利卡灵b在制备预防或/和治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用
阅读说明：本技术 利卡灵b在制备预防或/和治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用 (Application of licarin B in preparation of medicine for preventing or/and treating non-alcoholic fatty liver disease ) 是由 王刚 赵文宇 王琳琳 赵建新 张灏 陈卫 顾震南 于 2021-06-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了利卡灵B在制备预防或/和治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用,属于药物应用技术领域。本发明提供了利卡灵B在预防或治疗非酒精性脂肪肝方面的新用途,通过灌胃使用利卡灵B,能使小鼠体重减轻、血脂降低,肝脏脂质明显减少,血糖水平改善,肝功能水平明显改善,可以通过调节肝脏脂质代谢从而对非酒精性脂肪肝的预防和/或治疗产生积极效果。相比于化学或生物合成类药物,提取自天然中草药成分的利卡灵B成本较低,毒副作用小,在制备保肝、护肝产品方面有着极其广泛的应用空间。(The invention discloses application of licarin B in preparation of a medicine for preventing or/and treating non-alcoholic fatty liver disease, belonging to the technical field of medicine application. The invention provides a new application of licarin B in the aspect of preventing or treating non-alcoholic fatty liver, and the licarin B is used through gastric lavage, so that the weight of a mouse can be reduced, blood fat is reduced, liver lipid is obviously reduced, blood sugar level is improved, liver function level is obviously improved, and positive effects can be generated on the prevention and/or treatment of the non-alcoholic fatty liver through regulating liver lipid metabolism. Compared with chemical or biological synthetic medicines, the licarin B extracted from natural Chinese herbal medicine components has the advantages of low cost, small toxic and side effects and wide application space in the aspect of preparing liver-protecting products.)
技术领域
本发明涉及利卡灵B在制备预防或/和治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用，属于药物应用
技术领域
。背景技术
非酒精性脂肪肝是以肝细胞内脂肪过度积累为特征的一种疾病，与重度肥胖，胰岛素抵抗和慢性低度炎症密切相关。非酒精性脂肪性肝病的临床病理综合征的特点是弥漫性肝细胞伴肝细胞球囊化，肝内炎症反应和进行性纤维化。其病理变化可分为单纯脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化，纤维化甚至发展成肝癌。持续肝脂肪浸润和炎症反应可增加肝硬化和肝癌的发生率。此外，非酒精性脂肪性肝可导致血脂异常的发展进程，并显著增加心血管疾病的发病率。
非酒精性脂肪性肝进程发生的机制尚不清楚，尽管人们普遍认为它至少有两部分组成，即“二次打击”学说。脂肪代谢紊乱引起的肝脏脂肪堆积是引起肝脏脂肪变性的各种原因中的常见机制，其次是免疫细胞活化和炎症细胞因子产生。近年来，“多重打击”理论逐渐被广泛提出，包括遗传因素、胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱及肝细胞脂肪变性、氧化应激、炎症的发生、内质网应激及肠道菌群失调等，这些重要因素贯穿在非酒精性脂肪肝的不同发病阶段，共同促进非酒精性脂肪肝的发生发展。其中脂质代谢紊乱及肝细胞脂肪变性这一因素在各类学说中均有出现。
