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一类2-芳基异烟酸酰胺类lsd1/hdac双靶点抑制剂、其制备方法及应用

文档序号：44040 发布日期：2021-09-28 浏览：35次 >En<

阅读说明：本技术 一类2-芳基异烟酸酰胺类lsd1/hdac双靶点抑制剂、其制备方法及应用 (2-aryl isonicotinic acid amide LSD1/HDAC double-target inhibitor, and preparation method and application thereof ) 是由 段迎超 张少杰 关圆圆 于童 靳林峰 于 2021-07-07 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一类2-芳基异烟酸酰胺类LSD1/HDAC双靶点抑制剂、其制备方法及在制备抗肿瘤药物中的应用,属于药物化学技术领域。所述的化合物具有如下通式：其中,R-1优选OH、H；R-2优选OH、OCH-3、F、H、CH-3；R-3优选H、OH、Cl、OCH-3、NH-2、R-4优选H、OH、CF-3、OCH-3、CH-3、X为N或CH。本发明所述化合物对LSD1和HDAC1均具有较强的抑制活性,为LSD1/HDAC双靶点抑制剂类药物的研发提供了基础,可作为进一步候选或者先导化合物用于开发抗肿瘤治疗药物。(The invention relates to a 2-aryl isonicotinic acid amide LSD1/HDAC double-target inhibitor, a preparation method thereof and application thereof in preparing antitumor drugs, belonging to the technical field of pharmaceutical chemistry. The compounds have the following general formula: wherein R is 1 OH and H are preferred; r 2 OH and OCH are preferred 3 、F、H、CH 3 ；R 3 Preferably H, OH, Cl, OCH 3 、NH 2 、 R 4 H, OH, CF are preferred 3 、OCH 3 、CH 3 、)

一类2-芳基异烟酸酰胺类LSD1/HDAC双靶点抑制剂、其制备方 法及应用

技术领域

本发明具体涉及一类2-芳基异烟酸酰胺类LSD1/HDAC双靶点抑制剂、其制备方法及在制备抗肿瘤药物中的应用，属于药物化学

技术领域

。

背景技术

组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)是一个黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性的氨基氧化酶，其主要功能是特异性的去除组蛋白H3K4上的单、双甲基化修饰，抑制基因的转录。通过和雌激素受体或者雄激素受体相互作用，LSD1还可以去除H3K9上的单、双甲基化修饰，从而激活下游基因的转录。此外，LSD1还能去除非组蛋白如p53、DNMT1、STAT3、 E2F1、MYPT1、ERa和HIF-1的甲基化修饰，进一步调节其下游基因的稳定性和活性。LSD1 在急性髓性白血病、前列腺癌、肺癌、胃癌、雌激素受体阴性乳腺癌、结肠癌、滑膜肉瘤和神经母细胞瘤等多种肿瘤中的表达水平显著升高，并且和肺癌、白血病、结肠癌和乳腺癌等多种恶性肿瘤的不良预后密切相关。采用RNA干扰技术敲除LSD1的表达或者用小分子化合物抑制LSD1的活性，均可以抑制肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭，是目前抗肿瘤药物研发的热点靶标之一，目前已有IMG-7289，GSK2879552，TAK-418，ORY-2001， INCB059872，CC-90011和SP-2577等七个LSD1小分子抑制剂进入I期、II期临床试验，用于治疗急性髓系白血病和非小细胞肺癌。

组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是一类重要的组蛋白去乙酰化酶，主要负责从组蛋白尾部赖氨酸残基上去除乙酰化修饰，沉默基因转录。在白血病、淋巴癌、宫颈癌、结直肠癌，乳腺癌等多种恶性肿瘤中，HDAC家族成员的表达水平与活性都有明显上调，并且白血病、淋巴癌、宫颈癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤的不良预后与HDAC的表达水平呈正相关。目前已经有Vorinostat，Romidepsin，Belinostat，Panobinostat和Chidamide等5个HDAC 小分子抑制剂被FDA和CFDA批准上市，用于治疗恶性淋巴瘤、骨髓瘤等多种肿瘤。此外，还有多个HDAC抑制剂候选药物正在进行临床试验。

作为两个重要的组蛋白表观遗传调控蛋白，LSD1和HDAC都与癌症的发生、发展密切相关，并且二者之间存在着密切的串话关联关系。LSD1和HDAC1/2共同存在于NuRD、CoREST、Sin3A多种共抑制复合蛋白中，参与调控多种基因的转录。LSD1通过CoREST复合物与HDAC1以相互依赖的方式去乙酰化H4K16，从而调控胚胎干细胞和癌细胞的多能性。 LSD1与Sin3A/HDAC复合物可以协同抑制一系列促凋亡基因，维持乳腺癌对化疗的敏感性。HDAC1可以去除LSD1底物结合区K374的乙酰化修饰，进而促进LSD1和组蛋白H3的有效结合，增强LSD1的去甲基化酶活性，抑制下游靶基因的表达。在乳腺癌中，LSD1和HDAC5 的表达量均明显上调，HDAC5通过上调LSD1的去泛素酶USP28的表达，进而提高LSD1的稳定性和去甲基化活性，从而促进乳腺癌的发生和发展。相反，抑制HDAC5的活性或者敲除HDAC5则促进LSD1的泛素化降解，抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。联合应用LSD1和 HDAC抑制剂对多种恶性肿瘤包括横纹肌肉瘤、胶质母细胞瘤、乳腺癌、尤文氏肉瘤和急性髓系白血病都显示出良好的协同抗肿瘤作用。因此，发现新型、高活性的LSD1/HDAC双靶点抑制剂，通过同时抑制LSD1、HDAC以及互相串话的信号通路转导，发挥“1+1>2”的协同抗肿瘤作用，有望发现新型高效的抗肿瘤先导化合物，对于研究LSD1和HDAC的生理学功能、研发新型高效的抗肿瘤药物具有十分重要的意义。为了发现新型的LSD1/HDAC双靶点抑制剂，探索合成一类2-芳基异烟酸酰胺类化合物，验证其LSD1、HDAC双靶点抑制活性和体外抗肿瘤活性为本申请的出发点，目前尚未见有该类化合物的合成、LSD1/HDAC抑制活性及抗肿瘤活性的报道。

发明内容

由上述可知，本发明的一个目的在于提供一类2-芳基异烟酸酰胺类化合物，为新药物筛选提供可能。

本发明的另一个目的在于提供此类2-芳基异烟酸酰胺类化合物的制备方法。

本发明的再一个目的在于提供所述2-芳基异烟酸酰胺类化合物以LSD1/HDAC为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明所涉及的2-芳基异烟酸酰胺类化合物的结构通式为：

通式I中，R1为OH、H中的任意一个；R2为OH、OCH3、F、H、CH3中的任意一个；R3为 H、OH、Cl、OCH3、NH2、中的任意一个；R4为H、OH、CF3、OCH3、CH3、 中的任意一个；X为N或CH。

优选：通式I中，R1、R2、R3、R4和X所代表的取代基或原子如下表所示：

为实现上述第二个目的，本发明化合物的合成反应流程如下所示：

通式I化合物的合成路线：

化合物3的制备方法:化合物1和4-氨甲基苯甲酸甲酯盐酸盐(化合物2)在N,N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)和碱性化合物存在下，室温搅拌反应，反应结束后，反应体系加入水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩，浓缩物经柱层析分离，得化合物3。其中，所述强碱性化合物选自N,N-二异丙基乙胺、三乙胺中的一种。

化合物4的制备方法:化合物3和各种取代苯硼酸或取代苯硼酸频那醇酯或者取代吡啶硼酸，在甲苯中，碱性化合物和钯催化剂存在下，加热搅拌反应，反应结束后，反应体系加入水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩物经柱层析分离，得化合物4。其中，所述碱性化合物选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯、磷酸钾、氢化钠中的一种，所述的钯催化剂选自四(三苯基膦)钯、醋酸钯、双(二亚苄基丙酮)钯、二氯化钯中的一种。

化合物5的制备方法:在化合物4中，当R4为羟基时，化合物4和4-(溴甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯或者4-(2-溴乙基)吗啡啉氢溴酸盐，在DMF中，碱性化合物存在下，加热搅拌反应，反应结束后，反应体系加入水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩物经柱层析分离，得化合物5。其中，所述碱性化合物选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钾中的一种。

