发明提高了杀菌效果和口感效果,对口腔内幽门螺旋杆菌有较强的杀灭和抑制作用。(An application of wood frog antibacterial peptide in preparing anti-helicobacter pylori medicines relates to the field of anti-helicobacter pylori medicines, and the anti-helicobacter pylori medicines are oral spray, and comprise 17-23 wt% of wood frog antibacterial peptide concentrated solution, 1.0-1.8 wt% of honeysuckle extract, 1.0-1.8 wt% of schisandra extract, 1.0-1.8 wt% of momordica grosvenori extract, 0.001-0.007 wt% of sucralose, 3-5 wt% of honey, 0.08-0.12 wt% of tea polyphenol, 0.5-1.1 wt% of watermelon crystal, 12.6-14.6 wt% of sorbitol, 0.1-0.3 wt% of kasong, 0.01-0.1 wt% of menthol and the balance of purified water. The invention has a sterilizing rate of 92.29% above to helicobacter pylori. The invention improves the sterilization effect and the taste effect, and has stronger killing and inhibiting effects on helicobacter pylori in the oral cavity.)
技术领域
本发明涉及抗幽门螺旋杆菌药物技术领域，具体涉及林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用。
背景技术
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)，又称幽门螺杆菌或幽门螺旋菌，简称Hp。幽门螺旋杆菌主要存在于胃中，在慢性胃炎、消化性溃疡、与粘膜相关的淋巴样组织淋巴瘤、胃癌和胃癌的发病机理中起着至关重要的作用。由于幽门螺旋杆菌的特殊生存环境以及其能附于胃肠道的特性，使其杀灭和抑制是很困难的。并且至今为止，仍未发现较为理想的抗幽门螺旋杆菌的药物。
林蛙，别名雪蛤，是我国特有的重要药食两用两栖动物，其药用历史悠久，早在明代李时珍《本草纲目》中便有记载。已有研究表明，东北林蛙皮分泌物由多种组分组成，其皮肤分泌物抗菌肽粗提物具有广谱的抗菌活性。根据相关资料记载，一只东北林蛙个体可以同时在表皮分泌多达12种成熟抗菌肽。已经证实的，林蛙皮抗菌肽具有广谱的抗菌作用，已经在饲料、化妆品、卫生用品中广泛应用。
目前，还未见关于林蛙抗菌肽在抗幽门螺旋杆菌方面的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明提供一种林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用。
作为优选的实施方式，所述抗幽门螺旋杆菌药物的剂型为口腔喷剂。
作为优选的实施方式，所述口腔喷剂包括：林蛙抗菌肽浓缩液17-23wt％，金银花提取液1.0-1.8wt％，五味子提取液1.0-1.8wt％，罗汉果提取液1.0-1.8wt％，三氯蔗糖0.001-0.007wt％，蜂蜜3-5wt％，茶多酚0.08-0.12wt％，西瓜霜0.5-1.1wt％，山梨糖醇12.6-14.6wt％，卡松0.1-0.3wt％，薄荷醇0.01-0.1wt％，余量为纯化水。
作为更优选的实施方式，所述口腔喷剂包括：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％，金银花提取液1.5wt％，五味子提取液1.5wt％，罗汉果提取液1.5wt％，三氯蔗糖0.004wt％，蜂蜜4wt％，茶多酚0.1wt％，西瓜霜0.8wt％，山梨糖醇13.6wt％，卡松0.2wt％，薄荷醇0.06wt％，余量为纯化水。
作为优选的实施方式，所述林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法如下：
(1)原料：林蛙干体；
(2)加10-20倍于蛙体的4-8％醋酸于10-30℃溶胀0.5-1.5小时；
(3)将溶胀后的蛙体及醋酸液，在功率为100-250W，频率为20-60kHz超声波发生器内进行超声提取至少一次；每次提取时间10-40分钟，过滤，得提取液；
(4)提取液，在3000-10000r.p.m，10-20min条件下离心，弃去沉淀，收集上清液；
(5)在35-65℃温度下加热5-15min，然后降至5-10℃过滤，得抗菌肽滤清液；
(6)将抗菌肽滤清液在30-60℃和负压0.5个大气压条件下浓缩至1/3-1/10体积，抗菌肽浓缩液于0-4℃条件下保存。
作为更优选的实施方式，按步骤(3)、(4)重复操作1-3次；合并上清液，再按步骤(5)进行。
本发明的有益效果是：
本发明以林蛙抗菌肽浓缩液为主要原料，配合金银花提取液、五味子提取液、罗汉果提取液等共奏杀菌、清热、解毒之功效，送检样品原液对幽门螺旋杆菌的杀菌率分别为92.79％、92.29％、92.50％，符合WS/T650-2019(5.2.1.7)的结果判定。
