一种含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物及其制备方法和应用 (Composition containing pinoresinol and cycloolivil 9-glucoside and preparation method and application thereof ) 是由 肖军平 李小锋 毛金娣 刘胜 张小梅 旷春兰 张洪军 于 2021-08-31 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药技术领域,具体涉及一种含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物及其制备方法和应用。所述组合物,包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素、杜仲醇、槲皮素。该组合物能够有效提高组合物治疗膝关节炎的效果,同时,药物的利用率较高,在有效降低成本的同时减少药物副作用。(The invention belongs to the technical field of medicines, and particularly relates to a composition containing pinoresinol and cycloolivil 9-glucoside, and a preparation method and application thereof. The composition comprises the following components: cycloolivil 9-glucoside, chlorogenic acid, pinoresinol, guttiferol, and quercetin. The composition can effectively improve the effect of the composition on treating the gonitis, has higher utilization rate of the medicine, effectively reduces the cost and reduces the side effect of the medicine.)
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
膝关节炎是一种以退行性病理改变为基础的疾患。多患于中老年人群，其症状多表现为膝盖红肿痛、上下楼梯痛、坐起立行时膝部酸痛不适等。也会有患者表现肿胀、弹响、积液等，如不及时治疗，则会引起关节畸形，残废。在膝关节部位还常患有膝关节滑膜炎、韧带损伤、半月板损伤、膝关节游离体、腘窝囊肿、髌骨软化、鹅足滑囊炎、膝内/外翻等关节疾病。现有治疗膝关节炎的药物种类繁多，如中国专利申请CN201910540161.2提供一种治疗膝骨关节炎的中药制剂，包括以下重量份的中药原料：杜仲15-20份，淫羊藿15-20份，续断5-10份，川牛膝20-30份，补骨脂5-10份，羌活15-20份，白术5-10份，刺五甲15-20份，当归10-20份，柏子仁2-5份，桂皮5-10份，伸筋草5-10份，莪术15-20份，枸杞5-10份，羌活5-10份，甘草2-5份，苍术5-10份，藿香1-2份，丹参5-10份，牡蛎10-20份，独活10-20份，薏苡仁2-5份，木瓜5-10份，土茯苓2-5份。该制剂能够有效缓解患者痛苦，可同时增加骨密度的有益效果。
中国专利申请CN201610170627.0公开了一种治疗膝关节炎的组合中药，所述治疗膝关节炎的组合中药的配方如下：生川乌12-18份、生草乌12-18份、细辛12-18份、桃仁12-18份、牛膝12-18份、羌活16-24份、伸筋草22-28份、巴戟天22-28份、威灵仙22-28份、透骨草22-28份、大黄22-28份、川芎22-28份、当归20-30份、鸡血藤20-30份、海桐皮20-30份、桑枝20-30份。具有祛风除湿、行血活血、舒经活络、镇痛止痛的作用，可以促进血液的流通，缓解病人的疼痛。
现有技术中的药剂多数原料种类较多，虽然起到一定的缓解膝关节炎病症的效果，但并没有有效提高药物的利用效率，疗效仍然有待提高，同时原料间的相互作用不明确，患者使用过程中，副作用较大。
本发明的目的在于提供一种治疗膝关节炎的组合物，能够有效提高组合物治疗膝关节炎的效果，同时，药物的利用率较高，在有效降低成本的同时减少药物副作用。
发明内容
为克服以上技术问题，本发明提供了一种含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物及其制备方法和应用。该组合物具有较好的治疗膝关节炎的效果，同时，药物的利用率较高，在有效降低成本的同时减少药物副作用。
为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素、杜仲醇、槲皮素。
优选地，按照重量份数计，所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷5-20份、绿原酸1-10份、松脂素5-15份、杜仲醇1-5份、槲皮素1-5份。
优选地，按照重量份数计，所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷8-12份、绿原酸5-7份、松脂素7-11份、杜仲醇2-4份、槲皮素2-3份。
本发明的另一目的在于提供所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)在蒸馏水中加入表面活性剂A，加热后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入表面活性剂B后，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
优选地，步骤(1)中，所述表面活性剂A为大豆卵磷脂、辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷、十二烷基-β-D-吡喃麦芽糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺中的任一种或多种。
优选地，步骤(1)中，所述表面活性剂A为质量比为4-6:1的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺和大豆卵磷脂的混合物。
优选地，所述表面活性剂A的加入量为蒸馏水质量的0.1-0.5％。
优选地，所述蒸馏水的加入量为环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的2-3倍。
优选地，步骤(1)中，所述加热的温度为30-45℃。
优选地，表面活性剂B为茶皂素，所述茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的0.1-1％。
优选地，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入热水中浸泡提取，过滤后，将提取液经过大孔吸附树脂处理后，使用乙醇水溶液洗脱，干燥即可制得茶皂素。