化合物I的制备方法:在二氯甲烷溶液中，化合物4或化合物5和NH2OK/NH2OH的甲醇溶液反应，反应结束后，反应体系真空浓缩，浓缩物加水溶解，用稀盐酸调pH为5-6，抽滤，洗涤，收集固体，用甲醇重结晶得化合物I。

本发明优点：本发明合成的2-芳基异烟酸酰胺类化合物均具有较强的LSD1/HDAC双重抑制活性和体外抗肿瘤活性，且对LSD1具有很好的选择性。本发明所报道的多个化合物对 HDAC1的IC50值小于2nM，是阳性药物SAHA的7倍。该类LSD1/HDAC双靶点抑制剂对人白血病THP-1、MOLT-4和MV4:11细胞株显示出很好的体外抗肿瘤活性，多个化合物的体外抗肿瘤活性明显优于阳性药物SAHA，特别是化合物I-5和I-8对THP-1的活性分别是SAHA 的12倍和18倍。本发明化合物代表着一类具有全新结构的高活性的LSD1/HDAC双靶点抑制剂，为LSD1/HDAC双靶点抑制剂类药物的研发提供了基础，为LSD1和HDAC的生物学功能研究提供了有效工具，可作为进一步开发的候选或者先导化合物用于开发抗肿瘤、抗病毒、抗艾滋病等疾病治疗药物，且合成方法简单，有利于推广应用。

具体实施方式

下面结合反应路线举实施例对本发明技术方案作详细说明。

实施例1 4-((2-溴异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(3a)的合成

在50mL两口烧瓶中加入化合物1a(1212.1mg,6.0mmol),化合物2(1451.9mg,7.2mmol),HBTU(2502.9mg,6.6mmol),用无水DMF(8mL)溶解,氮气保护,然后加入N,N-二异丙基乙胺(1705.9mg,13.2mmol),加毕,室温搅拌反应1.5小时,然后向反应体系中加入水和乙酸乙酯萃取,合并乙酸乙酯层,分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,浓缩物经硅胶柱柱层析分离纯化(石油醚：丙酮＝5:1) 得化合物3a(850.4mg),白色固体,产率:40.6％,Mp:114-115℃.1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ9.51(t,1H,J＝6.0Hz),8.57(d,1H,J＝5.2Hz),8.06(s,1H), 7.94(d,2H,J＝8.4Hz),7.85(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝4.8Hz),7.48(d,2H, J＝8.4Hz),4.57(d,2H,J＝6.0Hz),3.85(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6) δ166.53,163.77,151.75,144.86,144.65,142.37,129.78,128.79,127.99,126.11,121.72,52.56,43.10.HRMS(ESI)calcd for C15H13BrN2NaO3[M+Na]+: 371.0002,Found:371.0004.

实施例2 4-((2-溴-5-氟异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(3b)的合成

按照实施例1的方法,用化合物1b(660.0mg,3.0mmol)替换1a,得目标化合物3b(900.1mg),白色固体,产率:81.7％,Mp:131-132℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.39(t,1H,J＝5.6Hz),8.61(s,1H),7.96(d,2H,J＝8.0Hz),7.90(d,1H, J＝5.2Hz),7.49(d,2H,J＝8.0Hz),4.56(d,2H,J＝5.6Hz),3.85(s,3H). 13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ166.53,161.38,155.84(d,JC-F＝259.6Hz),144.51, 140.32(d,JC-F＝27.1Hz),136.12(d,JC-F＝2.9Hz),134.71(d,JC-F＝15.2Hz), 129.80,128.83,127.91,127.87,52.58,42.94.HRMS(ESI)calcdfor C15H12BrFN2NaO3[M+Na]+:388.9908,Found:388.9904.

实施例3 4-((2-(3-羟基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4a)的合成

在50mL两口圆底烧瓶中,加入化合物3a(500.0mg,1.4mmol),甲苯(5mL),乙醇(5mL),H2O(1.3mL),K2CO3(359.3mg,2.6mmol),Pd(PPh3)4(162.0mg,0.14mmol) 和3-羟基苯硼酸(235.0mg,1.7mmol),氮气保护下,92℃搅拌反应4小时,反应结束后,将反应体系冷却至室温,用水和乙酸乙酯萃取,合并乙酸乙酯层,再分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,干燥完毕,抽滤,滤液减压浓缩,浓缩物用硅胶柱柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝2:1),得化合物4a(312.7mg),产率:61.5％,白色固体,Mp:185-186℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(s,1H),9.53(t,1H,J＝ 6.0Hz),8.80(d,1H,J＝4.8Hz),8.31(d,1H,J＝1.6Hz),7.95(d,2H,J＝ 8.4Hz),7.35(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.57-7.55(m,2H),7.50(d,2H, J＝8.0Hz),7.32(t,1H,J＝8.0),6.87(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝7.2Hz), 4.62(d,2H,J＝5.6Hz),3.84(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ166.56, 165.25,158.32,157.30,150.73,145.22,142.48,140.01,130.32,129.81,128.73, 127.95,120.68,117.89,116.93,113.95,52.56,43.02.HRMS(ESI)calcd for C21H19N2O4[M+H]+:363.1339,Found:363.1341.

实施例4 4-((2-(4-羟基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4b)的合成

按照实施例3的方法,用4-羟基苯硼酸(235.0mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸, 得化合物4b(417.4mg),白色固体,产率:81.3％,Mp:169-170℃.1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ9.85(s,1H),9.50(t,1H,J＝6.0Hz),8.74(d,1H,J＝5.2Hz), 8.27(s,1H),8.02(d,2H,J＝8.8Hz),7.96(d,2H,J＝8.0Hz),7.67(dd,1H, J1＝1.2Hz,J2＝4.8Hz),7.51(d,2H,J＝8.0Hz),6.91(d,2H,J＝8.4Hz), 4.63(d,2H,J＝6.0Hz),3.85(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ166.56, 165.45,159.36,157.42,150.53,145.26,142.40,129.81,129.58,128.73,128.62, 127.94,119.48,116.79,116.04,52.55,43.00.HRMS(ESI)calcd forC21H18N2NaO4 [M+Na]+:385.1159,Found:385.1158.

实施例5 4-((2-(2-羟基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4c)的合成

按照实施例3的方法,用2-羟基苯硼酸(235.0mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸, 得化合物4c(313mg),淡黄色固体,产率:61.7％,Mp:180-181℃.1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ13.69(s,1H),9.62(t,1H,J＝6.0Hz),8.79(dd,1H,J1＝0.8Hz, J2＝5.2Hz),8.61(t,1H,J＝5.2Hz),8.10(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝8.4Hz), 7.96(d,2H,J＝8.4Hz),7.84(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝5.2Hz),7.52(d,2H, J＝8.4Hz),7.38-7.33(m,1H),7.00-6.96(m,2H),4.65(d,2H,J＝6.0Hz), 3.85(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ166.55,164.90,159.38,157.97,147.83,145.07,143.36,132.22,129.82,128.77,128.00,127.83,120.38,119.48,119.43,118.41,117.94,52.57,43.11.HRMS(ESI)calcd for C21H17N2O4[M-H]-: 361.1194,Found:361.1190.

实施例6 4-((2-(2-甲氧基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4d)的合成

按照实施例3的方法,用2-甲氧基苯硼酸(258.3mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4d(379.9mg),无色油状物,产率:72.1％.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.46(t,1H,J＝6.0Hz),8.82(d,1H,J＝5.2Hz),8.26(t,1H,J＝1.2Hz), 7.96(d,2H,J＝8.0Hz),7.76-7.71(m,2H),7.49(d,2H,J＝8.0Hz),7.47- 7.42(m,1H),7.19(d,1H,J＝8.0Hz),7.09(t,1H,J＝7.6Hz),4.60(d,2H, J＝6.0Hz),3.85(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ166.56,165.55,157.19, 156.65,150.41,145.29,141.48,131.20,130.93,129.79,128.70,128.38,127.90, 122.79,121.12,119.81,112.37,56.11,52.55,43.01.HRMS(ESI)calcdfor C22H20N2NaO4[M+Na]+:399.1315,Found:399.1312.