研究表明，患有非酒精性脂肪性肝的肥胖患者脂质代谢下降。持续过量的游离脂肪酸参与了脂肪变性的发病机制，并导致非酒精性脂肪性肝相关的代谢并发症，如炎症反应。肝脏长期暴露于过量的游离脂肪酸中可能导致细胞内甘油三酯的积累，并损害胰岛素功能，进一步影响血糖水平。过量的脂肪酸促进TG的分泌，并增加肝脏的新生脂肪生成，导致肝毒性产生，并诱导肝脏持续产生炎症因子，影响肝脏功能。通过抑制脂肪酸合成可以抑制肝癌细胞增殖生长，降低存活率。因此，调控肝脏脂质代谢成为减肥降脂，抑制炎症反应，恢复肝脏功能，改善非酒精性脂肪肝的有力手段。
目前，通过限制饮食中的能量摄入(如低糖，低脂等)或进行适量运动可以在一定程度上预防非酒精性脂肪肝，但是干预程度是很有限的。随着现代生活节奏的加快，社会工作压力的增加，饮食和睡眠的不规律增加了非酒精性脂肪肝的发病率。常见的非酒精性脂肪肝治疗的药物有辛伐他汀，己酮可可碱，吡格列酮，奥贝胆酸，补充维生素E等，但是存在药物药品售价高昂、副作用大等缺点(如吡格列酮可引起噻唑烷二酮类药物常见的不良反应：高危人群的体重增加，足部水肿，骨质流失和充血性心力、衰竭；补充维生素E则可能显著增加健康男性罹患前列腺癌的风险)。因此，亟待研发一种提取自天然植物化合物治疗非酒精性脂肪肝的产品以解决此问题。
发明内容
本发明涉及药物应用技术领域，具体涉及一种天然中草药提取物成分利卡灵B(Licarin B)，提供一种能够减轻体重，降低血脂，减少肝脏脂质堆积，且毒副作用小的可于预防或/ 和治疗非酒精性脂肪肝的产品。
本发明提供了利卡灵B在制备预防/治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用，所述利卡灵B 的化学结构式如下：
在一种实施方式中，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝具体表现为(a)～(d)中的至少一种情况：
(a)降低非酒精性脂肪肝个体的血脂；
(b)减少非酒精性脂肪肝个体肝脏的脂质合成；
(c)调节非酒精性脂肪肝个体的肝脏脂质代谢和/或降低肝脏脂质堆积；
(d)改善非酒精性脂肪肝个体的肝脏功能。
在一种实施方式中，所述改善非酒精性脂肪肝个体的肝脏功能是指降低非酒精性脂肪肝个体丙氨酸氨基转移酶和/或天冬氨酸氨基转移酶的异常升高。
在一种实施方式中，所述非酒精性脂肪肝个体为具有非酒精性脂肪肝症状的哺乳动物。
在一种实施方式中，所述哺乳动物包括但不限于人类。
在一种实施方式中，所述利卡灵B小鼠口服剂量不低于100mg/kg·d，跟据FDA(美国食品药品监督管理局)提供的《Estimating the Maximum Safe Starting Dose inInitial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers》中给出的折算系数，成人口服剂量为不低于 8.1mg/kg·d。
在一种实施方式中，所述药物还含有药学上可接受的载体。
在一种实施方式中，所述载体为药学上可接受的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。
在一种实施方式中，所述填充剂为微晶纤维素、乳糖、甘露醇、淀粉或糊精中的一种或多种；所述润湿剂为乙醇或甘油中的一种或多种；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或低取代羟丙基纤维素中的一种或多种；所述粘合剂为淀粉糊、糖浆、饴糖、炼蜜或液状葡萄糖中的一种或多种；所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸富马酸钠、滑石粉或二氧化硅中的一种或多种。
在一种实施方式中，所述药物含有利卡灵B和羧甲基纤维素钠。
在一种实施方式中，所述药物含有终浓度为100mg/L的利卡灵B和终浓度为5g/L的羧甲基纤维素钠(CMC)。
在一种实施方式中，所述药物为可摄入胃肠道的制剂，例如口服制剂，包括但不限于片剂、胶囊剂或口服液。
本发明还要求保护所述利卡灵B在制备非医疗目的的保健产品中的应用。
有益效果：
(1)本发明中的利卡灵B提取自肉豆蔻，能使小鼠体重减轻，血脂降低，肝脏脂质明显减少，血糖水平改善，肝功能水平明显改善，可见本发明调节小鼠肝脏脂质代谢从而对非酒精性脂肪肝的预防和/或治疗产生积极效果。
(2)与现有技术比较本发明的有益效果在于：利卡灵B广泛存在于肉豆蔻，常山，辛夷(玉兰)，猕猴桃根，三白草等多种中草药中，用于治疗/预防小鼠非酒精性脂肪，可取得良好的效果；相比于化学或生物合成类药物，天然中草药成分的利卡灵B成本较低，毒副作用小；以利卡灵B治疗非酒精性脂肪肝，可以明显改善小鼠血脂和肝功水平、提高实验动物生存质量，因此利卡灵B及其保肝护肝产品有着极其广泛的应用空间。
附图说明
图1为肝脏和附睾脂肪病理组织切片(HE染色)。
图2为各组小鼠血清TC含量。
图3为各组小鼠血清TG含量。
图4为各组小鼠血清LDL-c含量。
图5为各组小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。
图6为各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)。
具体实施方式
药物利卡灵B购买自北京沃凯生物科技有限公司，分子量为324.370，纯度为HPLC≥98％，提取自肉豆蔻科肉豆蔻属植物肉豆蔻的干燥果仁中。根据中草药数据ETCM(http://www.tcmip.cn)和本草组鉴(http://herb.ac.cn)及文献调研，利卡灵B广泛存在于肉豆蔻，常山，辛夷(玉兰)，猕猴桃根，三白草等多种中草药中，具有很大的药用潜力。