优选地，所述热水的温度为60-80℃，提取时间为3-4h。
优选地，所述提取过程中加入碳酸钠，碳酸钠的加入量为茶籽饼质量的5-10％。
优选地，所述大孔吸附树脂的种类为D3520或D4006型大孔吸附树脂。
所述乙醇水溶液洗脱的具体过程为，先使用体积分数为80-95％的乙醇水溶液洗脱除杂，再使用30-45％的乙醇洗脱并收集洗脱液。
优选地，所述体积分数为80-95％的洗脱速率为1-3BV/h，用量为1-2BV。
优选地，所述体积分数为30-45％的洗脱速率为1-3BV/h，用量为3-5BV。
本发明的另一目的在于提供所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物在制备膝骨关节炎药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制剂，所述制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
与现有技术比，本发明的技术优势在于：
(1)本发明中提供的含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物具有较好的治疗膝骨关节炎的功效，同时，与绿原酸、松脂素、杜仲醇、槲皮素具有较好的协同作用。
(2)本发明中在制备组合物的过程中加入表面活性剂，一方面能够提高组合物的药物存储稳定性，另一方面能提高药效稳定性。
(3)本发明中在制备过程中加入茶皂素一方面能够有效促进组合物的稳定性，另一方面茶皂素还能和杜仲醇、槲皮素协同作用，促进组合物的药效。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷12份、绿原酸7份、松脂素7份、杜仲醇4份、槲皮素2份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.3wt％的质量比为5：1的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺和大豆卵磷脂的混合物，加热至40℃后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的0.3wt％，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱除杂，洗脱速率为2BV/h；再使用4BV的体积分数为35％的乙醇洗脱并收集洗脱液，洗脱速率为2BV/h；干燥洗脱液，即可制得茶皂素。
实施例2
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷5份、绿原酸5份、松脂素11份、杜仲醇2份、槲皮素1份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.5wt％的质量比为4:1的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺和大豆卵磷脂的混合物，加热至30℃后后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的0.1％，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入60℃的热水中，加入茶籽饼质量5wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D4006型大孔吸附树脂处理后，先使用1BV的体积分数为95％的乙醇水溶液洗脱除杂，洗脱速率为1BV/h；再使用5BV的体积分数为45％的乙醇洗脱并收集洗脱液，洗脱速率为1BV/h；干燥洗脱液，即可制得茶皂素。
实施例3
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷20份、绿原酸10份、松脂素11份、杜仲醇5份、槲皮素5份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的2-3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.1wt％的质量比为6:1的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺和大豆卵磷脂的混合物，加热至45℃后后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的1％，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入80℃的热水中，加入茶籽饼质量10wt％的碳酸钠浸泡提取4h，过滤后，将提取液经过D4006型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱除杂，洗脱速率为3BV/h；再使用3BV的体积分数为30％的乙醇洗脱并收集洗脱液，洗脱速率为3BV/h；干燥洗脱液，即可制得茶皂素。
实施例4
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷12份、绿原酸7份、松脂素7份、杜仲醇4份、槲皮素2份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.3wt％的大豆卵磷脂，加热至40℃后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的0.3wt％，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱除杂，洗脱速率为2BV/h；再使用4BV的体积分数为35％的乙醇洗脱并收集洗脱液，洗脱速率为2BV/h；干燥洗脱液，即可制得茶皂素。
实施例5
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷12份、绿原酸7份、松脂素7份、杜仲醇4份、槲皮素2份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.3wt％的十二烷基-β-D-吡喃麦芽糖苷，加热至40℃后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的0.3wt％，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱除杂，洗脱速率为2BV/h；再使用4BV的体积分数为35％的乙醇洗脱并收集洗脱液，洗脱速率为2BV/h；干燥洗脱液，即可制得茶皂素。
对比例1
与实施例1相比，区别在于使用杜仲醇替换槲皮素。
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷12份、绿原酸7份、松脂素7份、杜仲醇6份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸和松脂素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.3wt％的质量比为5：1的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺和大豆卵磷脂的混合物，加热至40℃后再将环橄榄树脂素9-糖苷、绿原酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇总质量的0.3wt％，再加入杜仲醇，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法同实施例1。