实施例7 4-((2-(4-甲氧基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4e)的合成

按照实施例3的方法,用化合物4-甲氧基苯硼酸(258.3mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得目标化合物4e(320.5mg),白色固体,产率:60.8％,Mp:142-143℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(d,1H,J＝5.2Hz),8.02(s,1H),7.95(d,2H,J ＝8.4Hz),7.92(d,2H,J＝8.8Hz),7.44(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝4.8Hz), 7.35(d,2H,J＝8.0Hz),7.23(t,1H,J＝5.2Hz),6.94(d,2H,J＝8.8Hz), 4.65(d,2H,J＝6.0Hz),3.88(s,3H),3.83(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ 166.81,166.10,160.87,158.20,150.21,142.86,142.01,130.99,130.08,129.49, 128.32,127.66,118.25,117.29,114.22,55.38,52.22,43.79.HRMS(ESI)calcd for C22H21N2O4[M+H]+:377.1496,Found:377.1496.

实施例8 4-((2-(4-甲基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4f)的合成

按照实施例3的方法,用化合物4-甲基苯硼酸(231.1mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得目标化合物4f(321.4mg),白色固体,产率:63.7％,Mp:152-153℃.1H NMR (400MHz,CDCl3)δ9.54(d,1H,J＝6.0Hz),8.80(d,1H,J＝4.8Hz),8.36(s, 1H),8.06(d,2H,J＝8.4Hz),7.96(d,2H,J＝8.0Hz),7.75(dd,1H,J1＝1.6 Hz,J2＝5.2Hz),7.51(d,2H,J＝8.0Hz),7.34(d,2H,J＝8.0Hz),4.63(d, 2H,J＝6.0Hz),2.38(s,3H).HRMS(ESI)calcd forC22H21N2O3[M+H]+:361.1547, Found:361.1544.

实施例9 4-((2-(4-三氟甲基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4g)的合成

按照实施例3的方法,用4-三氟甲基苯硼酸(332.1mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4g(356.0mg),产率:63.3％,白色固体,Mp:154-155℃.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.81(d,1H,J＝4.8Hz),8.16(t,1H,J＝1.2Hz),8.13(d,2H, J＝8.4Hz),7.99(d,2H,J＝8.4Hz),7.72(d,2H,J＝8.4Hz),7.58(dd,1H, J1＝1.2Hz,J2＝4.8Hz),7.39(d,2H,J＝8.4Hz),6.97(t,1H,J＝6.0Hz), 4.71(d,2H,J＝6.0Hz),3.90(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.78, 165.59,157.02,150.65,142.64,142.31,141.67,131.33(q,JC-F＝32.7Hz), 130.15,129.63,127.72,127.31,125.82(q,JC-F＝3.7Hz),124.05(q,JC-F＝273.3Hz),119.71,118.48,52.26,43.91.HRMS(ESI)calcd for C22H18F3N2O3[M+H]+: 415.1264,Found:415.1265.

实施例10 4-((2-(4-吗啉基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4h)的合成

按照实施例3的方法,用化合物4-吗啉苯硼酸频哪醇酯(491.6mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4h(199.3mg),白色固体,产率:33.0％,Mp:189-190℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝5.2Hz),8.05-8.01(m, 3H),7.98(d,2H,J＝9.2Hz),7.43-7.39(m,3H),6.98(d,2H,J＝8.8Hz), 6.71(t,1H,J＝6.0Hz),4.73(d,2H,J＝6.0Hz),3.91(s,3H),3.88(t,4H, J＝5.2Hz),3.25(t,4H,J＝5.2Hz).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.72, 166.07,158.38,152.16,150.27,142.78,141.92,130.18,129.71,129.49,127.96, 127.73,117.72,116.94,115.10,66.77,52.19,48.54,43.87.HRMS(ESI)calcd for C25H26N3O4[M+H]+:432.1918,Found:432.1917.

实施例11 4-((2-(3-吗啉基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4i)的合成

按照实施例3的方法,用化合物3-吗啉苯硼酸频哪醇酯(491.6mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4i(211.4mg),白色固体,产率:35.0％,Mp:155-156℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(d,1H,J＝5.2Hz),8.10(s,1H),7.98(d,2H,J ＝8.4Hz),7.62(t,1H,J＝2.0Hz),7.51(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz), 7.44(d,1H,J＝7.6Hz),7.38(d,2H,J＝8.0Hz),7.34(d,1H,J＝7.6Hz), 7.04(d,1H,J＝5.2Hz),6.98(dd,1H,J1＝2.0Hz,J2＝8.0Hz),4.69(d,2H, J＝6.0Hz),3.89(s,3H),3.86(t,4H,J＝4.8Hz),3.22(t,4H,J＝4.8Hz). 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.79,165.93,158.84,151.85,150.28,142.80,142.04,139.40,130.12,129.65,129.56,127.71,118.99,118.58,118.21,116.86,114.21,66.91,52.24,49.27,43.85.HRMS(ESI)calcd for C25H26N3O4[M+H]+: 432.1918,Found:432.1918.

实施例12 4-((2-(4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4j)的合成

按照实施例3的方法,用化合物4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸频哪醇酯(531.8mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4j(94.6mg),白色固体,产率:15.2％,Mp: 167-168℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.51(t,1H,J＝6.0Hz),8.73(d,1H,J ＝5.2Hz),8.27(s,1H),8.04(d,2H,J＝8.4Hz),7.96(d,2H,J＝8.0Hz), 7.64(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.50(d,2H,J＝8.0Hz),7.05(d,2H, J＝8.4Hz),4.62(d,2H,J＝6.0Hz),3.85(s,3H),3.25(t,4H,J＝5.2Hz), 2.46(t,4H,J＝5.2Hz),2.23(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.56,165.46,157.33,152.19,150.54,145.29,142.30,129.81,128.71,128.40,127.94,119.29,116.53,115.14,54.95,52.57,47.75,46.25,42.99.HRMS(ESI)calcd forC26H29N4O3[M+H]+:445.2234,Found:445.2236.

实施例13 4-((2-(4-吗啉磺酰基)苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4k)的合成

按照实施例3的方法,用化合物4-吗啉磺酰基苯硼酸(460.9mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4k(189.3mg),白色固体,产率:38.2％,Mp:216-217℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ9.59(t,1H,J＝6.0Hz),8.91(d,1H,J＝5.2Hz), 8.51(t,1H,J＝1.2Hz),8.43(d,2H,J＝8.8Hz),7.96(d,2H,J＝8.4Hz), 7.91-7.87(m,3H),7.52(d,2H,J＝8.4Hz),4.65(d,2H,J＝6.0Hz),3.85(s, 3H),3.65(t,4H,J＝4.4Hz),2.92(t,4H,J＝4.4Hz).13C NMR(101MHz,DMSO- d6)δ166.55,165.07,155.49,151.17,145.11,143.02,142.94,135.43,129.81, 128.79,128.74,128.10,127.99,121.83,119.05,65.76,52.56,46.38,43.08. HRMS(ESI)calcd for C25H24N3O6S[M-H]-:494.1391,Found:494.1392.

实施例14 4-((2-(3-氯-4-甲氧基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4l)的合成

按照实施例3的方法,用化合物3-氯-4-甲氧基苯硼酸(316.9mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸得化合物4l(207.1mg),白色固体,产率:36.0％,Mp:154-155℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.75(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝5.2Hz),8.10(d,1H,J＝2.0 Hz),8.04-8.01(m,3H),7.92(dd,1H,J1＝2.0Hz,J2＝8.4Hz),7.48(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.42(d,2H,J＝8.4Hz),7.01(d,1H,J＝8.8Hz), 6.75(t,1H,J＝5.6Hz),4.73(d,2H,J＝6.0Hz),3.96(s,3H),3.92(s,3H). 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.80,165.87,156.84,156.07,150.34,142.76, 142.13,131.76,130.10,129.54,128.80,127.71,126.40,123.01,118.78,117.30, 112.00,56.26,52.24,43.86.HRMS(ESI)calcd for C22H20ClN2O4[M+H]+:411.1106, Found:411.1105.