本发明提高了杀菌效果和口感效果，对口腔内幽门螺旋杆菌有较强的杀灭和抑制作用。由此证实，林蛙抗菌肽可广泛应用在制备抗幽门螺旋杆菌药物中，为预防和防治口腔幽门螺旋杆菌提供了新的途径，扩展了抗幽门螺旋杆菌药物的应用范围，提高了抗幽门螺旋杆菌的效果。
具体实施方式
本发明提供一种林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用。
优选的，所说的抗幽门螺旋杆菌药物的剂型为口腔喷剂，但不限于此。
优选的，所说的口腔喷剂包括：林蛙抗菌肽浓缩液17-23wt％，金银花提取液1.0-1.8wt％，五味子提取液1.0-1.8wt％，罗汉果提取液1.0-1.8wt％，三氯蔗糖0.001-0.007wt％，蜂蜜3-5wt％，茶多酚0.08-0.12wt％，西瓜霜0.5-1.1wt％，山梨糖醇12.6-14.6wt％，卡松0.1-0.3wt％，薄荷醇0.01-0.1wt％，余量为纯化水。
更优选的，所说的口腔喷剂包括：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％，金银花提取液1.5wt％，五味子提取液1.5wt％，罗汉果提取液1.5wt％，三氯蔗糖0.004wt％，蜂蜜4wt％，茶多酚0.1wt％，西瓜霜0.8wt％，山梨糖醇13.6wt％，卡松0.2wt％，薄荷醇0.06wt％，余量为纯化水。
其中，所说的林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法按照公开号为CN103073628A的中国专利，发明名称为：一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法中所公开的说明书中的方法制备林蛙抗菌肽浓缩液，具体如下：
(1)原料：林蛙干体；
(2)加10-20倍于蛙体的4-8％醋酸于10-30℃溶胀0.5-1.5小时；
(3)将溶胀后的蛙体及醋酸液，在功率为100-250W，频率为20-60kHz超声波发生器内进行超声提取至少一次；每次提取时间10-40分钟，过滤，得提取液；
(4)提取液，在3000-10000r.p.m，10-20min条件下离心，弃去沉淀，收集上清液；
(5)在35-65℃温度下加热5-15min，然后降至5-10℃过滤，得抗菌肽滤清液；
(6)将抗菌肽滤清液在30-60℃和负压0.5个大气压条件下浓缩至1/3-1/10体积，抗菌肽浓缩液于0-4℃条件下保存。
其中，所说的金银花提取液的具体制备方法如下：
挑选金银花药材，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
金银花提取液具有免疫功能：金银花提取液对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌等均有抑制作用。
金银花提取液能够抑制耐药菌蛋白质合成：金银花提取液对金黄色葡萄球菌耐药植株的呼吸有显著刺激作用，多用于耐药菌株导致的内外科炎症，如治疗肺结核并发呼吸道感染、肺炎、急性细菌性痢疾、腹泻等，也有用于降低咽喉部带菌率。
其中，所说的五味子提取液的具体制备方法如下：
挑选五味子药材经洗、润制备成五味子净料，加8倍量水提取三次，每次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
五味子，中药名，为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效。常用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗盗汗、津伤口渴、内热消渴、心悸失眠。
五味子提取液对免疫功能的影响：五味子提取液能增强机体对非特异性刺激的防御能力。
五味子提取液的抗菌作用：五味子提取液在体外对炭疽杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌等均有抑制作用。
其中，所说的罗汉果提取液的具体制备方法如下：
挑选罗汉果药材捣碎，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
罗汉果，葫芦科多年生藤本植物的果实，别名拉汗果、假苦瓜、光果木鳖、金不换、罗汉表、裸龟巴；其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果；功效是止咳化痰；现代医学证明，罗汉果对支气管炎、高血压等疾病有显著疗效，还是起到防治冠心病、血管硬化、肥胖症的作用；营养价值高，有清热解暑、化痰止咳、凉血舒骨、清肺润肠和生津止渴等功效；可治急慢性气管炎、咽喉炎、支气管哮喘、百日咳、胃热、便秘、急性扁桃体炎等症，糖尿病患者亦宜服用。
本发明的林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂中的应用，其中，所说的抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的具体制备方法如下：
按照配比，将林蛙抗菌肽浓缩液、金银花提取液、五味子提取液、罗汉果提取液、三氯蔗糖、蜂蜜、茶多酚、西瓜霜、山梨糖醇、卡松、薄荷醇、纯化水混匀，灌装旋盖，包装即得。
所说的抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的口服功效：作为杀灭口腔内幽门螺旋杆菌的辅助药物，对幽门螺旋杆菌有较强的杀灭作用。
所说的抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的适用范围：用于口腔表面的抗菌、清洁与护理。
所说的抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的使用方法：直接喷于口腔表面即可。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的制备