对比例2
与实施例1相比，区别在于使用柠檬酸替换绿原酸。
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素9-糖苷12份、柠檬酸7份、松脂素7份、杜仲醇4份、槲皮素2份。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素9-糖苷、柠檬酸和松脂素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入0.3wt％的质量比为5：1的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺和大豆卵磷脂的混合物，加热至40℃后再将环橄榄树脂素9-糖苷、柠檬酸、松脂素依次溶解于其中，搅拌形成溶液1；
(2)在蒸馏水中加入茶皂素，茶皂素的加入量为杜仲醇、槲皮素总质量的0.3wt％，再加入杜仲醇、槲皮素，形成溶液2；
(3)将溶液1和溶液2混合，搅拌，即可制得所述含松脂素和环橄榄树脂素9-糖苷的组合物。
所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱除杂，洗脱速率为2BV/h；再使用4BV的体积分数为35％的乙醇洗脱并收集洗脱液，洗脱速率为2BV/h；干燥洗脱液，即可制得茶皂素。
对比例3
与实施例1相比，区别在于茶皂素的制备方法不同。
一种含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物，组分同实施例1。
所述含环橄榄树脂素9-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)-(3)同实施例1。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为90％的乙醇水溶液，按照洗脱速率2BV/h，洗脱除杂，再使用4BV的体积分数为40％的乙醇，按照洗脱速率2BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
1、二甲苯致大鼠耳廓肿胀抗炎作用实验
SPF级健康雄性Wistar大鼠60只，体重200±20g，分为10组，每组6只，分别为空白组、阳性药物组、实施例1-5组、对比例1-3组。每只大鼠右耳双面涂抹二甲苯，50ul/只，30min后按以下分组给药：空白组不给予任何药物；实施例1-5组及对比例1-3组分别按照有效含量0.5mg/kg给予对应组制备的组合物，双面涂抹大鼠右耳后适当按摩促进药物吸收；阳性药物组使用市售洛索洛芬纳凝胶膏(湖南九典制药)，双面涂覆大鼠右耳后适当按摩促进药物吸收。1h后颈椎脱臼处死动物，用6mm直径打孔器分别双侧耳朵在相同部位打下圆耳片，用精密扭力天平称质量，计算肿胀度和肿胀率，结果见表1。
表1肿胀度和肿胀率数据
同一列表中，不同符号间具有显著性差异，P＜0.05。
由表1可知，与空白组相比，实施例1-5组和对比例1-3组提供的组合物能减轻二甲苯致大鼠耳廓的肿胀度，这说明本发明提供的组合物具有较好的抗炎作用。同时，组合物的原料组成和制备方法对其效果具有较大的影响。
2、大鼠膝骨性关节炎模型实验
取SD大鼠60只，体重200±20g，随机分为10组，每组6只，分别为正常组、模型组、实施例1-5组、对比例-3组。
除正常组外，大鼠均以关节腔注射木瓜蛋白酶复制KOA模型；对大鼠进行备皮及消毒处理，剃除大鼠右前肢膝关节部位及以下毛发，用75％乙醇消毒皮肤后，于右前肢膝关节腔内注射4％的木瓜蛋白酶溶液0.2mL，每2d一次，连续注射2周。14d后若发现大鼠出现下述症状时说明复制成功：右前侧膝关节红肿热痛，伴有软组织的肿胀或出现积液；右前侧膝关节以及周围出现僵硬以及活动受限；右前侧膝关节病理检查结果发现关节腔内出现大量渗出液；软骨表面不光滑，存在滑膜增生或粘连等关节炎病理改变。造模成功后第2天，除正常组与模型组以生理盐水灌胃，实施例1-5组及对比例1-3组各组大鼠给予相应组制备的组合物，按照10mg/kg/d的剂量灌胃进行干预，干预4周后采集各组大鼠的股动脉血，1500rpm·min-1离心10min，取血清，采用酶联免疫吸附法检测IL-6(白细胞介素-6)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-1β(白细胞介素-1β)水平(酶联免疫吸附试剂盒厂家为：武汉伊莱瑞特生物科技)。结果见表2。
表2炎症因子水平
试验组
IL-6(ng·L<sup>-1</sup>)
TNF-α(ng·L<sup>-1</sup>)
IL-1β(ng·L<sup>-1</sup>)
空白组
18.32±2.37<sup>a</sup>
22.15±6.14<sup>f</sup>
6.01±1.09*
模型组
44.26±4.51<sup>b</sup>
41.34±4.11<sup>g</sup>
12.65±2.34<sup>#</sup>
实施例1
23.57±5.34<sup>c</sup>
25.43±3.57<sup>h</sup>
7.46±0.87<sup>△</sup>
实施例2
24.61±3.08<sup>c</sup>
25.69±8.21<sup>h</sup>
7.29±1.54<sup>△</sup>
实施例3
23.68±1.55<sup>c</sup>
26.07±6.47<sup>h</sup>
7.54±2.05<sup>△</sup>
实施例4
30.25±2.67<sup>d</sup>
28.34±5.22<sup>h</sup>
8.02±3.11<sup>▼</sup>
实施例5
31.08±3.26<sup>d</sup>
29.10±4.28<sup>h</sup>
8.71±2.62<sup>▼</sup>
对比例1
34.53±6.64<sup>e</sup>
33.76±9.14<sup>i</sup>
10.89±1.03<sup>◇</sup>
对比例2
37.28±4.09<sup>e</sup>
36.21±5.67<sup>i</sup>
11.32±5.43<sup>◇</sup>
对比例3
33.56±5.12<sup>e</sup>
31.43±4.39<sup>i</sup>
9.86±2.19<sup>◇</sup>
同一列表中，不同字母或符号间具有显著性差异，P＜0.05。
由表2可知，与空白组相比，实施例1-5组和对比例1-3组提供的组合物能有效干预血清炎症因子水平，这说明本发明提供的组合物具有较好的治疗膝骨关节炎的效果。同时，组合物的原料组成和制备方法对其效果具有较大的影响。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。
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