实施例15 4-((2-(3,4-二甲氧基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4m)的合成

按照实施例3的方法,用化合物3,4-二甲氧基苯硼酸(309.4mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸得化合物4m(275.4mg),黄色固体,产率:48.4％,Mp:132-133℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,1H,J＝5.2Hz),8.09(t,1H,J＝1.2Hz),7.95(d, 2H,J＝8.4Hz),7.65(d,1H,J＝2.0Hz),7.52(d,1H,J＝2.0Hz),7.49(dd, 1H,J1＝1.2Hz,J2＝5.2Hz),7.40-7.34(m,3H),6.88(d,1H,J＝8.4Hz),4.67 (d,2H,J＝5.2Hz),3.93(s,3H),3.89(s,3H),3.88(s,3H).13C NMR(101MHz, CDCl3)δ166.80,166.06,158.09,150.33,150.14,149.26,142.91,142.01, 131.34,130.06,129.46,127.66,119.65,118.37,117.50,111.02,109.81,55.96, 55.93,52.22,43.80.HRMS(ESI)calcd for C23H21N2O5[M-H]-:405.1456,Found: 405.1456.

实施例16 4-((2-(2,4-二甲基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4n)的合成

按照实施例3的方法,用化合物2,4-二甲基苯硼酸(258.5mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得目标化合物4n(400.4mg),白色固体,产率:80.4％,Mp:88-89℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(d,1H,J＝5.2Hz),8.00(d,2H,J＝8.4Hz), 7.73(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝2.0Hz),7.54(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz), 7.38(d,2H,J＝8.4Hz),7.26-7.25(m,1H),7.09(s,2H,J＝7.6Hz),7.09(s, 1H),7.07(d,1H,J＝8.0Hz),6.84(t,1H,J＝5.6Hz),4.69(d,2H,J＝5.6 Hz),3.90(s,3H),2.36(s,3H),2.32(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.76,165.87,161.35,149.93,142.77,141.50,138.61,136.71,135.68, 131.72130.14,129.61,129.57,127.69,126.73,121.33,118.52,52.22,43.82, 21.18,20.25.HRMS(ESI)calcd for C23H23N2O3[M+H]+:375.1703,Found:375.1701.

实施例17 4-((2-(2-氟-4-甲基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4o)的合成

按照实施例3的方法,用2-氟-4-甲基苯硼酸(269.4mg,1.8mmol)替换3-羟基苯硼酸,得目标化合物4o(490.1mg),白色固体,产率:89.3％,Mp:126-127℃.1H NMR (400MHz,CDCl3)δ8.76(d,1H,J＝5.2Hz),8.06(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝2.4 Hz),7.98(d,2H,J＝8.0Hz),7.84(t,1H,J＝8.4Hz),7.54(dd,1H,J1＝ 1.6Hz,J2＝4.8Hz),7.37(d,2H,J＝8.0Hz),7.07-7.01(m,1H),6.95(d,1H,J ＝12.8Hz),4.68(d,2H,J＝5.6Hz),3.90(s,3H),2.39(s,3H).13C NMR(101 MHz,DMSO-d6)δ162.05,161.15,155.56(d,JC-F＝250.7Hz),149.85(d,JC-F＝2.5 Hz),145.63,138.10,137.24(d,JC-F＝8.6Hz),137.05,125.84(d,JC-F＝3.1Hz), 125.33 124.75 122.88 120.75(d JC-F＝3.0Hz)118.86(d JC-F＝11.3Hz)116.52(d,JC-F＝9.7Hz),114.76,112.00(d,JC-F＝22.8Hz)47.45,39.04,16.46. HRMS(ESI)calcd for C22H20FN2O3[M+H]+:379.1451,Found:379.1451.

实施例18 4-((2-(3-氯-4-吗啉苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4p)的合成

按照实施例3的方法,用3-氯-4-吗啉苯硼酸(410.5mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得目标化合物4p(355mg),白色固体,产率:76.2％,Mp:147-148℃.1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.70(dd,1H,J1＝0.8Hz,J2＝5.2Hz),8.06(d,2H,J＝2.0Hz), 7.97(d,2H,J＝8.4Hz),7.85(dd,1H,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz),7.51(dd,1H, J1＝1.6Hz,J2＝4.8Hz),7.37(d,2H,J＝8.4Hz),7.25(t,1H,J＝5.6Hz), 7.05(d,1H,J＝8.8Hz),4.68(d,2H,J＝6.0Hz),3.90(s,3H),3.88(t,4H, J＝4.8Hz),3.10(t,4H,J＝4.8Hz),1.82(s,1H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ 166.79,165.83,156.81,150.37,150.03,142.82,142.14,133.93,130.10,129.52, 129.32,128.94,127.70,126.12,120.21,118.97,117.54,67.05,52.25,51.46,43.84.HRMS(ESI)calcd for C25H23ClN3O4[M-H]-:464.1383,Found:464.1380.

实施例19 4-((2-(2-甲基-4-氨基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4q)的合成

按照实施例3的方法,用2-甲基-3-氨基苯硼酸(256.6mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4q(420.5mg),无色油状物,产率:80％.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.63(dd,1H,J1＝0.8Hz,J2＝5.2Hz),7.89(d,2H,J＝8.4Hz),7.63(dd,1H, J1＝0.8Hz,J2＝1.6Hz),7.48(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.28(d,2H, J＝8.4Hz),7.17(t,1H,J＝6.0Hz),6.98(t,1H,J＝8.0Hz),6.65(d,2H,J ＝7.6Hz),4.56(d,2H,J＝6.0Hz),3.81(s,3H),1.96(s,3H),1.16(s,2H). 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.84,165.91,161.63,149.73,145.34,142.94, 141.61,140.64,130.05,129.43,127.61,126.44,121.63,120.14,120.09,118.95, 115.50,52.23,43.72,14.08.HRMS(ESI)calcd for C22H22N3O3[M+H]+:376.1656,Found:376.1656.

实施例20 4-((6'-甲氧基-[2,3'-吡啶]-4-甲酰胺基)甲基)苯甲酸甲酯(4r)的合成

按照实施例3的方法,用2-甲氧基-5-吡啶硼酸(236.5mg,1.6mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4r(353.2mg),黄色固体,产率:72.6％,Mp:156-157℃.1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.50(t,1H,J＝5.2Hz),8.95(s,1H),8.81(d,1H,J＝4.8 Hz),8.43(d,1H,J＝8.4Hz),8.36(s,1H),7.96(d,2H,J＝7.6Hz),7.76(d, 1H,J＝4.8Hz),7.51(d,2H,J＝7.6Hz),6.98(d,1H,J＝8.4Hz),4.63(d, 2H,J＝5.6Hz),3.93(s,3H),3.85(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ 166.54,165.23,164.75,155.15,150.88,146.11,145.16,142.67,137.86,129.80, 128.74,128.10,127.96,120.50,117.55,111.09,53.95,52.56,43.02.HRMS(ESI) calcd for C21H18N3O4[M-H]-:376.1303,Found:376.1302.

实施例21 4-((5-氟-2-(对甲苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4s)的合成

按照实施例3的方法,用3b(514.0mg,1.4mmol)替换3a,用4-甲基苯硼酸(244.4mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4s(450.29mg),白色固体,产率: 85.0％,Mp:135-136℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(d,1H,J＝2.0Hz),8.36 (d,1H,J＝6.0Hz),8.04(d,2H,J＝8.4Hz),7.91(d,2H,J＝8.0Hz),7.43(d, 2H,J＝8.4Hz),7.29(d,2H,J＝8.0Hz),7.19-7.12(m,1H),4.76(d,2H,J＝ 6.4Hz),3.92(s,3H),2.41(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.73,161.73 (d,JC-F＝2.6Hz),155.45(d,JC-F＝256.5Hz),155.13(d,JC-F＝4.4Hz),142.55, 139.56,138.90,138.62,134.80,130.18,129.66,127.79(d,JC-F＝10.4Hz), 127.59,126.76,121.09,52.20,43.93,21.30.HRMS(ESI)calcd for C22H20FN2O3[M+ H]+:379.1452,Found:379.1450.