实施例中涉及的小鼠品系C57BL/6J购自北京维通利华实验动物技术有限公司；
实施例中涉及的60％高脂饲料购自南通特洛菲公司(货号：TP 23300)。
实施例1：利卡灵B安全性评价
参照Kuk Hyun Shin等人(公开于《Isolation of hepatic drug metabolisminhibitors from the seeds of Myristica fragrans》)的方法，通过灌胃给药方式，以200mg/kg剂量给药，观察给药后小鼠的情况，结果表明，在72h观察期内，受试小鼠均未见毒性症状，无运动减少或体重减轻，无呼吸困难或腹部刺激等情况，表明小鼠灌胃给药剂量达200mg/kg时，未见明显不良反应。
实施例2：利卡灵B对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏和脂肪组织中脂质堆积的影响
取5周龄雌性C57BL/6小鼠，于饲养室温20～26℃，湿度40～70％，12h/12h昼夜交替，自由进食及饮水的条件下适应性喂养1周后，按照平均体重分为3组，每组8只，其中一组喂食普通低脂饲料，另外两组喂食60％高脂饲料，饲养10-12周后，确定模型建立。3组分别设为空白对照组(CON)、模型组(HF)、利卡灵B组(Licarin B)。将利卡灵B用5g/L 的羧甲基纤维素钠溶液稀释至浓度为100mg/kg，得到Licarin B-羧甲基纤维素钠溶液，准备灌胃利卡灵B组。模型组和空白对照组只灌胃浓度为5g/L的羧甲基纤维素钠溶液。
实验时间共5周：CON组小鼠灌胃5g/L羧甲基纤维素钠溶液，每日每只200μL，观察体重和进食量变化，HF组小鼠灌胃5g/L羧甲基纤维素钠溶液，每日每只200μL，观察体重和进食量变化，Licarin B组小鼠灌胃Licarin B-羧甲基纤维素钠溶液，每日每只200μL，观察体重和进食量变化。在实验结束前，取血清采用分光光度法测定生化指标，小鼠处死后解剖取肝脏和附睾脂肪，脂肪等脏器组织做病理切片。
由图1可知，通过肝脏和附睾脂肪病理组织切片(HE染色)可以看出，和CON组(左)相比，HF组(中)小鼠肝脏出现脂肪变性，即出现大小不一的空泡(脂滴)，边界清晰，将细胞核挤向一侧，肝细胞体积增大，肿胀，细胞核明显，局部出现炎症反应。Licarin B组(右) 中小鼠肝脏组织空泡(脂滴)面积变小，炎症反应降低，肝脏脂质堆积有明显的缓解。和CON 组(左)相比，HF组(中)小鼠脂肪细胞体积变大，肿胀，且细胞之间出现一定程度的炎症反应，边界清晰可见。Licarin B组(右)中小鼠脂肪细胞面积变小，炎症反应降低，脂肪堆积现象有明显的缓解。由此可见利卡灵B有效减少小鼠肝脏和脂肪组织中的脂质积累。
实施例3：利卡灵B对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏中血脂水平的影响
小鼠模型的构建方法同实施例2，在实验结束前，取血清采用分光光度法测定生化指标，由图2-4可知，在饲喂第16周时，通过小鼠血清生化指标分析可以发现，HF组血清中LDL-c、 TC和TG的水平相比对照组均有升高。利卡灵B有效降低小鼠血清中的总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量水平，分别下降了32.14％和30.86％；与此同时，利卡灵B有效降低了低密度脂蛋白(LDL-c)的水平，与HF组相比降低了49.08％，效果显著。利卡灵B可以有效调节非酒精性脂肪肝小鼠的血脂水平。
实施例4：利卡灵B对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏功能水平的影响
动物模型的构建方法同实施例2，在实验结束前，取血清采用分光光度法测定生化指标，结果由图5-6可知，小鼠肝脏功能指标中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)在HF组中均有不同程度升高，说明出现了一定程度的肝功能受损和慢性炎症反应，与HF组相比，Licarin B组可以有效恢复肝脏功能，相对于HF组，Licarin B组的ALT从198.33±33.25U/L降低至75.35±24.17U/L，AST从130.99±18.12U/L降低至99.99±14.47U/L。
实施例5：利卡灵B用于制备药物
将利卡灵B与药学上可接受的载体配伍，或与多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
所述药学上可接受的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。
所述填充剂为微晶纤维素、乳糖、甘露醇、淀粉或糊精中的一种或多种；所述润湿剂为乙醇或甘油中的一种或多种；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或低取代羟丙基纤维素中的一种或多种；所述粘合剂为淀粉糊、糖浆、饴糖、炼蜜或液状葡萄糖中的一种或多种；所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸富马酸钠、滑石粉或二氧化硅中的一种或多种。
可选地，所述药物含有终浓度为100mg/L的利卡灵B和终浓度为5g/L的羧甲基纤维素钠(CMC)。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。