林蛙抗菌肽浓缩液的制备：按照公开号为CN103073628A的中国专利，发明名称为：一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法中所公开的说明书中的实施例2制备林蛙抗菌肽浓缩液。
金银花提取液的制备：挑选金银花药材，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
五味子提取液的制备：挑选五味子药材经洗、润制备成五味子净料，加8倍量水提取三次，每次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
罗汉果提取液的制备：挑选罗汉果药材捣碎，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
按照林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、金银花提取液1.5wt％、五味子提取液1.5wt％、罗汉果提取液1.5wt％、三氯蔗糖0.004wt％、蜂蜜4wt％、茶多酚0.1wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇13.6wt％、卡松0.2wt％、薄荷醇0.06wt％、余量为纯化水，混合均匀，灌装旋盖，包装即得。
实施例2抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的制备
林蛙抗菌肽浓缩液的制备：按照公开号为CN103073628A的中国专利，发明名称为：一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法中所公开的说明书中的实施例1制备林蛙抗菌肽浓缩液。
金银花提取液的制备：挑选金银花药材，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
五味子提取液的制备：挑选五味子药材经洗、润制备成五味子净料，加8倍量水提取三次，每次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
罗汉果提取液的制备：挑选罗汉果药材捣碎，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
按照林蛙抗菌肽浓缩液17wt％，金银花提取液1.0wt％，五味子提取液1.8wt％，罗汉果提取液1.8wt％，三氯蔗糖0.001wt％，蜂蜜3wt％，茶多酚0.08wt％，西瓜霜1.1wt％，山梨糖醇14.6wt％，卡松0.3wt％，薄荷醇0.01wt％，余量为纯化水，混合均匀，灌装旋盖，包装即得。
实施例3抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的制备
林蛙抗菌肽浓缩液的制备：按照公开号为CN103073628A的中国专利，发明名称为：一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法中所公开的说明书中的实施例3制备林蛙抗菌肽浓缩液。
金银花提取液的制备：挑选金银花药材，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
五味子提取液的制备：挑选五味子药材经洗、润制备成五味子净料，加8倍量水提取三次，每次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
罗汉果提取液的制备：挑选罗汉果药材捣碎，加8倍量水超声提取两次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.05(80℃)，存入冷库备用。
按照林蛙抗菌肽浓缩液23wt％，金银花提取液1.8wt％，五味子提取液1.0wt％，罗汉果提取液1.0wt％，三氯蔗糖0.007wt％，蜂蜜5wt％，茶多酚0.12wt％，西瓜霜0.5wt％，山梨糖醇12.6wt％，卡松0.1wt％，薄荷醇0.1wt％，余量为纯化水，混合均匀，灌装旋盖，包装即得。
试验例1抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂的抗幽门螺旋杆菌活性的测定
委托广东省微生物分析检测中心(地址：广州市先烈中路100号大院66号楼)进行检测，并出具分析检测报告。报告编号：2021SP02993R01；委托单位：通化康元生物科技有限公司。
分析检测报告具体内容如下：
检测项目：悬液定量杀菌试验。
检测完成日期：2021年04年01日。
一、器材
1、试验样品：本发明的抗幽门螺旋杆菌口腔喷剂。
2、试验菌株：幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)ATCC 43504第5代，菌株来源：广东省微生物菌种保藏中心。
3、主要仪器与编号：生物安全柜QSP-B-S001、恒温培养箱QSP-B-I016、生化培养箱QSP-B-I020。
二、方法
1、菌悬液的制备：将新鲜培养的菌株用PBS洗下，制成1×105cfu/mL～9.0×105cfu/mL的菌悬液。
2、检测方法：依据WS/T650-2019(5.2.1)，吸取菌悬液加入到样品中进行测试(试验样品原液，作用2min)，试验重复3次。
3、检验条件：温度：24℃，湿度：62％。
三、结果
其中，序号1对应实施例1，序号2对应实施例2，序号3对应实施例3。
四、结论
送检样品原液，作用2min，其对幽门螺旋杆菌的杀菌率分别为92.79％、92.29％、92.50％，符合WS/T650-2019(5.2.1.7)的结果判定(说明书规定时间的杀菌率≥90％，判有抗菌作用)，该样品对所测菌株具有抗菌作用。
本发明公开了一种林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。