实施例22 4-((5-氟-2-(4-甲氧基苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(4t)的合成

按照实施例21的方法,用化合物4-甲氧基苯硼酸(260.0mg,1.7mmol)替换3-羟基苯硼酸,得化合物4t(387.1mg),白色固体,产率:70.1％,Mp:128-129℃.1H NMR (400MHz,CDCl3)δ8.58(d,1H,J＝2.4Hz),8.32(d,1H,J＝6.0Hz),8.04(d, 2H,J＝8.0Hz),7.96(d,2H,J＝8.8Hz),7.43(d,2H,J＝8.4Hz),7.20-7.13 (m,1H),7.00(d,2H,J＝8.8Hz),4.76(d,2H,J＝6.4Hz),3.92(s,3H),3.87 (s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.74,161.78(d,JC-F＝2.7Hz),160.80, 155.22(d,JC-F＝256.1Hz),154.81(d,JC-F＝4.0Hz),142.56,138.65(d,JC-F＝ 28.0Hz),130.23,130.17,129.66,128.23,127.79(d,JC-F＝10.3Hz),127.58,120.58,114.28,55.39,52.19,43.92.HRMS(ESI)calcd for C22H20FN2O4[M+H]+: 395.1407,Found:395.1400.

实施例23 4-((2-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)异烟酸酰胺)甲基)苯甲酸甲酯(5a)的合成

在50mL两颈圆底烧瓶中加入碳酸铯(358.4mg,1.1mmol),加入无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL),搅拌下加入化合物4b(362.4mg,1.0mmol)和化合物4-(2-溴乙基)吗啡啉氢溴酸盐(330.0mg,1.2mmol),70℃加热搅拌反应1小时.反应结束后,反应体系加入水和乙酸乙酯萃取,合并乙酸乙酯层,用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,干燥完毕,过滤,滤液减压浓缩,浓缩物经硅胶柱柱层析分离纯化(石油醚:丙酮＝4:1)得化合物5a(385.7mg),白色固体,产率:81.1％,Mp:132-133℃.1HNMR(400MHz,CDCl3) δ8.70(dd,1H,J1＝0.4Hz,J2＝5.2Hz),8.04(dd,1H,J1＝0.8Hz,J2＝1.6 Hz),7.98(d,2H,J＝8.4Hz),7.95(d,2H,J＝8.8Hz),7.45(dd,1H,J1＝1.6 Hz,J2＝9.2Hz),7.38(d,2H,J＝8.0Hz),7.10(t,1H,J＝5.6Hz),6.97(d, 2H,J＝6.8Hz),4.68(d,2H,J＝5.6Hz),4.15(t,2H,J＝5.6Hz),3.90(s,3H),3.73(t,4H,J＝4.4Hz),2.82(t,2H,J＝5.6Hz),2.59(t,4H,J＝4.4 Hz).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.79,166.06,159.99,158.13,150.23,142.87, 142.03,131.18,130.09,129.51,128.33,127.67,118.28,117.33,114.84,66.89, 65.81,57.57,54.08,52.23,43.80.HRMS(ESI)calcd for C27H30N3O5[M+H]+: 476.2180,Found:476.2175.

实施例24叔丁基4-((4-(4-((4-(甲氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-2-吡啶基)苯氧基)甲基)-1-哌啶羧酸酯(5b)的合成

按照实施例23的方法,用化合物4-(溴甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(140.2mg,1.2mmol)替换4-(2-溴乙基)吗啡啉氢溴酸盐,得化合物5b(253.0mg),白色固体,产率:45.2％,Mp:105-106℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(d,1H,J＝4.8Hz),8.05 (t,1H,J＝1.2Hz),8.00(d,2H,J＝8.4Hz),7.96(d,2H,J＝8.8Hz),7.46 (dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.40(d,2H,J＝8.4Hz),7.07(t,1H,J＝ 6.0Hz),6.95(d,2H,J＝8.8Hz),4.70(d,2H,J＝6.0Hz),4.15(brs,2H), 3.90(s,3H),3.83(d,2H,J＝6.4Hz),2.73(brs,2H),2.03-1.91(m,1H), 1.84-1.79(m,2H),1.46(s,9H),1.31-1.20(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.75,166.03,160.33,158.22,154.90,150.25,142.88,142.05,131.08,130.11,129.60,128.34,127.69,118.19,117.26,114.74,79.48,72.38,52.18,43.82, 36.20,28.86,28.47.HRMS(ESI)calcd for C32H36N3O6[M-H]-:558.2610,Found: 558.2609.

实施例25 N-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-2-(3-羟基苯基)异烟酸酰胺(I-1)的合成

冰浴、搅拌下,将氢氧化钾的无水甲醇溶液(7.0g,45mL甲醇)慢慢滴加入盐酸羟胺的无水甲醇溶液中(5.84g,20mL甲醇),加毕,搅拌5分钟,过滤得NH2OK-NH2OH甲醇溶液,密封保存备用。在50mL两口圆底烧瓶中,加入化合物4a(362.4mg,1.0mmol), 用无水二氯甲烷(5mL)溶解,氮气保护、冰浴搅拌下,慢慢滴加上步制备的NH2OK-NH2OH溶液(16.5mL),加毕室温搅拌1.0小时.将反应体系减压浓缩,浓缩物用蒸馏水(20mL)溶解,用稀HCl调pH 5-6,有固体析出,过滤,收集固体,固体用甲醇重结晶得化合物I- 1(171.5mg),白色固体,产率:47.2％,Mp:145-146℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.22(s,1H),9.64(s,1H),9.50(t,1H,J＝6.0Hz),9.04(s,1H),8.80(d, 1H,J＝4.8Hz),8.31(t,1H,J＝1.2Hz),7.76-7.73(m,3H),7.59-7.56(m,2H), 7.43(d,2H,J＝8.4Hz),7.32(t,1H,J＝8.0Hz),6.88(dd,1H,J1＝1.6Hz, J2＝8.0Hz),4.58(d,2H,J＝5.6Hz).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.20, 158.32,157.28,150.71,142.78,142.56,140.02,131.91,130.33,127.67,127.47, 120.68,117.89,116.93,113.94,43.01.HRMS(ESI)calcd for C20H17N3NaO4[M+ Na]+:386.1111,Found:386.1112.

实施例26 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-羟基苯基)异烟酸酰胺(I-2)的合成

按照实施例25的方法,用4b(362.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-2(223.1 mg),白色固体,产率:61.4％,Mp:161-162℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22 (s,1H),9.85(s,1H),9.46(t,1H,J＝5.6Hz),9.05(s,1H),8.74(d,1H,J＝ 8.4Hz),8.25(s,1H),8.01(d,2H,J＝8.8Hz),7.74(d,2H,J＝8.0Hz),7.66 (dd,1H,J1＝0.8Hz,J2＝4.8Hz),7.43(d,2H,J＝8.4Hz),6.90(d,2H,J＝ 8.8Hz),4.58(d,2H,J＝5.6Hz).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.39,164.50, 159.35,157.40,150.52,142.83,142.47,131.90,129.58,128.62,127.67,127.47, 119.49,116.78,116.04,42.99.HRMS(ESI)calcd for C20H16N3O4[M-H]-:362.1146, Found:362.1147.

实施例27 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(2-羟基苯基)异烟酸酰胺(I-3)的合成

按照实施例25的方法,用4c(362.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-3(252.9 mg),产率:69.6％,黄色固体,Mp:192-193℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.68 (s,1H),11.22(s,1H),9.56(t,1H,J＝6.0Hz),9.04(s,1H),8.78(d,1H,J＝ 5.2Hz),8.59(s,1H),8.09(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝8.4Hz),7.82(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝5.2Hz),7.75(d,2H,J＝8.4Hz),7.44(d,2H,J＝8.4Hz),7.35 (td,1H,J1＝1.6Hz,J2＝7.6Hz),6.99-6.95(m,2H),4.60(d,2H,J＝5.6Hz). 13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ164.85,159.37,157.97,147.82,143.47,142.62, 132.21,131.99,127.84,127.72,127.48,120.38,119.49,119.46,118.40,117.95, 43.12.HRMS(ESI)calcd for C20H16N3O4[M-H]-:362.1146,Found:362.3349.

实施例28 N-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-2-(2-甲氧基苯基)异烟酸酰胺(I-4)的合成

按照实施例25的方法,用4d(376.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-4(232.8 mg),产率:61.7％,白色固体,Mp:189-190℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21 (s,1H),9.40(t,1H,J＝6.0Hz),9.03(d,1H,J＝2.0Hz),8.80(d,1H,J＝ 4.8Hz),8.24(t,1H,J＝1.6Hz),7.74-7.71(m,4H),7.47-7.39(m,3H),7.18 (d,1H,J＝7.6Hz),7.09(td,1H,J1＝1.2Hz,J2＝7.6Hz),4.55(d,2H,J＝ 5.6Hz),3.84(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.49,164.52,157.19, 156.62,150.40,142.88,141.57,131.89,131.20,130.93,128.39,127.61,127.46, 122.79,121.13,119.81,112.39,56.13,42.98.HRMS(ESI)calcd for C21H19N3NaO4[M +Na]+:400.1268,Found:400.1269.

实施例29 N-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-2-(4-甲氧基苯基)异烟酸酰胺(I-5)的合成

按照实施例25的方法,用4e(376.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-5(201.1 mg),白色固体,产率:53.3％,Mp:203-204℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.23 (s,1H),9.52(t,1H,J＝5.6Hz),9.04(s,1H),8.77(d,1H,J＝5.2Hz),8.32 (s,1H),8.13(d,2H,J＝8.8Hz),7.74(d,2H,J＝8.0Hz),7.70(d,1H,J＝ 4.4Hz),7.43(d,2H,J＝8.4Hz),7.08(d,2H,J＝8.8Hz),4.58(d,2H,J＝ 5.6Hz),3.83(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.32,164.53,160.91, 157.04,150.62,142.83,142.57,131.92,131.12,128.55,127.68,127.49,119.86, 117.12,114.67,55.74,43.00.HRMS(ESI)calcd for C21H20N3O4[M+H]+:378.1448,Found:378.1446.

实施例30 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-甲基苯基)异烟酸酰胺(I-6)的合成

按照实施例25的方法,用4f(360.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-6(215.39mg),白色固体,产率:59.6％,Mp:218-219℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.22(s,1H),9.49(t,1H,J＝6.0Hz),9.04(s,1H),8.80(d,1H,J＝ 5.2Hz),8.35(s,1H),8.06(d,2H,J＝8.0Hz),7.76-7.73(m,3H),7.43(d, 2H,J＝8.0Hz),7.34(d,2H,J＝8.0Hz),4.59(d,2H,J＝5.6Hz),2.38(s, 3H).HRMS(ESI)calcd for C21H20N3O3[M+H]+:362.1499,Found:362.1494.

实施例31 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-三氟甲基苯基)异烟酸酰胺(I-7)的合成

按照实施例25的方法,用4g(414.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-7(196.1 mg),白色固体,产率:47.2％,Mp:233-234℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22 (s,1H),9.54(t,1H,J＝6.0Hz),9.05(s,1H),8.89(d,1H,J＝4.8Hz), 8.48(t,1H,J＝1.2Hz),8.38(d,2H,J＝8.4Hz),7.91(d,2H,J＝8.4Hz), 7.86(dd,1H,J1＝1.2Hz,J2＝4.8Hz),7.74(d,2H,J＝8.4Hz),7.44(d,2H,J ＝8.4Hz),4.60(d,2H,J＝6.0Hz).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.01, 155.62,151.09,142.96,142.69,142.44,131.95,129.97(q,JC-F＝31.9Hz),127.92,127.70,127.48,126.24(q,JC-F＝3.4Hz),124.72(q,JC-F＝273.2Hz), 123.36,121.70,118.76,43.05.HRMS(ESI)calcd for C21H16F3N3NaO3[M+Na]+: 438.1036,Found:438.1037.

实施例32 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-吗啉基苯基)异烟酸酰胺(I-8)的合成

按照实施例25的方法,用4h(431.5mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-8(281.9 mg),黄色固体,产率:65.2％,Mp:158-159℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.26 (s,1H),9.51(t,1H,J＝6.0Hz),9.08(s,1H),8.78(d,1H,J＝4.8Hz),8.32 (s,1H),8.10(d,2H,J＝8.4Hz),7.79(d,2H,J＝8.4Hz),7.69(d,1H,J＝ 4.8Hz),7.48(d,2H,J＝8.0Hz),7.12(d,2H,J＝4.8Hz),4.63(d,2H,J＝ 5.6Hz),3.81(t,4H,J＝4.4Hz),3.27(t,4H,J＝4.4Hz).13C NMR(101MHz, DMSO-d6)δ165.42,164.55,157.30,152.30,150.52,142.85,142.47,131.94,128.91,127.97,127.66,127.48,119.37,116.65,114.99,66.48,48.17,43.01. HRMS(ESI)calcd for C24H23N4O4[M-H]-:431.1725,Found:431.1725.

实施例33 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(3-吗啉基苯基)异烟酸酰胺(I-9)

按照实施例25的方法,用4i(431.5mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-9(346.8 mg),黄色固体,产率:80.2％,Mp:107-108℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.14 (s,1H),9.56(s,1H),9.11(s,1H),8.80(d,1H,J＝4.8Hz),8.35(s,1H), 7.75-7.71(m,4H),7.58(d,1H,J＝7.2Hz),7.43-7.36(m,3H),7.07(d,1H,J ＝8.0Hz),4.91(s,2H),3.77(t,4H,J＝4.0Hz),3.19(t,4H,J＝4.0Hz).13C NMR(101MHz,Pyr-d5)δ166.04,158.29,152.12,150.40,143.27,142.71,139.83, 132.97,129.65,127.94,127.68,120.44,118.42,116.69,114.20,66.68,49.03, 43.53.HRMS(ESI)calcd for C24H23N4O4[M-H]-:431.1725,Found:431.1725.

实施例34 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)异烟酸酰胺(I- 10)的合成

按照实施例25的方法,用4j(444.5mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-10(129.3mg),红色固体,产率:29.1％,Mp:197-198℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21 (s,1H),9.46(t,1H,J＝6.0Hz),9.04(s,1H),8.72(d,1H,J＝4.8Hz),8.26 (s,1H),8.03(d,2H,J＝8.8Hz),7.73(d,2H,J＝8.4Hz),7.63(dd,1H,J1＝ 1.2Hz,J2＝4.8Hz),7.42(d,2H,J＝8.0Hz),7.05(d,2H,J＝8.8Hz),4.57 (d,2H,J＝6.0Hz),3.25(t,4H,J＝4.8Hz),2.46(t,4H,J＝4.8Hz),2.23 (s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.40,164.47,157.32,152.18,150.52, 142.85,142.39,131.90,128.42,127.94,127.66,127.46,119.29,116.53,115.14, 54.94,47.75,46.24,42.98.HRMS(ESI)calcd for C25H28N5O3[M+H]+:446.2187,Found:446.2184.

实施例35 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-(4-吗啉磺酰基)苯基)异烟酸酰胺(I-11) 的合成

按照实施例25的方法,用4k(495.6mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-11(268.6mg),黄色固体,产率:54.1％,Mp:160-161℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ11.23 (s,1H),9.55(t,1H,J＝5.2Hz),9.05(s,1H),8.90(d,1H,J＝4.8Hz),8.50 (s,1H),8.43(d,2H,J＝8.4Hz),7.91-7.86(m,3H),7.75(d,2H,J＝8.0Hz), 7.44(d,2H,J＝8.0Hz),4.60(d,2H,J＝5.2Hz),3.65(t,4H,J＝4.0Hz), 2.92(t,4H,J＝4.0Hz).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.00,164.49,155.46, 151.17,143.03,142.99,142.70,135.32,131.95,128.75,128.11,127.71,127.49, 121.84,119.05,65.75,46.37,43.06.HRMS(ESI)calcd forC24H24N4NaO6S[M+Na]+: 519.1309,Found:519.1307.

实施例36 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(3-氯-4-甲氧基苯基)异烟酸酰胺(I-12)的合成

按照实施例25的方法,用4l(410.9mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-12(264.4mg),黄色固体,产率:64.2％,Mp:177-178℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.22(s, 1H),9.54(t,1H,J＝6.0Hz),9.01(s,1H),8.79(d,1H,J＝5.2Hz),8.38(s, 1H),8.23(d,1H,J＝2.4Hz),8.15(dd,1H,J1＝2.0Hz,J2＝8.4Hz),7.75- 7.72(m,3H),7.43(d,2H,J＝8.0Hz),7.31(d,1H,J＝8.8Hz),4.58(d,2H, J＝6.0Hz),3.94(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.14,164.36,155.97, 155.60,150.74,142.75,142.71,131.99,128.36,127.67,127.46,127.19,122.06, 120.56,117.36,113.43,56.77,43.01.HRMS(ESI)calcd forC21H17ClN3O4[M-H]-: 410.0913,Found:410.0914.

实施例37 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)异烟酸酰胺(I-13)的合成

按照实施例25的方法,用4m(406.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-13(306.8mg),黄色固体,产率:75.3％,Mp:210-211℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.23 (s,1H),9.49(t,1H,J＝5.2Hz),9.06(s,1H),8.78(d,1H,J＝4.8Hz), 8.31(s,1H),7.76-7.69(m,5H),7.43(d,2H,J＝8.0Hz),7.10(d,1H,J＝8.4 Hz),4.59(d,2H,J＝5.2Hz),3.87(s,3H),3.83(s,3H).13C NMR(101MHz, DMSO-d6)δ165.17,164.75,164.50,155.14,150.87,146.11,142.75,137.88, 131.93,128.11,127.69,127.47,120.51,117.56,111.09,53.96,43.02.HRMS(ESI) calcd for C22H21N3NaO5[M+Na]+:430.1373,Found:430.1373.

实施例38 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(2,4-二甲基苯基)异烟酸酰胺 (I-14)的合成

按照实施例25的方法,用4n(374.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-14(82.9 mg),白色固体,产率:22.0％,Mp:196-197℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20 (s,1H),9.43(t,1H,J＝6.0Hz),9.03(s,1H),8.79(d,1H,J＝5.2Hz),7.90 (s,1H),7.75(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.72(d,2H,J＝8.0Hz),7.40 (d,2H,J＝8.0Hz),7.35(d,1H,J＝8.0Hz),7.15-7.11(m,2H),4.54(d,2H, J＝6.0Hz),2.33(s,3H),2.31(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.22, 160.45,150.12,142.73,142.06,138.25,137.27,135.82,131.97,131.87,130.15, 127.65,127.42,127.01,121.60,119.79,43.00,21.19,20.58.HRMS(ESI)calcdfor C22H20N3O3[M-H]:374.1510,Found:374.1509.

实施例39 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(2-氟-4-甲基苯基)异烟酸酰胺(I-15)的合成

按照实施例25的方法,用4o(378.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-15(281.8mg),白色固体,产率:74.3％,Mp:189-190℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21 (s,1H),9.48(t,1H,J＝6.0Hz),9.09(s,1H),8.85(d,1H,J＝5.2Hz),8.18 (s,1H),7.87(t,1H,J＝8.0Hz),7.81(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝5.2Hz),7.73 (d,2H,J＝8.0Hz),7.41(d,2H,J＝8.0Hz),7.23-7.17(m,2H),4.56(d,2H, J＝5.6Hz),2.39(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.12,164.43,160.18 (d,JC-F＝249.4Hz),153.92(d,JC-F＝2.4Hz),150.85,142.73,142.36,142.24(d, JC-F＝8.6Hz),131.96,131.05(d,JC-F＝3.2Hz),127.66,127.44,126.05(d,JC-F＝ 2.8Hz),124.09(d,JC-F＝11.4Hz),121.79(d,JC-F＝8.7Hz),120.51,117.12(d,JC-F＝21.8Hz),43.03,21.11.HRMS(ESI)calcd for C21H17FN3O3[M-H]-:378.1259, Found:378.1257.

实施例40 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(3-氯-4-吗啉苯基)异烟酸酰胺(I-16)的合成

按照实施例25的方法用,4p(465.9mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-16(318.4mg),黄色固体,产率:68.2％,Mp:185-186℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)) δ11.20(s,1H),9.51(t,2H,J＝5.2Hz),8.80(d,1H,J＝5.2Hz),8.37(s, 1H),8.21(d,1H,J＝1.6Hz),8.11(dd,1H,J1＝1.6Hz,J2＝8.4Hz),7.76- 7.73(m,3H),7.43(d,2H,J＝8.4Hz),7.29(d,1H,J＝8.4Hz),4.59(d,2H, J＝5.2Hz),3.77(t,4H,J＝4.4Hz),3.07(t,4H,J＝4.4Hz).13CNMR(101 MHz,DMSO-d6)δ165.13,164.37,155.59,150.80,150.10,142.74,142.68,134.20,132.02,128.90,128.21,127.66,127.44,126.79,121.35,120.71, 117.55,66.73,51.58,43.03.HRMS(ESI)calcd for C24H22ClN4O4 -[M-H]:465.1335, Found:465.1335.

实施例41 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(3-氨基-2-甲基苯基)异烟酸酰胺(I-17)

按照实施例25的方法,用4q(375.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-17(335.0mg),黄色固体,产率:89.0％,Mp:143-144℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22 (s,1H),9.44(t,1H,J＝6.0Hz),9.04(s,1H),8.79(d,1H,J＝4.0Hz),7.84 (s,1H),7.76-7.71(m,3H),7.40(d,2H,J＝7.2Hz),7.00(t,1H,J＝6.8Hz), 6.73(d,1H,J＝7.6Hz),6.60(d,1H,J＝7.2Hz),5.02(brs,2H),4.54(d,2H, J＝5.6Hz),1.98(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.23,164.53,161.60, 150.00,147.67,142.83,141.78,141.00,131.89,127.66,127.46,126.22,121.83, 119.70,119.26,118.28,114.70,42.99,14.66.HRMS(ESI)calcdfor C21H21N4O3[M +H]+:377.1608,Found:377.1608.

实施例42 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-6'-甲氧基-[2,3'-二吡啶]-4-甲酰胺(I-18) 的合成

按照实施例25的方法,用4r(377.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-21(312.9mg),白色固体,产率:82.7％,Mp:196-197℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.23 (s,1H),9.47(t,1H,J＝5.6Hz),9.06(s,1H),8.95(d,1H,J＝2.0Hz),8.81 (d,1H,J＝4.8Hz),8.43(dd,1H,J1＝2.4Hz,J2＝8.8Hz),8.36(s,1H),7.76- 7.74(m,3H),7.44(d,2H,J＝8.0Hz),6.98(d,1H,J＝8.8Hz),4.59(d,2H, J＝4.6Hz),3.93(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.17,164.75,164.50, 155.14,150.87,146.11,142.75,137.88,131.93,128.11,127.69,127.47,120.51, 117.56,111.09,53.96,43.02.HRMS(ESI)calcd for C20H17N4O4[M-H]-:377.1255, Found:377.1257.

实施例43 5-羟基-N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-甲基苯基)异烟酸酰胺(I-19)的合成

按照实施例25的方法,用4s(378.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-19(118.0mg),黄色固体,产率:31.1％,Mp:235-236℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11 (s,1H),11.21(s,1H),9.69(t,1H,J＝6.0Hz),9.03(s,1H),8.41(s,1H), 8.29(s,1H),7.92(d,2H,J＝8.0Hz),7.74(d,2H,J＝8.0Hz),7.44(d,2H, J＝8.4Hz),7.28(d,2H,J＝8.0Hz),4.61(d,2H,J＝6.0Hz),2.35(s,3H). 13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ167.38,164.49,153.44,147.66,142.30,140.87, 138.08,135.90,132.03,129.78,127.70,127.53,126.11,123.45,117.35,42.79, 21.23.HRMS(ESI)calcd for C21H18N3O4[M-H]-:376.1303,Found:376.1303.

实施例44 5-羟基-N-(4-羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-甲氧基苯基)异烟酸酰胺(I-20)的合成

按照实施例25的方法,用4t(394.4mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-20(186.6mg),黄色固体,产率:47.2％,Mp:224-225℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.02 (s,1H),11.23(s,1H),9.64(t,1H,J＝4.8Hz),9.05(s,1H),8.41(s,1H), 8.26(s,1H),7.97(d,2H,J＝8.8Hz),7.75(d,2H,J＝8.4Hz),7.45(d,2H, J＝8.0Hz),7.04(d,2H,J＝8.8Hz),4.62(d,2H,J＝5.6Hz),3.81(s,3H). 13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ167.38,164.50,159.95,153.04,147.59,142.33, 140.73,132.01,131.24,127.70,127.53,123.55,116.93,114.54,55.65,42.78. HRMS(ESI)calcd for C21H18N3O5[M-H]-:392.1252,Found:392.1251.

实施例45 N-(4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)-2-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)异烟酸酰胺(I- 21)的合成

按照实施例25的方法,用5a(475.5mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-21(401.2mg),白色固体,产率:84.2％,Mp:110-111℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22 (s,1H),9.48(t,1H,J＝6.0Hz),9.05(s,1H),8.70(d,1H,J＝4.8Hz),8.31 (s,1H),8.11(d,2H,J＝8.4Hz),7.74(d,2H,J＝7.6Hz),7.69(d,1H,J＝ 4.4Hz),7.43(d,2H,J＝8.0Hz),7.09(d,2H,J＝8.4Hz),4.58(d,2H,J＝ 4.8Hz),4.16(t,2H,J＝5.6Hz),3.59(t,4H,J＝4.8Hz),3.38(brs,4H), 2.72(t,2H,J＝5.6Hz).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.31,164.52,160.13, 157.02,150.63,142.82,142.55,131.91,131.10,128.54,127.67,127.48,119.87, 117.08,115.21,66.65,65.89,57.47,54.11,43.00.HRMS(ESI)calcd forC26H27N4O5[M-H]-:475.1987,Found:475.1990.

实施例46叔丁基4-((4-(4-((4-(羟基氨基甲酰胺)苄基)氨基甲酰基)-2-吡啶基)苯氧基) 甲基)哌啶-1-羧酸酯(I-22)的合成

按照实施例25的方法,用5b(559.7mg,1.0mmol)替换4a,得化合物I-22(455.8mg),白色固体,产率:81.3％,Mp:122-123℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.23 (s,1H),9.52(t,1H,J＝6.0Hz),9.06(s,1H),8.76(d,1H,J＝4.0Hz),8.32 (s,1H),8.11(d,2H,J＝8.0Hz),7.75(d,2H,J＝7.6Hz),7.70(d,1H,J＝ 4.8Hz),7.43(d,2H,J＝7.6Hz),7.07(d,2H,J＝8.0Hz),4.58(d,2H,J＝ 5.6Hz),4.00-3.97(m,2H),3.91(d,2H,J＝5.2Hz),2.81-2.68(m,2H),1.97- 1.91(m,1H),1.77(d,2H,J＝12.4Hz),1.41(s,9H),1.22-1.10(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.30,164.52,160.33,157.02,154.36,150.62, 142.83,142.54,131.90,131.06,128.54,127.68,127.48,119.86,117.08,115.16, 78.99,72.27,43.00,35.83,28.77,28.57.HRMS(ESI)calcd for C31H35N4O6[M-H]-: 559.2562,Found:559.2561.

本发明所合成化合物的LSD1、HDAC1和THP-1抑制活性评价 (一)LSD1、HDAC1和THP-1的抑制活性评价：

1、LSD1抑制活性评价实验方法

样品为实施例所合成的上述化合物纯化而得；样品储备液：称取3-5mg样品置于1.5 mL EP管中，然后用DMSO配制成浓度是20mM的溶液，-20℃避光保存，实验时根据所需浓度用DMSO稀释。将待测样品与LSD1蛋白于室温孵育后，加入LSD1反应底物H3K4me2并孵育反应，最后加入荧光染料Amplex和辣根过氧化酶HRP室温孵育，在酶标仪上激发光 530nm，发射光590nm检测荧光数值。

试验结果采用SPSS软件计算IC50值。

2、HDAC1抑制活性评价实验方法

称取3-5mg样品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成浓度是10mM的溶液，- 20℃避光保存，实验时根据所需浓度用DMSO稀释。制备1X缓冲液(改良Tris缓冲液)。 HDAC酶用1X缓冲液稀释至1.67X终浓度。将胰蛋白酶和乙酰肽底物混合制成底物溶液，用1X缓冲液稀释至2.5X终浓度。用Echo550将250nL待测化合物转移到384孔板上。然后，将15μL的酶液加入384孔板中，与待测化合物在室温下预孵育15min。用15 μL1X缓冲液作为阴性对照。然后将10μL底物溶液加入384孔中以启动反应。用 EnVision在激发波长355nm和发射波长460nm处检测荧光强度。

3、体外抗肿瘤活性测定

样品为实施例所合成的化合物；样品储备液：称取3-5mg样品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成浓度为10mmol/L溶液，-20℃避光保存放置，实验时根据所需浓度利用培养基稀释。

取对数生长期的细胞，消化计数后，用培养基调整细胞密度，以4000-5000个细胞/孔接种至96孔板中，每孔100μL，培养24h后，加入用培养基稀释好的不同浓度的药物(10 μM、2.5μM、0.625μM、0.1563μM、0.0391μM、0.0098μM、0.0024μM、0.006 μM)，每个浓度设3个复孔，另设空白对照组及阳性对照组。药物作用72h后，每孔加入40 μL CellTiter-GloReagent，振荡混匀2min，室温继续孵育10min后，酶标仪检测荧光强度，计算抑制率，计算公式如下:

抑制率(％)＝(最大荧光强度-给药组荧光强度)/(最大荧光强度-最小荧光强度)×100％。

4、实验结果

表1 LSD1、HDAC1和THP-1抑制活性评价结果

a N.D.:未测定。

b 30nM浓度时的抑制率为83％。

从上表实验结果可以看出，本发明化合物对LSD1和HDAC1均具有较好的抑制活性，IC50值在纳摩尔至微摩尔水平。大部分化合物对HDAC1的IC50小于10nM,优于阳性对照SAHA，特别是化合物I-2，I-8，I-10，I-16和I-21对HDAC1的IC50小于2nM，是阳性药物SAHA的7倍。体外抗肿瘤活性评价显示多个化合物对THP-1白血病细胞具有很好的抑制活性，其中化合物I-5,I-8和I-15对THP-1的IC50小于1μM,明显优于SAHA。特别是化合物I-5和I-8对THP-1 的活性分别是SAHA的12倍和18倍。

化合物I-5，I-8和I-15对THP-1的抑制活性显著优于阳性对照SAHA，我们进一步在两种白血病细胞株(MOLT-4、MV4:11)上评价了化合物I-5，I-8和I-15的体外抗肿瘤活性。

表2 化合物I-5和I-8体外抗肿瘤活性评价结果

实验结果表明化合物I-5、I-8和I-15对MOLT-4和MV4:11两种白血病细胞株均具有很好的抑制活性，IC50值均小于0.5μM。本发明化合物代表着一类结构全新的LSD1/HDAC双靶点抑制剂，多个化合物具有很好的体外抗肿瘤活性，可作为进一步开发的候选或者先导化合物，应用于制备抗癌药物，为LSD1/HDAC双靶点抑制剂类药物的研发提供了基础，为LSD1和 HDAC的生物学功能研究提供了有效工具。

(二)重组蛋白水平MAO-A/B抑制活性评价

1、实验方法：样品为实施例所合成的上述化合物纯化而得；样品储备液：称取3-5mg 样品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成浓度是20mM的溶液，-20℃避光保存，实验时根据所需浓度用DMSO稀释。Clorgyline和R-(-)-deprenyl分别作为MAO-A和MAO-B活性评价的阳性对照药物。根据制造商的使用方法，使用Promega的商品化MAO-Glo检测试剂盒测定对MAO-A和MAO-B的抑制活性。

2、实验结果：

表3 化合物I-5和I-8对MAO-A/B抑制活性评价结果

aN.D.:未检测

实验结果表明化合物I-5和I-8对LSD1的同源蛋白MAO-A和MAO-B没有抑制活性，对LSD1 具有很好的选择性。
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